單克隆抗體藥物-莫羅莫那-CD31985年，FDA批準了世界上第一例治療性單克隆抗體藥物--莫羅莫那CD3(muromonab-CD3,OKT3),這是一種利用雜交瘤技術生產的、具有一重鏈(相對分子質量約5萬)及一輕鏈(相對分子質量約2.5萬)的針對人T細胞表面抗原(CD3)蛋白中e鏈的鼠源性單克隆Ig2a免疫球蛋白。OKT3在控制并逆轉器官移植的排斥反應方面具有比其他化學性免疫劑更好的療效，自1986年開始臨床使用以來，一直是各移植中心免疫抑制綜合措施的重要手段之一。此外，臨床應用中亦發(fā)現OKT3對慢性乙型肝、再生障礙性貧血、急性病毒性心肌炎和惡性腫瘤等疾病具有一定的治療作用。1.莫羅莫那-CD3介紹位于細胞表面的主要組織相容性復合體Ⅱ級抗原(MHC-Ⅱ)在T淋巴細胞依賴型免疫反應中起著關鍵作用，也是引起急性異體移植排斥的主要原因。T細胞抗原受體(TCR)與T細胞表面的CD3分子以非共價鍵連接形成TCR-CD3復合物，用于識別抗原提呈細胞的MH-并進行細內信號傳遞。當進行異體移植時，接受者T細胞上的TCR-CD3識別并與捐獻者移植組織細胞的MHC-Ⅱ結合，通過CD3分子傳導信號到胞內，導致T細胞增殖和細胞毒T細胞的激活，最終對異體移植物發(fā)生免疫排斥反應。如果能制備出一種能阻斷上述反應過程中關鍵蛋白功能的抑制劑，就有可能避免異體移植時的排斥反應。2.OKT3的藥理作用遵循這一思路，Patrick等于1979年首次成功制備了一系列抗人T淋巴細胞的鼠源性單克隆抗體(OKT系列)，這些單克隆抗體能夠識別并綁定在人T細胞表面的某個抗原結合位點，從而阻斷T細胞功能。OKT3就是通過識別并綁定一個位于TCR-CD3復合物活性區(qū)域的亞單位，進而封閉了CD3的功能，使得T細胞的增殖和分化被阻止，并將幾乎所有的功能性T細胞短暫清除，即使后續(xù)仍有T細胞產生，外周血和組織中的T細反應，但不影響造血組織中的細胞。目前認為OKT3阻斷T細胞功能的主要作用機制是通過立體化學的阻聚作用，阻斷抗原提呈細胞抑制TCR與HC-Ⅱ銜接，刺激T細胞活化并釋放細胞因子、調理和消耗周邊T細胞，即OKT3與CD3分子結合，使細胞無法形成TCR-CD3復合物，或OKT3與CD3分子以復合物形式在細胞表面的局部聚集成帽狀，通過細胞內吞作用進入細胞內，導致T細胞無法識別同種異體抗原，進而實現對機體免疫應答的抑制。此外，OKT3可能通過細胞凋亡的方式誘導已活化的成熟T細胞死亡，但不影響處于靜止期的T細胞，此作用與T細胞表面的Fas蛋白及其配體密切相關;OKT3亦可以通過ADCC和CDC作用殺傷T細胞，阻斷補體介導的溶解和混合淋巴細胞反應的活性而抑制機體免疫功能;OKT3還可能采用包裹或免疫調整循環(huán)T細胞使其在通過肝臟網狀內皮系統時被清除，但肝衰竭引起網狀內皮細胞功能障礙時注射OKT3并未觀察到外周血中CD3細胞被迅速清除，而肝臟移植前應用OKT3卻仍能表現出免疫抑制效果，說明此途徑非OKT3免疫抑制的主要機制。3.OKT3的制備OKT3是采用雜交瘤技術制備的鼠源性單克隆抗體，其制備方法符合雜交瘤制備單克隆抗體的一般流程。首先以CD3蛋白分子為抗原、輔以弗氏佐劑對小鼠進行多次免疫,經眼底靜脈叢或尾靜脈取血測定抗體滴度后選擇高滴度的免疫動物進行加強免疫，3日后處死小鼠，無菌條件下分取脾臟，經研磨制取B淋巴細胞懸液;將小鼠骨髓瘤細胞與制取的免疫小鼠脾淋巴細胞進行體外融合后接種到細胞培養(yǎng)板,以HAT選擇性培養(yǎng)法篩選出其中符合要求的雜交瘤細胞(即脾-瘤融合細胞)，經抗體檢測后(如ELISA檢測)對鑒定為陽性的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng);連續(xù)克隆化培養(yǎng)獲得純系雜交瘤細胞后接種于小鼠腹腔內進行擴增或通過組織細胞培養(yǎng)技術大量培養(yǎng)，獲取包含OKT3的接種小鼠腹水或腹腔沖洗液、培養(yǎng)上清液，通過分離純化工藝進一步提取制備出符合質量要求的OKT3。63%85%42%21%(1)治療異體移植時的急性排斥反應:OKT3可用于治療腎移植患者中急性異體移植排斥和心臟、肝臟移植患者急性類固醇抵抗異體移植排斥，推薦劑量為靜脈單劑量注射5mg/d(1min內完成推注)，連續(xù)給藥10~14日。與其他免疫抑制劑聯合使用時，應將OKT3的使用劑量調至最低有效劑量。例如，Chkotua等將OKT3成功應用于對抗激素或抗胸腺細胞球蛋白(ATG)抗體無效的，發(fā)生嚴重排斥反應的腎移植患者。4.OKT3的臨床應用(2)治療慢性乙型肝炎:有研究者利用OKT3激活的殺傷細胞回輸治療慢性乙型肝炎取得了一定療效，且證實OKT3調節(jié)了患者的免疫功能，有利于機體清除乙肝病毒、減輕對肝細胞的破壞的現象。但也出現了應用OKT3一段時間停藥后，患者發(fā)生乙肝復發(fā)甚至出現急性重型肝炎導致死亡。 (3)治療急性病毒性心肌炎:急性病毒性心肌炎是由病毒感染引起的心肌局限性或彌漫性的急性炎癥病變，可能會引起機體嚴重的自身免疫應答反應而危及患者生命，通過給予OKT3治療可以抑制患者的自身免疫反應，進而逆轉急性心肌炎造成的心臟損害。問題評估相關對策研究總結成績與思考相關建議與總結TOPICHEADERWehavemanyPowerPointtemplatesthathasbeenspecificallydesignedtohelpanyonethatissteppingintotheworldofPowerPointfortheveryfirsttime.TOPICHEADERWehavemanyPowerPointtemplatesthathasbeenspecificallydesignedtohelpanyonethatissteppingintotheworldofPowerPointfortheveryfirsttime.TOPICHEADERWehavemanyPowerPointtemplatesthathasbeenspecificallydesignedtohelpanyonethatissteppingintotheworldofPowerPointfortheveryfirsttime.TOPICHEADERWehavemanyPowerPointtemplatesthathasbeenspecificallydesignedtohelpanyonethatissteppingintotheworldofPowerPointfortheveryfirsttime.TOPICHEADERWehavemanyPowerPointtemplatesthathasbeenspecificallydesignedtohelpanyonethatissteppingintotheworldofPowerPointfortheveryfirsttime.TOPICHEADERWehavemanyPowerPointtemplatesthathasbeenspecificallydesignedtohelpanyonethatissteppingintotheworldofPowerPointfortheveryfirsttime.此處添加標題文本WHATMAKESUSDIFFERENT?YOURTEXTHEREWehavemanyPowerPointtemplatesthathasbeenspecificallydesignedYOURTEXTHEREWehavemanyPowerPointtempla