1花生抗旱品種鑒定技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了花生抗旱品種的鑒定方法、評(píng)價(jià)指標(biāo)和分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。本文件適用于花生抗旱性評(píng)價(jià)及抗旱品種鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程發(fā)芽試驗(yàn)GB4407.2經(jīng)濟(jì)作物種子第2部分：油料類3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4樣品準(zhǔn)備選取籽粒飽滿、大小一致的種子樣品300粒，充分混合均勻，用1%的次氯酸鈉溶液浸泡消毒10min，自來(lái)水沖洗3次，蒸餾水沖洗3次。種子質(zhì)量應(yīng)符合GB4407.2的規(guī)定。5幼苗培養(yǎng)將待測(cè)種子樣品在25℃條件下浸種12h，均勻擺放至鋪有雙層濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿中，置于人工氣候箱內(nèi)，進(jìn)行紙間（BP）發(fā)芽試驗(yàn)，按照GB/T3543.4規(guī)定執(zhí)行。選取塑料盆缽20盆，裝等量蛭石后，每盆均勻播種5粒，置于人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度28℃/23℃（晝/夜）、光周期16h/8h（晝/夜）、光照強(qiáng)度400μmol·m-2·s-1～600μmol·m-2·s-1、相對(duì)濕度60%～70%。6試驗(yàn)設(shè)計(jì)采取PEG6000模擬干旱的方式。盆栽樣品幼苗生長(zhǎng)至4葉期時(shí)，分成對(duì)照組和干旱處理組，每組10盆，每盆保留3株。將幼苗從塑料盆缽中完整取出，用蒸餾水沖洗根部，吸干表面水分。對(duì)照組幼苗根系于蒸餾水中浸泡24h，干旱處理組幼苗根系于20%的PEG6000溶液中浸泡24h，其他培養(yǎng)條件同本文件5的規(guī)定。設(shè)3次重復(fù)。7指標(biāo)測(cè)定27.1相對(duì)植株鮮重培養(yǎng)24h后，選取對(duì)照組和干旱處理組長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗各5株，用蒸餾水沖洗根部，用吸水紙吸干表面水分，用電子天平稱量植株鮮重（g）,按照公式（1）計(jì)算相對(duì)植株鮮重。7.2葉片相對(duì)含水量培養(yǎng)24h后，選取對(duì)照組和干旱處理組長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗各5株，剪取倒數(shù)第四片復(fù)葉，稱量葉片鮮重（g然后，將葉片完全浸泡在蒸餾水中至恒重，稱量葉片飽水重（g最后，將葉片放入烘箱80℃烘干至恒重，稱量葉片干重（g）。按照公式（2）計(jì)算葉片相對(duì)含水量。7.3比葉重采用打孔稱重法測(cè)定。培養(yǎng)24h后，選取對(duì)照組和干旱處理組長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗各5株，剪取倒數(shù)第四片復(fù)葉，用直徑為0.5cm的打孔器，避開主葉脈，打20個(gè)小圓片，并稱量鮮重（g）。按照公式（3）計(jì)算葉片比葉重。7.4離體葉片失水速率培養(yǎng)24h后，選取對(duì)照組和干旱處理組長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗各5株，剪取第四片復(fù)葉，稱量葉片鮮重（g然后,于室內(nèi)避光自然風(fēng)干,2h后稱量葉片風(fēng)干重（g）；最后，于烘箱中80℃烘干至恒重，稱量葉片干重（g）。按照公式（4）計(jì)算離體葉片失水速率。式中：RWL—離體葉片失水速率；FWI—葉片鮮重；FW2—葉片風(fēng)干重；DW—葉片干重。7.5傷害度培養(yǎng)24h后，選取對(duì)照組和干旱處理組長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗各5株，剪取倒數(shù)第四片復(fù)葉，用直徑為0.5cm的打孔器，避開主葉脈，打20個(gè)小圓片，于5mL蒸餾水中浸泡5h后，用電導(dǎo)儀測(cè)定初始電導(dǎo)值；然后沸水浴15min，冷卻至室溫后，測(cè)定終電導(dǎo)值。按照公式（5）和公式（6）計(jì)算傷害度。式中：L—相對(duì)電導(dǎo)率（%K1—初始電導(dǎo)值；K2—終電導(dǎo)值。3式中：I—傷害度（%）；Lt—干旱處理組的相對(duì)電導(dǎo)率（%Lck—對(duì)照組的相對(duì)電導(dǎo)率（%）。7.6游離脯氨酸含量7.6.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制用分析天平精確稱取25.0mg脯氨酸，倒入小燒杯中，用少量蒸餾水溶解，然后倒入250mL容量瓶，加蒸餾水定容至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液（脯氨酸含量為100μg/mL）；取6個(gè)50mL容量瓶，分別裝入脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL和3.0mL，用蒸餾水定容至刻度并搖勻，脯氨酸濃度分別為1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL、5μg/mL和6μg/mL。取6支具塞試管，分別吸取2mL各濃度的脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，再加入2mL冰醋酸和2mL酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加熱30min。室溫冷卻后，各試管加入4mL甲苯，震蕩30s，靜置片刻，至色素全部轉(zhuǎn)移到甲苯層，用移液器將各管上層脯氨酸甲苯溶液吸至比色皿中，以甲苯溶液為空白對(duì)照，于520nm波長(zhǎng)處比色。根據(jù)吸光值和脯氨酸濃度擬合回歸方程，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算測(cè)定液中脯氨酸的含量(μg/mL）。7.6.2游離脯氨酸測(cè)定培養(yǎng)24h后，選取對(duì)照組和干旱處理組長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗各5株，剪取第四片復(fù)葉，稱取0.5g并剪碎，置于試管中。然后向試管中加入5mL3%的磺基水楊酸溶液，加塞在沸水浴中提取10min（提取過(guò)程中要經(jīng)常搖動(dòng)）。室溫冷卻后，吸取2mL提取液至另一具塞試管中，加入2mL冰醋酸和2mL酸性茚三酮溶液，在沸水浴中加熱30min。再次室溫冷卻后，加入4mL甲苯，震蕩30s，靜置片刻，萃取紅色甲苯層。用移液器將上層脯氨酸甲苯溶液吸至比色皿中，以甲苯溶液為空白對(duì)照，測(cè)定520nm波長(zhǎng)的吸光值。根據(jù)回歸方程計(jì)算測(cè)定液中脯氨酸的含量(μg/mL），根據(jù)公式（7）計(jì)算樣品中游離脯氨酸含量的百分?jǐn)?shù)。式中：X—測(cè)定液中脯氨酸的含量。7.7萎蔫指數(shù)培養(yǎng)24h后，選取對(duì)照組和干旱處理組長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗各5株，采用目測(cè)法評(píng)定萎蔫指數(shù)等級(jí)，并用數(shù)碼相機(jī)拍攝花生植株?duì)顟B(tài)，即：0級(jí)，花生葉片自然伸展，葉色鮮亮且有光澤，莖稈堅(jiān)挺；1級(jí)，葉片開始出現(xiàn)失水反應(yīng)，葉色無(wú)光澤，頂一葉、二葉略微下垂；2級(jí)，植株繼續(xù)失水，葉片皺縮下垂幅度增大；3級(jí)，部分葉片干硬、卷曲；4級(jí)，所有葉片均下垂、皺縮，葉片變黃；5級(jí)，葉片完全失水干硬，植株死亡。若萎蔫程度介于兩級(jí)之間，則為半級(jí)。8抗旱性綜合評(píng)價(jià)8.1評(píng)價(jià)方法4根據(jù)測(cè)定的相對(duì)植株鮮重、葉片相對(duì)含水量、比葉重、離體葉片失水速率、傷害度、游離脯氨酸含量和萎蔫指數(shù)，利用隸屬函數(shù)法進(jìn)行綜合性分析。按照公式（8）、公式（9）和公式（10）計(jì)算抗旱性綜合評(píng)價(jià)隸屬函數(shù)。μij=(xij?xjmin)/(xjmax?xjmin)（與抗旱性呈正相關(guān)的性狀） μij=1?(xij?xjmin)/(xjmax?xjmin)（與抗旱性呈負(fù)相關(guān)的性狀） 式中：μij—第i個(gè)品種第j個(gè)指標(biāo)的隸屬