13I本文件規(guī)定了馬鈴薯對黃萎病(Verticilliumwilt)抗性的室內(nèi)評價(jià)和田間評價(jià)的方法及程序。下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版標(biāo)準(zhǔn)病情指數(shù)(50.0)與同批次評價(jià)試驗(yàn)中感病對照品種病情指數(shù)的比值，記作K。養(yǎng)室(使溫度保持在20℃~28℃)、不銹鋼鍋、電磁爐、培養(yǎng)皿、試管、剪子、鑷子、三角瓶等。選擇馬鈴薯黃萎菌強(qiáng)致病力菌株，在馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)上活化7d~10d,挑取菌落邊緣1條件下恒溫振蕩培養(yǎng)5d后用2層滅菌紗布濾除菌絲，得到分生孢子懸浮液。在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)2將供試馬鈴薯品種及感病對照品種的種薯置于25℃催芽15d左右，待芽長至0.5cm后，用75%酒精消毒刀具，自尾芽開始切成立體小三角塊(25g～50g),保證每塊至少有1～2個(gè)芽眼。25℃攤開放置4h,待薯塊切口風(fēng)干后播種于薄壁塑料育苗盆。育苗盆口徑為20cm,下部墊滅菌土(大田土壤重量：育苗基質(zhì)重量=1:1,121℃,0.1MPa～0.15MPa,1h)5cm～6cm,壓實(shí)，每盆放置3上部覆土厚度為3cm～4cm,灌足自來水，在溫室中培養(yǎng)(培養(yǎng)溫度為20℃~28℃,出苗后10h光照，14h黑暗。陰天開補(bǔ)光燈，光照過強(qiáng)使用遮陽網(wǎng))。每個(gè)品種播種5盆作為1次重復(fù)，重復(fù)4次。采用人工傷根接種法。待馬鈴薯出苗后15d,用消毒的壁紙刀將花盆底部切掉，再用壁紙刀沿花盆底部平切傷根，然后放到底部鋪有2cm滅菌土的同樣新花盆中，置于接種液(2.0L)中浸泡30人工黃萎病圃應(yīng)建立在馬鈴薯代表性產(chǎn)區(qū)或土壤氣候條件相似、有利于黃萎病發(fā)生的地區(qū)；要求發(fā)病均勻，正常年份感病對照品種的病情指數(shù)達(dá)到40.0～60.0;病圃地勢平坦，排灌方便，周圍選用帶短絨的棉花毛籽作為繁殖病原菌的營養(yǎng)基質(zhì)。首先將棉花毛籽放入容器中，加入自來水 (洗滌靈濃度0.1%)將棉籽浸沒，浸泡過夜；次日將棉籽裝入紗袋中并用甩干機(jī)甩干，然后裝入菌種繁殖袋中(每袋3.0kg),用棉塞和報(bào)紙封口，高壓濕熱滅菌1h(121℃,0.1MPa～0.15MPa)備將培養(yǎng)好的接種物用攪拌機(jī)或鐵锨攪拌均勻至單粒棉籽基本分開狀態(tài)于地表，隨即淺層(約20cm)旋耕，使接種物與土壤混合均勻。按照當(dāng)?shù)胤N植方式播種馬鈴薯于人工病圃中，每個(gè)品種重復(fù)3～4次，每個(gè)重復(fù)至少20株。病情嚴(yán)重度分成五個(gè)級別，病級值分別為0,1,2,3和4。各病級癥狀描述如下：1級：病株顯癥葉片數(shù)占總?cè)~片數(shù)的比例≤25%,葉肉變?yōu)榈S色或呈不規(guī)則形的黃色病斑；2級：25%<病株顯癥葉片數(shù)占總?cè)~片數(shù)的比例≤50%,葉部褪綠形成病斑，病斑顏色大部分為3級：50%<病株顯癥葉片數(shù)占總?cè)~片數(shù)的比例≤75%,有少數(shù)葉片凋落；34級：病株顯癥葉片數(shù)占總?cè)~片數(shù)的比例＞75%，多為褐色枯斑，有的病株葉片脫落成光桿，整病情指數(shù)（DI計(jì)算結(jié)果精確到小數(shù)點(diǎn)后1位）相對病情指數(shù)（RDI）感病對照品種病情指數(shù)在40.0～60.0之間可采用相對病情指數(shù)，超出范圍 相對病情指數(shù)（RDI計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后1位 9抗性評價(jià)123454A.1病原菌的分類地位A.2培養(yǎng)特性和孢子形態(tài)梗上的瓶梗末端逐個(gè)割裂?？諝飧稍飼r(shí)，孢子在瓶梗末端聚集成堆，空氣濕潤時(shí)，則形成孢子球。顯微鏡下制片觀察時(shí)，孢子即散開，只留下梗端新生出的單個(gè)孢A.3癥狀盆栽馬鈴薯苗期黃萎病發(fā)病癥狀：下部葉片先表現(xiàn)癥狀，葉片或葉