時間分辨熒光免疫分析儀實驗報告1．實驗目的本次實驗為驗證時間分辨熒光免疫分析儀校準規(guī)范中的計量特性主要技術指標的合理性。2．儀器型號時間分辨熒光免疫分析儀多分為全自動和半自動兩種模式，主要生產廠商有：珀金埃爾默股份有限公司（PE)、賽默飛世爾科技ThermoFisher、瑞士TECAN、蘇州新波生物技術有限公司（被PE收購）、廣州市達瑞生物技術股份有限公司、廣州豐華生物工程有限公司、廣州萬孚生物技術有限公司、南京嵐煜生物科技有限公司，光景生物科技(蘇州)有限公司等。目前市場主流產品主要為PE、達瑞等品牌。表1為目前市場主要產品。表SEQ表\*ARABIC1常見的幾種儀器型號進口/國產品牌型號備注進口PEWallac

1235AutoDELFIA全自動Wallac

1420

Victor2

D半自動EasyCuta全自動（新波）Anytest2000BiotekSynergyH1半自動TECANSPARK半自動國產廣州達瑞DR6606全自動廣州萬孚LS1000半自動豐華TALENT-II半自動根據(jù)規(guī)范方法，采用以上部分型號儀器的計量性能進行校準和比對。3．實驗人員周瑾艷、黃彥捷4．實驗時間2022年05月至2022年09月5．環(huán)境條件溫度：（10~30）℃，相對濕度：≤70%6．實驗所用校準裝置及標準物質(1)銪單元素溶液國家有證標準物質，GBW(E)082185，100μg/mL，U=1μg/mL（k=2）。(2)甲胎蛋白血清（液體）標準物質GBW(E)090088，25.6IU/mL，U=1.2IU/mL（k=2）。冰凍人血清未結合雌三醇標準物質GBW(E)091049，33.6nmol/L，U=1.6nmol/L（k=2）。試劑：配套體外診斷試劑盒。數(shù)字溫度計：測量范圍（0~100）℃，最小分度0.1℃。電子天平：分度值不低于0.1mg，I級合格。容量瓶、移液管：A級合格。7．實驗對象挑選市場上部分時間分辨熒光免疫分析儀進行校準，主要采用為一臺達瑞DR6606、一臺PEWallac1420（半自動）、一臺PEEasyCuta2750、一臺PEEasyCutaMiNi2730。8．實驗方法時間分辨熒光免疫分析儀的各計量性能指標測量方法詳見時間分辨熒光免疫分析儀校準規(guī)范。9．實驗結論通過對這些不同生產廠家生產的時間分辨熒光免疫分析儀進行檢測限、線性、重復性、穩(wěn)定性、溫度準確度和波動度、臨床項目示值誤差、臨床項目檢測重復性、攜帶污染率測量。實驗結果表明，該校準規(guī)范規(guī)定的計量特性、校準項目、校準方法等要求科學合理，適用于儀器的校準工作。

時間分辨熒光免疫分析儀實驗原始記錄1.檢測限因時間分辨熒光免疫分析儀熒光信號因儀器而異，且常檢測的臨床項目常為陰性樣本或者低濃度樣本，因而通過考察儀器熒光性能最低檢測限尤為必要。本部分采用配套的增強液稀釋配制的銪標準溶液物質實現(xiàn)，參考行標YYT1533根據(jù)大部分儀器可達到的檢測下限，選用1×10-12mol/LEu溶液，并以增強液作為空白，均分別測試10次，計算各實驗標準偏差，采用公式(1)評估，當滿足公式(1)要求，則儀器檢測限不大于1×10-12mol/L（Eu）。起草小組在驗證實驗過程中，采用GBW(E)082185，按照規(guī)范附錄A的方法配制溶液，對不同型號儀器的檢測限進行校準，具體結果如表2-3所示。表2不同型號儀器檢測限校準結果儀器型號結論達瑞DR6606374.283515.04滿足：檢測限不大于1×10-12mol/L（Eu）PEWallac1420（半自動）374.873434.95PEEasyCutaMiNi2730617.372145.81PEEasycuta2750541.742462.27表3不同型號儀器檢測限校準原始數(shù)據(jù)達瑞DR6606PEWallac1420半自動PEEasyCutaMiNi2730PEEasycuta2750空白10-12mol/L(Eu)空白10-12mol/L(Eu)空白10-12mol/L(Eu)空白10-12mol/L(Eu)433392344434446652342105228284533915420365169022868442823399383140837478202488107128194393682418368176423397872883458381439637147622637988271444839344513655744244472127493933809425368472026109952623427378141835967472427738259545939084513673689254489026154593571459372573523917652662436.83816.84293657733.62450.8885.12731.124.23116.9620.9886.0645.05118.21133.09104.20374.283515.04374.873434.95617.372145.81541.742462.272.線性采用配制好的（1×10-12~1×10-8）mol/LEu溶液進行熒光值測量，重復測量6次，取其平均值。將各標準銪濃度對數(shù)值()與熒光對數(shù)值()進行線性回歸，計算線性相關系數(shù)。結果如表5-6所示。表5各儀器線性校準結果儀器型號達瑞DR6606PEWallac1420PEEasyCuta2750PEEasyCutaMiNi27300.9960.9930.9960.997表6各儀器線性校準原始數(shù)據(jù)儀器CEu/(mol/L)123456達瑞DR6606-121.0E-128224805472787423743668077537.003.880.996-111.0E-1136932374253624836754380013815937253.174.57-101.0E-10357995351734353070356851361174362296357186.675.55-91.0E-093586700345361834476453464380347098934552283479760.006.54-81.0E-0811961310119611891196112511961304119612111196119111961221.677.08PEWallac1420-121.0E-1212571113371134610767106751080111249.504.050.993-111.0E-1149604492214858548640505105018749457.834.69-101.0E-10471124458837470149466436467934470911467565.175.67-91.0E-094731956449060544697604536363446531944762774528380.006.66-81.0E-0812038357120383611203842712038440120384711203846512038420.177.08PEEasyCuta2750-121.0E-122691261925442550240826182571.673.410.996-111.0E-119988991096689709951093189683.833.99-101.0E-10122627122679122115121131121150119852121592.335.08-91.0E-091130792112553911149541113307111051911019291116173.336.05-81.0E-0810129405991252997341869696676943956293338529707701.676.99PEEasyCutaMiNi2730-121.0E-122823288327492595266227442742.673.440.997-111.0E-1112176124201175912120118061152611967.834.08-101.0E-10124886122971120635122939120932119562121987.505.09-91.0E-091188948117204811554051127165111901111117841145726.836.06-81.0E-0810775538105394101029637498514369862426954717010145392.337.01以上四種型號的儀器在銪濃度(10-12~10-8)mol/L范圍內線性均滿足r>0.99。3.重復性采用10-10mol/L銪標準溶液，連續(xù)測量6次，計算測得熒光值的相對標準偏差作為重復性的表征，同樣采用上述四種儀器測量，得到結果如表7-8所示。表7各儀器重復性校準結果儀器型號達瑞DR6606PEWallac1420PEEasyCuta2750PEEasyCutaMiNi2730RSD/%0.990.610.901.73表8各儀器重復性校準原始數(shù)據(jù)儀器123456平均值STDEVRSD/%PEWallac1420471124458837470149466436467934470911467565.174650.330.99達瑞DR6606388217382395383685381764385726384289384346.002358.060.61PEEasyCuta2750122627122679122115121131121150119852121592.331091.950.90PEEasyCutaMiNi2730124788122681119699122600120495119358121603.502106.811.73以上儀器熒光信號重復性RSD<3%，滿足規(guī)范建議要求。4.穩(wěn)定性采用10-10mol/L銪標準溶液，連續(xù)測量10次，計算測得熒光值的平均值，過4h、8h后分別再上機重復測試10次，計算測定熒光的平均值，以第1次的測定結果作為基準值，按式(7)計算相對偏移以表示穩(wěn)定性(α，%)：表9所示為四種型號儀器的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，其穩(wěn)定性均不大于±10%。表9不同型號儀器穩(wěn)定性校準結果儀器型號達瑞DR6606PEWallac1420PEEasyCuta2750PEEasyCutaMiNi2730RSD/%7.874.58-2.613.39表10不同型號儀器穩(wěn)定性校準原始數(shù)據(jù)儀器時間/h12345678910平均值穩(wěn)定性/%PEWallac14200471124458837470149466436467934470911476532468971473219459523468363.60/4471345476532481128476890479845480931480992480199483764486541479816.702.458489734490276490421490532491123490652490409487012482346495766489827.104.58達瑞DR66060357995351734353070356851361174362296357995351734353070356851356277.00/4373551370904370684364641375971373340361174362296367531371569369166.103.628388217382395383685381764385726384289389321381256385439381129384322.107.87PEEasycuta27500127762128072126114126291124553124183122877122238122007121382124547.90/4122740122681122870121997121887120597121487120495119691118552121299.70-2.618123965123071123636124092122867123184122090121590121955122218122866.80-1.35PEEasyCutaMiNi27300118464118352117707119142119519118195118664119055118688119415118720.10/4118647118527117779117231117890116968117429118181118241117924117881.70-0.718122286122564122766122960122340122567122617123448122024123837122740.903.39穩(wěn)定性測量結果，當采用銪溶液測量時，溶液的在8h內的保存應密封保存在2~8℃下，測試時，溶液回到室溫下再進行測試。5.溫度準確性與波動性采用溫度計對儀器各孵育艙進行溫度校準，儀器孵育溫度設定值為37℃，對每個孵育艙重復測定10次，計算得到溫度準確度和波動性，表11~13為PEEasyCutaMiNi2730、PEEasycuta2750兩個型號的溫度校準數(shù)據(jù)。表11各儀器溫度校準結果準確度(±1.5℃)波動度(±1.5℃)PEEasyCutaMiNi27300.700.95PEEasycuta2750-0.810.65表12PEEasyCutaMiNi2730溫度校準數(shù)據(jù)PEEasyCutaMiNi2730CH1(1號艙)CH2(2號艙)CH3(3號艙)CH4(4號艙)CH5(5號艙)CH6(6號艙)CH7(7號艙)CH8(8號艙)136.936.936.436.936.637.537.737.2236.736.736.336.836.637.537.737.1336.736.936.436.736.537.337.637.1436.936.736.436.736.237.537.637.2537.036.936.536.936.237.337.737.1637.037.036.636.936.137.537.937.2736.936.936.436.835.937.437.637.2836.936.936.436.735.737.437.737.2936.836.836.436.835.637.537.837.31037.037.036.937.037.537.737.737.3Mean36.8836.8736.4736.8236.2937.4637.7037.19Max37.0037.0036.9037.0037.5037.7037.9037.30Min36.7036.7036.3036.7035.6037.3037.6037.10準確度(±1.5℃)-0.12-0.13-0.53-0.18-0.710.460.700.19波動(±1.5℃)0.150.150.300.150.950.200.150.10表13PEEasycuta2750溫度校準數(shù)據(jù)PEEasycuta2750CH1(1號艙)CH2(2號艙)CH3(3號艙)CH4(4號艙)CH5(5號艙)CH6(6號艙)CH7(7號艙)CH8(8號艙)CH9(9號艙)CH10(10號艙)CH11(11號艙)CH12(12號艙)135.736.536.836.537.136.635.935.936.937.338.436.2235.736.636.836.737.336.836.136.037.037.438.136.4335.936.736.936.837.336.836.136.137.237.437.736.5436.136.937.137.037.436.936.336.337.237.637.436.6536.136.937.137.037.537.036.336.337.337.637.236.8636.237.037.437.137.637.236.436.637.537.736.937.0736.437.037.337.137.737.236.636.737.537.836.737.1836.537.237.637.537.837.436.736.837.637.936.437.3936.537.137.537.438.037.536.837.037.738.236.337.41036.837.337.637.638.037.536.937.137.838.236.137.5Mean36.1936.9237.2137.0737.5737.0936.4136.4837.3737.7137.1236.88Max36.8037.3037.6037.6038.0037.5036.9037.1037.8038.2038.4037.50Min35.7036.5036.8036.5037.1036.6035.9035.9036.9037.3036.1036.20準確度(±1.5℃)-0.81-0.080.210.070.570.09-0.59-0.520.370.710.12-0.12波動(±1.5℃)0.550.400.400.550.450.450.500.600.450.451.150.656.臨床項目示值誤差采用甲胎蛋白國家標準物質GBW（E）090088，對PEWallac1420、達瑞DR6606儀器進行校準。示值誤差分別為-4.24%和1.54%。滿足規(guī)范不大于±10%要求。同時我們也采用GBW（E）090088稀釋10倍進行測量，稀釋劑為試劑盒內緩沖溶液。如表14所示，示值誤差分別為27.98%和23.02%，均大于10%。這是由于免疫分析的基質效應，導致結果偏差。因而校準示值誤差時不建議將有證標準物質稀釋使用，否則可能影響互換性。同時我們也采用客戶自用的標準品進行驗證。如表14第三組所示，達瑞試劑盒自帶的甲胎蛋白標準品進行示值誤差實驗，示值誤差均小于10%，表明客戶試劑盒準確度滿足要求。表14各儀器甲胎蛋白示值誤差校準結果儀器型號標準值/(IU/mL)測量值平均值示值誤差/100%123PEWallac142025.623.9826.17223.39324.515-4.242.563.063.1883.5813.27627.98達瑞DR660625.625.63324.53627.81325.9941.542.563.1793.153