課程名稱：微生物學(xué)授課教師姓名及職稱：豐慧根教授配1、學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的操作技術(shù)；2、掌握細(xì)菌單染色和革蘭氏染色的方法；4、掌握革蘭氏染色反應(yīng)原理、操作步驟和意義。2、無菌操作技術(shù)2、無菌操作技術(shù)實(shí)驗(yàn)課講授授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實(shí)驗(yàn)，準(zhǔn)備示教材料，寫教案1．你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)2．當(dāng)你對(duì)一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣能確證你的染色技術(shù)操字2、掌握細(xì)菌單染色和革蘭氏染色的方法；4、掌握革蘭氏染色反應(yīng)原理、操作步驟和意義。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理細(xì)菌的涂片和染色是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的一項(xiàng)基本技術(shù)。細(xì)菌個(gè)體微小，且較透明，必須借助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對(duì)比，以便在顯微鏡下進(jìn)行觀察。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。用于生物染色的染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類。堿性染料的離子帶正電荷，能和帶負(fù)電荷的物質(zhì)結(jié)合。因細(xì)菌蛋白質(zhì)等電點(diǎn)較低，當(dāng)它生長于中性、堿性或弱酸性的溶液中時(shí)常帶負(fù)電荷，所以通常采用堿性染料（如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅或孔雀綠等）使其著色。酸性染料的離子帶負(fù)電荷，能與帶正電荷的物質(zhì)結(jié)合。當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)基pH下降時(shí)，細(xì)菌所帶正電荷增加，因此易被伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅等酸性染料著色。中性染料是前兩者的結(jié)合物又稱復(fù)合染料，如伊紅美藍(lán)、伊紅天青根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，可分為簡單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等，本實(shí)驗(yàn)主要做前面兩種。強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)課的要求和簡單復(fù)習(xí)理論知識(shí)過渡到本實(shí)驗(yàn)?zāi)康慕Y(jié)合理論知識(shí)講解實(shí)驗(yàn)原理這是最基本的染色法，由于細(xì)菌在中性環(huán)境下一般帶負(fù)電荷，所以通常采用一種堿性染料如美藍(lán)、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫進(jìn)行染色。簡單染色法是只用一種染料使細(xì)菌著色以顯示其形態(tài)，簡單染色不能辨別細(xì)菌細(xì)胞的構(gòu)造。（二）革蘭氏染色法原理蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別染色法，因?yàn)橥ㄟ^此法染色，革蘭氏染色過程所用四種不同溶液和作用：1、堿性染料：這在簡單染色中已討論過，此處用結(jié)晶紫。2、媒染劑：其作用是增強(qiáng)染料與細(xì)菌的親和力，更好地加強(qiáng)染料與細(xì)胞的結(jié)合。常用的媒染劑是碘液。3、脫色劑：幫助染料從被染色的細(xì)胞中脫色。利用細(xì)菌對(duì)染料脫色的難易程度不同，而將細(xì)菌加以區(qū)分。革蘭氏陽性細(xì)菌不易被脫色劑脫色，而革蘭氏陰性細(xì)菌則易被脫色。常用的脫色劑是丙4、復(fù)染液：也是一種堿性染料，目的是使脫色的細(xì)菌重新染上另一種顏色，以便與未脫色菌進(jìn)行比較。這里用的是蕃紅花紅溶近年來由于對(duì)細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)有了較深入的了解，對(duì)革蘭氏染色的機(jī)制提出不同的看法。一般認(rèn)為革蘭氏陽性細(xì)菌的肽聚糖層較厚，經(jīng)乙醇處理后使之發(fā)生脫水作用而使孔徑縮小，結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物保留在細(xì)胞內(nèi)而不被脫色；而革蘭氏陰性細(xì)菌的肽聚糖層很薄，脂肪含量高，經(jīng)乙醇處理后部份細(xì)胞壁可能被溶解并改變其組織狀態(tài)，細(xì)胞壁孔徑大，不能阻止溶劑透入，因而將結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物洗去而被脫色。雖然如此，革蘭氏染色的差異并不能完全認(rèn)為是化學(xué)的差別，也有物理結(jié)構(gòu)不同的結(jié)果，因?yàn)榻湍妇?xì)胞壁的成份完全和細(xì)菌不同，但具有革蘭氏染色陽性反應(yīng)。三、實(shí)驗(yàn)器材），精、蕃紅染液、復(fù)紅、乙醚酒精溶液、香柏油、無菌水3、器材：廢液缸、洗瓶、載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、（1）涂片：取干凈載玻片一塊，在載玻片的左、右各加一滴無菌水，按無菌操作法從菌種斜面挑取少量菌體與水滴充分混勻，簡單介紹本次實(shí)驗(yàn)所用器材調(diào)無菌操作腸桿菌。注意取菌不要太多，圖片要均勻。（2）干燥：讓涂片自然晾干。（3）固定：手執(zhí)玻片一端，讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定。在火上固定時(shí)，用手摸涂片反面，以不燙手為宜。不能將載片在火上烤，否則細(xì)菌形態(tài)毀壞。（染色前必須固定細(xì)菌。其目的有二：一是殺死細(xì)菌并使菌體粘附于玻片上；二是增加其對(duì)染料的親和力。常用的有加熱和化學(xué)固定兩種方法。固定時(shí)盡量維持細(xì)胞原有的形態(tài)。）（4）染色：將固定過的涂片放在廢液缸上的擱架上，加草酸（5）水洗：傾去染色液，斜置載片，用自來水的細(xì)水流由載片上端流下，不得直接沖在涂菌處，直洗至從載片上流下的水中無（6）干燥：將洗過的涂片放在空氣中晾干或用吸水紙吸干。（7）鏡檢：先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂?，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細(xì)調(diào)焦觀察細(xì)菌的形態(tài)。（1）涂片：涂片方法與簡單染色涂片相同。（2）晾干：與簡單染色法相同。（3）固定：與簡單染色法相同。蓋滿細(xì)菌涂面）的結(jié)晶紫染色液染色1分鐘。（5）水洗：傾去染色液，用水小心地沖洗。（9）復(fù)染：滴加蕃紅復(fù)染2min。（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃紅染色液。（11）晾干：將染好的涂片放空氣中晾干或者用吸水紙吸干。（12）鏡檢：鏡檢時(shí)先用低倍，再用高倍，最后用油鏡觀察，并判斷菌體的革蘭氏染色反應(yīng)性。邊講解邊演示,并強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)通過提出問題加強(qiáng)學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)原理的理解①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈：a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去；b.用擦鏡紙沾少許乙醚酒精溶液將鏡頭擦2-3次；c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2-3次。注意擦鏡頭時(shí)向一個(gè)方向擦②看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈。五、注意事項(xiàng)1.載玻片要潔凈無油跡，否則菌液涂不開。涂片時(shí)，滴水不要過多，挑菌量宜少，涂片要均勻，菌膜宜薄。強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)后處理的重2.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽通過正反兩方面再次性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時(shí)間過短，革蘭氏陰性菌也強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)會(huì)被染成革蘭氏陽性菌。脫色時(shí)間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴(yán)格規(guī)定。3.染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng)。六、實(shí)驗(yàn)作業(yè)(一)繪圖(二)問題和思考1．你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最2．當(dāng)你對(duì)一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣能確證你的染布置本次實(shí)驗(yàn)報(bào)告和思考題課程名稱：微生物學(xué)授課教師姓名及職稱：豐慧根配配字課程名稱：微生物學(xué)授課教師姓名及職稱：豐慧根教學(xué)手段和先先點(diǎn)評(píng)上次實(shí)驗(yàn)作業(yè)結(jié)合理論知識(shí)講解實(shí)驗(yàn)原理2、掌握芽孢、莢膜染色的基本原理及方法;二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理芽孢、莢膜染色法都是利用細(xì)菌各部位（分）的構(gòu)造不同，它們對(duì)染料的親和力也不同。因此，可以采用各種特殊染色方法，使細(xì)菌細(xì)胞的不同構(gòu)造能在顯微鏡下顯示出來，便于觀察和區(qū)別。），生長到一定時(shí)間（對(duì)數(shù)期后期），在細(xì)胞內(nèi)形成一個(gè)圓形、橢圓形或圓柱形芽孢有的長在中央或近中央，圓形或橢圓形，芽孢的大小，位置，在分類鑒定上有一定的意義，它僅僅是芽孢細(xì)菌生活史的一個(gè)環(huán)節(jié)，它還是檢驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌徹底不徹底的依據(jù)。芽孢壁厚、透性低，著色和脫色均較困難，當(dāng)用弱堿性染料（孔雀綠）在加熱的情況下進(jìn)行染色時(shí)，使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽孢內(nèi)，進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，當(dāng)用對(duì)比度大的復(fù)染色劑（蕃紅液）染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，是芽孢和菌體更易區(qū)分。菌體呈紅色而芽孢呈綠色。（二）莢膜染色法莢膜是包圍在細(xì)菌細(xì)胞外的一層粘液狀或膠狀物質(zhì)，其成分為多糖、糖蛋白或多肽。由于莢膜與染料的親和力弱、不易著色；而且可以溶于水，易在用水沖洗時(shí)被除去。莢膜雖不是細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu)，但它是細(xì)胞外碳源和能源性貯藏物質(zhì)，并能保護(hù)細(xì)胞免受干燥的影響，同時(shí)能增加某些病原菌的致病能力，使之抵御宿主吞噬細(xì)胞的吞噬。由于莢膜與染料的親和力弱、不易著色；而且可以溶于水，易在用水沖洗時(shí)被除去。通常用負(fù)染色法染色，使細(xì)菌和背景著色，背景與菌體之間形成一透明區(qū)即莢膜，便于觀察，由于莢膜很薄，容易變形，在制片是一般不三、實(shí)驗(yàn)器材1、菌種：蠟樣芽孢桿菌約2d營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物；褐球固氮菌生理鹽水等3、器材：試管夾、酒精燈、接種針、載玻片、顯微鏡、香柏油、乙醚酒（1）制片：按常規(guī)涂片、干燥、固定；（2）染色：用試管夾夾住玻片的一端，在涂片上滴加孔雀綠3－4滴，（3）水洗：待玻片冷卻、用細(xì)水流沖洗至流出的水為無色；簡單介紹本次實(shí)驗(yàn)所用器材再次介紹制片操作將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細(xì)調(diào)焦觀察。）：（1）制備菌和墨水混合液：加一滴墨水于潔凈的載玻片上，然后挑取少量褐球固氮菌與之充分混合均勻；（2）加蓋玻片：將一潔凈蓋波片蓋在混合液上，然后在蓋波片上放一張濾紙，輕輕按壓以吸去多余的混合液；（3）鏡檢：用低倍鏡和高倍鏡觀察。五、注意事項(xiàng)并強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注再次強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)2、染色加熱過程要及時(shí)補(bǔ)充染液，切勿讓涂片干涸。3、莢膜染色涂片不要用加熱固定，以免莢膜皺縮變形。4、涂片不要用力過猛，不要滴加水，以防破壞其莢膜原形。六、實(shí)驗(yàn)作業(yè)(一)繪圖1．繪出表示芽孢桿菌的形態(tài)特征，注意芽孢的形狀、著生位置及芽孢囊2．繪圖說明你所觀察到的細(xì)菌的菌體和莢膜的形態(tài)。(二)問題和思考1．若涂片中觀察到的只是大量游離芽孢，很少看到芽孢囊及營養(yǎng)細(xì)胞，布置本次實(shí)驗(yàn)報(bào)告和思考題課程名稱：微生物學(xué)授課教師姓名及職稱：郭偉云講師配字先點(diǎn)評(píng)上次實(shí)驗(yàn)作業(yè)結(jié)合理論知識(shí)和圖片講解實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體帶一類革蘭氏陽性細(xì)菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長帶叫基內(nèi)菌絲（簡稱“基絲”），基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲（簡稱“氣絲”），并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。放線菌的孢子絲形狀和孢子排列情況是放線菌分類的重要依據(jù)，為了不打亂孢子的排列情況，常用印片染色法和膠帶紙粘菌染色法進(jìn)行制片觀察。為了觀察放線菌的形態(tài)特征，人們?cè)O(shè)計(jì)了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長條件下的形態(tài)特征，本實(shí)驗(yàn)介紹其中將放線菌接種在瓊脂平板上，扦上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上，觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可以觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于不同生長期的形態(tài)。玻璃紙是一種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙覆蓋在瓊脂平板表面，然后將放線菌接種于玻璃紙上，經(jīng)培養(yǎng)，放線菌在玻璃紙上生長形成菌苔。觀察時(shí)，揭下玻璃紙，固定在載玻片上直接鏡檢。這種方法既能保持放線菌的自然生長，也便于觀察不同生長期的形態(tài)特征。將要觀察帶放線菌帶菌落或菌苔，先印在載玻片上，經(jīng)染色后觀察。這種方法主要用于觀察孢子絲帶形態(tài)、孢子帶排列及其形狀等。該方法簡便、但形態(tài)特我們本次實(shí)驗(yàn)主要采用印片法來觀察放線菌的基本形態(tài)。三、實(shí)驗(yàn)器材3.器材：載玻片，玻璃紙，小刀，接種環(huán)，吸水紙，擦鏡紙，酒精燈，香柏油，乙醚-乙醇混合液，顯微鏡。（1）印片：用解剖刀取放線菌培養(yǎng)體一塊，將菌面朝上放在一載玻片上，孢子絲或孢子）粘附（“印”）在后一塊載玻片的中央，有印跡的一面朝上，通過（3）鏡檢：干后先用低倍鏡后用高倍鏡，最后用油鏡觀察孢子絲、孢子的形態(tài)及孢子排列情況。五、注意事項(xiàng)1、鏟菌苔時(shí)注意不要將瓊脂鏟得太厚，以免影響壓片；2、玻片不要太熱，以免瓊脂融化，干擾放線菌的附著；3、制片過程中切不可涂片，以免破壞菌絲形態(tài)；4、印片完畢后注意將印有放線菌的一面朝上進(jìn)行固定，印片不要用力過大壓壞瓊脂培養(yǎng)基，也不要挪動(dòng)，以免改變放線菌的自然形態(tài)；六、實(shí)驗(yàn)作業(yè)(一)繪圖繪出說明你所觀察到的放線菌的主要形態(tài)特征。(二)問題和思考1．試比較三種培養(yǎng)和觀察放線菌方法的優(yōu)缺點(diǎn)。簡單介紹本次實(shí)驗(yàn)所用器材邊講解邊演示調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)再次強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)布置本次實(shí)驗(yàn)報(bào)告和思考題課程名稱：微生物學(xué)授課教師姓名及職稱：郭偉云講師配字2、學(xué)習(xí)掌握區(qū)分酵母菌死、活細(xì)胞的染色方法；3、掌握酵母菌的一般形態(tài)特征及其與細(xì)菌的區(qū)別。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理菌體比細(xì)菌大。繁殖方式也較復(fù)雜，無性繁殖主要是出芽生殖，僅裂殖酵母屬是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通過接合產(chǎn)生子囊孢子。本實(shí)驗(yàn)通過用美藍(lán)染色浸片來觀察生活的酵母形態(tài)和出芽生殖方式。美藍(lán)是一種無毒性染料，它的氧化型是藍(lán)色的，而還原型是無色的，用它來對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色。由于細(xì)胞中新陳代謝的作用，使細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，所以酵母的活細(xì)胞無色，而對(duì)于死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞，則因它們無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。因此，用美藍(lán)水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài)，還可以區(qū)分死、活細(xì)胞。三、實(shí)驗(yàn)器材3、器材：廢液缸、載玻片、蓋玻片、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡等。（1）在載玻片中央加一滴0.1％呂氏堿性美藍(lán)染色液，用接種環(huán)挑取少量酵母菌苔放入上述液滴里，混合均勻；（2）用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下（3）將制片放置約3min，先低倍鏡后高倍鏡觀察酵母形態(tài)和出芽情況，并先點(diǎn)評(píng)上次實(shí)驗(yàn)作業(yè)結(jié)合理論知識(shí)和圖片講解實(shí)驗(yàn)原理簡單介紹本次實(shí)驗(yàn)所用器材邊講解邊演示調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)根據(jù)顏色區(qū)別死活細(xì)胞。五、注意事項(xiàng)再次強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)布置本次實(shí)驗(yàn)再次強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)布置本次實(shí)驗(yàn)報(bào)告和思考題2、蓋玻片不宜平著放下，以免產(chǎn)生氣泡影響觀察。六、實(shí)驗(yàn)作業(yè)(一)繪圖繪圖說明你所觀察到的酵母菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)及出芽生殖方式。(二)問題和思考1、呂氏堿性美藍(lán)染液濃度和作用時(shí)間的不同，對(duì)酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影2、在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)別于一般細(xì)菌？配字2、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；4、掌握高壓蒸汽滅菌技術(shù)，了解幾種常用滅菌方法。培養(yǎng)基是按照微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物所需的各種營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成的一種基質(zhì)。它包括碳源、氮源、能源、生長因子、無機(jī)鹽和水六培養(yǎng)和鑒定不同的微生物，必須根據(jù)其需要，配制合適的培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。滅菌是指應(yīng)用物理或化學(xué)的方法，殺滅物體表面和內(nèi)部一切微生物營養(yǎng)體、芽孢和孢子。滅菌方法很多，可分為加熱、過濾、照射和化學(xué)藥品法等。這種滅菌法是利用熱空氣使物體升溫，而導(dǎo)致物體上所帶的微生物由于干熱脫水而死亡。常用于空玻璃器皿、金屬用具等的滅菌，對(duì)于帶膠皮的物品、液體及固體培養(yǎng)基等不能使用此法滅菌。2、高壓蒸汽滅菌法此種滅菌方法的原理是在一密閉容器中，煮沸時(shí)形成的蒸汽不能擴(kuò)散到容器外面去，而堆積在密閉的容器內(nèi)，使蒸汽壓力升高；隨著水的煮沸，溫度也就相應(yīng)增高。利用過熱的蒸汽來使細(xì)菌及其耐熱芽孢蛋白質(zhì)凝固變性，以致失去生命力，從而達(dá)到徹底滅菌的效果。121.30C保持15—30分鐘進(jìn)行滅菌，就可殺死一切微生物細(xì)胞及其芽孢或孢子。進(jìn)行高壓蒸汽滅菌的儀器叫高壓蒸汽滅菌鍋。滅菌對(duì)象是培養(yǎng)基、玻璃器皿和各種不因高溫處理而變質(zhì)的物品材料。但對(duì)一些不耐高溫、高壓的溶液或培養(yǎng)基不先點(diǎn)評(píng)上次實(shí)驗(yàn)作業(yè)結(jié)合理論知識(shí)講解實(shí)驗(yàn)原理簡單介紹本次實(shí)驗(yàn)所用器材2．牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10％NaOH溶液、10％鹽酸溶液。蛋白胨一起放入200ml的燒杯中，然后加入100ml水，置電爐上加熱攪拌至其完全溶解。用玻璃棒把稱量紙?zhí)舫鰶_凈（用洗瓶洗，沖洗液流入燒杯）。（3）稱取20g瓊脂，放入煮沸的溶解液中，繼續(xù)加熱至瓊脂完全溶解，加熱過程中要不斷攪拌以防瓊脂沉淀糊底或溢出杯外。（4）待瓊脂完全融化后，再補(bǔ)足自來水，趁熱用玻璃棒蘸少許液體點(diǎn)在pH試紙上測(cè)定酸堿度并用NaOH或HCl溶液調(diào)整pH值至7.2～7.4。（7）將上述分裝在各種容器中的培養(yǎng)基，塞好棉塞，捆扎好。（9）擺斜面滅菌后，需做斜面的試管，應(yīng)待培養(yǎng)基冷卻至50～60℃（溫度不能過高，以防斜面上冷凝水太多）后，擺成斜面。斜面的斜度要適當(dāng)，斜面的長度不超過試管長度的二分之一。擺放時(shí)注意不要使培養(yǎng)基沾污棉塞，冷凝過程中不要移動(dòng)試管，待斜面完全凝固后，再收起使用或貯藏。并強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注2、蛋白胨極易吸濕，稱取時(shí)動(dòng)作要迅速；3、配制固體培養(yǎng)基時(shí)，先將其他藥品加熱溶解到快沸時(shí)，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至瓊脂完全熔化，此過程要不斷攪拌，以免瓊脂糊底，并控制火4、分裝量根據(jù)試管大小和實(shí)際需要而定，固體培養(yǎng)基裝量約為管高的1/5，液體培養(yǎng)基的裝量約為管高的1/4，三角瓶的裝量不超過瓶體的1/2；5、分裝過程中注意不要將培養(yǎng)基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起配字1、了解微生物分離和純化的原理2、掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化接種培養(yǎng)的基本操作技術(shù)，掌握微生物的無菌操作技術(shù)。在自然界中，不同種類的微生物絕大多數(shù)都是混雜生活在一起的，為了生產(chǎn)和科學(xué)研究的需要，當(dāng)我們希望獲得某一種微生物時(shí)，就必須從混雜的微生物類群中分離出它，以得到只含有這一種微生物的純培養(yǎng)物，這種獲得純培養(yǎng)物的方法稱為微生物的分離與純化。為了獲得純種的微生物，一般根據(jù)該微生物營養(yǎng)或培養(yǎng)特點(diǎn)，或?qū)δ撤N抑制劑的耐受性不同，或?qū)δ撤N環(huán)境條件要求不同，從而制作或設(shè)置一些選擇性培養(yǎng)基，或選擇性培養(yǎng)條件，再用稀釋涂布平板法或稀釋混合平板法或劃線法分離，純化該微生物，直至得到該純種菌株。土壤是微生物生活的大本營，在這里生活的微生物數(shù)量和種類都極其豐富，因此，土壤是我們開發(fā)利用微生物資源的重要來源，可以從其中分離純化到許多1．樣品土樣2．培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、豆芽汁3．其它盛9ml無菌水的試管、盛90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶、無菌玻璃涂棒、無菌吸管、接種環(huán)、無菌培養(yǎng)皿。1．細(xì)菌的分離無菌吸管吸取10-1土壤懸液lml，加入編號(hào)10-2的無菌試管混合均勻，即成10-2的土壤稀釋液。再用另一支吸管吸取10-2試管中的土壤稀釋先點(diǎn)評(píng)上次實(shí)驗(yàn)作業(yè)結(jié)合理論知識(shí)講解實(shí)驗(yàn)原理簡單介紹本次實(shí)驗(yàn)所用器材邊講解邊演示,并強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)皿中分別倒入15ml已融化并且冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板，（3）培養(yǎng)與移植待平板完全冷凝后，將平板倒置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24~48小時(shí)，檢查分離結(jié)果。將培養(yǎng)后長出的單個(gè)菌落分別挑取接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的斜面上，然后置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)，待菌苔長出后，檢查菌苔是否單純，也可用顯微鏡涂片染色檢查是否是單一的微生物，若有其它雜菌混雜，就可再一次進(jìn)行分離、純化，直至獲得純培養(yǎng)。2．放線菌的分離由于放線菌在培養(yǎng)基上蔓延生長不如真菌快，其繁殖速度又比細(xì)菌慢，故分離這類微生物時(shí)要特別注意防止細(xì)菌和霉菌的蔓延，以免妨除去部分細(xì)菌，可先將土壤進(jìn)行風(fēng)干。因?yàn)榧?xì)菌營養(yǎng)體遇干燥環(huán)境容易死亡，而放線菌比細(xì)菌的抗干燥能力強(qiáng)。風(fēng)干的土壤與少量CaCO3混合，于28℃培養(yǎng)數(shù)天，更能進(jìn)一步減少細(xì)菌和增加放線菌的數(shù)量。（2）選用的土壤稀釋度要根據(jù)放酚10滴，充分混勻，可進(jìn)一步減少細(xì)菌和霉菌的生長。一般放線菌生長的適宜溫度為25～28℃,培養(yǎng)5～7天，培養(yǎng)基為高氏一號(hào)培養(yǎng)基。具體操作過程見“細(xì)菌的分離”。3．霉菌的分離大多數(shù)霉菌為好氧微生物，必須有充足的氧氣才能很好地生長。霉菌能耐受較酸性環(huán)境，所以一般分離霉菌時(shí)取偏酸性、含有機(jī)質(zhì)較豐富的接近表層的土壤，特別是森林土壤中含有較多霉菌。如果用特定的材料為培養(yǎng)用馬丁氏（Martin）瓊脂培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中加1/3000的孟加拉紅水溶液，使用3～5天，待菌落長出后，檢查結(jié)果。此法與稀釋混合平板法基本相同，無菌操作也一樣，所不同的是先將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，高氏一號(hào)培養(yǎng)基，馬丁氏培養(yǎng)基融化，在火焰旁注入培養(yǎng)皿，搖勻后制成平板，然后用土壤稀釋液中各吸取0.2ml對(duì)號(hào)放入已寫好稀釋度的平板中，用無菌玻璃涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，然后分別倒置于28℃和37℃溫箱中培養(yǎng)后，再挑取單個(gè)菌落，直至獲得純1．將各種固體培養(yǎng)基融化后制成平板，并用記號(hào)筆標(biāo)明培養(yǎng)基名稱。2．劃線在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取上述10-1的土壤稀釋液一環(huán)在平板上劃線(如圖2劃線方法很多，但無論哪種方法劃線，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進(jìn)行稀釋，使形成單個(gè)菌落。常用劃線方法有下（1）交叉劃線法用接種環(huán)以無菌操作挑取土壤懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線3～4條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70°角，并將接種環(huán)上的殘菌燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同法通過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線（如圖3劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于溫箱培養(yǎng)。（2）連續(xù)劃線法用接種環(huán)挑取樣品在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線(如圖左為交叉劃線法右為連續(xù)劃線法1．在你所實(shí)驗(yàn)的三種培養(yǎng)基平板上長出的菌落屬于哪個(gè)類群？簡述它們的2．稀釋分離時(shí)，為什么要將已融化的瓊脂培養(yǎng)基冷卻到45～50℃左右才能3．劃線分離時(shí)，為什么每次都要將接種環(huán)上多余的菌體燒掉？劃線為何不4．培養(yǎng)時(shí)為什么要將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)？課程名稱：微生物學(xué)授課教師姓名及職稱：康靜配字先點(diǎn)評(píng)上次實(shí)驗(yàn)作業(yè)個(gè)體生長很難測(cè)定，而且實(shí)際應(yīng)用意義不大。因此，它們的生長不是依據(jù)細(xì)胞大小，而是以群體的生長作為單細(xì)胞微生物生長的指標(biāo)。測(cè)定微生物生長的方法很多，但不外乎是總菌計(jì)數(shù)和活菌計(jì)數(shù)兩大類。常用計(jì)數(shù)板作微生物的鏡檢直接計(jì)數(shù)，其計(jì)得的是死菌和活菌的總和，故稱總菌計(jì)數(shù)法。而平板菌落計(jì)數(shù)法因能計(jì)測(cè)樣品中的活菌數(shù)，故稱活菌計(jì)數(shù)法。2、學(xué)習(xí)并掌握使用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物直接計(jì)數(shù)的方法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法適合于含單細(xì)胞用細(xì)菌計(jì)數(shù)板。二者的原理和部件均相結(jié)合理論知識(shí)講解實(shí)驗(yàn)原理血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚載玻片，載玻片上有4條槽構(gòu)成的3面各有一個(gè)方格網(wǎng)（圖15-1每個(gè)的刻度有兩種：一種是大方格分為16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格；另一種是一個(gè)大方格a平面圖（中間平臺(tái)分為兩半，各刻有一個(gè)方格網(wǎng)）b側(cè)面圖（中間平臺(tái)與蓋玻片之間有高度為0.1的間隙）分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格。但兩種計(jì)數(shù)室都有一個(gè)共在計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成1ml菌液中的總菌數(shù)。如果設(shè)五個(gè)中方格的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，那么，一個(gè)大方格中簡單介紹本次2.器具顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、酒精燈、接種環(huán)、無菌水、吸管、蓋玻片、實(shí)驗(yàn)所用器材1．稀釋將釀酒酵母菌懸液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，菌液如不濃，可不必稀釋。2．鏡檢計(jì)數(shù)室在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則3．加樣品將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的細(xì)口滴管將稀釋的釀酒酵母菌液由蓋玻片邊緣滴一小滴（不宜過多）讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自行進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產(chǎn)生。4．顯微鏡計(jì)數(shù)靜止5分鐘后，將血球計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)，在計(jì)數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計(jì)數(shù)。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5~10個(gè)菌體為宜。每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格（可選4個(gè)角和中央的中格）中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即可作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的值來計(jì)算樣品的平均含菌量。5．清洗血球計(jì)數(shù)板使用完畢后，將血球計(jì)數(shù)板在水龍頭上用水柱沖洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重新洗滌至干凈為止。邊講解邊演示,并強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)將所計(jì)的5個(gè)中方格中的菌數(shù)填入下表（次）12（A）菌數(shù)（個(gè)／mlA×16（或25）×B×10000式中：A——一個(gè)中格的菌數(shù)平均值再次強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)再次強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、加樣時(shí)先搖勻菌液，計(jì)數(shù)室中不可有氣泡產(chǎn)生；2、計(jì)數(shù)時(shí)，格線上的菌體只數(shù)上方和右邊線上的；3、如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，作為兩個(gè)菌體計(jì)算。配字先點(diǎn)評(píng)上次實(shí)先點(diǎn)評(píng)上次實(shí)驗(yàn)作業(yè)實(shí)驗(yàn)?zāi)康奈⑸锷L繁殖要有一定的溫度條件，不同的微生物要求不同的生長溫度范圍。在生長范圍內(nèi)又可分為最高，最適和最低三種生長溫度。如溫度超過最高或最低溫度時(shí)，微生物均不能生長，或處于休眠狀態(tài)，甚至死亡。結(jié)合理論知識(shí)講解實(shí)驗(yàn)原理按照微生物要求的生長溫度范圍，可將其分為高溫性，中溫性和低溫性三個(gè)類型，大多數(shù)微生物是中溫性的，它們的適宜生長溫度在25～37℃之間，故實(shí)驗(yàn)結(jié)合理論知識(shí)講解實(shí)驗(yàn)原理圍，并掌握測(cè)定溫度對(duì)微生物生長的影響的方法。3．器具酒精燈，接種針，冰箱，恒溫箱。（1）在5支牛肉膏瓊脂斜面培養(yǎng)基上都接種上枯草桿菌，接種時(shí)劃曲線或（2）在另5支牛肉膏瓊脂斜面上都接種上大腸桿菌，接種時(shí)劃直線或曲線。簡單介紹本次實(shí)驗(yàn)所用器材邊講解邊演示,并強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1．記載實(shí)驗(yàn)結(jié)果，填入下表。結(jié)合理論知識(shí)2．高溫和低溫對(duì)微生物生長各有何影響？為什么？講解實(shí)驗(yàn)原理微生物的生長繁殖，需要一定的pH值范圍，即環(huán)境中的氫離子濃度對(duì)微生物的生長繁殖有直接的影響，大多數(shù)細(xì)菌和放線菌適于中性或微堿性環(huán)境，酵母菌和霉菌則適于在弱酸性或酸性環(huán)境中生長，當(dāng)環(huán)境的pH值超過其適于生長的范圍時(shí)，微生物的生長則受到明顯的阻抑或不能生長。簡單介紹本次實(shí)驗(yàn)所用器材4．器具酒精燈、lml無菌吸管、接邊講解邊演示,1.調(diào)pH值取足量分裝為8ml的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液7支，分別按下表所列容量加入各種溶液，調(diào)成不同pH值的培養(yǎng)液（ml）并強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注1234567 — 2．按無菌操作方法，分別于各管中各接種大腸桿菌0.2ml，分別標(biāo)明試管序3．另取8ml的牛肉膏蛋白胨液二支，按無菌操作的方法用無菌吸管移入無4．將上述接種好的培養(yǎng)物置于37℃下培養(yǎng)。48小時(shí)后觀察記載實(shí)驗(yàn)結(jié)果。l．記載結(jié)果，填入下表：注：根據(jù)混濁程度，確定生長情況：不生長（-稍生長生長一般(++)；生長良好。2．氫離子濃度對(duì)微生物生長有何影響？課程名稱：微生物學(xué)授課教師姓名及職稱：郭偉云講師配字課程名稱：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)授課教師姓名及職稱：郭偉云教學(xué)手段和1、學(xué)習(xí)幾種主要微生物的生理代謝試驗(yàn)及2、認(rèn)識(shí)微生物代謝類型的多樣性；二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理微生物代謝重要特征之一，就是代謝類型的多樣性。即使同屬化能異養(yǎng)菌中的不同微生物，它們分解生物大分子的能力，分解利用含碳化合物、含氮化合物的途徑和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物也各不相同等等。此外，微生物代謝類型多樣性具體表現(xiàn)在生化反應(yīng)的多樣性，因此人們?cè)谖⑸锏姆诸愯b定工作中，常利用其生化反應(yīng)作為重要依據(jù)。1、大分子物質(zhì)的水解試驗(yàn)不同微生物分解利用生物大分子能力各有不同。只有那些能夠產(chǎn)生并分泌跑外酶的微生物才能利用大分子有機(jī)物。如：油脂水解（脂肪酶）、淀粉水解（淀粉酶）、明膠液化（蛋白酶）等。大分子物質(zhì)的水解過程可以通過觀察細(xì)菌菌落周圍的物質(zhì)變化來證實(shí)。淀粉水解試驗(yàn)原理：淀粉遇碘液會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色，但細(xì)菌水解淀粉的區(qū)域，用碘測(cè)定不再產(chǎn)生藍(lán)色，表明細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶。2、糖類發(fā)酵試驗(yàn)原理細(xì)菌具有分解某些糖類的特定酶，可根據(jù)細(xì)菌分解利用糖能力的差異，表現(xiàn)出是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為鑒定菌種的依據(jù)。是否產(chǎn)酸，可在糖發(fā)酵培養(yǎng)基中加入指示劑溴甲酚紫（即B.C.P指示劑，其pH在5.2以下呈黃色，pH在6.8以上呈紫色經(jīng)培養(yǎng)后根據(jù)指示劑的顏色變化來判斷。是否產(chǎn)氣，可從培養(yǎng)基中的杜氏小管中是否有氣泡觀測(cè)。三、實(shí)驗(yàn)器材1、菌種：大腸桿菌（E.coli）、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、普通變形桿菌；2、培養(yǎng)基和試劑：固體淀粉培養(yǎng)基、葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基、蔗糖發(fā)酵培養(yǎng)基和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管各3支（內(nèi)裝有倒置的德漢氏小管）等。3、器材：試管架、接種環(huán)、酒精燈等。先點(diǎn)評(píng)上次實(shí)驗(yàn)作業(yè)結(jié)合理論知識(shí)講解實(shí)驗(yàn)原理簡單介紹本次實(shí)驗(yàn)所用器材（1）無菌操作制固體淀粉培養(yǎng)基平板；（2）用記號(hào)筆在平板底部化成3部分，將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌分別在不同部分劃線接種，在平板的反面分別寫上菌名；（4）觀察各種細(xì)菌的生長情況，將平板打開蓋子，滴入少量Lugol’s碘液于平皿中，輕輕旋轉(zhuǎn)平板，使碘液均勻鋪面整個(gè)平板；如菌苔周圍出現(xiàn)無色透明菌，說明淀粉已被水解，為陽性。透明圈的大糖發(fā)酵試驗(yàn)（1）試管標(biāo)記：在試管外壁標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱和接種細(xì)菌菌名。（2）接種：取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，分別接種大腸桿菌、枯草桿菌，第三支不接做對(duì)照；取蔗糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，分別接種大腸桿菌、枯草桿菌，第三支不接做對(duì)照。（4）觀察各試管顏色變化及德漢氏小管中有無氣泡。與對(duì)照管比較，若糖發(fā)酵管保持原有顏色，其反應(yīng)結(jié)果為陰性，表明該菌不能利用該種糖，記錄用“－”表示；如呈黃色，反應(yīng)結(jié)果為陽性，表明該菌能分解該種糖產(chǎn)酸，記錄用“＋”表示。表示；沒有氣泡為陰性反應(yīng)，記錄用“－”表示。五、注意事項(xiàng)2、糖發(fā)酵試驗(yàn)要注意杜氏小管的置入方法；3、在接種后，輕緩搖動(dòng)試管，使其均勻，防止倒置的小管進(jìn)入氣泡。六、實(shí)驗(yàn)作業(yè)(一)填表繪圖說明你所觀察到的酵母菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)及出芽生殖方式。分別將淀粉水解試驗(yàn)（“+”表示陽性，“-”表示陰性）和糖發(fā)酵試驗(yàn)（“+”表示產(chǎn)酸或產(chǎn)氣，“-”表示不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）結(jié)果填入下表：菌名大腸桿菌枯草芽孢桿菌金黃色葡萄球菌邊講解邊演示調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)再次強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)布置本次實(shí)驗(yàn)報(bào)告和思考題淀粉水解能力糖類發(fā)酵大腸桿菌普通變形桿菌對(duì)照葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵(二)問題和思考課程名稱：微生物學(xué)授課教師姓名及職稱：郭偉云講師配字2、了解各種保藏方法的優(yōu)缺點(diǎn)及其適用的目標(biāo)微生物；3、學(xué)習(xí)并掌握幾種常用的微生物菌種保藏方法。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理保藏微生物菌種的目的不僅要保存菌株的生命本身，而且還必須要盡可能地使菌株的遺傳性狀保持不變，同時(shí)保證其在整個(gè)保存過程中不被他種微生物污染。因此，選擇一種能夠長期有效且穩(wěn)定的保藏微生物菌種的方法事由于微生物種類繁多，且保存方法的難易程度不同，所以微生物菌種的保藏方法亦有許多。但是不管有多少種菌種保藏方法，其基本原理都要求使微生物的代謝作用降至最低程度，從而使其處于不活潑的狀態(tài)，即休眠狀態(tài)。就微生物本身而言，保藏就是要利用它們處于休眠狀態(tài)的孢子或芽孢而進(jìn)行；而從環(huán)境條件來說，就是要選用低溫、干燥和缺氧等三個(gè)條件。保藏方法大致可分為以下幾種：有些微生物當(dāng)遇到冷凍或干燥等處理時(shí)，會(huì)很快死亡，因此在這種情況下，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進(jìn)行菌種轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產(chǎn)菌種的保存。傳代保存時(shí)，培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。一般地，大多數(shù)菌種的保藏溫度以5℃為好，像病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進(jìn)行保存，而蕈類等大型食用菌的菌先點(diǎn)評(píng)上次實(shí)驗(yàn)作業(yè)結(jié)合理論知識(shí)講解實(shí)驗(yàn)原理介紹每種保藏方法的使用及其優(yōu)缺點(diǎn)種則可以室溫直接保存。傳代培養(yǎng)保存法雖然簡便，但其缺點(diǎn)也很明顯，如：①菌種管棉塞經(jīng)常容易發(fā)霉；②菌株的遺傳性狀容易發(fā)生變異；③反復(fù)傳代時(shí)，菌株的病原性、工作量大；⑤雜菌的污染機(jī)會(huì)較多。培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。2、懸液保存法：即使微生物混懸于適當(dāng)溶液中進(jìn)行保存的方法。常用的①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。常用的有方法包括以下幾種，如①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌種的保藏。方法是在滅菌的土壤中加入菌液，立即在室溫下進(jìn)行干燥或使菌體繁殖后再干燥，然后冷藏或在室溫下密封保存。保存用的土壤原則上以肥沃的耕土為宜，土壤需風(fēng)干、粉碎、過篩和滅菌。于塞有棉塞的試管中，加水或加入充分稀釋的液體培養(yǎng)基（以含水量為土壤培養(yǎng)至菌絲能用肉眼確認(rèn)的程度為止，移入干燥器中經(jīng)短時(shí)間干燥或風(fēng)干后密封，冷藏或室溫保存。②砂土保存法：取清潔的砂，過60目篩去掉大砂粒，并用磁鐵吸去砂中鐵屑，再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗數(shù)次，干燥后，置于經(jīng)充分混勻后，放入真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗凈的砂（經(jīng)HCl預(yù)處理）和一份貧瘠、過篩的黃土攙和后滅菌，再進(jìn)行菌種保③硅膠保存法：以6～16目的無色硅膠代替砂子，干熱滅菌后，加入菌液。加菌液時(shí)，由于硅膠的吸附熱常使溫度升高，因而需設(shè)法加以冷卻。④磁珠保存法：將菌液浸入素?zé)胖椋ɑ蚨嗫撞Ａе椋┖笤龠M(jìn)行干燥保存的一種方法。在螺旋口試管中裝入1/2管高的硅膠（或無水CaSO4上鋪玻璃棉，再放上10～20粒磁珠，經(jīng)干熱滅菌后，接入菌懸液，最后冷藏、室溫保藏或減壓干燥后密封保藏。本法對(duì)酵母菌很有效，特別適用于根瘤菌，可保存長達(dá)兩年半時(shí)間。⑤麩皮保存法：在麩皮內(nèi)加入60%的水，經(jīng)滅菌后接種培養(yǎng)，最后干燥⑥紙片（濾紙）保存法：將滅菌紙片浸入培養(yǎng)液或菌懸液中，常壓或減壓干燥后，置于裝有干燥劑的容器內(nèi)進(jìn)行保存。這類方法包括冷凍真空干燥法和L－干燥法。冷凍真空干燥法是將要保藏的微生物樣品先經(jīng)低溫預(yù)凍，然后在低溫狀態(tài)下進(jìn)行減壓干燥。L-干燥法則不需要低溫預(yù)凍樣品，只是使樣品維持在10－20C范圍內(nèi)進(jìn)5、冷凍保存法適用于抗凍力強(qiáng)的微生物。這些微生物可在其菌體細(xì)胞外遭受凍結(jié)的情況下而不受損傷，而對(duì)其它大多數(shù)微生物而言，無論在細(xì)胞外凍結(jié)還是在細(xì)胞內(nèi)凍結(jié)，都會(huì)對(duì)菌體造成損傷，因此當(dāng)采用這種保藏方法時(shí)，應(yīng)注意以下①要選擇適于冷凍干燥的菌齡細(xì)胞；②要選擇適宜的培養(yǎng)基，因?yàn)槟承┪⑸飳?duì)冷凍的抵抗力，常隨培養(yǎng)基成分的變化而顯示出巨大差異；③要選擇合適的菌液濃度，通常菌液濃度越高，生存率越高，保存期也⑤可在菌液內(nèi)添加甘油等保護(hù)劑，以防止在冷凍過程中出現(xiàn)菌體大量死亡的現(xiàn)象。同樣，也可添加各種糖類、去纖維血液和脫脂牛乳等具有良好保護(hù)效果的溶劑，但對(duì)有些微生物而言，不加保護(hù)劑時(shí)更有效。⑥原則上應(yīng)盡快進(jìn)行冷凍處理，但當(dāng)加入保護(hù)劑時(shí)，可靜置一段時(shí)間后此后必須盡快降到貯藏溫度；而對(duì)絕大多數(shù)微生物而言，則不必如此，如結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜的原蟲則可在－35℃范圍內(nèi)進(jìn)行緩慢降溫，而噬菌體則必需采用⑧若進(jìn)行長期保存，則貯藏溫度越低越好；振蕩使之迅速融解。而就厭氧菌來說，則應(yīng)選擇靜置融化的措施。當(dāng)冷凍菌融化后，應(yīng)盡量避免再次冷凍，否則菌體的存活率將顯著下降。三、實(shí)驗(yàn)器材2、試劑：液體石蠟、河沙、紅土等；溫箱中使水蒸氣蒸發(fā)備用；（2）菌種培養(yǎng)：將菌種在斜面上培養(yǎng)成熟；（3）灌注礦物油：用無菌吸管吸取無菌的液體石蠟，加入已長好菌的斜（4）低溫（5℃左右）保藏：將試管直立，置冰箱中保存。2、砂管保藏法簡單介紹本次實(shí)驗(yàn)所用器材邊講解邊演示調(diào)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)（2）準(zhǔn)備菌種：在合適培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得孢子；（3）接種：干法接種，直接將放線菌、真菌孢子接種于沙管中。濕法接種，先將斜面培養(yǎng)物制成菌懸液，吸取菌懸液于沙管中（每管約10滴（4）干燥保藏：將含菌沙管放在含干燥劑的干燥器中吸水干燥。低溫或五、實(shí)驗(yàn)作業(yè)布置本次實(shí)驗(yàn)報(bào)告和思考題武術(shù)教案課的基本步法等1、使學(xué)生初步了解武術(shù)的基本練習(xí)功法，并掌握練習(xí)的技術(shù)要領(lǐng)。2、通過長拳學(xué)習(xí)，了解套路動(dòng)作結(jié)構(gòu)、難點(diǎn)課的重點(diǎn)：手型、步型、手法、腿法難點(diǎn)：三路長拳中的虛步亮掌時(shí)課的內(nèi)容間1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4、安排見習(xí)生（5）仆步壓腿（6）正壓腿（7）膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)（8）踝、腕關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)一、基本手型、手法、步型、步法等拳：拳握緊，拳面平、直腕掌：四指并攏伸直，拇指彎屈緊扣于虎口處勾：五指第一指節(jié)捏攏在一起，屈腕步型：弓、馬、仆、虛、歇、丁步，坐盤，插步，蓋步組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法速度適中2、成廣播體操隊(duì)形散開教法：教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)。要求：準(zhǔn)備活動(dòng)充分組織：集體練習(xí)1、簡介本課程基本功練習(xí)內(nèi)容演練技巧并示范課的組織教法課的內(nèi)容組織教法2、手法：3、學(xué)生模仿，教師糾錯(cuò)順肩、急旋前臂的動(dòng)作架拳：松肩、肘微屈，前臂內(nèi)旋推掌：挺胸、收腹、立腰、出掌快速有力，有寸勁亮掌：抖腕、亮掌與轉(zhuǎn)頭同時(shí)完成1、糾正易犯錯(cuò)誤，繼續(xù)練習(xí)要求：仔細(xì)觀察記憶，認(rèn)真練習(xí)組織：集體練習(xí)坐盤2、學(xué)生跟練4、步法：擊步、墊步等3、學(xué)生自練，教師口令提示二、三路長拳第一段1-4動(dòng)4、教師糾錯(cuò)，學(xué)生再練習(xí)特點(diǎn)：姿勢(shì)挺拔，動(dòng)作舒展，快速有5、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)力（1）靜力性放松1、教師提示并口令指揮要求：積極放松場(chǎng)地布置田徑場(chǎng)器材及設(shè)備武術(shù)教案課的基本外擺腿腿法練習(xí)的正確方法。重點(diǎn)重點(diǎn)：基本功練習(xí)中的挺胸、立腰或塌腰難點(diǎn)難點(diǎn)：長拳中的大躍步前穿課的時(shí)間課的內(nèi)容1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)（3）俯背運(yùn)動(dòng)（4）膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)（5）踝、腕關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)3、專門性練習(xí)：拉韌帶一、正側(cè)壓腿、正側(cè)踢腿、里合腿、外擺腿要點(diǎn)：直體向前、向下壓振，逐漸加大振幅，逐步提高腿的高度要點(diǎn)：同正壓腿組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對(duì)慢跑,隊(duì)伍整齊2、成廣播體操隊(duì)形散開3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)2、教師講解壓韌帶要領(lǐng)并示范組織：集體練習(xí)分組練習(xí)1、簡介基本功練習(xí)內(nèi)容2、教師講解示范，并強(qiáng)調(diào)動(dòng)作要領(lǐng)學(xué)生練習(xí)，教師指導(dǎo)3、教師領(lǐng)做，學(xué)生跟練武術(shù)教案課的組織教法課的內(nèi)容組織教法5場(chǎng)地布置要點(diǎn)：抬頭挺胸，身體中正。要點(diǎn)：腳尖向腦后走。要點(diǎn)：保持上肢中正。要點(diǎn)：展胯，動(dòng)作幅度大。4、師生再見4、學(xué)生集體練習(xí)，教師糾錯(cuò)5、學(xué)生分組練習(xí)，教師糾錯(cuò)2、教師啟發(fā)引導(dǎo)學(xué)生完成動(dòng)作3、反復(fù)練習(xí)，思考動(dòng)作，體會(huì)動(dòng)作要領(lǐng)組織：集體練習(xí)3、學(xué)生練習(xí)，教師口令指揮4、教師糾錯(cuò)，學(xué)生再練習(xí)組織：集體練習(xí)1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習(xí)注意事項(xiàng)要求：積極放松器材及設(shè)備武術(shù)教案課的基本三、單足跳、蛙跳等2、學(xué)習(xí)三路長拳新動(dòng)作并復(fù)習(xí)已學(xué)的。難點(diǎn)課的重點(diǎn)：套路學(xué)習(xí)的虛步栽拳、提膝穿掌的方向路線難點(diǎn)：基本功練習(xí)腰的靈活性時(shí)課的內(nèi)容組織教法間1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)隊(duì)形：△△教師2、師生問好5＇3、宣布本次課的內(nèi)容及要求××××××××××××××體育委員4、安排見習(xí)生××××××××××××××教法：宣講法1、繞田徑場(chǎng)慢跑二圈（2×400m）組織：1、成兩列縱對(duì)慢跑,隊(duì)伍整齊2、徒手操（4×8拍）2、成廣播體操隊(duì)形散開（1）頭部運(yùn)動(dòng)（2）四肢運(yùn)動(dòng)3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)（3）俯背運(yùn)動(dòng)（4）膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)教法：1、教師講解基本功要領(lǐng)并示范（5）踝、腕關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)（6）拉韌帶2、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)3、專門性練習(xí)：基本功、五步拳3、學(xué)生練習(xí)五步拳，教師指導(dǎo)糾錯(cuò)一、腰功、跳躍、平衡練習(xí)組織：集體練習(xí)收髖，并向前折體2、教師分解教學(xué)2、涮腰3、教師講解示范單個(gè)動(dòng)作要點(diǎn)：盡量增大繞環(huán)幅度4、教師領(lǐng)做，學(xué)生跟練要點(diǎn)：兩手臂盡量伸直武術(shù)教案課的組織教法課的內(nèi)容組織教法要點(diǎn)：踢擺時(shí)，腳高須過腰，左腿在擊響的一瞬間，屈膝收控于右腿側(cè)。要點(diǎn)：躍步要遠(yuǎn)，落地要輕，兩臂上擺要點(diǎn)：平衡站穩(wěn)，提膝過腰，腳內(nèi)扣7、望月平衡要點(diǎn)：平穩(wěn)站立，扣緊膝窩，腳底朝上三、單足跳、蛙跳等4、布置課后作業(yè)5、學(xué)生自練，教師指揮6、教師糾錯(cuò)，學(xué)生再練習(xí)及糾正方法8、學(xué)生分組自練，教師巡回指導(dǎo)9、集體練習(xí)，教師指揮要求：講解簡明扼要，學(xué)生觀察思考組織：集體練習(xí)1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習(xí)注意事項(xiàng)要求：積極放松武術(shù)教案課的基本難點(diǎn)課的二、單足跳、蛙跳重點(diǎn)：轉(zhuǎn)身踢腿馬步盤肘難點(diǎn)：彈跳力的練習(xí)時(shí)課的內(nèi)容間1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4、安排見習(xí)生（3）俯背運(yùn)動(dòng)（4）膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)（5）踝、腕關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)3、專門性練習(xí)：柔韌練習(xí)、基本功初級(jí)長拳第三路：第二段6-8動(dòng)要點(diǎn)：兩臂要?jiǎng)澚A，幅度要大，擺要點(diǎn)：左腿后撤一步成右弓步，右掌向下、向后伸直成后勾手，左掌經(jīng)腰體素質(zhì)，尤其是腿部力量。組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對(duì)慢跑,隊(duì)伍整齊2、成廣播體操隊(duì)形散開3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)2、教師指導(dǎo)糾錯(cuò)習(xí)2、教師分解教學(xué)模仿練習(xí)4、教師領(lǐng)做，學(xué)生跟練體育教學(xué)（教案）課的組織教法課的內(nèi)容組織教法場(chǎng)地布置8、轉(zhuǎn)身踢腿馬步盤肘盤肘要快速有力，右肩前傾。要點(diǎn)：掄臂動(dòng)作要連貫并劃成立圓，歇步要兩腿交叉全蹲，左腿大小腿靠緊，臀部貼于左小腿外側(cè)，膝關(guān)節(jié)在要點(diǎn)：仆步時(shí)左腿充分伸直，腳尖內(nèi)挺胸，塌腰，微左轉(zhuǎn)。二、素質(zhì)訓(xùn)練4、布置課后作業(yè)5、學(xué)生自練，教師指揮6、教師糾錯(cuò)，學(xué)生再練習(xí)8、教師強(qiáng)調(diào)重難點(diǎn)，并介紹易犯錯(cuò)誤及糾正方法9、學(xué)生分組自練，教師巡回指導(dǎo)11、集體糾錯(cuò)，學(xué)生再練習(xí)，教師小結(jié)要求：講解簡明扼要，學(xué)生觀察思考組織：學(xué)生分組練習(xí)教法：學(xué)生練習(xí)，教師指導(dǎo)組織：集體練習(xí)1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習(xí)注意事項(xiàng)要求：積極放松器材及設(shè)備武術(shù)教案課的基本難點(diǎn)重點(diǎn)：五種步型的動(dòng)作要領(lǐng)難點(diǎn)：長拳中的幾個(gè)難度動(dòng)作質(zhì)，促進(jìn)身體的全面發(fā)展。課的時(shí)間課的內(nèi)容組織教法1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)隊(duì)形：△△教師2、師生問好3、宣布本次課的內(nèi)容及要求××××××××××××××體育委員4、安排見習(xí)生××××××××××××××教法：宣講法1、繞田徑場(chǎng)慢跑二圈（2×400m）組織：1、成兩列縱對(duì)慢跑,隊(duì)伍整齊2、徒手操（4×8拍）2、成廣播體操隊(duì)形散開（1）頭部運(yùn)動(dòng)（2）四肢運(yùn)動(dòng)3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)（3）俯背運(yùn)動(dòng)（4）膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)（5）踝、腕關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)2、教師指導(dǎo)糾錯(cuò)3、專門性練習(xí)：柔韌練習(xí)、彈跳力3、學(xué)生再練習(xí)沉髖。1、逐漸延長站立時(shí)間，左右交替練習(xí)使兩腳尖朝前，兩膝微向內(nèi)扣。習(xí)武術(shù)教案課的組織教法課的內(nèi)容組織教法5場(chǎng)地布置要點(diǎn)：挺胸、直背、塌腰、沉髖要點(diǎn)：挺胸、直背塌腰、前虛后實(shí)，虛實(shí)分明要點(diǎn)：挺胸、塌腰、兩腿并攏貼緊、要點(diǎn)：動(dòng)作之間的銜接4、布置課后作業(yè)4、結(jié)合穿掌作左、右歇步亮掌動(dòng)作組織：集體練習(xí)2、教師領(lǐng)做，學(xué)生同步練習(xí)3、學(xué)生自練，教師巡回指導(dǎo)4、集中糾錯(cuò)，學(xué)生再練習(xí)要求：講解簡明扼要，學(xué)生觀察思考組織：集體練習(xí)1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習(xí)注意事項(xiàng)要求：積極放松器材及設(shè)備武術(shù)教案二、途中跑、彎道跑技術(shù)要領(lǐng)及練習(xí)課的基本難點(diǎn)課的重點(diǎn)：彎道跑的擺臂及身體重心控制，弓步劈拳左右腳上步帶弧形難點(diǎn)：途中跑技術(shù)中大腿鞭打積極下壓，換跳步動(dòng)作的協(xié)調(diào)、連貫，震腳時(shí)腿要彎曲，全腳著地時(shí)課的內(nèi)容1課的內(nèi)容1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4、安排見習(xí)生2、游戲：長江黃河一組同學(xué)叫“長江”，另一組叫“黃河”3、專門性練習(xí)：柔韌練習(xí)、基本功一、途中跑、彎道跑要點(diǎn)：當(dāng)擺動(dòng)腿擺到最高點(diǎn)時(shí)，即以腳掌微蹺起做由前向下后方的運(yùn)動(dòng)，在腳前離重心投影點(diǎn)約1.5腳掌處著間××××××××××××××××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對(duì)慢跑,隊(duì)伍整齊2、成方向相反的兩橫排3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)2、講解游戲名稱、方法、規(guī)則3、學(xué)生做游戲組織：集體練習(xí)→分組練習(xí)2、用腳掌富有彈性的著地放松，步幅大，并注意后蹬和前擺的正確技術(shù)武術(shù)教案課的組織教法課的內(nèi)容組織教法部結(jié)分場(chǎng)地布置難點(diǎn)：上下肢協(xié)調(diào)，調(diào)節(jié)平衡和跑的要點(diǎn)：跑時(shí)身體要向圓心傾斜，彎道半徑越小，跑的速度越快，身體向內(nèi)傾斜程度就越大，為了跑最短距離，腳著地點(diǎn)應(yīng)盡量靠近左側(cè)分道線。難點(diǎn)：身體各部位的正確技術(shù)。二、三路長拳第三段3-4動(dòng)要點(diǎn)：左右腳上步稍帶弧形2、換跳步弓步?jīng)_拳要點(diǎn)：動(dòng)作要連貫、協(xié)調(diào)，震腳腿要4、布置課后作業(yè)組織：集體練習(xí)→分組練習(xí)→集體練習(xí)教法：同前一次課要求：講解簡明扼要，學(xué)生觀察思考組織：集體練習(xí)1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習(xí)注意事項(xiàng)要求：積極放松器材及設(shè)備武術(shù)教案課的基本難點(diǎn)課的重點(diǎn)：弓步臂拳的擄手動(dòng)作，劈拳時(shí)手臂伸直彎道跑時(shí)身體向內(nèi)傾斜，擺臂幅度難點(diǎn)：換跳步時(shí)課的內(nèi)容間1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4、安排見習(xí)生（3）俯背運(yùn)動(dòng)（4）膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)（5）踝、腕關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)3、專門性練習(xí)：柔韌練習(xí)、基本功一、復(fù)習(xí)三路長拳3-4動(dòng)及前兩段要點(diǎn)：左右腳上步稍帶弧形2、換跳步弓步?jīng)_拳要點(diǎn)：動(dòng)作連貫、協(xié)調(diào)，震腳時(shí)腿要彎屈，全腳著地，左腳離地不要高。武術(shù)教案組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對(duì)慢跑,隊(duì)伍整齊2、成廣播體操隊(duì)形散開3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)2、教師指導(dǎo)糾錯(cuò)習(xí)2、教師巡回檢查指導(dǎo)課的組織教法課的內(nèi)容組織教法場(chǎng)地布置先慢跑再中速跑然后快跑，體會(huì)隨著速度的加快，身體內(nèi)傾程度不斷加大2、學(xué)習(xí)跑進(jìn)彎道技術(shù)，先在直道上入彎道前2-3步加大右腿的蹬地力量和改變右臂的擺臂角度。接著跑進(jìn)直道，轉(zhuǎn)直道的那幾步身體逐漸正直，隨慣性向前。4、完整技術(shù)：彎、直道的銜接4、布置課后作業(yè)組織：集體→分組1、圍成一圈，逐漸加速，體會(huì)動(dòng)作技術(shù)4、彎道跑完整技術(shù)6、教師檢查指導(dǎo)組織：集體練習(xí)1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習(xí)注意事項(xiàng)要求：積極放松器材及設(shè)備武術(shù)教案課的基本難點(diǎn)二、中長距離的變速跑重點(diǎn)：長拳的規(guī)范性難點(diǎn)：變速跑節(jié)奏的掌握課的時(shí)間課的內(nèi)容1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4、安排見習(xí)生（3）俯背運(yùn)動(dòng)（4）膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)（5）踝、腕關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)3、專門性練習(xí)：柔韌練習(xí)、基本功組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對(duì)慢跑,隊(duì)伍整齊2、成廣播體操隊(duì)形散開3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)2、教師指導(dǎo)糾錯(cuò)習(xí)1、學(xué)生先復(fù)習(xí)，教師檢查2、教師集體糾錯(cuò)武術(shù)教案課的組織教法課的內(nèi)容組織教法30＇二、中長距離的變速跑1、簡述中長距離跑的分類并說明其鍛煉價(jià)值2、結(jié)合示范講解技術(shù)要領(lǐng)2、教師巡回指導(dǎo)，認(rèn)真糾錯(cuò)組織：集體練習(xí)4、體會(huì)技術(shù)特點(diǎn)場(chǎng)地布置4、布置課后作業(yè)組織：集體練習(xí)1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習(xí)注意事項(xiàng)要求：積極放松器材及設(shè)備武術(shù)教案班級(jí)一、復(fù)習(xí)三路長拳第二段，第三段班級(jí)一、復(fù)習(xí)三路長拳第二段，第三段課的基本2、測(cè)試學(xué)生的耐力水平及鍛煉的效果。重點(diǎn)重點(diǎn)：長拳的復(fù)習(xí)難點(diǎn)難點(diǎn)：跑的正確姿勢(shì)課的時(shí)間課的內(nèi)容1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4、安排見習(xí)生（3）俯背運(yùn)動(dòng)（4）膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)（5）踝、腕關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)3、專門性練習(xí)：柔韌練習(xí)、基本功要點(diǎn)：檢查跑的能力難點(diǎn)：跑的正確姿勢(shì)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：優(yōu)、良、及格組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對(duì)慢跑,隊(duì)伍整齊2、成廣播體操隊(duì)形散開3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)2、教師指導(dǎo)糾錯(cuò)組織：依點(diǎn)名順序測(cè)試武術(shù)教案課的組織教法課的內(nèi)容組織教法二、復(fù)習(xí)三路長拳第二段、第三段1-4動(dòng)要點(diǎn)：上步弓步劈拳時(shí)上步略帶弧形2、復(fù)習(xí)第二段要點(diǎn)：動(dòng)作之間的銜接，節(jié)奏的掌握組織：集體練習(xí)→分組練習(xí)→集體練習(xí)2、學(xué)生仔細(xì)領(lǐng)會(huì)動(dòng)作4、布置課后作業(yè)1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習(xí)注意事項(xiàng)要求：積極放松器材及設(shè)武術(shù)教案課的基本二、復(fù)習(xí)鉛球側(cè)向投擲技術(shù)難點(diǎn)課的重點(diǎn)：長拳換跳步技術(shù)動(dòng)作難點(diǎn)：鉛球擺動(dòng)腿與身體的協(xié)調(diào)時(shí)課的內(nèi)容間1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4、安排見習(xí)生（3）俯背運(yùn)動(dòng)（4）膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)（5）踝、腕關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)3、專門性練習(xí)：柔韌練習(xí)、基本功一、學(xué)習(xí)三路長拳第三段5-6動(dòng)上體右轉(zhuǎn)90o,重心移至兩腿中間成馬步，右拳收至腰間，左掌變?nèi)蜃蠼M織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對(duì)慢跑,隊(duì)伍整齊2、成廣播體操隊(duì)形散開3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)2、教師指導(dǎo)糾錯(cuò)習(xí)1、教師先完整示范，再分解教學(xué)并示范，學(xué)生模仿練習(xí)3、教師領(lǐng)做，學(xué)生跟練4、學(xué)生自練，教師指揮并糾錯(cuò)武術(shù)教案課的組織教法課的內(nèi)容組織教法場(chǎng)地布置2、弓步下沖拳右腿蹬直成左弓步，左拳變掌向下經(jīng)體前向上架于頭左上方，掌心向上右拳自腰間向左前斜下方?jīng)_出，目視右二、復(fù)習(xí)鉛球側(cè)向投擲技術(shù)（4）側(cè)向成發(fā)力前的準(zhǔn)備姿勢(shì)（5）持球成徒手、屈膝俯身成原地弓箭步做交換跳練習(xí)4、布置課后作業(yè)6、教師強(qiáng)調(diào)重難點(diǎn)，并介紹易犯錯(cuò)誤及糾正方法7、學(xué)生分組自練，教師巡回指導(dǎo)8、集體練習(xí)，教師口令指揮9、集體糾錯(cuò)，學(xué)生再練習(xí)組織：集體練習(xí)→分組練習(xí)1、原地推球的技術(shù)要點(diǎn)分析組織：集體練習(xí)1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習(xí)注意事項(xiàng)要求：積極放松器材及設(shè)備武術(shù)教案課的基本難點(diǎn)課的二、100M跑、立定跳遠(yuǎn)重點(diǎn)：長拳動(dòng)作間的銜接即節(jié)奏的把握難點(diǎn)：換跳步動(dòng)作時(shí)課的內(nèi)容間1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4、安排見習(xí)生（3）俯背運(yùn)動(dòng)（4）膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)（5）踝、腕關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)3、專門性練習(xí)：柔韌練習(xí)、基本功組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對(duì)慢跑,隊(duì)伍整齊2、成廣播體操隊(duì)形散開3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)2、教師指導(dǎo)糾錯(cuò)習(xí)1、學(xué)生演練，教師檢查學(xué)生學(xué)習(xí)情況2、教師指出不足4、教師再講解并示范武術(shù)教案課的組織教法課的內(nèi)容組織教法1、教師計(jì)時(shí)，記錄成績3、見習(xí)生輔助教師記錄4、學(xué)生測(cè)試要求：測(cè)試要公正、公平、準(zhǔn)確4、布置課后作業(yè)14、提示課外練習(xí)注意事項(xiàng)要求：積極放松場(chǎng)地布置場(chǎng)地布置器材及設(shè)備武術(shù)教案課的基本二、學(xué)習(xí)三路長拳第三段7-8動(dòng)1、反復(fù)練習(xí)以使學(xué)生熟練掌握三路長拳已學(xué)動(dòng)作并能獨(dú)立完成動(dòng)作練習(xí)。2、弄清新學(xué)動(dòng)作的要領(lǐng)、方向、路線難點(diǎn)課的重點(diǎn)：長拳精、氣、神的把握、體會(huì)難點(diǎn)：側(cè)踹腿的高度不能低于腰，力點(diǎn)在腳跟時(shí)課的內(nèi)容間1、體育委員集合整隊(duì)，報(bào)告人數(shù)3、宣布本次課的內(nèi)容