北京pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的基本原理是（）A.基因重組B.核酸分子雜交C.體外DNA復(fù)制D.基因轉(zhuǎn)錄答案：C2.以下哪種酶是PCR反應(yīng)中所必需的（）A.逆轉(zhuǎn)錄酶B.RNA聚合酶C.TaqDNA聚合酶D.限制性內(nèi)切酶答案：C3.PCR反應(yīng)體系中，引物的作用是（）A.提供模板B.催化反應(yīng)C.引導(dǎo)DNA合成的起始D.終止反應(yīng)答案：C4.在PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為（）A.90-95℃B.72℃C.55-60℃D.37℃答案：A5.PCR產(chǎn)物的特異性取決于（）A.模板的純度B.引物的特異性C.Taq酶的活性D.反應(yīng)體系的離子濃度答案：B6.以下哪種不是PCR的應(yīng)用領(lǐng)域（）A.基因診斷B.基因克隆C.蛋白質(zhì)合成D.法醫(yī)鑒定答案：C7.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，防止污染的關(guān)鍵措施是（）A.戴手套B.嚴(yán)格分區(qū)操作C.頻繁更換試劑D.降低反應(yīng)溫度答案：B8.如果PCR沒有得到預(yù)期的產(chǎn)物，可能的原因不包括（）A.引物設(shè)計(jì)錯(cuò)誤B.模板量過少C.退火溫度過高D.增加循環(huán)次數(shù)答案：D9.在熒光定量PCR中，常用的熒光染料是（）A.溴化乙錠B.SYBRGreenC.考馬斯亮藍(lán)D.結(jié)晶紫答案：B10.PCR反應(yīng)中，dNTP的作用是（）A.構(gòu)建引物B.提供能量C.合成DNA的原料D.穩(wěn)定反應(yīng)體系答案：C二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的基本要素包括（）A.模板B.引物C.Taq酶D.dNTPE.緩沖液答案：ABCDE2.以下關(guān)于引物設(shè)計(jì)的原則正確的是（）A.長(zhǎng)度一般為15-30bpB.G+C含量在40%-60%C.避免引物內(nèi)部形成二級(jí)結(jié)構(gòu)D.引物間不能互補(bǔ)E.與模板完全匹配答案：ABCDE3.PCR污染的來源主要有（）A.標(biāo)本間交叉污染B.PCR產(chǎn)物污染C.試劑污染D.實(shí)驗(yàn)室氣溶膠污染E.操作人員污染答案：ABCDE4.熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)包括（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.能定量分析D.操作簡(jiǎn)單E.重復(fù)性好答案：ABCDE5.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，以下哪些操作可以提高反應(yīng)的特異性（）A.優(yōu)化引物設(shè)計(jì)B.適當(dāng)提高退火溫度C.減少模板量D.增加Taq酶量E.降低鎂離子濃度答案：AB6.PCR技術(shù)可用于檢測(cè)（）A.病毒感染B.細(xì)菌感染C.基因變異D.腫瘤相關(guān)基因E.遺傳性疾病相關(guān)基因答案：ABCDE7.以下關(guān)于Taq酶的特點(diǎn)正確的是（）A.熱穩(wěn)定性高B.催化活性依賴鎂離子C.缺乏3'-5'外切酶活性D.可以進(jìn)行長(zhǎng)片段DNA的合成E.容易受到抑制答案：ABC8.PCR反應(yīng)中，影響擴(kuò)增效率的因素有（）A.引物濃度B.模板濃度C.Taq酶濃度D.退火溫度E.循環(huán)次數(shù)答案：ABCDE9.以下屬于PCR衍生技術(shù)的是（）A.巢式PCRB.反向PCRC.多重PCRD.定量PCRE.差異顯示PCR答案：ABCDE10.為了保證PCR結(jié)果的準(zhǔn)確性，在實(shí)驗(yàn)過程中需要注意（）A.樣本的采集和保存B.試劑的質(zhì)量C.儀器的校準(zhǔn)D.操作規(guī)范E.數(shù)據(jù)分析合理答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR可以在體內(nèi)進(jìn)行。（）答案：錯(cuò)誤2.引物的濃度越高，PCR反應(yīng)效果越好。（）答案：錯(cuò)誤3.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤4.在PCR反應(yīng)中，退火溫度越低越好。（）答案：錯(cuò)誤5.熒光定量PCR只能檢測(cè)DNA。（）答案：錯(cuò)誤6.PCR反應(yīng)中，模板可以是RNA。（）答案：正確7.只要有模板，PCR就一定能得到產(chǎn)物。（）答案：錯(cuò)誤8.防止PCR污染的唯一措施就是使用一次性用品。（）答案：錯(cuò)誤9.巢式PCR可以提高檢測(cè)的靈敏度。（）答案：正確10.PCR產(chǎn)物的大小與引物的長(zhǎng)度有關(guān)。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR的基本步驟。答案：PCR的基本步驟包括變性、退火和延伸。變性是將模板DNA加熱至90-95℃，使雙鏈解開；退火是將溫度降至55-60℃，引物與模板互補(bǔ)序列結(jié)合；延伸是在72℃下，Taq酶以dNTP為原料，從引物開始合成新的DNA鏈。2.說明引物在PCR中的重要性。答案：引物在PCR中非常重要。它決定了PCR產(chǎn)物的特異性，引導(dǎo)DNA合成的起始，其長(zhǎng)度、G+C含量、是否形成二級(jí)結(jié)構(gòu)、引物間是否互補(bǔ)等都會(huì)影響PCR反應(yīng)的特異性和效率。3.如何減少PCR反應(yīng)中的污染？答案：減少PCR反應(yīng)污染可從多方面著手。嚴(yán)格分區(qū)操作，將試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本處理、擴(kuò)增等區(qū)域分開；實(shí)驗(yàn)用品盡量一次性使用；規(guī)范操作流程，如避免氣溶膠產(chǎn)生；定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒等。4.簡(jiǎn)述熒光定量PCR的原理。答案：熒光定量PCR原理是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR反應(yīng)進(jìn)行，產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)強(qiáng)度也相應(yīng)增加，通過檢測(cè)熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR進(jìn)程，實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量分析。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在新型冠狀病毒檢測(cè)中的應(yīng)用。答案：PCR技術(shù)在新冠檢測(cè)中起關(guān)鍵作用。可特異性擴(kuò)增新冠病毒核酸片段，通過檢測(cè)是否有擴(kuò)增產(chǎn)物判斷是否感染。其靈敏度較高，能在感染早期檢測(cè)到病毒。但也存在假陰性等問題，需要規(guī)范采樣、運(yùn)輸和檢測(cè)流程來提高準(zhǔn)確性。2.如何優(yōu)化PCR反應(yīng)條件以提高產(chǎn)物的特異性？答案：優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，保證引物特異性和合適長(zhǎng)度等；適當(dāng)提高退火溫度，減少非特異性結(jié)合；合理控制模板、Taq酶、dNTP濃度；優(yōu)化鎂離子等反應(yīng)體系離子濃度；選擇合適的循環(huán)次數(shù)等。3.闡述PCR產(chǎn)物分析的常用方法及其特點(diǎn)。答案：常用瓊脂糖凝膠電泳，操作簡(jiǎn)單、成本低，可直觀判斷產(chǎn)物大小。還有熒光定量