pcr上崗證歷年考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的三個步驟順序為（）A.延伸、退火、變性B.退火、變性、延伸C.變性、退火、延伸D.變性、延伸、退火答案：C2.以下哪種酶是PCR反應(yīng)中常用的DNA聚合酶（）A.限制性內(nèi)切酶B.RNA聚合酶C.Taq酶D.連接酶答案：C3.PCR反應(yīng)體系中，引物的作用是（）A.提供模板B.提供能量C.引導(dǎo)DNA合成的起始D.催化反應(yīng)答案：C4.在PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為（）A.50-55℃B.72℃C.94-95℃D.37℃答案：C5.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)的基本成分（）A.dNTPB.模板DNAC.引物D.蛋白酶答案：D6.PCR擴增的產(chǎn)物是（）A.RNAB.蛋白質(zhì)C.DNAD.多糖答案：C7.用于PCR產(chǎn)物檢測的瓊脂糖凝膠電泳中，溴化乙錠（EB）的作用是（）A.使DNA變性B.提供緩沖體系C.染色DNA，便于觀察D.促進DNA遷移答案：C8.如果PCR反應(yīng)沒有得到預(yù)期的產(chǎn)物，可能的原因不包括（）A.引物設(shè)計不合理B.模板量過多C.退火溫度過低D.反應(yīng)體系中加入了過多的dNTP答案：D9.在進行PCR反應(yīng)時，為了避免污染，以下做法錯誤的是（）A.試劑分裝B.反應(yīng)前后在同一工作區(qū)域操作C.嚴格按照無菌操作原則D.定期對儀器設(shè)備進行清潔和維護答案：B10.以下關(guān)于PCR反應(yīng)循環(huán)次數(shù)的說法正確的是（）A.循環(huán)次數(shù)越多越好B.循環(huán)次數(shù)一般為20-30次C.循環(huán)次數(shù)由退火溫度決定D.循環(huán)次數(shù)與模板量無關(guān)答案：B二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用（）A.醫(yī)學(xué)診斷B.法醫(yī)鑒定C.基因克隆D.物種進化研究答案：ABCD2.影響PCR反應(yīng)特異性的因素有（）A.引物的特異性B.退火溫度C.模板的純度D.Mg2+濃度答案：ABCD3.PCR反應(yīng)的特點包括（）A.特異性強B.靈敏度高C.操作簡便D.可大量擴增目的基因答案：ABCD4.以下哪些是PCR反應(yīng)中常用的緩沖液成分（）A.Tris-HClB.KClC.MgCl2D.(NH4)2SO4答案：ABC5.在設(shè)計PCR引物時，需要考慮的因素有（）A.引物長度B.引物的GC含量C.引物的特異性D.引物的二級結(jié)構(gòu)答案：ABCD6.以下關(guān)于PCR產(chǎn)物分析方法的說法正確的有（）A.瓊脂糖凝膠電泳可用于初步分析產(chǎn)物大小B.聚丙烯酰胺凝膠電泳分辨率更高C.熒光定量PCR可實時檢測產(chǎn)物量D.測序是確定產(chǎn)物序列的最準確方法答案：ABCD7.PCR反應(yīng)中可能出現(xiàn)的假陽性結(jié)果原因包括（）A.樣本間交叉污染B.試劑污染C.氣溶膠污染D.引物二聚體形成答案：ABC8.以下關(guān)于Taq酶的特性正確的是（）A.熱穩(wěn)定性高B.具有5′→3′聚合酶活性C.具有3′→5′外切酶活性D.反應(yīng)最適溫度為72℃左右答案：ABD9.在進行PCR實驗時，對于樣本處理的要求有（）A.保證樣本的代表性B.防止樣本降解C.去除樣本中的雜質(zhì)D.對樣本進行定量答案：ABC10.以下哪些情況可能導(dǎo)致PCR反應(yīng)的失?。ǎ〢.儀器故障B.引物失效C.模板量過少D.反應(yīng)體系配制錯誤答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)只能擴增雙鏈DNA。（）答案：錯誤2.引物的長度越長越好。（）答案：錯誤3.退火溫度越高，PCR反應(yīng)的特異性越強。（）答案：正確4.在PCR反應(yīng)中，dNTP的濃度越高越好。（）答案：錯誤5.PCR反應(yīng)可以在常溫下進行。（）答案：錯誤6.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯誤7.瓊脂糖凝膠電泳中，DNA片段越小，遷移速度越慢。（）答案：錯誤8.熒光定量PCR只能檢測DNA的量。（）答案：錯誤9.如果PCR反應(yīng)中出現(xiàn)引物二聚體，一定會影響目的產(chǎn)物的擴增。（）答案：錯誤10.只要遵循無菌操作原則，就不會出現(xiàn)PCR污染問題。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的原理。答案：PCR即聚合酶鏈反應(yīng)，是一種體外擴增特定DNA片段的技術(shù)。其原理是以擬擴增的DNA分子為模板，以一對分別與模板互補的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，重復(fù)這一過程，可使目的DNA片段得到大量擴增。2.簡要說明引物設(shè)計的基本原則。答案：引物設(shè)計基本原則包括：合適的長度（一般18-30bp）；合適的GC含量（40%-60%）；避免引物內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu)；引物之間不能形成引物二聚體；具有高度特異性等。3.簡述在PCR實驗中如何避免污染。答案：在PCR實驗中避免污染的方法有：試劑分裝；嚴格劃分工作區(qū)域，如試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)；使用帶濾芯的槍頭；定期對儀器設(shè)備清潔維護；操作時嚴格遵守?zé)o菌操作原則等。4.簡述瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物的原理。答案：瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物的原理是：DNA分子在電場作用下向正極遷移，由于不同大小的DNA片段在瓊脂糖凝膠中的遷移速度不同，小片段DNA遷移速度快，大片段DNA遷移速度慢，從而使DNA片段按大小分離，經(jīng)溴化乙錠染色后在紫外燈下可觀察到不同條帶。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論PCR技術(shù)在新型冠狀病毒檢測中的應(yīng)用及意義。答案：PCR技術(shù)在新冠檢測中用于檢測病毒核酸。其意義在于能夠快速、準確地檢測出病毒的存在，早期發(fā)現(xiàn)感染者，對于控制疫情傳播、及時隔離治療患者、評估疫情規(guī)模等方面有著至關(guān)重要的作用。2.探討影響PCR反應(yīng)效率的因素有哪些？答案：影響PCR反應(yīng)效率的因素包括引物特異性和質(zhì)量、模板的純度和量、酶的活性、反應(yīng)體系中各成分濃度（如dNTP、Mg2+等）、退火溫度、循環(huán)次數(shù)等。這些因素相互影響，合理優(yōu)化可提高反應(yīng)效率。3.請討論如何提高PCR反應(yīng)的特異性。答案：提高PCR反應(yīng)特異性可從以下方面著手：設(shè)計高特