11.020.20CCS

C

0545

DB45/T

2829—2023地中海貧血篩查與診斷技術(shù)規(guī)范Technical

for

screening

and

diagnosis

廣西壯族自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)

布DB45/T

2829—2023 前言

................................................................................

III引言

.................................................................................

IV1

...............................................................................

12 規(guī)范性引用文件

.....................................................................

13 術(shù)語和定義

.........................................................................

14 縮略語

.............................................................................

25 地中海貧血篩查技術(shù)

.................................................................

25.1 篩查人群

.......................................................................

25.2 篩查流程

.......................................................................

25.3 篩查技術(shù)

.......................................................................

26

.............................................................

56.1 資質(zhì)要求

.......................................................................

56.2 診斷技術(shù)

.......................................................................

57 實驗室質(zhì)量控制

....................................................................

107.1 室內(nèi)質(zhì)量控制

..................................................................

107.2 室間質(zhì)量評價

..................................................................

118 信息管理

..........................................................................

118.1 樣本保存

......................................................................

118.2 資料保存

......................................................................

11附錄

A（規(guī)范性） 地中海貧血篩查流程圖................................................

12A.1 地中海貧血攜帶者篩查流程

......................................................

12A.2 地中海貧血新生兒篩查流程

......................................................

13A.3 地中海貧血育齡夫婦篩查流程

....................................................

14附錄

B（資料性） 血細胞分析和血紅蛋白組分分析自制質(zhì)控品質(zhì)量評價......................

15附錄

C（資料性） 血紅蛋白組分分析報告單..............................................

16附錄

D（規(guī)范性） 地中海貧血基因診斷知情同意書........................................

17附錄

E（資料性） 地中海貧血基因診斷申請單............................................

20附錄

F（資料性） 地中海貧血基因產(chǎn)前診斷知情同意書....................................

21附錄

G（資料性） 地中海貧血產(chǎn)前基因診斷申請單........................................

24附錄

H（資料性） 地中海貧血基因檢測報告單............................................

25附錄

I（資料性） 血紅蛋白組分分析室內(nèi)質(zhì)量控制程序....................................

26I.1 質(zhì)控物的選擇

..................................................................

26I.2 均值的建立

....................................................................

26DB45/T

2829—2023I.3

控制限的設(shè)定

..................................................................

26I.4

質(zhì)量控制結(jié)果的記錄和質(zhì)量控制圖的繪制

..........................................

26I.5

失控判定規(guī)則

..................................................................

26I.6

失控處理

......................................................................

27參考文獻

.............................................................................

28IIDB45/T

2829—2023 本文件按照GB/T

—《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會提出并宣貫。本文件由廣西衛(wèi)生標準化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院。喜貴、伍欣、李穎、白金平。IIIDB45/T

2829—2023 廣西是中國地中海貧血高發(fā)地區(qū)。2010度和檢測依從性等均有了長足進步。制定。篩查與診斷技術(shù)的目的。IVDB45/T

2829—20231 范圍本文件界定了地中海貧血篩查與診斷的相關(guān)術(shù)語和定義，規(guī)定了地中海貧血篩查技術(shù)、診斷技術(shù)、實驗室質(zhì)量控制、信息管理等要求。本文件適用于廣西壯族自治區(qū)行政區(qū)域內(nèi)醫(yī)療機構(gòu)及檢驗機構(gòu)對地中海貧血的篩查與診斷。2規(guī)范性引用文件文件。GB

19489實驗室生物安全通用要求GB

39707 醫(yī)療廢物處理處置污染控制標準WS/T

血細胞分析參考區(qū)間WS/T

兒童血細胞分析參考區(qū)間WS/T

臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求WS/T

臨床檢驗定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制WS/T

臨床檢驗室間質(zhì)量評價3 術(shù)語和定義WS/T

、WS/T

644界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1非輸血依賴型地貧 non-transfusion

dependent

血的地中海貧血類型。3.2輸血依賴型地貧

dependent

間縮短的地中海貧血類型。3.3血紅蛋白

H

病

H

由2-3個α---肽鏈聚合為β四聚體（Hb

H）。3.4產(chǎn)前診斷 prenatal

diagnosis對可疑出生缺陷的胎兒在出生前應用各種檢測手段，產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷或出生前診斷。DB45/T

2829—20234縮略語下列縮略語適用于本文件。Hb：血紅蛋白（）Hb

A2：血紅蛋白A2（Hemoglobin

A2)Hb

A：血紅蛋白A

Hb

F：血紅蛋白F

DNA：脫氧核糖核酸（Deoxyribonucleic

Acid)PCR：聚合酶鏈反應（Polymerase

Chain

Reaction）MCV：紅細胞平均體積（

Corpuscular

Volume）MCH：紅細胞平均血紅蛋白量（Mean

）SOP：標準操作程序（Standard

Operation

）NMPA：國家藥品監(jiān)督管理局(National

Products

Administration)EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylene

Diamine

Acid）PT：能力驗證

Testing)5 地中海貧血篩查技術(shù)5.1 篩查人群全人群均可篩查，重點篩查人群包括：婚前、孕前、產(chǎn)前的夫婦及新生兒、疾病查因人群等。5.2 篩查流程地中海貧血篩查流程見附錄A。5.3 篩查技術(shù)5.3.1血細胞分析5.3.1.1標本處理用含EDTA抗凝劑的真空采血管，靜脈采血2

ml，輕輕混勻，避免標本溶血，采樣后及時送檢，4

h內(nèi)完成檢測。5.3.1.2 試劑和儀器使用經(jīng)國家注冊批準、性能良好的試劑及儀器設(shè)備。5.3.1.3 檢測方法使用血細胞計數(shù)儀采用自動檢測方法。MCV、MCH可通過間接計算或直接檢測得到，按公式（1公式（2）計算：??????

=

?????

·················

(1)式中：MCV——紅細胞平均體積，單位為分升（fL）；B——每升血液中紅細胞數(shù)，單位為10

每升（

。B——每升血液中紅細胞數(shù)，單位為10B——每升血液中紅細胞數(shù)，單位為10

每升（

。B——每升血液中紅細胞數(shù)，單位為10

每升（

；A——每升血液中血細胞比容，單位為百分比（%12 12??????

=

?????

·················

(2)式中：MCH——紅細胞平均血紅蛋白量，單位為匹克（pg)；12 12C——每升血液中紅細胞血紅蛋白量，單位為克每升（g/L)。5.3.1.4 質(zhì)控物具體如下：——宜使用配套質(zhì)控物，若選擇非配套質(zhì)控物時應評價其質(zhì)量和適用性；——應有低值、中值、高值

3

個水平的質(zhì)控物。5.3.1.5 參考區(qū)間28天～18歲兒童參考區(qū)間按WS/T

779執(zhí)行，成年人參考區(qū)間按WS/T

405執(zhí)行。5.3.2血紅蛋白分析5.3.2.1 標本處理5.3.2.1.1

檢測樣本不受飲食和采血時間的影響。5.3.2.1.2

按照適用于臨床實驗室檢測的常規(guī)方法采集靜脈血或臍帶血。5.3.2.1.3

采用含有

EDTA

或檸檬酸鹽抗凝劑的采血管。5.3.2.1.4

全血樣本采集后應及時送檢，如未能及時檢測應

4℃儲存，宜

1

周內(nèi)完成檢測。5.3.2.1.5

30

48℃運送。5.3.2.2 檢測方法學和毛細管等電聚焦電泳等。5.3.2.3檢測系統(tǒng)5.3.2.3.1

應選用有

NMPA

認證的分析系統(tǒng)（儀器和試劑）。5.3.2.3.2

5.3.2.3.3

實驗室啟用/更換一個新的分析系統(tǒng)檢測臨床樣本前，應該對系統(tǒng)性能進行驗證。5.3.2.3.4

試劑的性能驗證方法宜參考

CNAS-GL037

進行，儀器的驗證方法宜參考

。5.3.2.3.5

儀器應定期校準，或者維修后應進行校準。5.3.2.4 質(zhì)控物5.3.2.4.1 質(zhì)控物應有良好的長期穩(wěn)定性，宜選擇商品制品，或自制。5.3.2.4.2 宜選用凍干粉或冰凍全血質(zhì)控物，質(zhì)控物復溶后，分管凍存。檢測時，取出平衡至室溫，混勻后進行測定。質(zhì)控物不宜反復凍融。5.3.2.4.3 實驗室自制新鮮冰凍全血質(zhì)控物，原料為足量的混合新鮮全血，采用凍存管分裝，并對均勻性進行考察評價，評價參見附錄

B，存儲于-20

℃或更低溫度，可以穩(wěn)定半年。5.3.2.4.4 應有

2

個水平的質(zhì)控物（正常值及病理值）。12

60

Hb

283

Hb

130.8Hb

291.5

Hb

2.4Hb

2DB45/T

2829—20235.3.2.5 測定5.3.2.5.1所用試劑、耗材應按說明書要求存放，在有效期內(nèi)使用完畢。5.3.2.5.2 實驗室應制定標準操作程序，包含但不限于以下內(nèi)容：項目名稱、檢測原理、樣本采集及響因素、校準程序（可由儀器廠家實施）、結(jié)果審核及報告。5.3.2.5.3 血液樣本及質(zhì)控物實驗完成后，處理樣本應符合

39707

的規(guī)定。5.3.2.6報告5.3.2.6.1

以百分比（％）為單位，結(jié)果保留

1

位小數(shù)點。5.3.2.6.2

報告單宜提供方法學，以利于臨床醫(yī)生判斷結(jié)果。5.3.2.6.3

如條件允許，宜提供電泳圖譜/色譜圖。5.3.2.6.4

異常血紅蛋白，宜以血紅蛋白組別歸屬進行報告（如

Hb

J、

E

等）。5.3.2.6.5

存在圖譜異?；驒z測結(jié)果異常，應提供結(jié)果描述和檢測建議，以利于臨床醫(yī)生判斷結(jié)果。5.3.2.6.6

血紅蛋白分析報告單參見附錄

C。5.3.2.7 參考區(qū)間5.3.2.7.1 根據(jù)不同年齡設(shè)定參考區(qū)間。5.3.2.7.2 產(chǎn)前樣本臍帶血，尚無參考區(qū)間。5.3.2.7.3 0

天～6

1～6

6個月～2

歲的參考區(qū)間。5.3.2.7.4 血紅蛋白組分在小于

2

歲以內(nèi)的年齡段，其組分含量波動較大，因此，這個年齡段的血紅蛋白組分參考區(qū)間制定較為困難，其可靠性低于年齡≥2

歲組的參考區(qū)間。5.3.2.7.5 宜根據(jù)檢測方法學設(shè)定不同年齡參考區(qū)間。

capillarys

Flex

為例，參考《現(xiàn)代蛋白電泳篩查和診斷的臨床應用》，見表

表1不同年齡段參考區(qū)間5.3.3 陽性結(jié)果不同年齡段參考區(qū)間5.3.3.1 具有以下至少一項實驗室檢測結(jié)果可判斷為成人地中海貧血篩查陽性：——MCV＜82fl；——MCH＜27pg；——Hb

A2≥3.5%；——Hb

A2＜2.4%；——Hb

F＞5%；——出現(xiàn)異常血紅蛋白。5.3.3.2 具有以下至少一項實驗室檢測結(jié)果可判斷為新生兒、兒童地中海貧血篩查陽性：——出現(xiàn)異常血紅蛋白；——MCV、

低于其年齡段參考范圍下限；——育齡夫婦雙方，陽性一方為缺失型α

-地中海貧血（--/，如：--SEA/、--THAI/、--FIL/——育齡夫婦雙方，陽性一方為缺失型α

-地中海貧血（--/，如：--SEA/、--THAI/、--FIL/等）——育齡夫婦雙方，陽性一方為α

-缺失型及α-非缺失型時，當配偶一方篩查為陰性結(jié)果（包括——Hb

A2、Hb

A

或

Hb

F

位于參考范圍外。6 地中海貧血基因診斷技術(shù)6.1 資質(zhì)要求6.1.1 實驗室資質(zhì)6.1.1.1 臨床基因檢測實驗室應符合

GB

基因擴增檢驗技術(shù)準入審核合格證書。6.1.1.2 地中海貧血基因診斷（產(chǎn)前標本）臨床基因檢測實驗室應具備產(chǎn)前診斷資質(zhì)。6.1.1.3 地中海貧血基因（罕見型）診斷檢驗實驗室應獲得行業(yè)主管部門批準。6.1.2 人員資質(zhì)6.1.2.1 實驗室技術(shù)人員應具有檢驗資格證，且應經(jīng)過國家級或省級臨床檢驗中心培訓并取得《臨床基因擴增實驗室人員上崗證》。6.1.2.2 實驗室技術(shù)人員應具有檢驗資格證，且應經(jīng)過國家級或省級臨床檢驗中心培訓并取得《臨床6.1.2.3 地中海貧血基因診斷（靜脈血）結(jié)果報告審核人員應具備中級及以上職稱。6.1.2.4 地中海貧血基因診斷（產(chǎn)前標本）結(jié)果報告審核人員應具備副高職稱及以上的職稱。6.1.2.5 地中海貧血篩查、基因診斷人員應每

3

年參加主管行政部門或相關(guān)行業(yè)協(xié)會組織的地中海貧血知識和技術(shù)培訓，并獲得培訓合格證書/學分。6.2 診斷技術(shù)6.2.1 地中海貧血基因診斷（靜脈血）6.2.1.1 適應癥包括：——地中海貧血篩查陽性；0攜帶者，篩查陰性配偶一方行α-地中海貧血基因檢測；+血細胞分析和血紅蛋白組分分析），由患者知情選擇進行地貧基因檢測；——育齡夫婦雙方，其中一方為β-檢測結(jié)果陽性時，進行地中海貧血基因檢測；當配偶一方血紅蛋白電泳篩查提示存在異常血紅蛋白時，由患者知情選擇進行地貧基因檢測；——貧血查因的患者地中海貧血篩查陽性時；——臍血血紅蛋白篩查陽性時；——有生育中/重型地貧患兒家族史的人群。6.2.1.2 知情同意開展地中海貧血基因檢測應簽署知情同意書，同意書參見附錄D，應包括以下內(nèi)容：——地中海貧血基本知識；——檢測的目的和內(nèi)容；DB45/T

2829—2023——技術(shù)優(yōu)勢和局限性；——臨床適應癥。6.2.1.3 申請單檢測應填寫申請單，申請單參見附錄E，宜包括但不限于以下內(nèi)容：申請單抬頭、受檢者姓名、年電泳參數(shù)、篩查單位。Hb

2Hb

26.2.1.4標本處理6.2.1.4.1按照適用于臨床實驗室檢測的常規(guī)方法采集靜脈血。6.2.1.4.2檢測樣本不受飲食和采血時間的影響。6.2.1.4.3采用含有

EDTA

抗凝劑的采血管。6.2.1.4.4

30

48℃運送。6.2.1.4.5 樣本如未能及時檢測，可先保存：——樣本在常溫條件下短期保存（＜7

天）；——樣本在

4

℃條件下冷藏保存（＜3

個月）；——樣本在≤℃條件下可以長期保存。6.2.1.5 檢測設(shè)備器、熒光定量儀等設(shè)備，宜根據(jù)檢驗方法學選擇以下相應設(shè)備：——普通

——瓊脂糖水平電泳儀；——凝膠成像分析儀；——雜交儀；——熒光定量

——二代測序基因分析儀；——核酸濃度測定儀；——遺傳分析儀。6.2.1.6 檢測耗材無粉乳膠手套、口罩、鞋套或區(qū)域?qū)Ｓ眯?、吸頭、離心管、凍存盒、％乙醇、有效氯消毒液。6.2.1.7 檢測試劑應選擇NMPA批準應用于臨床實驗室的地貧基因檢測試劑盒。6.2.1.8 實驗操作6.2.1.8.1 核酸提取步驟如下：a)

樣本進行實驗室唯一編號；DB45/T

2829—2023b)

手工方法提取核酸的，按照試劑盒提取說明書進行；c)

使用核酸提取儀的，按照儀器操作說明書進行；d)

實驗結(jié)束后，按照實驗室

SOP

文件進行清理和消毒，包括桌面、安全柜、移液器等；e)

記錄有關(guān)實驗記錄、設(shè)備使用記錄。6.2.1.8.2 DNA

擴增及分析步驟如下：a)

按所用試劑盒說明書在儀器上設(shè)置擴增參數(shù)，并保存供長期使用；b)

按照試劑盒說明書分裝、配制反應液（如有需要）；c)

加

DNA

模板前，擴增板/管先進行瞬時離心；d)

加

DNA

模板后，擴增板/管進行瞬時離心；e)

根據(jù)選擇的方法，按照實驗室

文件進行操作；f)

記錄有關(guān)實驗記錄、設(shè)備使用記錄。6.2.1.8.3 結(jié)果判斷a)

參照所使用試劑盒的判斷標準進行結(jié)果判斷。b)

可疑結(jié)果，宜使用另一種檢測方法的試劑盒進行復核。c)

基因檢測結(jié)果應結(jié)合篩查結(jié)果、臨床信息進行綜合判斷。6.2.1.8.4 結(jié)果報告a)

檢驗報告單應體現(xiàn)檢測方法、檢測范圍及標本類型。b)

檢驗報告單應體現(xiàn)檢測結(jié)果并書寫基因型，不應下臨床診斷性報告。c)

實驗室結(jié)果有異常發(fā)現(xiàn)，應進行備注描述。d)

可疑結(jié)果，應進行罕見型地中海貧血基因檢測的，應由行業(yè)主管部門批準的罕見型地中海貧血基因檢測機構(gòu)進行檢測。e)

報告單簽發(fā)應雙人簽字，其中一名為中級及以上職稱。f)

地中海貧血基因檢測報告單參見附錄

H。6.2.2 地中海貧血基因產(chǎn)前診斷6.2.2.1 適應癥包括：——有生育輸血依賴型地中海貧血患兒風險的夫婦，孕婦應進行地中海貧血基因侵入性產(chǎn)前診斷；——有生育非輸血依賴型地中海貧血患兒風險的夫婦，進行遺傳咨詢，宜知情選擇地中海貧血基因侵入性產(chǎn)前診斷。6.2.2.2 知情同意開展地中海貧血基因產(chǎn)前診斷應簽署知情同意書，同意書參見附錄F，應包括以下內(nèi)容：——產(chǎn)前診斷指征；——檢測的目的和內(nèi)容；——技術(shù)風險和局限性。6.2.2.3 申請單DB45/T

2829—2023開展地中海貧血基因產(chǎn)前診斷應填寫申請單，申請單參見附錄G，宜包括但不限于以下內(nèi)容：——基本信息：申請單抬頭、受檢者姓名、年齡、民族、檢測項目、聯(lián)系電話、申請科室、申請醫(yī)生、申請日期、樣本類型；——應填寫夫婦雙方的篩查結(jié)果和基因型，檢測機構(gòu)。6.2.2.4 產(chǎn)前診斷時機地中海貧血基因產(chǎn)前診斷為侵入性產(chǎn)前診斷，產(chǎn)前診斷時機及取材方式如下：——孕

9～14

周宜行絨毛活檢；——孕

16

周后宜行羊膜腔穿刺取羊水；——孕

22

周后宜行臍靜脈穿刺取臍帶血。6.2.2.5產(chǎn)前診斷前相關(guān)檢查包括：——超聲檢查胎盤位置、胎數(shù)、孕周、胎兒情況；——檢測孕婦血細胞分析、凝血功能檢測、

血型、乙肝、艾滋病、丙肝、梅毒結(jié)果，排除禁忌癥。6.2.2.6 標本采集6.2.2.6.1 采集方法進行產(chǎn)前診斷需要獲得足量的胎兒DNA樣本，目前在臨床上廣泛應用的是傳統(tǒng)的侵入性取材方法，主要有三種：即絨毛穿刺取樣、羊膜腔穿刺和經(jīng)皮臍血穿刺取樣。6.2.2.6.2 采集量～）20～30）mL2

。6.2.2.7標本處理6.2.2.7.1

侵入性產(chǎn)前診斷操作采集的絨毛、羊水、臍血，樣本采集后及時送檢。如未能及時檢測宜4℃暫存。6.2.2.7.2

肉眼可見明顯血色的羊水樣本，應同時進行培養(yǎng)前樣本、培養(yǎng)后樣本檢測。6.2.2.7.3

產(chǎn)前樣本均應雙份雙盲檢測。6.2.2.7.4

產(chǎn)前樣本應行母源污染鑒別，出現(xiàn)影響檢測結(jié)果判斷的母源污染，應重新采集樣本。6.2.2.8 檢測的設(shè)備、耗材、試劑6.2.2.8.1 檢測設(shè)備：見

。6.2.2.8.2 檢測耗材：見

。6.2.2.8.3 檢測試劑：見

，并增加地貧基因產(chǎn)前診斷宜使用雙份雙盲試劑盒。6.2.2.9 實驗操作6.2.2.9.1 核酸提取見6.2.1.8.16.2.2.9.2 母源污染鑒定DB45/T

2829—2023步驟如下：a)

選用適合的

STR

分析檢測試劑盒；b)

按照說明書進行檢測和結(jié)果判斷；c)

記錄有關(guān)實驗記錄、設(shè)備使用記錄。6.2.2.9.3 DNA

擴增及分析見6.2.1.8.2。6.2.2.9.4 結(jié)果判斷見6.2.1.8.3，并增加產(chǎn)前樣本檢測先判斷是否存在母源污染，當母源污染影響結(jié)果判斷時，應重結(jié)果判斷。6.2.2.10結(jié)果報告見6.2.1.8.4，并增加修改報告單簽發(fā)要求，即：應雙人簽字，其中一名為副高及以上職稱。6.2.2.11 產(chǎn)前診斷結(jié)果遺傳咨詢綜合家系分析產(chǎn)前診斷結(jié)果并給出咨詢意見：a)

重型α-地貧胎兒，宜終止妊娠；b)

輸血依賴型地貧胎兒，宜知情選擇終止妊娠；c)

非輸血依賴型地貧胎兒，宜知情選擇終止妊娠。6.2.2.12 追蹤隨訪6.2.2.12.1 侵入性產(chǎn)前診斷取材后

7

天隨訪妊娠情況。6.2.2.12.2胎兒分娩后

1

個月隨訪。6.2.3 地中海貧血基因診斷（罕見型）6.2.3.1 標本處理6.2.3.1.1 靜脈血樣本：見

6.2.1.4。6.2.3.1.2 產(chǎn)前樣本：見

。6.2.3.2 檢測的設(shè)備、耗材、試劑6.2.3.2.1 檢測設(shè)備：見

，并增加三代測序基因分析儀（視方法學而選擇）。6.2.3.2.2 檢測耗材：見

。6.2.3.2.3 檢測試劑：地中海貧血基因診斷（罕見型）檢測商品試劑盒或自配試劑。6.2.3.3 方法宜根據(jù)突變情況選擇合適的檢測技術(shù)，包括但不限于：——多重連接探針擴增技術(shù)（MLPA——Sanger

測序技術(shù)；——二代測序技術(shù)（NGS）；——第三代測序技術(shù)（）DB45/T

2829—2023——數(shù)字

技術(shù)等。6.2.3.4 實驗操作6.2.3.4.1 核酸提取靜脈血樣本提取步驟見6.2.1.8.1，產(chǎn)前樣本核酸提取步驟見6.2.2.11.1。6.2.3.4.2 DNA

擴增及分析步驟如下：a)

按所用試劑盒說明書在儀器上設(shè)置擴增參數(shù)，并保存，供長期使用；b)

按照試劑盒說明書分裝、配制反應液；c)

根據(jù)選擇的方法，按照說明書進行操作；d)

記錄有關(guān)實驗記錄、設(shè)備使用記錄。6.2.3.5 結(jié)果判斷6.2.3.5.1 參照所使用檢測方法的判斷標準進行結(jié)果判斷。6.2.3.5.2 基因檢測結(jié)果應結(jié)合家系、篩查結(jié)果、臨床信息進行綜合判斷。6.2.3.5.3 檢測結(jié)果為未知突變的，宜采集家系進行驗證。6.2.3.6 結(jié)果報告6.2.3.6.1 檢驗報告單應體現(xiàn)檢測方法、檢測范圍。6.2.3.6.2 檢驗報告單應體現(xiàn)檢測結(jié)果并書寫基因型，不應下臨床診斷性報告。6.2.3.6.3 實驗室結(jié)果如有異常發(fā)現(xiàn)，宜進行備注描述。6.2.3.6.4 本檢測為實驗室自配試劑，僅供臨床醫(yī)生參考，不應作為排除性檢測結(jié)果，宜結(jié)合臨床癥狀及其他檢查綜合判斷。7 實驗室質(zhì)量控制7.1 室內(nèi)質(zhì)量控制7.1.1 地貧篩查實驗7.1.1.1 血細胞分析3個測試后或開機間隔6

h必須進行第二次3個水平質(zhì)控品的檢測，室內(nèi)控制應符合WS/T

要求。7.1.1.2 血紅蛋白組分分析7.1.1.2.1 在每批進行樣本測試前，應先進行質(zhì)控物分析，以確定分析系統(tǒng)狀態(tài)良好，測定結(jié)果可靠后，再進行樣本分析。7.1.1.2.2 當出現(xiàn)失控現(xiàn)象，應進行失控分析，并采取相應的措施。質(zhì)量控制限的設(shè)定及失控判斷規(guī)則應符合

WS/T

641

要求，參見附錄

I。7.1.2 地貧基因診斷實驗7.1.2.1 地中海貧血基因診斷10DB45/T

2829—20237.1.2.1.1 運行每批次樣本，應同時進行陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品。7.1.2.1.2 質(zhì)控品應包括提取、擴增、產(chǎn)物分析的全過程，實驗結(jié)果陰性質(zhì)控品應為陰性，陽性質(zhì)控品應為陽性。7.1.2.1.3 整個實驗流程應兩名實驗技術(shù)員核對。7.1.2.1.4 產(chǎn)前診斷樣本應進行雙盲雙線檢測，檢測結(jié)果應與遺傳規(guī)律相符。當不符合遺傳規(guī)律時，應查找原因，進行記錄并告知臨床醫(yī)生。7.1.2.2 地中海貧血基因診斷（罕見型）7.1.2.2.1 宜通過實驗的可重復性、不同方法學、家系的檢測結(jié)果比對進行質(zhì)量控制。7.1.2.2.2 整個實驗流程應兩名實驗室技術(shù)員核對。7.2 室間質(zhì)量評價7.2.1 項目每年應至少參加省級臨床檢驗中心或國家級臨床檢驗中心室間質(zhì)量評價（能力驗證，PT）計劃。7.2.2 室間質(zhì)量評價樣品應當隨臨床樣本一起進行檢測。7.2.3 地貧篩查項目室間質(zhì)評

成績應≥

分，地貧基因診斷項目室間質(zhì)評

成績應為

8 信息管理8.1 樣本保存8.1.1 地貧篩查樣本至少保留

7

天。8.1.2 地貧基因外周血樣本至少保留

3

年、地貧基因產(chǎn)前診斷樣本至少保留

5

年。宜保留外周血、羊水、絨毛、臍血樣本，不宜保存

DNA

樣本。8.2 資料保存8.2.1 報告單有效期限為

3

年。8.2.2 產(chǎn)前診斷相關(guān)資料保留至少

15

年。8.2.3 地貧基因診斷知情同意書及申請單保存至少

5

年。11DB45/T

2829—2023

附 錄 A（規(guī)范性）地中海貧血篩查流程圖A.1 地中海貧血攜帶者篩查流程見圖。圖A.1

攜帶者篩查流程圖12DB45/T

2829—2023A.2 地中海貧血新生兒篩查流程見圖。圖A.2

新生兒篩查流程圖13DB45/T

2829—2023A.3 地中海貧血育齡夫婦篩查流程見圖。圖A.3

育齡夫婦篩查流程圖141011121314151617181920DB45/T

2829—2023

附錄B（資料性）血細胞分析和血紅蛋白組分分析自制質(zhì)控品質(zhì)量評價B.1以采用單因素方差分析血液中

A2

F

的均勻性為例。評價所采用的分析系統(tǒng)應具有良好的精密度。B.2從樣品總體中隨機抽取

21

個(制備數(shù)量少于

500

個，可抽取

10

個)樣品，每個樣品重復測定

3

次（不少于

2

1

次：1-2-3…-19-20-21

2

21-20-19…-3-2-1

3

次：1-2-3…-19-20-21。測定結(jié)果樣表見表

。表B.1

Hb

A2表B.1

Hb

A2

測定結(jié)果B.4 對測定中出現(xiàn)的異常值，在未查明原因之前，不應隨意剔除。15DB45/T

2829—2023

附 錄 C（資料性）血紅蛋白組分分析報告單血紅蛋白組分分析報告單見圖。XX醫(yī)院XX科檢驗報告單姓名：XX性別：X年齡：XX

XX床

號

：XX科

別

：XX科

標本種類：靜脈血申請備注：臨床診斷：

樣本編號：XX申請醫(yī)生：XX檢驗項目：血紅蛋白組分分析NO

項目名稱

結(jié)果

參考區(qū)間 單位1 血紅蛋白H(Hb

H)2 血紅蛋白Bart’s(Hb

Bart’s)3 血紅蛋白A(Hb

A)

↑

8.1↑

2.2↓

87.8

96.4-97.9

%%%4 血紅蛋白F/Q(Hb

F/Q) 0.7 0-55 血紅蛋白D/G(Hb

D/G) 未檢出6 血紅蛋白S(Hb

S) 未檢出7 血紅蛋白E(Hb

E) 未檢出

%%%%8 血紅蛋白A2(Hb

A2)9 血紅蛋白C(Hb

C)10

血紅蛋白J(Hb

J)11

血紅蛋白CS(Hb

CS)12

血紅蛋白快速帶13

血紅蛋白慢速帶

↓

1.2未檢出未檢出未檢出未檢出未檢出

2.4-3.5

%%%%%%備注：建議進一步地貧基因檢測。采樣時間：

接收時間：

檢驗者：XX 審核者：XX報告時間：

XX注：圖C.1

血紅蛋白組分分析報告單16DB45/T

2829—2023

附 錄 D（規(guī)范性）地中海貧血基因診斷知情同意書地中海貧血基因診斷知情同意書見圖D.1。XX

醫(yī)院地中海貧血基因診斷知情同意書姓名：年齡 性別：送檢科室/單位： ID

號：【情況介紹和治療建議】您因__________________

，擬定進行地中海貧血（簡稱地貧）基因診斷，需采集靜脈血樣本送檢?！炯膊√攸c及其風險】床表型多不貧血，但如雙親為同型地貧攜帶者，有生育重型或中間型地貧后代的風險。中間型α-地

H

后不良。重型α-地中海貧血胎兒主要表現(xiàn)為胎兒水腫、巨大胎盤、胎死宮內(nèi)及出生后無法存活，且母體易出現(xiàn)高血壓、子癇前期等并發(fā)癥。重型和中間型β-地中海貧血孕期胎兒無明顯異常表現(xiàn)，出生到一定年紀后發(fā)病。目前公認唯一治愈的方法是造血干細胞移植，但面臨無合適供體、排異反應、移植失敗等風險，且治療費用昂貴。大部分患者只能依賴性輸血和去鐵治療，長期的治療費用昂貴?！緮M定醫(yī)療方案的性質(zhì)、目的】【其他可選方法及其風險】（應列出其他可及的地中海貧血基因檢測方法學及其局限性）【拒絕擬定醫(yī)療方案的風險】

可能不會發(fā)生以下介紹的檢查風險，但可能生育嚴重類型地貧的患兒?！緳z查潛在風險和對策】圖D.1

地中海貧血基因診斷知情同意書17DB45/T

2829—2023告訴我可與我的醫(yī)生討論有關(guān)我檢查的具體內(nèi)容，如果我有特殊的問題可與我的醫(yī)生討論。1．我理解此檢查可能發(fā)生的風險及醫(yī)生采取的可能對策：1) 2) 果的，則不能保證基因檢測結(jié)果的準確性；3)由于檢測異常、

4) 其他無法預測的外部因素可能導致檢測無法正常進行，將終止該項檢測；5) 受檢者為兒童時，需要父母雙方提供篩查和基因診斷結(jié)果，否則不能保證檢測結(jié)果的準確性；6)檢測結(jié)果為新發(fā)突變時，需要父母雙方采樣進行家系驗證，否則無法解釋新發(fā)突變的致病性。2.

作職責和嚴格執(zhí)行操作規(guī)程的情況下，該項檢查仍有局限性，存在漏診和誤診的風險。盡管存在風險，規(guī)范進行操作，盡最大努力減少上述風險的發(fā)生。我理解根據(jù)我個人的情況，除上述風險以外，還可能出現(xiàn)其他特殊并發(fā)癥或風險。圖

D.1

地中海貧血基因診斷知情同意書（續(xù)）18DB45/T

2829—2023【孕婦知情選擇】

我的醫(yī)生已經(jīng)告知我將要進行的檢測項目的內(nèi)涵、此次檢查可能存在的局限性和風險、以及相關(guān)檢查的必要性。我已如實向醫(yī)生告知我所有涉及疾病的情況，如有隱瞞，一切后果自負。

我同意□不同意□我的醫(yī)生為我進行地中海貧血基因診斷。

我理解我的檢查項目，我并未得到檢測百分之百成功的許諾。

我授權(quán)醫(yī)生對檢測涉及的樣本進行處置，包括進一步的送檢多種檢測方法、科學研究等，以幫助醫(yī)師進一步多平臺進行診斷。受檢者簽名： 日期： 年 月 日地址： 電話：______________________如果受檢者無法簽署知情同意書，請其授權(quán)的親屬或法定監(jiān)護人在此簽名：受檢者授權(quán)親屬或法定監(jiān)護人簽名： 與受檢者關(guān)系： 日期： 年 月 日地址： 電話：_____________________【醫(yī)生陳述】我已經(jīng)告知受檢者（授權(quán)親屬或法定監(jiān)護人）將要進行的檢查方式、此次檢查中及檢查后可能發(fā)生的并發(fā)癥和風險、可能存在的其他檢查方法并且解答了受檢方關(guān)于此次檢查的相關(guān)問題。醫(yī)生簽名: 日期： 年 月 日圖

D.1

地中海貧血基因診斷知情同意書（續(xù)）19DB45/T

2829—2023

附 錄 E（資料性）地中海貧血基因診斷申請單地中海貧血基因診斷（靜脈血）申請單見圖。XX

地

中

海

貧

血

基

因

診

斷

申

請

單男性信息：姓名： 歲 民族 族

ID：申請項目：□αeq

\o\ac(□,+)β地貧基因分析； α地貧基因分析；□β地貧基因分析篩查結(jié)果：Hb g/L

MCV

MCH pg

Hb

A2 %

Hb

F %

其它：篩查機構(gòu)： 日期:基因診斷結(jié)果： 檢測機構(gòu)：檢測日期： 身份證號碼：聯(lián)系電話： 聯(lián)系地址：女性信息：姓名： 年齡 歲 族 就診卡

ID：申請項目：□αeq

\o\ac(□,+)β地貧基因分析； α地貧基因分析；□β地貧基因分析篩查結(jié)果：Hb g/L

MCV

MCH pg

Hb

A2 %

Hb

F %其它：篩查機構(gòu)： 日期:基因診斷結(jié)果： 檢測機構(gòu)：檢測日期： 身份證號碼：聯(lián)系電話： 聯(lián)系地址：補助對象： 三聯(lián)單編號

NO 檢驗費用： 元 補助金額： 元送檢醫(yī)師： 送檢科室：送檢機構(gòu)： 送檢日期：20 年 月 日其他說明：填表說明：如果是男性，就在男方信息欄填寫；若為女性，在女方信息欄填寫；若為夫妻，則分別填寫；若為小孩，則在其他說明行填寫其父母的基因診斷結(jié)果，若為補助對象，按照指示填寫。按照規(guī)定，務必提供患者的篩查結(jié)果，若沒有，請補充相關(guān)檢測。申請的檢測項目，只圖E.1

地中海貧血基因診斷申請單20DB45/T

2829—2023

附錄 F（資料性）地中海貧血基因產(chǎn)前診斷知情同意書地中海貧血基因產(chǎn)前診斷知情同意書見圖F.1。XX

醫(yī)院地中海貧血基因產(chǎn)前診斷知情同意書孕婦姓名： 年齡： ID

號：【情況介紹和治療建議】您因，擬定進行地中海貧血（簡稱地貧）基因產(chǎn)前診斷，需采集：絨毛，羊水，臍血 eq

\o\ac(□,樣本)送檢?！炯膊∪焉锾攸c及其風險】重型α--地貧整個妊娠期無明顯異常臨床指征，出生發(fā)病后，則需要終身依賴輸血和去鐵等治療，給家庭及社會帶來沉重負擔?！緮M定醫(yī)療方案的性質(zhì)、目的】

種

β-X

α-

X

α-【可選方法及其風險】-2.-/β--【拒絕擬定醫(yī)療方案的風險】 【檢查潛在風險和對策】圖F.1

地中海貧血基因產(chǎn)前診斷知情同意書21DB45/T

2829—20231．我理解此檢查可能發(fā)生的風險及醫(yī)生采取的可能對策：1)

樣本如果存在母源污染，可能對檢測結(jié)果判斷造成影響。因此，標本（培養(yǎng)前/后）檢測前先

10%則將終止該項檢測。小于或等于

10%比例的母源污染無法檢出，不排除影響檢測結(jié)果；2)

出所有突變類型或位點；3)

如果雙盲平行試驗結(jié)果不一致，應重新采樣，否則將終止該項檢測；4)

細胞培養(yǎng)產(chǎn)生嚴重影響，故服藥后檢查需告知醫(yī)生及實驗室，以確定是否適宜進行細胞培養(yǎng)；細胞培養(yǎng)失敗，應重新采樣，否則將終止該項檢測；5)

其他無法預測的外部因素可能導致檢測無法正常進行，將終止該項檢測；2.

醫(yī)療技術(shù)規(guī)范進行操作，盡最大努力減少上述風險的發(fā)生。我理解根據(jù)我個人的妊娠情況，除上述風險以外，還可能出現(xiàn)其他特殊并發(fā)癥或風險?！驹袐D知情選擇】關(guān)檢查的必要性。我已如實向醫(yī)生告知我的所有妊娠情況，如有隱瞞，一切后果自負。 我同意不同意□

我的醫(yī)生為我進行地中海貧血基因產(chǎn)前診斷。 我理解我的檢查項目，我并未得到檢測百分之百成功的許諾。 助醫(yī)師進一步多平臺進行診斷。孕婦簽名：日期： 年 月 日地址： 電話：如果孕婦無法簽署知情同意書，請其授權(quán)的親屬或法定監(jiān)護人在此簽名：孕婦授權(quán)親屬或法定監(jiān)護人簽名: 與孕婦關(guān)系: 日期: 年 月 日圖

F.1

地中海貧血基因產(chǎn)前診斷知情同意書（續(xù)）22DB45/T

2829—2023地址： 【醫(yī)生陳述】檢查方法并且解答了孕婦關(guān)于此次檢查的相關(guān)問題。醫(yī)生簽名: 日期:年 月 日圖

F.1

地中海貧血基因產(chǎn)前診斷知情同意書（續(xù)）23DB45/T

2829—2023

附 錄 G（資料性）地中海貧血產(chǎn)前基因診斷申請單地中海貧血產(chǎn)前基因診斷申請單見圖G.1。XX

醫(yī)

院地

中

海

貧

血

產(chǎn)

前

基

因

診

斷

申

請

單胎兒信息：eq

\o\ac(□,

)孕齡： 周 標本類型： 羊水

□絨毛 臍血

羊水是否培養(yǎng)

eq

\o\ac(□,

)申請項目： αeq

\o\ac(□,+)β地貧基因分析； α地貧基因分析；□β地貧基因分析母親信息：姓名： 年齡 歲 族 就診卡

ID：篩查結(jié)果：Hb g/L

MCV fL

MCH pg

Hb

A2 %

Hb

F %

其他：篩查機構(gòu)： 日期:基因診斷結(jié)果： 檢測機構(gòu)：檢測日期： 身份證號碼：聯(lián)系電話： 聯(lián)系地址：父親信息：姓名： 年齡 歲 族

ID：篩查結(jié)果：Hb g/L

MCV fL

MCH pg

Hb

A2%

Hb

F %

其他：篩查機構(gòu)： 日期:基因診斷結(jié)果： 檢