I本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B均為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：呂作舟、陳立國、王卓仁。Ⅱ栽培黑木耳使用的菌種是人工培育的純菌絲體及其培養(yǎng)基的混合體。我國采用三級擴大繁育程序(即母種、原種、栽培種)培育木耳菌種。為了規(guī)范我國木耳菌種生產(chǎn)、經(jīng)銷和使用，確保我國黑木耳生產(chǎn)持續(xù)健康發(fā)展，特制定本標(biāo)準(zhǔn)。1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了黑木耳(Auriculariaauricula)菌種的術(shù)語和定義、質(zhì)量要求、試驗方法、檢驗規(guī)則及本標(biāo)準(zhǔn)適用于黑木耳菌種的生產(chǎn)、流通和使用。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T191包裝儲運圖示標(biāo)志(GB/T191—2000,eqvISO780:1997)GB/T4789.28食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗染色法、培養(yǎng)基和試劑GB/T12728—1991食用菌術(shù)語GB19172—2003平菇菌種NY/T528—2002食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，以玻璃試管為培養(yǎng)容器和由母種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶或15cm×28cm聚丙烯塑料袋為容器。[NY/T528—2002,定義3.4]由原種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃瓶或塑料袋為容器。栽培種只能用于栽培，不可再次擴大繁殖菌種。具有不同遺傳基因的菌落間產(chǎn)生不生長區(qū)帶或形成不同形式線行邊緣的現(xiàn)象。[GB19172—2003,定義3.4]因菌絲體局部變異或感染病毒而導(dǎo)致菌絲變細(xì)、生長緩慢、菌絲體表面特征成角狀異常的現(xiàn)象。2高溫抑制線hightemperaturedline食用菌菌種在生產(chǎn)過程中受高溫的不良影響，培養(yǎng)物出現(xiàn)的圈狀發(fā)黃、發(fā)暗或菌絲變稀弱的現(xiàn)象。[GB19172—2003,定義3.6]耳芽(原基)promordium黑木耳子實體的幼小階段，形成于培養(yǎng)基的表面，呈淡黃色或褐色半透明的膠質(zhì)體。生物學(xué)效率biologicalefficiency單位數(shù)量培養(yǎng)料的干物質(zhì)與所培養(yǎng)產(chǎn)生出的子實體或菌絲體干重之間的比率。[GB/T12728—1991,定義2.1.20]種性charactersofvariety食用菌的品種特性是鑒別食用菌菌種或品種優(yōu)劣的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。一般包括對溫度、濕度、酸堿度、[NY/T528—2002,定義3.8]4質(zhì)量要求4.1母種4.1.1容器規(guī)格應(yīng)符合NY/T528—2002中4.7.1.1規(guī)定。4.1.2感官要求應(yīng)符合表1規(guī)定。表1母種感官要求容器完整、無破損、無裂紋棉塞或無棉塑料蓋干燥、潔凈，松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基灌入量為試管總?cè)莘e的四分之一至五分之一斜面長度頂端距棉塞40mm～50mm菌絲生長量長滿斜面接種量(接種塊大小)菌種正面外觀潔白、纖細(xì)、平貼培養(yǎng)基生長、均勻、平整、無角變，菌落邊緣整齊，無雜菌菌落斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮，有菌絲體分泌的黃褐色色素于培養(yǎng)基中氣味有黑木耳菌種特有的清香味，無酸、臭、霉等異味4.1.3微生物學(xué)要求應(yīng)符合表2規(guī)定。表2母種微生物學(xué)要求菌絲形態(tài)粗細(xì)不勻，常出現(xiàn)根狀分枝，有鎖狀聯(lián)合雜菌無4.1.4菌絲生長速度：在PDA培養(yǎng)基(見附錄A)上，在適溫(26℃±2℃)下，菌絲10天～15天長滿斜面。34.1.5母種栽培性狀：供種單位所供母種需經(jīng)栽培試驗確證種性中農(nóng)藝性狀合格后，方可用于擴大繁4.2.1容器規(guī)格應(yīng)符合NY/T528—2002中4.7.1.2規(guī)定。4.2.2感官要求應(yīng)符合表3規(guī)定。容器完整、無破損、無裂紋棉塞或無棉塑料蓋干燥、潔凈，松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基上表面距瓶(袋)口的距離50mm±5mm接種量(每支母種接原種數(shù)，接種物大小)(4～6)瓶(袋),≥12mm×15mm菌絲生長量長滿容器菌絲體特征白色至米黃色，細(xì)羊毛狀，生長旺健，菌落邊緣整齊培養(yǎng)基及菌絲體培養(yǎng)基變色均勻，菌種緊貼瓶壁，無干縮菌絲分泌物允許有少量無色至棕黃色水珠雜菌菌落無頡顱現(xiàn)象及角變無耳芽(子實體原基)允許有少量膠質(zhì)、琥珀色顆粒狀耳芽有黑木耳菌種特有的清香味，無酸、臭、霉等異味4.2.3微生物學(xué)要求應(yīng)符合表2規(guī)定。4.3栽培種4.3.1容器規(guī)格應(yīng)符合NY/T528—2002中4.7.1.3規(guī)定。4.3.2感官要求應(yīng)符合表4規(guī)定。表4栽培種感官要求容器完整、無破損、無裂紋棉塞或無棉塑料蓋干燥、潔凈，松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基上表面距瓶(袋)口的距離接種量(每瓶原種接栽培種數(shù))40瓶(袋)～50瓶(袋)菌絲生長量長滿容器菌絲體特征白色至米黃色，細(xì)羊毛狀，生長旺健，菌落邊緣整齊培養(yǎng)基及菌絲體培養(yǎng)基變色均勻，菌種緊貼瓶(袋)壁或略有干縮菌絲分泌物允許有少量無色至棕黃色水珠雜菌菌落無頡顏現(xiàn)象及角變無耳芽(子實體原基)允許有少量淺褐色至黑褐色菊花狀或不規(guī)則膠質(zhì)耳芽有黑木耳菌種特有的清香味，無酸、臭、霉等異味44.3.3微生物學(xué)指標(biāo)應(yīng)符合表2規(guī)定。4.3.4菌絲生長速度：在適宜培養(yǎng)基上，在適溫(26℃±2℃)下，一般35天～40天長滿容器。5抽樣5.1質(zhì)檢部門的抽樣應(yīng)具有代表性。5.2母種按品種、培養(yǎng)條件、接種時間分批編號，原種、栽培種按菌種來源、制種方法和接種時間分批編號。按批隨機抽取被檢樣品。5.3母種、原種、栽培種的抽樣量分別為該批菌種量的10%、5%、1%。但每批抽樣數(shù)量不得少于10支(瓶、袋);超過100支(瓶、袋)的，可進(jìn)行兩級抽樣。6試驗方法6.1感官檢驗按表5逐項進(jìn)行。表5感官檢驗方法檢驗項目檢驗方法檢驗項目檢驗方法容器肉眼觀察接種量母種、原種肉眼觀察、測量栽培種檢查生產(chǎn)記錄棉塞、無棉塑料蓋肉眼觀察培養(yǎng)基上表面距瓶(袋)口的距離肉眼觀察母種培養(yǎng)基灌入量肉眼觀察菌絲體特征肉眼觀察培養(yǎng)基及菌絲體肉眼觀察母種斜面長度肉眼觀察分泌物肉眼觀察菌種生長量肉眼觀察雜菌菌落肉眼觀察，必要時用5×放大鏡觀察母種菌種外觀肉眼觀察耳芽(子實體原基)肉眼觀察頡頑現(xiàn)象及角變?nèi)庋塾^察母種斜面背面外觀肉眼觀察鼻嗅6.2微生物學(xué)檢驗表2中各項用放大倍數(shù)不低于10×40的光學(xué)顯微鏡對培養(yǎng)物的水封片進(jìn)行觀察，每一檢樣應(yīng)觀察不少于50個視野。6.2.1霉菌檢驗取少量疑有霉菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接種于PDA培養(yǎng)基(見第A.1章)斜面或平板上，26℃士2℃培養(yǎng)5天～7天，菌落出現(xiàn)白色以外的雜色者，或有異味者為霉菌污染物，必要時進(jìn)行水封片鏡檢。6.2.2細(xì)菌檢驗取少量疑有細(xì)菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接入GB/T4789.28中4.8規(guī)定的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中，25℃~28℃振蕩培養(yǎng)1天～2天，觀察培養(yǎng)液是否混濁。培養(yǎng)液混濁，為有細(xì)菌污染；培養(yǎng)液澄清，為無細(xì)菌污染。6.3菌絲生長速度6.3.1母種PDA培養(yǎng)基(見第A.1章),26℃±2℃培養(yǎng)，記錄長滿斜面所需天數(shù)。56.3.2原種和栽培種章規(guī)定的配方之一，在26℃±2℃培養(yǎng)，記錄長滿培養(yǎng)基所需天數(shù)。6.4母種農(nóng)藝性狀將被檢母種制成原種。采用第B.1章、第B.2章、第B.3章規(guī)定的配方之一，含水量提高至62%±2%,制作菌袋45個。接種后，分三組進(jìn)行常規(guī)管理，根據(jù)表6所列項目，做好栽培記錄，統(tǒng)計檢驗結(jié)果。同時將該母種的出發(fā)菌株設(shè)為對照，亦做同樣處理。對比二者的檢驗結(jié)果，以時間計的檢驗項目中，被檢母種的任何一項時間較對照菌株推遲五天以上(含五天)者，為不合格；產(chǎn)量顯著低于對照菌株者，為不合格；子實體外觀、耳片剖面形態(tài)與對照明顯不同或畸形者，為不合格。表6母種栽培中農(nóng)藝性狀檢驗記錄試驗結(jié)果試驗結(jié)果母種長滿管所需天數(shù)總產(chǎn)/g原種長滿瓶所需天數(shù)單產(chǎn)/g母種接種至萌發(fā)所需天數(shù)單朵耳質(zhì)量/g原種接種至萌發(fā)所需天數(shù)生物學(xué)效率/(%)栽培種接種至定植所需天數(shù)耳片朵型、色澤栽培種接種至產(chǎn)生耳芽所需天數(shù)耳片直徑、厚度/mm接種至收第一茬耳所需天數(shù)耳片剖面髓層各級菌種都應(yīng)留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)每個批號菌種3支(瓶、袋)～5支(瓶、袋),于4℃~6℃下貯存，母種和原種6個月，栽培種4個月。按質(zhì)量要求進(jìn)行檢驗。檢驗項目全部符合質(zhì)量要求者，為合格菌種；其中任何一項不符合要求者，均為不合格菌種。8.1.1產(chǎn)品標(biāo)簽每支、瓶(袋)菌種需貼有清晰注明以下要素的標(biāo)簽：a)產(chǎn)品名稱(如：黑木耳母種);b)品種名稱(如：冀誘1號);c)生產(chǎn)單位(如：××菌種廠);d)接種日期(如：2001.××.××);e)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。8.1.2包裝標(biāo)簽每箱菌種需貼有清晰注明以下要素的包裝標(biāo)簽：a)產(chǎn)品名稱、品種名稱；c)出廠日期；6f)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。8.1.3包裝儲運圖示標(biāo)志a)小心輕放標(biāo)志；d)防止倒置標(biāo)志；e)防止重壓標(biāo)志。8.2包裝8.2.1母種外包裝采用木盒或有足夠強度的瓦楞紙箱，內(nèi)部用棉花、碎紙等具有緩沖作用的輕質(zhì)材料填滿。8.2.2原種、栽培種外包裝采用足夠強度的瓦楞紙箱，每箱20瓶，內(nèi)部用碎紙、報紙等具有緩沖作用的輕質(zhì)材料填滿。紙箱上部和底部用8cm寬的膠帶封口，并用打包帶捆扎兩道，箱內(nèi)附產(chǎn)品合格證書和使用說明(包括菌種種性、培養(yǎng)基配方及適用范圍)。8.3.1不得與有毒物品混裝。8.3.2氣溫達(dá)30℃以上時，需用0℃~20℃的冷藏車(船)運輸。8.4.1母種一般在4℃~6℃冰箱中貯存，貯存期不超過三個月。8.4.2原種一般在0℃~10℃以下冷庫中貯存，貯存期不超過40天。8.4.3栽培種應(yīng)盡快使用，14天內(nèi)可在溫度不超過26℃、清潔、通風(fēng)、干燥(相對濕度50%～70%)、避光的室內(nèi)松散存放。7(規(guī)范性附錄)母種常用培養(yǎng)基及其配方A.1PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)馬鈴薯200g(用浸出汁),葡萄糖20g,瓊脂20g,水1000mL,pH值自然。A.2CPDA培養(yǎng)基(綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)馬鈴薯200g(用浸出汁),葡萄糖20g,磷酸二氫鉀2g,硫酸鎂0.5g,水1000mL,pH值