試驗室小型豬的豬瘟疾病的診療防治

豬瘟是由豬瘟病毒(Classicalswinefevervirus)引起

的一種以高熱稽留、出血、梗死、壞死和高死亡率為主要特

征的高度接觸性傳染病。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列

為A類必須申報的重要動物傳染病之一，并作為國際貿(mào)易檢

疫的重要對象。豬瘟遍布于全世界的養(yǎng)豬國家和地區(qū)，尹有

不同程度的流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，我國的《家

畜家禽防疫條例實施細則》將CSF定為一類動物傳染病，并

從2008年起列為動物疫病強制免疫項目。

據(jù)世界糧農(nóng)組織、世界動物衛(wèi)生組織、世界衛(wèi)生組織

(FAO-OIE-WHO)出版的《動物衛(wèi)生年鑒》公布，全世界有

44個國家和地區(qū)存在豬瘟，主要分布在南美、歐洲和遠東的

一些國家和地區(qū)。截止到1976年，阿爾巴尼亞、保加利亞

等12個國家宣布消滅了豬瘟。到1992年底又有美國、日本

等9個國家宣布為無豬瘟國家，此外還有新西蘭、澳大利亞

和斯堪的納維亞半島的國家也相繼宣布消滅了豬瘟。目前該

病主要在亞洲、歐洲、非洲、美洲的國家與地區(qū)流行。在我

國，當(dāng)前各省市均有豬瘟的流行，每年因豬瘟死亡的豬約占

病死豬的1/3以上。我國每年由豬瘟導(dǎo)致的直接經(jīng)濟損失有

數(shù)十億元，造成了巨大的資源浪費。

自20世紀(jì)70年代末開始，全世界豬瘟以溫和型豬瘟為

主，呈周期性、波浪形的地區(qū)散發(fā)性流行。豬瘟病程由急性

變?yōu)槁?，臨床癥狀由典型變?yōu)榉堑湫偷臏睾托拓i瘟或亞急

性持續(xù)性感染，癥狀不明顯。

近年來在我國一些地區(qū)散發(fā)的“溫和型豬瘟”或“高熱

病”成為豬瘟發(fā)生的禍根，由于病原毒力降低，易出現(xiàn)掙續(xù)

感染、胎盤垂直感染、妊娠母豬帶毒綜合征及新生仔豬的免

疫耐受等，依靠常規(guī)方法很難確診并剔除此類病豬，給防治

工作帶來了新的困難。

病原(Classicalswinefevervirus,CSFV)屬瘟病毒屬、

黃病毒科，是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的正鏈RNA病毒。LowingsP

等于1996年首次構(gòu)建了CSFV系統(tǒng)發(fā)生樹，基于豬瘟病毒E2

基因的PCR結(jié)果分析將115株CSFV劃分成2個組群，5個亞

群。國際學(xué)術(shù)界于2000年采用最不穩(wěn)定的和主要產(chǎn)生中和

抗體的E2基因序列分析，將豬瘟病毒分為3個基因群，10

個基因亞群。他們的研究與BjorklundH等對20多個國家在

1945—1997年間分離的106株病毒研究結(jié)果相同。

ParchariyanonS等在2000年利用RFLP分析法對E2基因的

分析指出，豬瘟病毒分為3個群和7個亞群

(Parchariyanonetal.2000)o同年P(guān)atondJ在總結(jié)前人研

究的基礎(chǔ)上，利用對5'NCR的150個核甘酸、E2蛋白190個

核甘酸，以及NS5B蛋白409個核甘酸差異分析指出，世界

上流行的豬瘟病毒主要為3個群以及3?4個亞群，分別為

1.1、1.2、1.3.2.1、2.2、2.3、3.1、3.2、3.3、3.4。對

中國20世紀(jì)109個豬瘟發(fā)病地的110個臨床樣本首次研究

表明，93.6%的流行株為2.1、2.2、2.3,6.4%的流行株以及

Shimen株和兔化弱毒株C株為L1型，并未發(fā)現(xiàn)1.2型。由

于CSFV在體內(nèi)前體外穩(wěn)定遺傳變異較慢，此后的研究報道

也基本統(tǒng)一為3型10個亞型的分類方法。后續(xù)對全球各地

流行毒株的分類表明，1.1、1.2、1.3亞群主要分布在歐洲

東部、亞洲東南部以及南美洲部分地區(qū)；亞群2.1、2.2、2.3

則主要分布于歐洲和亞洲；亞群3.1、3.2、3.3、3.4則主

要分布于美洲地區(qū)。到目前為止，最新的數(shù)據(jù)表明國內(nèi)流行

株大部分為2.1、2.2和2.3亞群，其中2.1亞群為主導(dǎo)亞

群，有大約30%為L1亞群，國內(nèi)未發(fā)現(xiàn)L2亞群和3群豬

瘟病毒。

CSFV只有一個血清型，但存在不同的抗原型毒株，與牛

病毒性腹瀉豁膜病病毒(BVDV)、邊界病病毒(BDV)有共同

抗原，在血清學(xué)上有交叉反應(yīng)。隨著非典型CSF的出現(xiàn)，人

們考慮到是否存在著CSFV的其他血清型。1966年,Mengeling

從非典型CSF病例中分離出了低毒力毒株-331慢性CSF毒株。

1976年以后，美國、法國及日本的學(xué)者先后發(fā)現(xiàn)當(dāng)時使用的

弱毒疫苗有殘余毒力表現(xiàn)，他們根據(jù)血清中和試驗，結(jié)合流

行病學(xué)調(diào)查，闡明了CSFV存在著血清學(xué)變種，但均屬于同

一血清型。法國的Cathior等通過試驗證明，CSFV有兩個血

清學(xué)亞種，一個是包括許多強毒株和絕大多數(shù)用作疫苗的弱

毒株；另一個是包括發(fā)生隱性CSF的低毒力株(如美國的331

株)，由此將CSFV分成A、B兩群。他們確證了我國CSF兔

化毒弱毒疫苗完全可以抵抗這些血清學(xué)變異毒株的感染，這

兩個群的抗原特異性是一致的，并認為BVDV在種系發(fā)育角

度上可看成是CSFV衍化而來的，是一個CSFV特殊的血清學(xué)

變種。日本的上條泰雄也對CSF毒株進行了分群，他將CSF

流行毒株分成了H、B兩個群，H群相當(dāng)于A群，B群主要包

括1972—1973年以及1980年在日本分離到的慢性CSF野毒

株。這兩種分群方法所不同的是GPE-株(日本的疫苗株)的

劃分，上條泰雄將其歸屬為B群。

CSFV病毒粒子呈球形，有時呈六角形，直徑較為均一，

多在70nm左右,具有二十面體的非螺旋形核衣殼，核衣殼

的直徑約為40nm；在病毒粒子的表面有6?8nm類似穗樣的

糖蛋白纖突；病毒粒子囊膜圍繞著電子致密的等軸核心。推

測豬瘟病毒的核衣殼是在細胞中裝配，并通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或高爾

基體以出芽的方式披上包膜，發(fā)育成為成熟的病毒。

CSFV為單股正鏈RNA病毒，其基因組的長度約為12.3kb,

包括一個完整的開放閱讀框(openread-ingframe,ORF),

一個3'端非編碼區(qū)(3‘untranslatedregion,3'UTR)和一

個5'端非編碼區(qū)(5'untrans-latedregion,5'UTR)。豬瘟

病毒3'端非編碼區(qū)與真核生物相比沒有polyA,5'端非編碼

區(qū)與真核生物相比不具有帽子結(jié)構(gòu)，而是被內(nèi)核糖體進入位

點(Internalribosomeentrysite,IRES)取代。豬瘟病毒

的開放閱讀框可以編碼一個大的多聚蛋白，該多聚蛋白可在

病毒自身編碼的蛋白酶和宿主細胞編碼的信號肽酶的水解、

修飾作用下形成12個成熟蛋白，從N端到C端依次為：NR、

C、Em、El、E2、P7、NS2、NS3、

NS4A、NS4B、NS5A和NS5B。這十二個蛋白可以分為結(jié)

構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白兩類，其中結(jié)構(gòu)蛋白包括C.Em.El.

E2,非結(jié)構(gòu)蛋白包括Nm、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A

和NS5Bo

上述基因有些直接與CSFV的復(fù)制有關(guān)，是病毒復(fù)制所

必需的，有些基因是形成完整的感染性病毒顆粒必需的。已

經(jīng)證實，Nm蛋白是一種具有蛋白水解酶活性的半胱氨酸自消

化蛋白酶，也是CSFV的一個毒力蛋白，雖然不直接參與病

毒的復(fù)制，但參與宿主免疫應(yīng)答，CSFV很有可能通過N…”

基因影響宿主某些基因的表達來實現(xiàn)免疫逃避。C蛋白是豬

瘟病毒的衣殼蛋白，是豬瘟病毒基因組編碼的第一個結(jié)構(gòu)蛋

白。Em是CSFV的一個囊膜糖蛋白，其RNase活性是CSFV毒

力的決定因子之一。E1是CSFV的囊膜糖蛋白，由于嵌坦在

病毒囊膜內(nèi)，所以不能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體；CSFV的E1

蛋白內(nèi)含有3個可能的N-連接糖基化位點，這三個糖基化位

點在CSFV里高度保守；有研究表明，El蛋白的糖基化與CSFV

的毒力有關(guān)，對該區(qū)域進行突變可以研制出活毒弱疫苗。E2

蛋白是CSFV三個囊膜糖蛋白之一，常以E2E2同源二聚體或

E2E1異源二聚體的形式存在于病毒粒子及病毒感染的細胞

表面，介導(dǎo)病毒的感染；E2蛋白是CSFV三個囊膜糖蛋白中

最易發(fā)生變異的蛋白，也是CSFV的主要保護性抗原，能誘

導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生及抵抗致死性強毒株的攻擊。Risatti等

應(yīng)用定點突變技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，Asn805的糖基化對CSFV毒力

影響最大，它的突變可導(dǎo)致病毒喪失毒力，在接種突變株后

的第3和28d可以抵抗致死性BICv毒株的攻擊；應(yīng)用漸進

連續(xù)突變法將Brescia強毒株(BICv)E2蛋白中TAVSPTTLR

序列替換為BVDVNADL21毒株E2蛋白的相應(yīng)序列TSFNMDTLA

進行一系列試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)突變體T4v(TSFNMDTLR)和T5V

(TSFNMDTLA)在體外培養(yǎng)比親本毒株的產(chǎn)量降低了10倍,

蝕斑大小也比親本毒株變??；應(yīng)用反向遺傳技術(shù)用疫苗株CS

毒株E2基因替換Brescia強毒株的E2基因，獲得的重組病

毒株Brescia-(E2-CS)可以顯著致弱高致病力的Brescia

強毒株；體內(nèi)感染顯示，感染豬僅表現(xiàn)出一過性的病毒血癥,

病毒在扁桃體內(nèi)的復(fù)制能力降低，病毒的擴散受到限制，排

毒減少。對比CS株和Brescia株的E2基因的氨基酸序列后

發(fā)現(xiàn)，在第882?1064位氨基酸上有13個氨基酸的變異，

這些氨基酸對病毒毒力減弱起關(guān)鍵作用，單個或多個氨基酸

的替換對病毒毒力沒有影響，只有替換全部氨基酸才會導(dǎo)致

病毒毒力減弱，由此可見，E2蛋白對CSFV毒力影響很大。

P7是介于結(jié)構(gòu)蛋白E2和非結(jié)構(gòu)蛋白NS2之間的一個蛋白，

在瘟病毒屬中具有高度的保守性，推測其可能參與E2蛋白

的成熟和病毒粒子的形成。

CSFV病毒在CsCl中浮力密度為1.12-1.175g/mL,沉

淀系數(shù)S20為140?150,在蔗糖密度梯度中浮力密度為

1.15~1.16g/cm2,等電點為4.8。在試驗條件下CSFV很穩(wěn)

定，但溫度對培養(yǎng)上清中病毒的活性有很大影響。病毒粒子

在5CTC可存活3d,37T可存活7d,在-7(TC可存活約4年而

不明顯喪失感染性，在凍肉中至少可存活2個月，6(TC以上

持續(xù)60min才能保證完全破壞血清、血液和尿液中的病毒。

病毒在pH值5?10時穩(wěn)定，在pH值3時迅速失活，脫纖血

中的病毒在pH值5-5.5時最穩(wěn)定。在相同溫度和pH值下，

不同毒株的穩(wěn)定性不同，但是病毒的滅活條件主要取決于介

質(zhì)。細胞培養(yǎng)物中的CSFV在60℃10min就喪失了感染性，

但在去除纖維蛋白的血液中68℃30min以上仍能存活。因此,

很難確定不同環(huán)境下CSFV的存活條件。CSFV是典型的有囊

膜病毒，乙酷、氯仿、去氧膽酸鹽、諾乃洗滌劑P40和電角

素等可使其迅速失去感染性，2%NaOH仍然是豬場常用的有效

消毒劑。病毒對二甲亞碉穩(wěn)定，故將其用于CSFV的凍存保

存。

CSFV可在豬的骨髓、睪丸、肺、脾和腎的細胞培養(yǎng)物及

白細胞中繁殖，最常用的是PK-15、SK6和CPK細胞系，其

中最易感的是PK-15、PK-2a和ST等幾株豬腎和豬睪丸細胞

系。CSFV接種在豬睪丸細胞上不產(chǎn)生細胞病變，但在接種

CSFV3d后，再接種新城疫病毒（NDV）,即產(chǎn)生明顯的細胞病

變，而且提高了\DV效價的滴度。因此常根據(jù)細胞病變的有

無，間接測定CSFV。這種方法叫END試驗（雞新城疫病毒強

化試驗），

流行病學(xué)家豬和野豬是CSFV的唯一宿主，其他動物均

對CSFV有抵抗力，而豬則不分性別、年齡、品系均易感，

且一年四季均可發(fā)生。病豬是主要的傳染源，豬場一旦遭受

感染，除了出現(xiàn)部分病豬外，還呈現(xiàn)隱性或潛伏感染，不易

察覺，代代相傳，長期流行，一時難以撲滅。

總的看來，我國豬瘟已被基本控制，較大面積的發(fā)生減

少了，沒有大規(guī)模暴發(fā)，呈散發(fā)流行，規(guī)模較小，病程由急

性變?yōu)槁赃^程，病情來勢較為緩和。在臨床上，典型豬瘟

少了，非典型的溫和性豬瘟多了。帶毒母豬普遍存在隱性或

潛伏感染，感染母豬通常不表現(xiàn)臨床癥狀和肉眼可見的病理

變化，但卻不斷她向外排毒或通過胎盤將病毒傳染給胎兒,

這些感染母豬往往被忽視而成為最主要的傳染源。在發(fā)病日

齡上，大豬、中豬發(fā)病少了，但胎豬、仔豬和小豬發(fā)生的多

了，多為2月齡以下的豬為主，發(fā)病死亡最多的是2?3周

齡乳豬和斷奶前后的仔豬為主。發(fā)病季節(jié)不明顯，豬瘟一年

四季均可發(fā)生，以往春節(jié)前為發(fā)病高峰，目前各地養(yǎng)豬業(yè)發(fā)

展很快，周轉(zhuǎn)快，故豬瘟的發(fā)生季節(jié)性很不明顯。

當(dāng)前認為，CSFV主要傳播方式是健康豬與感染豬的直接

接觸，但CSF發(fā)病無規(guī)律，病豬時多時少，似乎接觸傳播可

能性不大，而頻繁注射和針頭消毒不嚴(yán)可能是重要的傳播途

徑。

豬瘟病毒感染豬初期，病毒在豬扁桃體進行復(fù)制，但隨

后病毒會擴散到附近的淋巴結(jié)，并經(jīng)由血液運輸?shù)竭_機體多

個組織器官，比如腎、胰腺、骨髓、血液淋巴結(jié)等，此時病

毒通過鼻液、眼睛分泌物、唾液、尿液和排泄物排出體外,

到此歷經(jīng)6?9上早期研究表明，體外排除的病毒對溫度敏

感，但是依然可以在5(TC存活3d,在37七存活7?15d。所

以病豬的鼻液、眼睛分泌物、唾液以及排泄物等均具有感染

力。而天然的感染途徑為口鼻，直接接觸病豬的分泌物或者

直接與感染豬的接觸均可導(dǎo)致健康豬感染豬瘟病毒。此外,

豬瘟病毒也可以垂直傳播，即通過母豬子宮內(nèi)感染傳播給子

代小豬，有報道稱，人工授精也會使得豬瘟病毒傳染給母豬

并傳給子代小豬,

豬瘟是我國四大動物疫病之一，至今已流行90多年。

近年來，中國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展迅速，在世界養(yǎng)豬業(yè)中占據(jù)重要地

位。多年來我國一直將豬瘟的撲滅計劃列為當(dāng)前豬病防控重

點。我國利用兔化弱毒豬瘟疫苗，全面實施預(yù)防接種，有效

地控制了豬瘟的流行。雖在疫苗大規(guī)模免疫下，該病可被有

效控制，但許多臨床輕微發(fā)病豬不易診斷出來，使慢性豬瘟

仍長期持續(xù)存在于豬場中。

近年來，我國豬瘟的流行和發(fā)病特點已發(fā)生了很大的變

化，其流行形式已從頻發(fā)的大流行轉(zhuǎn)變?yōu)橹芷谛?、波浪性?/p>

地區(qū)性散發(fā)性流行。通常3?4周一個周期，疫點顯著減少，

多局限于所謂“豬瘟不穩(wěn)定地區(qū)”的散發(fā)性流行。呂宗吉等

對全國16個省、市、自治區(qū)48個發(fā)病豬場(疫點)的豬瘟

流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國豬瘟的流行在較大范圍內(nèi)以臨床表

現(xiàn)不典型的豬瘟為主，發(fā)病對象多見于3月齡以下的仔豬,

發(fā)病率和死亡率普遍較高，流行規(guī)模以局部流行為主，同一

豬場中育肥豬與種豬的發(fā)病率很低；母豬多呈隱性感染，部

分感染母豬表現(xiàn)出繁殖障礙。陳麗穎等對河南省部分豬場的

豬瘟流行病學(xué)調(diào)查表明，引起母豬繁殖障礙和初生仔豬的豬

瘟呈上升趨勢，發(fā)病率和死亡率(新生仔)均很高，有的豬

場發(fā)生母豬繁殖障礙占妊娠豬的78.2%；有些母豬感染CSFV

后只表現(xiàn)繁殖障礙并無其他明顯臨床癥狀；仔豬接種豬瘟疫

苗后不產(chǎn)生抗體，并發(fā)生非典型豬瘟。2006年陶海靜等對河

南省各地市養(yǎng)殖戶送檢的301份疑似豬瘟病料進行CSFV檢

測,CSFV檢出率達到26.25%,其中以保育豬CSFV陽性檢出

率最高(36.59%,30/82),依次為育肥豬(27.14%,19/70)、

哺乳仔豬(23.68%,18/76)和種母豬(16.44%,12/73)。

吳健敏等于1986—2000年對廣西南寧、桂林、柳州等8個

地(市)40個不同規(guī)模豬場的豬瘟流行情況進行調(diào)查，結(jié)果

發(fā)現(xiàn)在13個豬場中，除1個豬場的豬購前免疫情況不清楚

外，有9個豬場的CSF均發(fā)生于免疫豬群；此外，以母豬繁

殖障礙和新生仔豬死亡為主要發(fā)病特征的非典型豬瘟病例

占69.2%(9/13),其中母豬繁殖障礙占46.2%(6/13),新

生仔豬死亡占46.2%(6/13),典型豬瘟發(fā)病僅占23.1%(3/13),

并從1頭健康豬的扁桃體中檢出CSFV核酸。舒相華等對云

南16個規(guī)模養(yǎng)豬場中不同區(qū)域、季節(jié)和不同生長階段豬群

的552份樣品進行豬瘟病毒的ELISA檢測，結(jié)果表明，受檢

地區(qū)的抗凝血樣品中均存在豬瘟抗原陽性樣品，檢出率為

9.4%(52/552),其中仔豬陽性率為13.9%(20/144),母豬

的陽性率為10.8%(15/139),公豬陽性率為6.6%(4/60),

育肥豬陽性率為6.2%(13/209)o蔣毅立等對廣西各地收集

的健康種母豬白細胞、健康豬扁桃體、流產(chǎn)胎兒和新生仔豬

樣本進行CSFV的RT-PCR檢測，CSFV陽性率分別是1.16%

(2/172)、0.83%(1/120).7.4%(12/162)和9.1%(3/33)。

以上結(jié)果說明目前豬瘟的臨床癥狀已從典型癥狀轉(zhuǎn)變?yōu)榘Y

狀較輕或不明顯，出現(xiàn)母豬繁殖障礙和新生仔豬先天性感染。

發(fā)病對象不再是以仔豬為主，而是仔豬、保育豬、育肥豬、

種豬等各年齡階段的豬都可感染發(fā)病。豬瘟流行特點的改變

為豬瘟及整個養(yǎng)堵業(yè)的疫病防控體系帶來了重重困難。

2008年，昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物中心5頭淘汰實驗用小型

豬喂了幾次樹艇?吃落的飼料與未經(jīng)任何處理的糞便混合料

后，突然高燒41℃~42℃,拒食，眼潮紅、有膿性分泌物,

糞便堅硬，注射抗生素后沒有好轉(zhuǎn)，5?lid后相繼死亡。其

他豬群也表現(xiàn)同樣的癥狀，持續(xù)一個月，治療無效，死亡率

為91.3吼2011年，張嘉寧等采用ELISA或凝集試驗對西藏

小型豬10頭已注射豬瘟疫苗的原代（Fo代）母豬和40頭

20日齡乳豬、50頭第一代（FI代）3?5月齡豬進行了10

種豬?。ㄘi瘟、偽狂犬病、籃耳病、豬流感、圓環(huán)病毒感染、

細小病毒病、乙型腦炎、弓形體病、衣原體病和布氏桿菌病）

的血清學(xué)調(diào)查。結(jié)果，豬瘟病毒抗體陽性率分別是母豬為

80.0%,20日齡乳豬為45.0%、3?5月齡豬為4.0%。上達結(jié)

果證實，實驗用小型豬也可自然感染CSFV。

致病機理CSFV主要通過口腔或咽部吞入污染物而進入

豬體，首先侵入扁桃體的上皮細胞，隨后侵入其外周淋巴結(jié)

并在其內(nèi)復(fù)制，擴散至淋巴結(jié)的內(nèi)皮和上皮細胞，進入血液

循環(huán)系統(tǒng)，在脾、骨髓等淋巴組織中大量增殖，導(dǎo)致豬免疫

系統(tǒng)的損傷，并逐步侵入實質(zhì)器官、呼吸系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系

統(tǒng)。CS-FV感染急性期的主要特征是免疫抑制。CSFV囊膜蛋

白Em能夠抑制淋巴細胞的蛋白合成，從而導(dǎo)致淋巴細胞凋

亡，這可能是免疫系統(tǒng)受到損傷的主要原因，并由此造成循

環(huán)系統(tǒng)中B淋巴細胞的缺失。胸腺中單核巨噬細胞分泌的活

性化學(xué)介質(zhì)，對胸腺細胞的凋亡產(chǎn)生很重要的作用，由此可

能導(dǎo)致病豬胸腺萎縮。感染豬瘟的另一個特征性標(biāo)志是外周

血單核細胞的減少，主要是粒細胞的減少，而骨髓造血細胞

的死亡可能是導(dǎo)致粒細胞減少的原因之一。

CSFV可逃避宿主天然免疫的清除，導(dǎo)致持續(xù)性感染，并

延遲獲得性免疫的產(chǎn)生。CSFV能夠感染骨髓樹突狀細胞并在

其中高效復(fù)制而不誘導(dǎo)樹突細胞產(chǎn)生病變，使樹突細胞外于

非激活狀態(tài)，同時顯著提高Y-IFN和IL-10的水平，從而抑

制宿主的固有免疫和特異性免疫。有報道證明CSFVNpro基

因也可通過各類細胞因子的產(chǎn)生抑制宿主細胞免疫。2009年

Luo等研究發(fā)現(xiàn)CSFVErns也可通過抑制B-IFN的產(chǎn)生來逃

避機體的先天免疫。此外，CSFV還可以推遲中和抗體產(chǎn)生的

時間，使感染后3周左右才產(chǎn)生中和抗體。

CSFV復(fù)制過程中產(chǎn)生的前列腺素E2和IL-1,會使機體

發(fā)熱并產(chǎn)生出血現(xiàn)象。豬瘟感染很重要的病理特征是內(nèi)臟器

官的彌漫性出血，大腿內(nèi)側(cè)也有廣泛的出血斑或出血點。當(dāng)

前，引起出血的機制還不是很清楚，至今為止的傾向性意見

認為CSFV的感染可能使血管內(nèi)皮細胞通透性、凝血機制發(fā)

生改變，這些改變可能造成出血、血栓的形成和血液凝固。

Campos發(fā)現(xiàn)用豬瘟感染主動脈血管內(nèi)皮細胞，會引起促凝劑

活性下降、血栓形成時間延長。Bensaude研究CSFV對血管

內(nèi)皮細胞的作用，發(fā)現(xiàn)凝血酶原轉(zhuǎn)錄水平上升，導(dǎo)致內(nèi)皮組

織發(fā)生促凝血反應(yīng)，破壞了凝血平衡，導(dǎo)致血液凝固加速和

末端血栓的形成。

臨床癥狀豬瘟的自然感染期一般為5?7d,短則2d,最

長達21do人工感染豬瘟強毒株的豬一般在接種后36?48h

后即可發(fā)病。豬瘟從臨床癥狀上又可分為急性、亞急性、慢

性3種類型。急性型的豬在發(fā)病時體溫可以升高至40.5℃~

42℃,呈稽留熱現(xiàn)象，并且可持續(xù)7?10d,病豬出現(xiàn)眼結(jié)膜

炎，兩眼紅腫，有膿性分泌物，表情呆滯、弓背怕冷，皮膚

發(fā)紅，發(fā)展到后期時，腹下、耳根、四肢末端及會陰部呈現(xiàn)

紫締色或出血。病豬一般先便秘后腹瀉，公豬包皮內(nèi)有積尿,

少數(shù)出現(xiàn)驚厥，病程在幾小時至幾天不等。慢性型豬瘟的病

程可分為3期，早期以精神委頓、體溫升高為主要特征，當(dāng)

體溫下降至正常或稍高于正常時，則進入第二期，后期體溫

再次升高，精神時好時壞，便秘和腹瀉交替出現(xiàn)。這種豬一

般生長緩慢，很難完全康復(fù)，發(fā)展成為僵豬的可能性很大。

近年來，由于弱毒疫苗的普遍使用，CSFV的生態(tài)環(huán)境和

病毒群落發(fā)生了變化，我國CSF在發(fā)病特點上出現(xiàn)了所謂非

典型豬瘟、溫和型豬瘟和無名高熱。非典型豬瘟的表現(xiàn)形式

主要有兩種，一種是繁殖障礙型豬瘟，主要發(fā)生于生產(chǎn)母豬,

其本身呈階段性感染，并無明顯的臨床癥狀，但能通過垂直

傳播危害下一代，導(dǎo)致胚胎死亡和仔豬的成活率下降。病毒

能通過胎盤屏障傳給不同時期的胚胎，產(chǎn)出木乃伊胎、死胎

和弱仔。有的仔豬出生后就表現(xiàn)精神沉郁、震顫、間歇性腹

瀉，有的發(fā)生嘔吐和運動失調(diào)，皮膚出現(xiàn)出血斑塊，皮下水

腫等癥狀，病仔豬常在2?3d死亡，致死率很高。這種病例

一般不發(fā)生水平傳播，發(fā)病率的高低，與帶毒母豬的多少有

關(guān)。隱性感染母豬所產(chǎn)仔豬，出生后一段時期內(nèi)表現(xiàn)健康,

在哺乳期內(nèi)生長良好，一旦斷奶后，仔豬即連續(xù)出現(xiàn)病狀。

表現(xiàn)體溫升高達4UC左右，厭食。特征性的癥狀是頑固性腹

瀉，糞便由褐色變成黃色。后期由于肛門失禁，糞便沿著后

腿流下，惡臭。病豬迅速消瘦，腹下部及耳根皮膚呈紫色瘀

血。治療無效，病程1周左右，以死亡而告終。非典型豬瘟

的另一種表現(xiàn)形式是慢性（溫和型）豬瘟，見于豬瘟流行的

老疫區(qū)或流行后期的幸存病豬，也可能發(fā)生在豬瘟免疫接種

制度不健全的農(nóng)對散養(yǎng)豬。該病主要經(jīng)水平傳播，各種日齡

的豬都可感染，但以青年豬和肥育豬較為多見。病程長達1?

2個月，病情發(fā)展緩慢，呈散發(fā)流行，在一個地區(qū)或豬場內(nèi)

不易根除。病豬的體溫稽留在40。。左右，癥狀時輕時重，食

欲時好時壞，糞便時干時稀。病程較長者，皮膚出現(xiàn)瘀血斑

和壞死塊，以腹下部為多見。有時也出現(xiàn)紫耳朵、干尾巴、

紫斑蹄。據(jù)報道，這種病豬的皮膚一旦破損或扎針后，局部

流血不止，即血液凝固不良，也是本病的特征之一。病豬日

益消瘦，日齡越小，病死率越高。部分育肥豬經(jīng)1?2個月

后可能耐過，但失去經(jīng)濟價值。除此以外，CSF常常和其他

傳染病混合感染，造成診斷困難或誤診。豬瘟和豬副嗜血桿

菌病混合感染時，豬體側(cè)、下肢出現(xiàn)零散的綠豆大的瘀血斑;

與豬藍耳病混合感染時，豬眼瞼潮紅或青紫；與豬鏈球雷病

混合感染時，豬頸部至薦部毛根充血。另外，豬瘟還容易和

仔豬副傷寒、圓環(huán)病毒病等發(fā)生混合感染。

病理變化CSF剖檢可見的病理變化會隨著感染毒株的毒

力和豬體自身對病毒抵抗力的不同而變化。最急性的豬瘟一

般只能在漿膜、黏膜和內(nèi)臟有少量出血，在典型病變形成之

前就死亡。急性而亞急性豬瘟剖檢時可發(fā)現(xiàn)淋巴系統(tǒng)、泌尿

系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化道系統(tǒng)及皮膚有出血現(xiàn)象。具體表現(xiàn)

在喉頭出血，脾臟邊緣呈鋸齒狀，腎表面有出血點，腸系膜

淋巴腫脹，呈磚紅色、腹股溝淋巴結(jié)出血壞死，腫大，呈現(xiàn)

大理石樣變，有些病豬可見膀胱內(nèi)壁有出血斑。各個臟器內(nèi)

部的黏膜或表面的漿膜會有卡他性炎癥、纖維素或者出血性

炎癥發(fā)生。慢性豬瘟無明顯的全身性出血癥狀，但會在回腸

末端、盲腸和結(jié)腸發(fā)生偽膜性壞死，出現(xiàn)紐扣狀潰瘍。

非典型豬瘟的剖檢病變與典型豬瘟有相似之處，但病變

程度較輕。剖檢的主要病變是胃腸道有不同程度的充血、出

血，大腸段有潰瘍，全身淋巴結(jié)水腫、充血和出血，僅有部

分病例（約占1/10）的腎、膀胱黏膜呈現(xiàn)小點出血。慢性豬

瘟的主要病變與典型豬瘟接近，但較為輕微，如淋巴結(jié)輕度

出血或只有水腫現(xiàn)象。腎、喉及膀胱黏膜有少量出血點，脾

稍腫、邊緣有1?2處小梗死灶?；孛ぐ昴c段可出現(xiàn)潰瘍、

壞死，但難得見到紐扣狀潰瘍的病變。

診斷1.病毒分離鑒定：病毒分離是檢測豬瘟病毒的金標(biāo)

準(zhǔn)，是國際標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法。具體操作步驟是：選擇疑似豬

瘟感染的豬，取其脾臟、扁桃體等含毒量較高的組織，接種

豬瘟敏感的細胞系，一般是豬腎細胞，由于個別CSFV毒株

會產(chǎn)生細胞病變，而多數(shù)CSFV一般不會致細胞病變，所以

接種之前應(yīng)首先固定細胞，接種后通過間接免疫熒光或者直

接免疫熒光的方法檢驗病毒是否產(chǎn)生了復(fù)制。最初，間接免

疫熒光檢測試驗常采用豬瘟的多抗來進行確診，隨著單克隆

抗體技術(shù)的發(fā)展，針對豬瘟各蛋白的單抗越來越多，但一般

都選擇針對E2蛋白的單抗進行診斷。由于病毒分離時間長，

操作麻煩且易受實驗者主觀意識的影響，因此不利于豬瘟的

快速檢測，但在豬瘟流行時期該方法依舊是確診豬瘟的必不

可少的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

2.血清學(xué)診斷：（1）酶聯(lián)免疫吸附試驗：酶聯(lián)免疫吸附

試驗是現(xiàn)在使用最廣的檢測手段，國內(nèi)有許多學(xué)者通過豬瘟

病毒E2蛋白的表達構(gòu)建出各種檢測CSFV抗體的ELISA方法,

大大推動了該方法的發(fā)展，如孫元等用桿狀病毒表達的E2

蛋白、尹雙輝等于2009年誘導(dǎo)出的E2基因的可溶性蛋白,

均能建立起很好的ELISA檢測方法，且與試劑盒相比均具有

很好的敏感性。但無論通過何種表達方法建立的ELISA方法,

均不能特異的區(qū)別疫苗免疫和野毒感染。由于我國通常采用

疫苗免疫，因此不適于檢測少量樣品，并會大大降低該方法

的準(zhǔn)確率。ELISA方法操作簡便，所需時間最短，常用于規(guī)

?；i場的檢測，在疾病預(yù)防和控制、評價疫苗的免疫效果

中發(fā)揮著重要作用。

(2)瓊脂糖擴散試驗：瓊脂糖擴散試驗的敏感性很低，

只能大概測定被檢樣品的抗體或抗原是否存在，一般不用于

診斷。

(3)血清中和試驗：此法可用來檢測血清中的抗體，

但由于豬瘟兔化弱毒疫苗的大量使用，豬體內(nèi)的抗體水平一

般偏高，常出現(xiàn)假陽性的結(jié)果，且由于豬瘟與牛病毒腹瀉病

在血清學(xué)的檢測中易產(chǎn)生交叉反應(yīng)，所以做中和試驗進行判

斷時易產(chǎn)生誤診的結(jié)果。

(4)間接血凝試驗：間接血凝試驗操作簡便、快捷，

能直接測出抗體效價，也能用來檢測抗原的存在，但敏感性

較低。

(5)熒光抗體試驗：此法常用來檢測冰凍組織切片中

的抗原，許多國家已經(jīng)將這種方法作為消滅豬瘟的法定診斷

方法，可直接檢出脾臟、扁桃體和腎臟冰凍組織切片中的抗

原，且結(jié)果可靠。

(6)過氧化物酶聯(lián)中和試驗：此法是將病毒液與待檢

血清混合作用后接入細胞，待細胞長成單層后，固定，加入

豬抗CSFV的血清，作用一段時間后，加入辣根標(biāo)記的二抗，

加入底物顯色，肉眼觀察顯色結(jié)果，該方法是國際貿(mào)易指定

的檢測方法之一。

3.分子生物學(xué)診斷方法：(1)RT-PCR方法：RT-PCR方

法是發(fā)展較早的一種診斷病毒病的技術(shù)，主要過程是從組合

樣品或各種體液中提取病毒RNA后，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄得到其cDNA,

然后以cDNA為模板進行PCR的一種檢測方法。隨著對豬瘟

分子生物學(xué)研究的深入，尤其是豬瘟個別毒株的全序列測定,

該方法已經(jīng)成為診斷豬瘟病毒的常用實驗室方法。由于E2

蛋白基因在豬瘟病毒的毒株中相對保守，因此成為該方法中

常用的擴增基因片段。此外，5'端非編碼區(qū)的108bp片段、

NSSB區(qū)的174bp的片段也是鑒別豬瘟常用的目的基因。與病

毒分離等方法相比，RT-PCR方法的優(yōu)點是診斷快速，在Id

內(nèi)即可對樣品做出鑒別診斷。而且，針對特異的PCR上下游

引物，可用來和牛病毒性腹瀉等癥狀相似的疾病做出診斷鑒

別。

再者，RT-PCR敏感度高，操作簡單，重復(fù)性好。

(2)巢式RT-PCR方法(RT-nPCR)：由于RT-PCR最初

很難區(qū)分免疫豬群和野毒感染的豬群，因此很多學(xué)者在

RT-PCR的基礎(chǔ)上建立起RT-nPCR,該方法較RT-PCR來說檢

測豬瘟更敏感。李艷、秦玉明等分別建立了巢式PCR和RT-PCR

結(jié)合酶切實驗用于區(qū)分疫苗毒和野毒感染。Paton等在比較

了RT-PCR和RT-nPCR方法的特異性和敏感性后認為，巢式

RT-PCR比RT-PCR方法的敏感性高出10~100倍。

（3）熒光定量PCR方法：熒光定量PCR技術(shù)也早已用

于豬瘟的診斷中，其原理是除了常規(guī)的上下游引物外，還設(shè)

定一個TaqMan的熒光探針，該探針的5'端附有發(fā)光基團，

3'端基部含有一個淬滅基團，在探針與cDNA結(jié)合時是不產(chǎn)

生發(fā)光信號，當(dāng)引物由5'端向