第第頁安捷倫液相色譜儀正確安裝及使用方法液相色譜操作規(guī)程

安捷倫液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分構(gòu)成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工獲得正確牢靠的試驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。

*：安捷倫液相色譜儀安裝條件

一、環(huán)境要求：

1、溫度：15～30℃

2、日溫差：3℃

3、相對濕度：20%～85%

4、地面：平滑、不易起塵

5、安裝場所：無震動、四周無腐蝕性介質(zhì)、無電磁場干擾，操作臺縱深尺寸60cm以上，避開空調(diào)直吹風(fēng)，避開直射陽光。

6、推舉液相色譜儀工作臺：長2米、寬0.8米，承重點于80公斤。建議離墻距離0.3米以上。

一般在安裝的實際空間上，還要考慮：

與其它儀器間距大于60cm，儀器后面板應(yīng)留有不小于50cm的空間，前面板至操作臺邊緣距離不小10cm；儀器安裝平穩(wěn)堅固，接入了UPS電源，儀器外殼與地線連接。

二、電源要求：

1、單相交流220V，（+5%～—10%），50～60Hz，有單獨的良好接地。

2、若電壓不穩(wěn)，需配置穩(wěn)壓電源，功率大于2.5千瓦。

3、準(zhǔn)備1個合格的萬用接線板，總數(shù)不小于5個扁平三角接線插座。

4、斷電續(xù)電本領(lǐng)：斷電情形，設(shè)備能持續(xù)運行1小時以上。

5、接地：安裝場所應(yīng)有牢靠接地線裝置

三、溶劑要求：

1、二次重蒸餾水，1000毫升以上（建議用0.45微米水相濾膜過濾）。

2、乙腈或甲醇（色譜純或優(yōu)級純），1500毫升以上（建議用0.45微米有機相濾膜過濾）。

四、操作系統(tǒng)：WindowsXP操作系統(tǒng)

硬件要求：內(nèi)存不低于2G；硬盤不低于160G；配有網(wǎng)絡(luò)適配器（2個網(wǎng)卡）；帶光區(qū)驅(qū)動

第二、安捷倫液相色譜儀安裝方法：

1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：

a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。

柱接頭接受低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3/16英寸的內(nèi)螺紋（國內(nèi)外已規(guī)范化）。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管（6.35mm）連接，中心放置壓壞用于密封。3/16英寸的內(nèi)螺紋與1/16英寸（1.57mm）的連接管連接，中心也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量削減柱外死體積，在安裝色譜柱時，用1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上（連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴格掌控在2.5mm長或其他固定尺寸）。

在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片（或濾網(wǎng)），用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有確定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避開腐蝕。

b、柱填料：

液相色譜柱的分別作用是在填料與流動相之間進行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。

正相柱：多以硅膠為柱填料。依據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在310m的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合CN，—NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。

反相柱：緊要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團（ODS）的非極性填料。也有無定型和球型之分。

常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在310m之間。

2，色譜柱的安裝：

a、拆開柱包裝盒，確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。

b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。

c、按柱管上標(biāo)示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口相連接（如條件允許，建議在柱前使用保護柱）；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1—0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時確定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止，再用扳手連續(xù)順時針擰1/4—1/2圈，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象，請用扳手連續(xù)順時針擰1/4圈，直至不漏液為止。

第三、液相色譜柱的使用：

色譜柱在使用前，進行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是依照色譜柱出廠報告中的條件進行（出廠測試所使用的條件是zui佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

1、樣品的前處理：

a、使用流動相溶解樣品。

b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

c、使用0.45m的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

2、流動相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分別的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

a、流動相對樣品具有確定的溶解本領(lǐng)，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱中）。

b、流動相具有確定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特別情況除外）。

c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分別效果；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度）。

d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，使用對紫外吸取較低的溶劑配制。

e、流動相沸點不要太低，否則簡單產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致試驗無法進行。

f、在流動相配制好后，確定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3、流動相流速的選擇：

因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要努力探求zui佳柱效，使用zui佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。

當(dāng)選用zui佳流速時，分析時間可能延長?？山邮芨牧鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間（如使用反相柱時，可適當(dāng)加添甲醇或乙腈的含量）。

注意：

a.由于甲醇廉價，對于反相柱推舉使用甲醇體系（必需使用乙腈的場合除外）。

b.對于正相柱推舉使用沸程為30—60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水使用超純水（電阻率大于18兆歐），去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。

c.含水流動相在試驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要放置時間過長。加入疊氮化鈉，防止細菌生長。

d.流動相要求使用0.45m濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。

e.使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

4、柱性能測試：

啟動液相色譜儀：a、流動相流速設(shè)定為1ml/min。

b、UV檢測器波長設(shè)定為254nm。

使用出廠測試時使用的流動相構(gòu)成及測試樣品。

記錄并計算測試結(jié)果。

液相色譜儀常見故障及處理方法

液相色譜儀常見故障及處理方法簡析

1、液相色譜儀—氣泡溢出

流動相內(nèi)有氣泡,關(guān)閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團,堵塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可；亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,連續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0～3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。

2、液相色譜儀—柱壓高原因

（1）緩沖液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內(nèi)；

（2）樣品污染沉積。處理對于第一種情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓漸漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定）,再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

3、液相色譜儀—既無壓力指示,又無液體流過

（1）泵密封墊圈磨損；

（2）大量氣泡進入泵體。處理對于第一種情況,更換密封墊圈；對于第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫忙抽出空氣。

4、液相色譜儀—壓力波動大,流量不穩(wěn)定

原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意察看流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避開吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

5、液相色譜儀—出峰不佳,峰分叉

（1）色譜柱被污染；

（2）柱頭填料塌陷。處理對于第一種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定）,再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后仍舊出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分（污染的填料）,裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。

6、液相色譜儀—峰面積重復(fù)性不佳

（1）進樣閥漏液；

（2）加樣針不到位。

（3）液量不足.

處理對于第一種情況更換進樣閥墊圈；對于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保