ICS?FORMTEXT?????FORMTEXT?????FORMTEXT備案號(hào)：DBFORMTEXT??DBFORMTEXTXX/FORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT代替?DBFORMTEXT桑蠶一代雜交種質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫規(guī)程FORMTEXTInspectionandquarantinerulesforqualityofF1hybrideggsofsilkwormFORMTEXT?????FORMDROPDOWNFORMTEXT（本稿完成日期：2023/3/6）FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實(shí)施FORMTEXT?江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局???發(fā)布DBXX/XXXXX—XXXXI桑蠶一代雜交種質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蠶種質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫的術(shù)語(yǔ)和定義、蠶卵識(shí)別、卵質(zhì)調(diào)查、母蛾微粒子病檢疫、成品卵微粒子病檢疫、蠶種質(zhì)量指標(biāo)等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于省內(nèi)桑蠶一代雜交種的質(zhì)量檢驗(yàn)。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。\t"/kns8/defaultresult/_blank"

桑蠶一代雜交種檢驗(yàn)規(guī)程N(yùn)Y/T327\t"/kns8/defaultresult/_blank"桑蠶微粒子病病原鑒定方法

GB/T20395術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。一代雜交種（F1hybrids）利用雜種優(yōu)勢(shì)，以不同地理系統(tǒng)的品種雜交制成，供原料繭生產(chǎn)的蠶種。散卵種（Looseeggs）產(chǎn)附于蠶連紙或散卵布上的蠶卵經(jīng)脫落、比重等技術(shù)程序處理后的蠶種。良卵率（Percentageofgoodeggs）良卵數(shù)占蠶卵總粒數(shù)的百分比。雜交率（Percentageofhybridizedsilkworms）符合該品種性狀蠶的數(shù)量占調(diào)查蠶總頭數(shù)的百分比。實(shí)用孵化率（Effectivehatchingrates）經(jīng)過(guò)催青的蠶種，連續(xù)2d孵化最多的蟻蠶頭數(shù)占調(diào)查良卵總數(shù)的百分比。微粒子病蛾率（Pebrinecontaminationrateofmoths）帶微粒子病的母蛾數(shù)占制種批（戶）母蛾總數(shù)的百分比。按規(guī)定方法抽樣檢驗(yàn)，以允許檢出的病蛾集團(tuán)數(shù)來(lái)判定合格與否。微粒子病卵率（Pebrinecontaminationrateofeggs）帶微粒子病的蠶卵占制種批蠶卵總數(shù)的百分比。按規(guī)定方法對(duì)成品蠶種進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，以允許檢出的微粒子病卵集團(tuán)數(shù)來(lái)判定合格與否。蠶卵識(shí)別正常卵（良卵）指在一定條件下胚胎能正常發(fā)育的卵。卵形正常卵為短橢圓形、扁平。卵所在的前端稍尖后端鈍圓，還有球形、紡錘形、腎臟形、皺紡卵等。卵的中央有卵渦，卵渦有深有淺，因品種不同而有差異。卵色卵色為卵黃色、漿膜色、卵殼色三者的復(fù)合物，一般品種為褐綠色或褐紫色。卵殼色一般為白色、黃色、淡黃色。產(chǎn)附指所產(chǎn)蠶卵分布是否均勻、有無(wú)疊卵和粘著力強(qiáng)弱等。不良卵指死卵、不受精卵及胚胎不能正常發(fā)育的卵。死卵a(bǔ)）早期死卵：從漿膜著色到點(diǎn)青期而死，卵渦深陷或成癟卵，多黑褐色，也有淡紅色、赤褐色。b）催青死卵：蠶卵點(diǎn)青、轉(zhuǎn)青后不孵化、卵殼不下陷。c）白死卵：卵一部分呈黃白色，一部分有黑點(diǎn)，大小、多少不一。d）灰白死卵：卵色灰白，卵面三角形凹陷，少數(shù)淡黃而不癟。e）白殼卵：卵殼有一小空隙、卵殼呈白色。f）不孵化卵：外觀正常不孵化、胚胎只有某種程度的發(fā)育。不越年卵當(dāng)年產(chǎn)卵當(dāng)年就孵化的卵，分為生種和再出卵2種。a）生種：產(chǎn)卵后不變色、在正常溫度保護(hù)下10d左右孵化。b）再出卵：產(chǎn)卵后變成固有色，當(dāng)年內(nèi)陸續(xù)孵化。不受精卵卵呈黃白色，即不著色卵。受精后到漿膜形成前死亡的卵也看作不受精卵。卵質(zhì)指標(biāo)成品良卵率調(diào)查時(shí)間：人工孵化種在浸酸后調(diào)查，越年種在浴消整理入庫(kù)前調(diào)查。調(diào)查數(shù)量：蠶卵經(jīng)充分干燥并拌勻后以批為單位抽樣，1個(gè)批調(diào)查3個(gè)樣，1g/1個(gè)樣。調(diào)查方法：準(zhǔn)確點(diǎn)數(shù)良卵，嚴(yán)格區(qū)別不良卵，經(jīng)復(fù)核后算出成品良卵率。良卵率（%）=克卵良卵粒數(shù)/克卵總粒數(shù)×100實(shí)用孵化率調(diào)查時(shí)間：人工孵化種在浸酸入庫(kù)后調(diào)查；越年種在各期用種經(jīng)中間感溫入庫(kù)后進(jìn)行調(diào)查。抽樣數(shù)量：每批抽取3個(gè)樣本，1g/1個(gè)樣。調(diào)查方法：樣卵孵化后逐日統(tǒng)計(jì)孵化卵數(shù)，計(jì)算最大兩日孵化卵數(shù)。孵化率（%）=最大2日孵化蟻蠶頭數(shù)/良卵總粒數(shù)×100雜交率調(diào)查方法：飼養(yǎng)至5齡第3日，每批次調(diào)查3個(gè)樣本，每個(gè)樣本調(diào)查一匾，點(diǎn)數(shù)純種頭數(shù)，計(jì)算雜交率。雜交率（%）=（調(diào)查總頭數(shù)-純種頭數(shù)）/調(diào)查總頭數(shù)×100每盒良卵粒數(shù)調(diào)查方法：稱取3個(gè)1.00g樣卵，調(diào)查良卵粒數(shù)和不良卵粒數(shù)，取平均值。每盒良卵粒數(shù)=平均每克良卵粒數(shù)×每盒平均重量克數(shù)母蛾微粒子病檢疫袋蛾一代雜交種以制種批為單位隨機(jī)抽樣袋蛾，每個(gè)批（戶）首末蠶種的母蛾必須要袋。按NY/T327的規(guī)定抽樣袋蛾，所袋蛾盒數(shù)應(yīng)大于規(guī)定的最低限度母蛾盒數(shù)以作備用。蛾盒保管每日所袋的蛾盒要妥善保管。將蛾盒分批（戶）、品種（品系）進(jìn)行捆扎，每10盒一小扎，每50盒一大扎，以批為單位，按照蛾盒號(hào)由小到大捆扎。依照制種批次、品種（品系）順序放置，置于通風(fēng)干燥、無(wú)蟲(chóng)鼠害場(chǎng)所存放，不可堆積。蛾盒驗(yàn)收蛾盒規(guī)格一代雜交種蛾盒30格。蛾盒上應(yīng)標(biāo)明生產(chǎn)單位、品種名、批次、產(chǎn)卵日期、蛾盒號(hào)。分批（戶）袋蛾的還應(yīng)標(biāo)明批號(hào)（戶號(hào)）。驗(yàn)收按NY/T327的規(guī)定進(jìn)行蛾盒驗(yàn)收。母蛾干燥、保管干燥蛾盒在產(chǎn)卵3-5d內(nèi)不得曝曬或烘干，應(yīng)待蠶蛾自然死亡3-5d后方可進(jìn)行干燥處理。母蛾干燥的方法可日曬或烘干，烘蛾溫度不得高于70℃。母蛾干燥程度以蛾頭胸部干燥，腹部稍軟為適。干燥的蛾盒及時(shí)清點(diǎn)捆扎，妥善保管。保管樣品蛾盒室應(yīng)保持通風(fēng)干燥，防發(fā)霉、防蟲(chóng)蛀、防鼠害、防損壞和遺失。檢疫方法抽樣→拆、倒蛾→磨蛾→過(guò)濾→離心沉淀→取樣制片→鏡檢→記錄歸檔抽樣按要求抽取第一、二樣本，第一樣本必須包括首末蛾盒號(hào)，不得少抽或多抽，若第一樣本蛾盒未裝滿的，從第二樣本中補(bǔ)足，第一、二樣本應(yīng)分別放置。拆、倒蛾將蛾盒中30只蛾倒入一只磨罐內(nèi)作為一個(gè)檢驗(yàn)單位。拆蛾時(shí)要點(diǎn)清蛾盒內(nèi)的母蛾個(gè)數(shù)，如發(fā)現(xiàn)一只蛾盒內(nèi)不足30個(gè)時(shí)，應(yīng)以同批（戶）母蛾補(bǔ)足。將拆好的母蛾倒入四聯(lián)磨蛾罐要按拆蛾的先后順序送至磨蛾準(zhǔn)備臺(tái)上。磨蛾在裝有母蛾的磨杯中加注0.5%～0.6%Na2CO3或K2CO3溶液60ml～80ml，用轉(zhuǎn)速數(shù)為7000r/min±500r/min的集團(tuán)磨蛾機(jī)研磨30s，以母蛾磨碎肉眼觀察如糊狀為度。過(guò)濾將磨碎液倒入過(guò)濾漏斗讓蛾液流入離心管，直至蛾液基本濾盡。過(guò)濾材料采用易使微孢子濾過(guò)的薄型濾紙、脫脂棉或20～40目的細(xì)紗網(wǎng)。離心沉淀置于3000r/min±150r/min的離心機(jī)，離心2.5min～3.0min，倒去上層液。取樣制片將離心后的沉淀物經(jīng)振蕩后，取樣點(diǎn)在載玻片上，每個(gè)樣本制作2個(gè)標(biāo)本，分二次制作。鏡檢用不低于600倍的顯微鏡2人對(duì)檢，每個(gè)樣本查看不少于5個(gè)視野。若對(duì)檢結(jié)果不一致，應(yīng)復(fù)檢確認(rèn)。一旦發(fā)現(xiàn)微孢子要保存樣本供復(fù)查，結(jié)果判定按GB/T20395的規(guī)定執(zhí)行。記錄歸檔每日鏡檢結(jié)束應(yīng)將當(dāng)日鏡檢的原始記載資料整理歸檔。病蛾率計(jì)算與判定統(tǒng)計(jì)每批（戶）的檢出病蛾數(shù)，計(jì)算病蛾率。清洗消毒每檢完一試管架，及時(shí)清洗試管和試管架。檢到有可疑樣本時(shí)，玻片、試管、竹棒及架需用1%有效氯漂白粉液消毒后再清洗。成品卵微粒子病檢疫抽取樣卵從成品蠶種中隨機(jī)抽取7g蠶卵。檢驗(yàn)方法將上述7g樣卵分別裝入7個(gè)小紙袋中，每袋1g卵，標(biāo)明場(chǎng)名、品種、批次。將上述活性化的蠶種樣本放于29℃，相對(duì)濕度85%以上的環(huán)境中進(jìn)行催青，待孵化的蟻蠶在高溫多濕中自然死亡后進(jìn)行檢驗(yàn)。根據(jù)制種批的大小和第1、第2樣本數(shù)量的要求（見(jiàn)表1），將每一紙袋中的死蟻蠶放于乳缽孔內(nèi)，每孔（一個(gè)集團(tuán)）約100條蟻蠶，用磨棒將蟻蠶磨爛，再滴入4～10滴2%氫氧化鉀溶液進(jìn)一步研磨。按乳缽序號(hào)點(diǎn)板制作標(biāo)本，送初檢員2人對(duì)檢，每個(gè)樣本觀察不少于10個(gè)視野。初檢無(wú)微粒子孢子的樣本按14個(gè)乳孔制作標(biāo)本由復(fù)檢員復(fù)檢，復(fù)檢無(wú)微粒子孢子后，再通知沖洗，有微粒子孢子，則通知初檢人員重新點(diǎn)板回查。初檢有微粒子孢子的樣本送復(fù)檢員復(fù)核，并進(jìn)行登記（見(jiàn)表2）。消毒沖洗整理原始記錄不合格判定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。表1桑蠶一代雜交種成品卵微粒子病檢疫抽樣規(guī)定與不合格判定標(biāo)準(zhǔn)批蠶種數(shù)量（盒或張）抽檢蠶卵集團(tuán)數(shù)不合格判定標(biāo)準(zhǔn)病卵集團(tuán)數(shù)信賴度,%第一樣本第二樣本第一檢第二檢50以下2814298.5198.6750-1003026398.8999.00101-5003236499.1899.11501-10003642599.5399.0610016799.061501-20004256799.8299.182001以上4250899.8299.39備注：第一樣本檢驗(yàn)結(jié)束，如沒(méi)有檢出病卵集團(tuán)，則判定該批蠶種為合格種，不檢第二樣本。如果檢出的病卵集團(tuán)數(shù)達(dá)到上表不合格標(biāo)準(zhǔn)，則判定該批蠶種為不合格，也不用檢驗(yàn)第二樣本。第一樣本檢出的病卵集團(tuán)數(shù)未達(dá)到不合格標(biāo)準(zhǔn)，則檢驗(yàn)第二樣本。一樣本加二樣本檢出的病卵數(shù)合并計(jì)算，如果仍未達(dá)不合格標(biāo)準(zhǔn)，則判定該批蠶種為合格，兩樣本病卵數(shù)合并超過(guò)合格標(biāo)準(zhǔn)，則判定為不合格。表2桑蠶一代雜交種各批次成品卵檢疫情況表批次品種蠶種張數(shù)合格與否判定第一樣本檢驗(yàn)數(shù)第一樣本微粒子孢子檢出集團(tuán)數(shù)第二樣本檢驗(yàn)數(shù)第二樣本微粒子孢子檢出集團(tuán)數(shù)第一、第二樣本檢驗(yàn)數(shù)第一、第二樣本微粒子孢子檢出集團(tuán)數(shù)備注蠶種質(zhì)量指標(biāo)江西省一代雜交種的質(zhì)量指標(biāo)見(jiàn)附錄A。

（規(guī)范性附錄）江西省一代雜交種質(zhì)量指標(biāo)蠶種類別檢驗(yàn)項(xiàng)目檢疫項(xiàng)目盒良卵量（粒）良卵率（%）實(shí)用孵化率（%）雜交率（%）病蛾率（%）病卵率（%）江西省標(biāo)準(zhǔn)春制越年種28000±500≥98.00≥96.00≥98.00＜0.50＜0.15秋制越年種28000±500≥97.00≥96.00≥98.00＜0.50＜0.15即浸種28000±500≥92.00≥96.00≥98.00＜0.50＜0.15冷浸種28000±5