Q/LB.□XXXXX-XXXXDB32/TXXXX—XXXX人體血清中11種農(nóng)藥殘留量測(cè)定氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜范圍本文件規(guī)定了人體血清中氯苯胺靈、五氯苯甲醚、野麥畏、乙烯菌核利、殺螟硫磷、粉銹寧、二甲戊靈、毒蟲(chóng)畏、丁草胺、腈菌唑和莎稗磷11種農(nóng)藥殘留量氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜測(cè)定方法。本文件適用于人體血清中氯苯胺靈、五氯苯甲醚、野麥畏、乙烯菌核利、殺螟硫磷、粉銹寧、二甲戊靈、毒蟲(chóng)畏、丁草胺、腈菌唑和莎稗磷11種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T16126生物監(jiān)測(cè)質(zhì)量保證規(guī)范術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理試樣經(jīng)飽和硫酸銨沉淀蛋白，提取上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，富集濃縮后，用氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。試劑和材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。試劑甲醇（CH3OH）。二氯甲烷（CH2Cl2）。正己烷（C6H14）。甲苯（C7H8）。二氯甲烷-甲醇混合溶液：用二氯甲烷和甲醇按4:1體積比混合。無(wú)水硫酸銨（(NH4)2SO4）。飽和硫酸銨溶液：稱(chēng)取過(guò)量無(wú)水硫酸銨，用100mL水溶解至有晶體析出。胎牛血清。標(biāo)準(zhǔn)品農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥95%或有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，見(jiàn)附錄A。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（0.5mg/mL）：分別準(zhǔn)確稱(chēng)取12.5mg（精確至0.1mg）各標(biāo)準(zhǔn)品，用甲苯溶解并轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，定容至刻度，配制成濃度為0.5mg/mL的各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于-18℃避光保存，可穩(wěn)定3個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)使用溶液標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（25μg/mL）：分別移取250μL各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于5mL容量瓶中，用甲苯定容至刻度，配制成濃度為25μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。臨用現(xiàn)配。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)準(zhǔn)確吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液于空白基質(zhì)（胎牛血清）中，配制成目標(biāo)農(nóng)藥參考濃度分別為0μg/L，0.5μg/L，1.0μg/L，5.0μg/L，10.0μg/L和100.0μg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)，采用與待測(cè)樣本相同的前處理方法（8測(cè)定步驟），最后形成濃度水平為0μg/L，12.5μg/L，25.0μg/L，125.0μg/L，250.0μg/L和2500.0μg/L基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)序列。臨用現(xiàn)配。材料十八烷基硅烷鍵合固相萃取柱：3mL，200mg或相當(dāng)者。非抗凝管。聚丙烯離心管：1.5mL。儀器和設(shè)備氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀：配有電子轟擊源（EI）。電子天平：感量0.0001g。固相萃取裝置。氮吹濃縮裝置。高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速可達(dá)12000r/min。渦旋振蕩器。試樣采集使用非抗凝管采集不少于2mL外周靜脈血，室溫靜置30min，3000r/min離心15min，取上清液轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中備用。試樣采集耗材、環(huán)境和人員應(yīng)符合GB/T16126要求。測(cè)定步驟提取準(zhǔn)確移取0.5mL血清于1.5mL離心管中，加入500μL飽和硫酸銨溶液，渦旋振蕩30s，12000r/min離心15min，吸取上清液至另一離心管中。凈化固相萃取柱依次用甲醇、水各3mL活化。取上清液過(guò)柱，待樣品自然流盡后加入1mL水淋洗，淋洗液流盡后負(fù)壓抽干15min。依次用4mL二氯甲烷-甲醇混合溶液、3mL正己烷洗脫，收集洗脫液，于40℃氮吹至干。加入200μL二氯甲烷，渦旋振蕩1min后，轉(zhuǎn)移至250μL內(nèi)襯管中，自然揮干，加入20μL甲苯復(fù)溶，渦旋振蕩1min后用于氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜測(cè)定。測(cè)定氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜參考條件色譜條件載氣：高純氦氣，流速1mL/min；色譜柱：苯基亞芳基聚合物色譜柱，30m×0.25mm×0.25μm；或性能相當(dāng)者；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：2μL；進(jìn)樣口溫度：270°C；柱溫：初始溫度100°C，持續(xù)1min；30°C/min升溫至200°C保持1min；5°C/min升溫至210°C保持2min；10℃/min升溫至260℃；20℃/min，升溫至300℃，保持5min。三重四級(jí)桿質(zhì)譜條件碰撞氣：高純氬氣，流速1mL/min；離子源溫度：300°C；傳輸線(xiàn)溫度：300°C；掃描模式：SRM；電離電壓：70eV；發(fā)射電流：50μA；掃描寬度：3.0s；掃描時(shí)間：0.043s；電離方式：EI；選擇離子監(jiān)測(cè)：每種化合物分別選擇一個(gè)定量離子對(duì)，一個(gè)定性離子對(duì)。所有需要檢測(cè)的離子依據(jù)出峰順序，分時(shí)段分別檢測(cè)。每種化合物的保留時(shí)間、定量離子及定性離子，參見(jiàn)附錄B?；瘜W(xué)物的選擇離子流圖參見(jiàn)附錄C。定性測(cè)定被測(cè)試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較，相對(duì)誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如果檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，目標(biāo)化合物的質(zhì)譜定量和定性離子均出現(xiàn)，而且同一檢測(cè)批次，對(duì)同一化合物，樣品中目標(biāo)化合物的定性離子和定量離子的相對(duì)豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)工作溶液相比，其允許偏差不超過(guò)表1規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標(biāo)農(nóng)藥。如果不能確證，應(yīng)重新進(jìn)樣，以?huà)呙璺绞剑ㄓ凶銐蜢`敏度）或采用增加其他確證離子的方式或用其他靈敏度更高的分析儀器來(lái)確證。定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度/%>5020~50（含）10~20（含）≤10允許相對(duì)偏差/%±20±25±30±50定量測(cè)定本方法通過(guò)工作曲線(xiàn)法進(jìn)行定量測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的上機(jī)濃度范圍為：12.5μg/L~2500.0μg/L，樣品經(jīng)過(guò)提取與凈化后進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)得到的目標(biāo)物定量離子的峰面積，采用工作曲線(xiàn)法進(jìn)行定量，計(jì)算樣本中11種農(nóng)藥的含量。平行試驗(yàn)按步驟8.1~8.3的規(guī)定對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定?？瞻自囼?yàn)除不加試樣外，其他操作步驟均按步驟8.1~8.3的規(guī)定進(jìn)行。結(jié)果計(jì)算樣本中各農(nóng)藥的含量按照公式（1）計(jì)算，計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。 Cs=C×VVS 式中：CS——樣本中各農(nóng)藥濃度，μg/L；C——從工作曲線(xiàn)得對(duì)應(yīng)的各農(nóng)藥的濃度，μg/L；V——樣本檢測(cè)定容體積，μL；VS——樣本取樣體積，μL；方法的定量限和準(zhǔn)確度定量限血清取樣量為0.5mL，定容體積為20μL時(shí)，11種農(nóng)藥的定量限參見(jiàn)附錄A。準(zhǔn)確度胎牛血清中11種農(nóng)藥添加濃度均為1μg/L時(shí)，回收率為76.5%~133%；添加濃度均為10μg/L時(shí)，回收率為81.4%~123%。1.0μg/L、10.0μg/L添加濃度下各農(nóng)藥相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為17%~35%。

（規(guī)范性）

11種檢測(cè)農(nóng)藥中文名稱(chēng)及方法定量限11種檢測(cè)農(nóng)藥中文名稱(chēng)及方法定量限序號(hào)中文名稱(chēng)定量限/（μg/L）1氯苯胺靈0.52五氯苯甲醚0.53野麥畏0.54乙烯菌核利0.55殺螟硫磷0.56粉銹寧0.57二甲戊靈0.58毒蟲(chóng)畏0.59丁草胺0.510腈菌唑0.511莎稗磷0.5

（資料性）

11種檢測(cè)農(nóng)藥參考保留時(shí)間、定量離子對(duì)和定性離子對(duì)11種檢測(cè)農(nóng)藥參考保留時(shí)間、定量離子對(duì)和定性離子對(duì)序號(hào)CAS號(hào)中文名稱(chēng)英文名參考保留時(shí)間/min定量離子對(duì)/（m/z）碰撞能量/eV定性離子對(duì)/（m/z）碰撞能量/eV1101-21-3氯苯胺靈Chlorpropham7.05213.1/127.112127.0/65.12021825-21-4五氯苯甲醚Pentachloroanisole7.81279.9/236.920264.8/236.9832303-17-5野麥畏Triallate8.75270.0/185.916268.0/183.96450471-44-8乙烯菌核利Vinclozolin9.54212.0/145.020178.1/115.1185122-14-5殺螟硫磷Fenitrothion10.26277.0/109.012125.0/79.06643121-43-3粉銹寧Triadimefon10.96208.0/111.020181.0/127.16740487-42-1二甲戊靈Pendimethalin11.57252.1/162.114162.1/161.1108470-90-6毒蟲(chóng)畏Chlorfenvinphos11.78269.0/161.014267.0/159.012923184-66-9丁草胺Butachlor12.56176.1/147.112160.1/130.1261088671-89-0腈菌唑Myclobutanil13.31179.0/90.030150.0/123.0161164249-01-0莎稗磷Anilofos16.20226.1/157.112125.0/79.08

（資料性）

11種檢測(cè)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)選擇離子流色譜圖11種檢測(cè)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)選擇離子流色譜圖1.氯苯胺靈；2.五氯苯甲醚；3.野麥畏；4.乙烯菌核利；5.殺螟硫磷；6.粉銹寧；7.二甲戊靈；8.毒蟲(chóng)畏；9.丁草胺；10.腈菌唑；11.莎稗磷。前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由江蘇省衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：南京醫(yī)科大學(xué)、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、無(wú)錫市疾病預(yù)防控制中心本文件主要起草人：夏彥愷、朱寶立、陳敏健、管權(quán)權(quán)、丁新良、孫宏。前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由江蘇省衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：南京醫(yī)科大學(xué)、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、無(wú)錫市疾病