第第頁第3章基因工程復(fù)習(xí)提升易混易錯(cuò)練易錯(cuò)點(diǎn)1不能正確選擇限制酶并分析酶切結(jié)果1.(2024山東省實(shí)驗(yàn)中學(xué)月考)下圖分別表示某種質(zhì)粒和含目的基因的DNA片段，利用相關(guān)工具酶將二者構(gòu)建成基因表達(dá)載體并導(dǎo)入受體菌。幾種可供使用的限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)如下表所示。下列關(guān)于構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)限制酶的選擇及其相關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是()注：TetR表示四環(huán)素抗性基因；AmpR表示氨芐青霉素抗性基因。限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn)EcoRⅠ-G↓AATTC-BamHⅠ-G↓GATCC-BclⅠ-T↓GATCA-Sau3AⅠ-↓GATC-SmaⅠ-CCC↓GGG-A.若單獨(dú)使用SmaⅠ，則目的基因表達(dá)的產(chǎn)物可能不相同B.若單獨(dú)使用SmaⅠ，則含有目的基因的受體菌不能在氨芐青霉素培養(yǎng)基中生長C.若選擇BamHⅠ和SmaⅠ，能在四環(huán)素培養(yǎng)基中生長的受體菌一定含有目的基因D.若用EcoRⅠ和BclⅠ切割質(zhì)粒，則需用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA易錯(cuò)點(diǎn)2不能正確選擇PCR中的引物2.(2024廣西河池模擬)目的基因和載體如果用同一種限制酶處理，連接時(shí)會(huì)出現(xiàn)正反接的情況，為鑒定篩選出的表達(dá)載體中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR后，結(jié)合電泳技術(shù)鑒定，圖示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，其中目的基因?yàn)殚L度300bp的片段。下列有關(guān)說法不正確的是()A.PCR復(fù)性溫度不宜太低，避免引物錯(cuò)配和模板鏈形成雙鏈B.電泳條帶遷移的位置和速度與DNA分子的大小和構(gòu)象有關(guān)C.選取引物甲、丙，擴(kuò)增出450bp長度片段時(shí)，可以說明目的基因正接D.選取引物甲、乙，擴(kuò)增出400bp長度片段時(shí)，可以說明目的基因反接易錯(cuò)點(diǎn)3對(duì)目的基因?qū)氩煌锛?xì)胞的方式理解不清3.(2024遼寧沈陽期末)花粉管通道法是我國科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的介導(dǎo)植物基因轉(zhuǎn)化的一種方法，其原理是在植物受粉后的特定時(shí)期，將外源DNA溶液涂于柱頭上，利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道，將外源DNA導(dǎo)入受精卵細(xì)胞，并進(jìn)一步整合到受體細(xì)胞的基因組中，過程如圖所示。下列相關(guān)說法錯(cuò)誤的是()A.外源DNA需要構(gòu)建基因表達(dá)載體才能借助圖示方法實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化B.構(gòu)建的基因表達(dá)載體必須含有起始密碼子，以作為轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)C.外源DNA進(jìn)入圖中的受精卵后，可以整合到其染色體的DNA上D.相比于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，花粉管通道法可省去植物組織培養(yǎng)這一操作4.(2024江蘇宿遷月考)如圖是將人的生長激素基因?qū)爰?xì)菌B內(nèi)制“工程菌”的示意圖。已知細(xì)菌B內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因。下列說法正確的是()A.將重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌B細(xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法B.將完成導(dǎo)入過程后的細(xì)菌涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，能生長的只是導(dǎo)入了普通質(zhì)粒的細(xì)菌C.為防止特異性引物的特異性差，PCR獲取人生長激素基因設(shè)計(jì)的特異性引物不宜過長D.目的基因成功表達(dá)的標(biāo)志是受體細(xì)胞中含有人的生長激素基因易錯(cuò)點(diǎn)4混淆目的基因的檢測和鑒定方法、原理5.(2024河南信陽期中)棉花是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物，黃萎病是棉花的最主要病害之一，有棉花的“癌癥”之稱。我國科學(xué)家在世界上首次獲得轉(zhuǎn)基因抗黃萎病棉花新株系。這將使棉花“癌癥”有望得到根治?？茖W(xué)家將從海島棉中分離出來的抗黃萎病基因At7導(dǎo)入陸地棉中，使陸地棉獲得抗病性狀。下列對(duì)轉(zhuǎn)基因棉的檢測與鑒定的敘述，錯(cuò)誤的是()A.檢測轉(zhuǎn)基因棉是否導(dǎo)入基因At7，需要一段能與基因At7互補(bǔ)的短單鏈核酸引物B.檢測轉(zhuǎn)基因棉中的基因At7是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，其原理是抗原與抗體的特異性結(jié)合C.檢測到轉(zhuǎn)基因棉表達(dá)出At7蛋白，說明轉(zhuǎn)基因棉中成功導(dǎo)入了基因At7并能表達(dá)D.檢測轉(zhuǎn)基因棉是否抗黃萎病，可接種黃萎病的病原體到轉(zhuǎn)基因棉植株上6.(2024黑龍江雞西期中)病毒的檢測方法有：①用“病毒核酸檢測試劑盒”，檢測病毒的遺傳物質(zhì)RNA；②特異性抗原蛋白檢測，即檢測病毒表面的一種糖蛋白；③特異性抗體檢測，即檢測感染者體內(nèi)通過免疫反應(yīng)所產(chǎn)生的某種抗體。下列有關(guān)說法不正確的是()A.方法②③都需要用到抗原—抗體雜交的方法B.方法①②③都需要從患者體內(nèi)采集病毒樣本C.某人有可能①②為陽性③為陰性，也可能③為陽性①②為陰性D.由于RNA比DNA穩(wěn)定性差，核酸檢測時(shí)往往需將病毒樣本的RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，擴(kuò)增之后進(jìn)行分段測序

答案與解析第3章基因工程復(fù)習(xí)提升易混易錯(cuò)練1.C2.C3.B4.B5.B6.B1.C選用不同的酶切割質(zhì)粒和目的基因，進(jìn)行結(jié)果分析：結(jié)果分析單獨(dú)使用SmaⅠ用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含目的基因的DNA片段后，目的基因可能會(huì)正向或反向連接到質(zhì)粒上，則目的基因表達(dá)的產(chǎn)物可能不相同，A正確SmaⅠ破壞質(zhì)粒上的氨芐青霉素抗性基因，使含有目的基因的受體菌不能在氨芐青霉素培養(yǎng)基中生長，B正確使用BamHⅠ和SmaⅠ普通質(zhì)粒、重組質(zhì)粒上都含有正常的四環(huán)素抗性基因，導(dǎo)入普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒的受體菌均能在四環(huán)素培養(yǎng)基中生長，C錯(cuò)誤如下圖所示，含目的基因的DNA片段上有EcoRⅠ的識(shí)別序列，但沒有BclⅠ的識(shí)別序列，但Sau3AⅠ切割DNA后產(chǎn)生的黏性末端與BclⅠ相同。若用EcoRⅠ和BclⅠ切割質(zhì)粒，則可用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA片段，D正確。歸納總結(jié)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)限制酶的選擇依據(jù)(1)切割位點(diǎn)應(yīng)位于目的基因兩側(cè)，不能破壞目的基因。(2)為避免目的基因和質(zhì)粒的自身連接、目的基因和質(zhì)粒反向連接，可使用兩種限制酶分別切割目的基因和質(zhì)粒。(3)質(zhì)粒作為載體必須具備啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等，所選擇的限制酶不能破壞所有的標(biāo)記基因以及啟動(dòng)子和終止子。(4)所用限制酶的切割位點(diǎn)應(yīng)位于啟動(dòng)子和終止子之間。2.C復(fù)性是在高溫解旋后降低溫度讓引物與模板鏈結(jié)合，復(fù)性溫度不宜太低，避免引物錯(cuò)配和模板鏈形成雙鏈，A正確；電泳條帶遷移的位置和速度與DNA分子的大小、構(gòu)象有關(guān)，如電泳一段時(shí)間后，較大的DNA分子遷移距離小，離加樣孔近，而較小的DNA分子遷移距離大，離加樣孔遠(yuǎn)，B正確；由于使用的引物是甲、丙，甲、丙沒有與目的基因的相應(yīng)位置配對(duì)，不管基因正接還是反接，擴(kuò)增出的片段均為450bp，C錯(cuò)誤；題圖為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，如果目的基因和質(zhì)粒反向連接，則引物乙會(huì)出現(xiàn)在重組質(zhì)粒的外側(cè)(如下圖)，此時(shí)選取引物甲、乙可以擴(kuò)增出的片段長度為300+100=400(bp)，D正確。歸納總結(jié)(1)引物的作用：可使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸，即引導(dǎo)DNA聚合酶按照5'→3'方向合成子鏈DNA。(2)引物的設(shè)計(jì)：引物是依據(jù)目的基因的已知序列設(shè)計(jì)而成的，應(yīng)選擇目的基因每條鏈的3'端對(duì)應(yīng)序列依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則設(shè)計(jì)引物。(3)引物長度：不能太短，否則特異性不強(qiáng)；不能太長，因?yàn)檫^長會(huì)導(dǎo)致其延伸溫度大于72℃，不適于TaqDNA聚合酶進(jìn)行反應(yīng)。(4)引物自身及一對(duì)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列：引物自身會(huì)折疊或互補(bǔ)配對(duì)，影響引物與模板的復(fù)性結(jié)合。(5)在引物上添加限制酶酶切位點(diǎn)：延伸是從引物的3'端開始的，引物的3'端不能進(jìn)行任何修飾；引物的5'端可以修飾。3.B要讓目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后能穩(wěn)定存在并得到復(fù)制和表達(dá)，不管采用什么導(dǎo)入方法，都需要構(gòu)建基因表達(dá)載體才能實(shí)現(xiàn)，A正確；起始密碼子在mRNA上，不在基因表達(dá)載體(DNA)上，啟動(dòng)子是轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)，B錯(cuò)誤；外源DNA進(jìn)入圖中的受精卵后，可以整合到染色體的DNA上，從而實(shí)現(xiàn)復(fù)制和表達(dá)，C正確；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法需要對(duì)成功導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞進(jìn)行植物組織培養(yǎng)以獲得轉(zhuǎn)基因植物，而花粉管通道法可省去植物組織培養(yǎng)這一操作，D正確。4.B將基因表達(dá)載體導(dǎo)入細(xì)菌B細(xì)胞之前，一般要先用Ca2+處理細(xì)胞，使其處于感受態(tài)；將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，A錯(cuò)誤。根據(jù)題圖可知，目的基因與質(zhì)粒A的結(jié)合點(diǎn)(a)在質(zhì)粒A四環(huán)素抗性基因中，重組質(zhì)粒構(gòu)建會(huì)導(dǎo)致四環(huán)素抗性基因被破壞，且細(xì)菌B內(nèi)不含質(zhì)粒A上的基因，則能在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長的是導(dǎo)入普通質(zhì)粒A的細(xì)菌，B正確。引物中堿基數(shù)量越多，則引物的特異性越強(qiáng)，PCR獲取人生長激素基因設(shè)計(jì)的特異性引物不宜過短，C錯(cuò)誤?；虮磉_(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，目的基因成功表達(dá)的標(biāo)志是受體細(xì)胞中表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì)，D錯(cuò)誤。5.B分析目的基因的檢測的內(nèi)容及方法：檢測內(nèi)容方法檢測轉(zhuǎn)基因棉是否導(dǎo)入基因At7采用PCR等技術(shù)，PCR時(shí)需要一段能與基因At7互補(bǔ)的短單鏈核酸引物，A正確檢測轉(zhuǎn)基因棉中的基因At7是否轉(zhuǎn)錄出mRNA可采用PCR等技術(shù)，PCR原理是DNA半保留復(fù)制，需要遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，B錯(cuò)誤檢測轉(zhuǎn)基因棉是否抗黃萎病屬于個(gè)體水平檢測，可接種黃萎病的病原體到轉(zhuǎn)基因棉植株上，D正確基因表達(dá)表示轉(zhuǎn)錄和翻譯，檢測到轉(zhuǎn)基因棉表達(dá)出At7蛋白，說明轉(zhuǎn)基因棉中成功導(dǎo)入了基因At7并能表達(dá)，C正確。6.B方法②③都是檢測蛋白質(zhì)，都需要用到抗原—抗體雜交的方法，A正確。①RNA檢測和②抗原蛋白檢測需要從患者體內(nèi)采集病毒樣本，而③檢測抗體不需要采集病毒樣本，B錯(cuò)誤。某人有可能感染了病毒但還未產(chǎn)生抗