生物制藥工藝學(xué)試驗指導(dǎo)

（12個試驗，36課時）

焦飛

生物技術(shù)教研室

試驗一健胃消食片配方及片劑的制備

一、試驗?zāi)康?/p>

1.掌握壓片機壓片的措施及影響片劑成型的重要原因；

2.學(xué)會片劑處方的調(diào)配。

二、試驗材料和儀器

太子參，陳皮，山藥，麥芽（炒），山楂，蔗糖粉，糊精，硬脂酸鎂，粉碎機，干燥箱，制

片機

三、試驗原理

健胃消食片為內(nèi)科傷食類非處方藥物，主治健胃消食，用于脾胃虛弱，消化不良，脾

胃虛弱所致的食積，癥見不思飲食，暖腐酸臭，脫腹脹痛。健胃消食片U勺配方如下，太子參

228.6g,陳皮22.9g,山藥171.4g,麥芽（炒）171.4g,山楂114.3g,蔗糖糊精適量，值得片

劑為淡棕黃色的片或薄薄膜片，氣略香，味微甜，酸。制作措施：太子參半量與山藥粉碎成

細粉，其他陳皮三味藥及剩余的太子參置于燒杯，加3倍量水，煎煮1小時，濾過，合并兩

次煎液，減壓濃縮至浸育，干燥。將蔗糠粉糊精和生藥粉以3：1：1的混合粉與浸膏混合制

成軟材，軟材的軟硬應(yīng)合適，以“手握成團，輕壓則散”為宜。采用擠出制粒的措施制成顆

粒，顆粒在60-80攝氏度干燥，干燥時應(yīng)逐漸升溫，以免因顆粒表面干燥過快結(jié)成硬殼而影

響內(nèi)部水分II勺蒸發(fā)。顆粒整粒后加入1%硬脂酸鎂混合后壓片。

四、試驗環(huán)節(jié)

1.稱取太子參22.8g,陳皮2.3g,山藥17.1g,山藥17.1g,麥芽17.1g,山楂11.4g

2.太子參山藥用粉碎機粉成細粉。

3.將上述藥材放入燒杯中，加入3倍量的水，煎煮半小時，反復(fù)兩次，將上清液合并，減

壓濃縮至浸膏，將所得浸膏放入烘箱中8（）度干燥。

4.將蔗糖粉糊精和干燥后日勺粉末以3：1：1H勺比例混合制成顆粒軟材，將軟材放入烘箱中

逐漸升溫干燥。

5.干燥后日勺軟材加入1%硬脂酸鎂放入壓片機中壓片。

試驗二溶菌酶結(jié)晶的制備

一、試驗?zāi)康?/p>

1.掌握鹽析法提取蛋白質(zhì)的原理和過程：

2.學(xué)會溶菌酶的結(jié)晶和精制措施。

二、試驗材料與儀器

新鮮雞蛋，氯化鈉，1mol/L氫氧化鈉溶液，醋酸緩沖液，燒杯，玻璃棒，布氏漏斗，

干燥箱。

三、試驗原理

溶菌酶又稱細胞壁質(zhì)酶或N—乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是?種國內(nèi)外很緊銷日勺生化物

質(zhì)，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床。具有多種藥理作用，能抗感奧、消炎、消腫、增強體內(nèi)免疫反應(yīng)

等，有抗菌II勺作用，常用于五官科多種粘膜炎癥，皮膚帶狀瘡疹等疾病。是優(yōu)良的天然防腐

劑，可用于食品的防腐保鮮。尤其重要的是近年來溶菌酶已成為基因工程及細胞工程必不可

少的工具酶。

四、試驗環(huán)節(jié)

（1）搜集雞蛋清將新鮮雞蛋兩端各敲-?種小洞，使蛋清流出（最佳是新生的雞蛋、PH

值不得低于8,否則不能使用），按其體枳的兩倍量加入水，輕輕攪拌5min,使蛋清溶液的

稠度均勻，注怠在攪拌過程中不能起泡，攪拌不適宜過快、攪拌棒應(yīng)光滑等，以防蛋白質(zhì)變

性而影響溶菌酶產(chǎn)品的得率及質(zhì)量，最終用雙層細紗布濾除蛋清溶液中口勺臍帶塊及碎蛋殼

等。

（2）加入氯化鈉按每100ml蛋清溶液加入2g.氯化鈉口勺比例，白蛋清溶液中慢慢加

入氯化鈉細粉，邊加邊攪拌，促使氯化鈉細粉及時溶解，以防止局部濃度過高或沉淀于容器

底部，否則會引起蛋白質(zhì)的變性而產(chǎn)生大量的白色沉淀。

（3）粗制溶菌酶加完氯化鈉細粉后，再用lmol/L的氫氧化鈉溶液小心地將上述

蛋清溶液日勺PH值調(diào)整到10.8。在用氫氧化鈉溶液調(diào)整蛋清溶液PH值時，用膠頭滴管將其

逐漸滴入并不停攪拌以免局部過堿而導(dǎo)致蛋白質(zhì)R勺變性，從而影響溶菌酶EI勺得率和質(zhì)量。為

加速溶菌酶的I結(jié)晶過程，可再加入適量的溶菌酶結(jié)晶體作為品種。低溫下靜置數(shù)天，溶菌防

結(jié)晶將慢慢析出，于72~96h到達最高產(chǎn)率。待結(jié)晶完全后，傾去上清液并用布氏漏斗濾出

結(jié)晶，即可得到粗制的溶菌酶晶體。

（4）精制溶菌酶將制得的粗結(jié)晶用PH值4.6的醋酸溶解，然后讓酶液靜置2h,接著

過濾除去不溶物，搜集濾液并量出體枳，按100ml濾液和5g氯化鈉的比例加入（加入措施

與第二步加入氯化鈉的措施相似）。然后用Imol/L日勺氫氧化鈉溶液緩慢地將其PH值調(diào)整到

10.8后，低溫下靜置結(jié)晶。為加速結(jié)晶過程可向酶液中加入溶菌酶晶種，待結(jié)晶完全后再

傾去上清液，用布氏漏斗過濾可得溶菌酶結(jié)晶，如純度不夠，可反復(fù)操作提純，直至到達所

需要的純度為止，結(jié)晶于30~40°:烘干后即得溶菌酶產(chǎn)品。

（5）包裝存貯產(chǎn)品應(yīng)裝于玻璃或陶瓷容器中，置于陰冷處保留，以免溶菌酶受熱后

失去活性。

注意事項

（1）整個過程只能在玻璃或陶瓷容器中進行，不可用金屬容器，以免酶失活而影響產(chǎn)

品的得率及質(zhì)量。

（2）操作口勺全過程要在低溫下進行（10°如下），防止原料變質(zhì)和酶失活。

（3）第三步中加入溶菌酶品種的詳細操作是將溶菌酶晶體均勻地懸浮于少許口勺PH值

為10.8,濃度為5%氯化鈉溶液中，取幾滴加入到調(diào)好的PH值和氯化鈉濃度的蛋清液內(nèi)，

再置低溫處結(jié)晶。

試驗三纖維素酶活力的測定

一、試驗?zāi)康?/p>

1.理解纖維素酶的種類和測定原理，以及纖維素酶的作用特性；

2.掌握3,5-二硝基水楊酸（DNS）法測定纖維素酶活力的原理和措施。

二、試驗原理

纖維素酶是一種多組分酶，包括4種組分：內(nèi)切［M,4-葡聚糖酶、外切*1,4-葡聚精酶、

纖維二糖水解酶和纖維二犍酶（又稱氏葡聚糖昔酶）。在多種酶組分的協(xié)同作用下，能降解

纖維素，使之變成纖維寡糖、纖維二糖和葡萄糖等還原糖。這些還原糖能將堿性條件下的

3,5-二硝基水楊酸（DNS）還原，生成紅棕色的氨基化合物，在540nm波長處有最大光吸

取，在一定范圍內(nèi)還原糖內(nèi)量與反應(yīng)液的顏色強度呈比例關(guān)系。運用比色法測定其還原糖的

量就可測定纖維素酶的活力。

由不一樣底物測得的酶活力分別稱為FPA（濾紙?zhí)敲富盍Γ┖虲MCA（裝甲基纖

維素酶活力）。為了統(tǒng)一原則，目前一般用濾紙作為纖維素酶作用H勺底物。

纖維素酶在一定溫度和pH條件下，將纖維素底物（濾紙）水解，釋放出還原糖。在堿性、

煮沸條件下，3,5-二硝基水楊酸（DNS試劑）與還原糖發(fā)生顯色反應(yīng)，其顏色的深淺與還原糖

（以葡萄糖計）含量成正比。通過在54（）nm測其吸光度，可得到產(chǎn)生還原糖的量，計算出纖維

素酶的濾紙酶活力。濾紙酶活力Filtcrpapcractivity（FPA）指Ig固體能（或1mL液體酶），在

（50士0」）℃,指定pH條件卜.（酸性纖維素酶pH4.8,中性纖維素酸pH6.0）,lh水解濾紙底物,

產(chǎn)生出相稱于1mg葡萄穗的還原糖量，為1個酶活力單位，以u/g（或u/mL）表達。

三、試驗器材和試劑

水浴鍋、分光光度計、計時器、比色皿、移液管、吸耳球

DNS試劑、檸檬酸緩沖液、簡萄糖原則儲備溶液、迅速定性濾紙

四、試驗內(nèi)容

1.葡的糖原則曲線的繪制：

取7支具塞刻度試管，編號，按照表一規(guī)定的量，分別吸取葡萄糖原則液、緩沖溶液

和DNS試劑于各管中，混勻。將原則管同步置于沸水浴中，反應(yīng)10min,取出，迅速冷卻

至室溫，用水定容至25血，蓋塞，混勻。在540nm處測量吸光度，以葡萄糖量為橫坐標,

吸光度為縱坐標，繪制原則曲線，獲得線性回歸方程。

表■葡萄糖原則曲線

管葡萄糖原則使用溶液緩沖液吸取DNS試劑

號濃度（nig/ml）吸取量（ml）量（ml）吸取量（ml）

00.0O.(X)23.0

11.00.501.53.0

21.50.501.53.0

32.00.501.53.0

42.50.501.53.0

53.00.501.53.0

63.50.501.53.0

2.待測酶液的制備

（1）稱取酹樣1.0g,用檸檬酸緩沖液溶解至100ml（100倍），之后分別做200倍、400倍

和800倍稀釋，混勻。精確定容放置10min,待測。

（2）濾紙條的準備

濾紙條事先干燥，水分平衡后，將濾紙折成寬1cm,質(zhì)量為5±0.5mg口勺漉紙條，折

成M型備用。

（3）能活力MJ測定

取四支具塞試管，將折成M型的濾紙條分別放入每支試管底部，其中一支試管空白，

分別向四支試管中加入緩沖液L5ml,待測酶液0.5ml（空白管不加），使管內(nèi)溶液浸沒濾

紙，蓋塞。

將四支試管同步置于50°C水浴中，精確計時60min,取出，立即向各管中加入DNS

試劑3.0ml。再于空白管中精確加入稀釋好日勺待測酶液0.5ml,搖勻。將四支管同步放入沸

水浴中，加熱lOmin,取出,迅速冷卻至室溫,加水定容至25ml,搖勻。

以空白管（對照液）調(diào)儀器零點，在540nm下，測量三支平行管中樣液的吸光度，取

平均值。以平均值查原則曲線或用回歸方程求出還原糖含量。

（4）酶活力的計算

纖維酶活力按如下公式計算：

X=AX1/0.5Xn

式中，X-樣品的灌紙酶活力，u/g；A?根據(jù)吸光度在原則曲線上查得的還原糖量，mg；

n-酶樣日勺稀釋倍數(shù)。

試驗四金銀花、黃苓、川尊和連翹浸膏的制備

一、試驗?zāi)康?/p>

1.掌握提取措施及操作要點。

2.熟悉提取率的測定措施。

3.理解總浸膏量中總黃酮量和總有機酸量日勺測定措施。

二、試驗原理

浸膏劑指用合適溶劑與措施提取中藥中有效成分，蒸去所有溶劑，調(diào)整濃度至規(guī)定原

則所制成的膏狀或粉狀的固體制劑。除另有規(guī)定外，浸膏劑每1g相稱于原有藥材的2~5g。

浸膏劑一般用煎煮法或滲漉法制備。煎煮法指將藥材加水煎煮取汁的措施，一般過程為取規(guī)

定藥材，切碎或粉碎成粗粉，置合適煎器中，加水浸沒藥材，浸泡合適時間后，加熱至煮沸,

保持微沸一定期間，分離煎出液，藥渣依法煎出多次(一般為2~3次)，至煎液味淡為止，

合并各次煎出液，濃縮至規(guī)定濃度。煎煮法合用于有效成分能溶于水，且對濕、熱均穩(wěn)定的

藥材:滲漉法是將適度粉碎U勺藥材置滲漉筒中，由上部不停添加溶劑，溶劑滲過藥材層向下

流動過程中浸出藥材成分的措施。合用于珍貴藥材、毒性藥材及高濃度制劑。

三、試驗材料與器材

金銀花、黃苓、川茸、連翹、酚儆試劑、NaOH滴定液、0.6%Mg(Ac)2甲醇溶液

索氏提取儀、回流冷凝管、加熱套、水浴鍋

四、試驗內(nèi)容

1.金銀花提取

取最粗粉金銀花、黃苓、川茸、連翹各20g,加入200ml蒸儲水，按煎煮法，煎煮3

次，每次30min,取上清液或過濾取濾液。

2.浸膏制備：將濾液濃縮至稀糖漿狀，靜置2周，過濾，即得浸膏。

3.質(zhì)量檢查

（1）觀測浸音的外觀性狀，本品在水浴上蒸干后，在105℃干燥3小時，至恒定，測定測

定總浸音量。

（2）含量測定

①總有機酸時測定：在供試品溶液中加入酚酰試劑2滴，用標定好的10.0749mol（的

NaOH滴定液滴定至溶液顯粉色。每1mlNaOH滴定液相稱于9.916mg的水楊酸，總有機

酸量以水楊酸計。

②總黃酮的測定:按《中藥化學(xué)》中盧丁測定措電0.6%Mg（Ac）2甲醇溶液為參比,

于510nm處測定各溶液吸光值。

試驗五金銀花、黃苓、川萼和連翹浸膏的純化及丸劑的制

備

一、試驗?zāi)康?/p>

1.掌握泛制法、塑制法制備丸劑的措施與操作要點。

2.熟悉水丸、蜜丸、滴丸對藥料和輔料的處理原則及各類丸劑H勺質(zhì)量規(guī)定。

二、試驗原理

丸劑是根據(jù)中醫(yī)辨證論治口勺原則組方。碾研成細末，混合均勻后，根據(jù)處方用蜜、水、

黃酒、醋、面糊、米糊、蜂蠟、藥汁、流浸育、糖漿等為粘合劑，制成圓球形的內(nèi)服固體劑

型，如蜜丸、水丸、糊丸、蠟丸、濃縮丸等，以治療疾病的一種療法。丸劑H勺制法有泛制法、

塑制法和滴制法。泛制法合用于水丸、水蜜丸、糊丸、濃縮丸的制備，其工藝流程為：原、

輔料的準備f起模f成型f蓋面f干燥f選丸f質(zhì)量檢查f包裝。塑制法合用于蜜丸、濃縮

丸、糊丸、蠟丸等的制備，其工藝流程為：原、輔料的準備f制丸塊f制丸條f分粒、搓

圓f干燥f質(zhì)量檢查f包裝。供制丸用的藥粉應(yīng)為細粉或極細粉；起模、蓋而、包衣的藥粉,

應(yīng)根據(jù)處方藥物口勺性質(zhì)選用。丸劑H勺賦形劑種類較多，選用恰當?shù)臐櫇駝?、黏合劑，使之?/p>

有助于成型，又有助于控制溶散時限，提高藥效。

水丸制備時，根據(jù)藥料性質(zhì)、氣味等可將藥粉分層泛入丸內(nèi)，掩蓋不良氣味，防止芳

香成分時揮發(fā)損失，也可將速效部分泛于外層，緩釋部分泛于內(nèi)層，到達長期有效的目的I。

一般選用黏性適中的藥物細粉起模，并應(yīng)注意掌握好起模用粉量。如用水為潤濕劑，必須用

8小時以內(nèi)的涼開水或蒸譚水。水蜜丸成型時先用低濃度的J蜜水，然后逐漸用稍高濃度的蜜

水，成型后再用低濃度的蜜水撞光。蓋面時要尤其注意分布均勻。

泛制丸因含水分多，濕丸粒應(yīng)及時干燥，干燥溫度一般為80c左右。含揮發(fā)性、熱敏

性成分，或淀粉較多的丸劑，應(yīng)在6(rc如下干燥,。丸齊j在制備過程中極易染菌，應(yīng)采用恰

當?shù)拇胧┘右钥刂啤?.滴丸的冷卻劑必須對基質(zhì)和主藥均不溶解.，其比重輕于基質(zhì)，但兩

者應(yīng)相差極微，使滴丸滴入后逐漸下沉，予以充足歐I時間冷卻。否則，如冷卻劑比重較大，

滴丸浮于液面；反之則急劇下沉，來不及所有冷卻，滴丸會變形或合并。

三、試驗材料與儀器

金銀花、黃苓、川萼、連翹、蜂蜜、純化水

培養(yǎng)皿、小型制丸機

四、試驗內(nèi)容

1.水丸及I制備：金銀花、黃苓、川茸、連翹以上4味，各取5g,混合粉碎成細粉，混

勻。①起模：即起母子?？刹捎盟庁沂止しɑ虬洛仚C械法。手工法是以小掃帚蘸少許開水,

或其他粘合劑均勻地刷在藥匾上，然后撒上少許藥粉，轉(zhuǎn)動藥匾，使藥粉所有濕潤，再用干

燥棕刷輕輕將藥粉刷離，通過再刷水，加藥粉，旋轉(zhuǎn)藥匾，如此反更多次，使顆粒逐漸呈圓

形而增大，過藥篩選用均勻口勺顆粒作為母子。機械法則以包衣鍋替代藥匾起模，其操作措施

與手工法基本相似。逐漸加大制成符合規(guī)定口勺丸劑。手工法泛丸是母子B勺基礎(chǔ)上②泛丸：將

篩選的母子。繼續(xù)用藥匾,通過噴水，撒藥粉，運用旋轉(zhuǎn)、推拉、揉滾、翻擺等操作，反復(fù)

進行，使藥丸加大到一定水平，過篩，即可制成均勻光滑一致的水泛丸。機器泛丸基本操作

與手工法相似。③干燥：水丸制成后應(yīng)將其攤布容器中，于陰涼通風(fēng)處及時干燥，并應(yīng)隨時

加以翻動。或用低溫烘干，

2.蜜丸:將藥材細粉用蜂蜜為粘合劑制成的丸劑。分為大蜜丸及小蜜丸兩種。蜜丸操作

重要為煉蜜、丸塊及丸條制備、丸劑分割與搓圓、干燥、包衣等幾種環(huán)節(jié)。①煉蜜：將蜂蜜

置于鍋中加熱熬煉。撈出漂浮物及浮沫以清除其中的）雜質(zhì)，并可殺死微生物，破壞酵素，合

適減少水分含量，增長粘合力，以適合制丸規(guī)定。煉蜜根據(jù)熬煉時間長短：分為嫩蜜、中蜜

（亦稱煉蜜）老蜜3種二煉蜜水平按藥物性質(zhì)和季節(jié)而定，嫩蜜、煉蜜合用于粘性較強的J藥材,

老蜜則合用于粘性差的礦物或纖維性較多的藥材；冬季多用嫩蜜，夏季多用老蜜。加入煉好

的蜂蜜②丸塊及丸條制備：少許制備時將藥物細粉置于清潔II勺容器內(nèi)?；旌暇鶆?，制成軟硬

合適的可塑性丸塊，然后搓制成粗細一致的丸條。大量生產(chǎn)時，則用機械完畢丸塊及丸條制

備?？梢允止ぶ仆杌驒C械制丸。手工制丸按預(yù)定規(guī)格將丸條掐成均勻顆粒⑧丸劑分割與搓

圓：丸條制成后。搓圓即成。機械制丸是丸條制成后自動切割，搓揉，滾圓。干燥措施多用

烘干法④干燥：大蜜丸機蜜丸一般應(yīng)干燥后貯存。以丸?；ゲ徽尺B，不粘手，手捏之不易變

形為度。如不需干燥則以蠟皮包裹貯存。

試驗六植物油/0?環(huán)糊精包合物的制備

一、試驗?zāi)康?/p>

1.掌握飽和水溶液法制備包合物的工藝；用單凝聚法制備微囊的措施。

2.熟悉。一環(huán)糊精的性質(zhì)及包合物的其他制備措施；熟悉影響成囊的原因及控制措施,

3.理解p—環(huán)糊精包合物歐J應(yīng)用。

二、試驗原理

環(huán)糊精（cyclodextrin,CYD）是一種新型的水溶性包合材料，是淀粉經(jīng)酶解得到的一

種產(chǎn)物。這些分子中有6?13個葡萄糖分子以a—1,4糖昔鍵連接而成的環(huán)筒狀構(gòu)造代低聚

糖化合物，具分子構(gòu)造中具有一定大小的空穴，畬環(huán)筒內(nèi)毓水、環(huán)筒外親水的特性。環(huán)糊精

包合物是指借助分子間的作用力（包括靜電引力、氫鍵、偶極子間引力等），藥物分子包括

或嵌入環(huán)糊精11勺筒狀構(gòu)造內(nèi)形成的超微粒分散物。形成的包合物服用后在體內(nèi)經(jīng)滲透、獷散、

競爭性置換等作用釋放出藥物分子而發(fā)揮藥效。環(huán)糊精包合能將一種液體物質(zhì)轉(zhuǎn)變成一種固

體復(fù)合物并且固定芳香物質(zhì)和揮發(fā)性物質(zhì)。環(huán)糊精包合物制備措施諸多，有飽和水溶液法、

研磨法、噴霧干燥法、冷凍干燥法等，可根據(jù)環(huán)糊精和藥物的性質(zhì)，結(jié)合實際生產(chǎn)條件加以

選川。藥物制成包合物后可增長藥物的穩(wěn)定性，增長難溶性藥物的溶解度與溶出速度，提高

藥物的生物運用度，掩蓋藥物的不良嗅味，減少藥物的刺激性，還可使液體藥物粉末化以便

制劑，有些包合物還可作為緩釋和靶向制劑的藥物載體。

微型膠囊（簡稱微囊）是運用天然、半合成或合成口勺高分子材料（通稱囊材），將固體

或液體藥物（通稱囊心物）包裹而成直徑5^m?250Hm的微小膠囊。藥物微囊化后，穩(wěn)定

性增長，并呈固體粉末狀.可供制備散劑、膠囊劑、片?劑、注射劑及軟音劑等使用。微囊的

制備措施諸多，可歸納為物理化學(xué)法、化學(xué)法及物理機械法等。本次試驗采用物理化學(xué)法中

的單凝聚法和復(fù)凝聚法。本試驗運用兩種具有相反電荷的高分子材料作囊材，將囊心物分散

在囊材的水溶液中，在一定條件下，相反電荷的高分子材料互相交聯(lián)形成復(fù)合物后，溶解度

減少，自溶液中凝聚析出成囊。本試驗所用阿拉伯膠帶負電，而A型明膠在等電點以上帶

負電，等電點如下帶正電。假如將待包H勺藥物先與阿拉伯膠制成乳濁液或混懸液，然后在一

定溫度下與等量明膠溶液混合，用醋酸調(diào)pH在左右，貝］明膠帶正電，與帶負電的阿拉伯膠

互相凝聚而包在藥物周圍，成為微囊。

三、試驗儀器與藥物

顯微鏡（10x40倍）、500ml燒杯、乳缽、溫度計、水浴、布氏漏斗、100ml量筒、10ml

量筒、蒸發(fā)皿、阿拉伯膠、明股、37%甲醛、10%醋酸、1。%氫氧化鈉

四、試驗內(nèi)容與操作

1.薄荷油后環(huán)糊精包合物

【處方】氏環(huán)糊精4g

植物油1mL（28d）

蒸儲水50mL

【制法】稱取（3—CYD4g,置100mL錐形瓶中，加入蒸儲水50mL,加熱溶解，降溫

至50℃,精密滴加植物油1mL,恒溫攪拌2.5小時。冷藏24小時，待沉淀完全后過濾。用

無水乙醇5mL分三次洗滌沉淀3次，至沉淀表面近無油漬，將包合物置干燥器中干燥，即

得。

2.植物油微囊

【處方】

植物油1.0g10%醋酸適量

明膠2.5g20%氫氧化納液適最

阿拉伯膠2.5g硬脂酸鎂適量

37%甲醛1.25ml蒸儲水適量

【制法】取阿拉伯膠2.5g,使溶于50ml蒸饋水中（60℃）,加入植物油1.0g于組織搗

碎機中乳化1分鐘。將之轉(zhuǎn)入5（）（）ml燒杯并放入50C恒溫水浴鍋中。另取明膠2.5g,使溶

于60℃50ml蒸儲水中。將明膠液在攪拌下加入上述乳濁液中，用10%的醋酸調(diào)pH4.1左右,

顯微鏡下觀測見到油珠外層有一層薄薄的膜，即已成囊（此時囊形并不圓整，大小不一）。

加入蒸儲水200ml（溫度應(yīng)不低于306,不停攪拌直到10℃如下。加入37%甲醛1.25ml

（以蒸儲水1.25ml稀釋），攪拌15分鐘，用20%氫氧化鈉液調(diào)pH8?9,繼續(xù)攪拌冷卻半小

時，除去懸浮日勺泡沫，濾過，用水洗滌至無甲醛臭，pH中性即可。抽濾，加3%硬脂酸鎂

制粒，過一號篩，于50C烘干，即得。

五、注意事項

1.成囊時pH調(diào)整不要過高或過低，一般調(diào)pH至4.0左右，此時明膠所有帶正電荷。

2.攪拌速度要合適。速度過快，囊膜易破壞，過慢則微囊易粘連。速度不一，則成囊大小不

均勻。

3.加入甲醛使囊膜變性，用量多少直接影響變性程度。用10%氫氧化鈉調(diào)pH=8。攪拌30min,

以增長甲醛與明膠的交聯(lián)作用，使凝膠的網(wǎng)狀構(gòu)造孔隙縮小。

六、思索題

1.制備包合物的關(guān)鍵是什么？

2.本試驗為何選用p一環(huán)糊精為主分子？它有什么特點？

3.除飽和水溶液法外，制備包合物的措施尚有哪些？

4.試舉例闡明包合物在藥物制劑中的應(yīng)用。

試驗七植物油小環(huán)糊精包合物的質(zhì)量檢查

一、試驗?zāi)康?/p>

1.掌握。一環(huán)糊精包合物和微囊的質(zhì)量檢測措施。

2.熟悉藥物溶出度的測定措施。

二、試驗原理

影響包合物的原因包括內(nèi)因和外因。內(nèi)因：主、客分子的大小；客分子的極性。外因：

溫度、附加劑、PH等。為獲得最佳制備工藝，以包合物的收得率、包合物中藥物H勺含量為

評價原則，幾種質(zhì)量評價措施：顯微鏡法和電鏡掃描法溶解度和溶出度法、紫外分光光度法、

熒光光度法、紅外分光光譜法、差示熱分析法、X射線衍射法、核磁共振法。通過比較包合

前后紫外吸取光譜圖，根據(jù)吸取峰的位置和高度來判斷包合與否成功或包合前后重要成分與

否發(fā)生變化。

目前微囊U勺質(zhì)量評價，除制成I向制劑自身規(guī)定應(yīng)符合藥典規(guī)定外，還包括下述內(nèi)容：

（-）形態(tài)、粒徑及其分布，可采用光學(xué)顯微鏡、掃描或電了?顯微鏡觀測形態(tài)并提供照片。

微囊形態(tài)應(yīng)為圓整球形或腌圓形IJ勺封閉囊狀物，微球應(yīng)為圓整球形或橢圓形的實體；（二）

藥物的含量微囊、微球中藥物含量的測定一般采用溶劑提取法。溶劑的選擇原則是：應(yīng)使藥

物最大程度地溶出而最小程度地溶解載體材料，溶劑自身也不應(yīng)干擾測定。（三）藥物口勺教

藥量與包封率，對于粉末狀微囊，先測定其含藥量后計算載藥量；對于混懸于液態(tài)介質(zhì)中的

微囊，先將其分離，分別刻定液體介質(zhì)和微囊的含藥量后計算其載藥量和包封率。

三、試驗儀器與藥物

電子天平、顯微鏡（10x40倍）、溶出儀

四、試驗內(nèi)容

1.包合物質(zhì)量檢查

(1)性狀包合物為白色干燥粉末，無明顯的植物油氣味。

(2)重量：稱量包合物的總質(zhì)量，計算得率。

2.微囊H勺質(zhì)量評價重要檢查膠囊內(nèi)容物微膠囊日勺粒度分布、顯微觀測、總油及表面油,

(1)微膠囊的顯微鏡觀測

取一滴固化后的微膠囊溶液，將其放于載玻片匕用顯微鏡觀測并測量其粒徑大小。

(2)溶出度：量取200ml蒸儲水，注入每一種測定容器內(nèi)，加熱使溶劑溫度保持在37c

±0.5-0,調(diào)整轉(zhuǎn)速使具穩(wěn)定，取微囊試樣置于管內(nèi)，然后進行測定。

試驗八金霉素鏈霉菌培養(yǎng)基的制備

一、試驗?zāi)康?/p>

1.學(xué)會鏈霉菌種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基H勺配制；

2.掌握試驗室高壓濕熱滅菌的措施。

二、試驗原理

金霉素鏈霉菌(Strcptomycesaurcofacicns)亦稱“金色鏈霉菌”，放線菌門

(Actinobactcria),放線菌綱(Actinobactcria),放線茵目(Actinomycetales),性霉菌科

(Strcptomycctaccac),鏈霉菌屬(Strcptomyces)。在固體培養(yǎng)基上產(chǎn)生金色色素，故名。其菌

落為草帽型，菌落直徑一般為3?5亳米，表面較平坦，中間有隆起。菌落開始為白色，長抱

子后變青色?？咕毓I(yè)上用以生產(chǎn)金霉素。

放線菌是一類介于細菌與真菌之間的I單細胞微生物。放線菌在土壤中分布最多，大多

數(shù)生活在含水量較低、有機質(zhì)豐富和微堿性的土壤中。多數(shù)狀況卜，泥土中散發(fā)出的“泥腥

味”就是由放線菌中鏈霉菌產(chǎn)生H勺土腥素導(dǎo)致的。放線菌大都好氧，屬于化能異養(yǎng)，菌絲纖

細，分枝，常從一種中心向周圍輻射生長。因其生長具輻射狀，故名放線菌。放線菌能像真

菌那樣形成分枝菌絲，并在菌絲末端產(chǎn)生外生H勺分生池子，有些種類甚至形成抱子囊，因而

曾被誤認是真菌。但其菌落較小而致密，不易挑取。不少菌種在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)和工業(yè)上廣泛應(yīng)

用，可產(chǎn)生抗菌素，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)和分離出的由放線菌產(chǎn)生的抗生素多達4()0()多種，其中，有

50多種抗生素已經(jīng)廣泛地得到應(yīng)用，如鏈霉素、紅霉素、土霉素、四環(huán)素、金霉素、卡那

霉素、氯霉素等用于臨床治療人口勺多種疾?。挥行┛缮a(chǎn)蛋白酶、葡萄糖異構(gòu)酶；存的用于

農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，如滅瘟素、井岡霉素、慶豐霉素等。

四環(huán)素類抗生素是由鏈霉菌生產(chǎn)或經(jīng)半合成制取的一類廣譜抗生素?？咕V極「，包

括革蘭氏陽性和陰性菌、立克次體、衣原體、支原體和螺旋體。品種重要包括金霉素、四環(huán)

素和土霉素。

三、試驗材料與器材

1ml移液槍、鋁鍋、電爐NaBr母液(0.1g/ml)、KCI母液(0.1g/ml)、M-增進劑母液(2.5mg

/ml)

四、試驗環(huán)節(jié)

1.種子培養(yǎng)基

種子培養(yǎng)基(g/L)：可溶性淀粉40,黃豆餅粉20,酵母粉5,蛋白陳5,CaCO34,

(NH4)2SO43,MgSO4-7H2O0.25,KH2Po40.25。

先稱取黃豆餅粉20g,單獨煮沸10分鐘，加入少許涼水降溫，4層紗布壓榨取汁，與

其他稱好的各成分混合，定容至ILo

每50ml分裝到250ml三角瓶中，每組2瓶。

2.定向發(fā)酵培養(yǎng)基

發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：可溶性淀粉100,黃豆餅粉40,蛋白陳15,CaCO35,酵母粉25

(NH4)2SO43,MgSO4?7H2O0.25,a—淀粉酶().1。

配制措施同種子培養(yǎng)基，配好后分裝到500ml三角瓶中，每瓶100ml,分別加入如下成

分，比較它們對四環(huán)素產(chǎn)量的影響：

對照(不加其他成分)；

加入NaBr母液至終濃度為2g/L；

加入KCI母液至終濃度為2g/L；

加入NaBr母液至終濃度為2g/L及M-增進劑母液至終濃度為().()25g/L。

每組各配?瓶。

3.滅菌

將封好口的培養(yǎng)基121℃滅菌30min。同步滅1ml剪口移液槍頭。

(總過程：稱量——溶化一定容一一分裝——封口——滅菌)

五、注意事項

1.黃豆餅粉煮沸取汁。

2.培養(yǎng)基封口最佳用8層紗布或棉花塞，最佳不用橡膠塞，以增長透氣性。

3.滅菌時鍋內(nèi)要補足水分。由于滅菌鍋較大，升溫排氣一定要充足(lOmin)。

六、補充閱讀

工業(yè)發(fā)酵中運用生產(chǎn)菌發(fā)酵得出最終產(chǎn)物是一種逐層放大的過程，各個不一樣的階段

對于營養(yǎng)成分11勺規(guī)定也各有特點，根據(jù)發(fā)酵不一樣階段的規(guī)定，培養(yǎng)基可分為抱子培養(yǎng)基、

種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基三種。

抱子培養(yǎng)基胞子培養(yǎng)基是供菌種繁殖抱子的一種常用固體培養(yǎng)基，對這種培養(yǎng)基的規(guī)

定是能使菌體迅速生長，產(chǎn)生較多優(yōu)質(zhì)MJ泡子，并規(guī)定這種培養(yǎng)基不易引起菌種發(fā)生變異。

因此對狗子培養(yǎng)基的基本配制規(guī)定是：第一，營養(yǎng)不要太豐富（尤其是有機氮源），否則不

易產(chǎn)抱子。如灰色鏈霉在葡萄糖一硝酸鹽一其他鹽類口勺培養(yǎng)基上都能很好地生長和產(chǎn)他子，

但若加入0.5%酵母膏或酪蛋白后，就只長菌絲而不長池子。第二，所用無機鹽的濃度要適

量，否則也會影響池子量和池子顏色。第三，要注意m子培養(yǎng)基的pH和濕度。生產(chǎn)上常用

的泡子培養(yǎng)基有：族皮培養(yǎng)基、小米培養(yǎng)基、大米培養(yǎng)基、玉米碎屑培養(yǎng)基和用葡萄糖、蛋

白陳、牛肉膏和食鹽等配制成的瓊脂斜面培養(yǎng)基。大米和小米常用作霉菌抱子培養(yǎng)基，由于

它們含氮量少，毓松、農(nóng)面積大，因此是很好抱子培養(yǎng)基。

種子培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基是供泡子發(fā)芽、生長和大量繁殖菌絲體，并使菌體長得粗壯，

成為活力強H勺“種子”。因此種子培養(yǎng)基H勺營養(yǎng)成分規(guī)定比較豐富和完全，氮源和維生素H勺

含量也要高些，但總濃度以略稀薄為好，這樣可到達較高的溶解氧，供大量菌體生長繁殖。

種子培養(yǎng)基R勺成分要考慮在微生物代謝過程中能維持穩(wěn)定的pH,其構(gòu)成還要根據(jù)不一樣菌

種的生理特性而定。?般種子培養(yǎng)基都用營養(yǎng)豐富而完全的天然有機氮源，由于有些氨基酸

能刺激狗子發(fā)芽。但無機氮源輕易運用，有助于菌體迅退生長，因此在種子培養(yǎng)基中常包括

有機及無機氮源。最終一級的種了?培養(yǎng)基的成分最佳能較靠近發(fā)酵培養(yǎng)基，這樣可使種子進

入發(fā)醉培養(yǎng)基后能迅速適應(yīng)，迅速生長。

發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基是供菌種生長、繁殖和合成產(chǎn)物之用。它既要使種子接種后能

迅速生長，到達一定的菌吆濃度，又要使長好的菌體能迅速合成需產(chǎn)物。因此，發(fā)酵培養(yǎng)基

的構(gòu)成除有菌體生長所必需的元素和化合物外，還要有產(chǎn)物所需的特定元素、前體和增進劑

等。但若因生長和生物合成產(chǎn)物需要的總［向碳源、氮源、磷源等的濃度太高，或生長和合成

兩階段各需日勺最佳條件規(guī)定不一樣步，則可考慮培養(yǎng)基用分批補料來加以滿足。

試驗九金霉素鏈霉菌的定向發(fā)酵

一、試驗?zāi)康?/p>

1.學(xué)習(xí)和掌握無菌操作技術(shù)。

2.掌握定向發(fā)酵四環(huán)素的原理。

二、試驗原理

定向發(fā)酵是指通過變化培養(yǎng)基組分(加入某些物質(zhì))變化微生物代謝途徑，使發(fā)酵按主觀

規(guī)定產(chǎn)生較多日勺產(chǎn)物。

金霉素、四環(huán)素和土霉素,它們的化學(xué)構(gòu)造極為相;以:

金霉素ClH

土霉素HOH

四環(huán)素HH

金霉菌原是產(chǎn)生金霉素(Chkmetracycline)的菌種，但因金霉素比四環(huán)素只多一種氯離

子，因此只要在發(fā)酵液中加入某些物質(zhì)，制止氯離子進入四環(huán)素分子;從而使菌種產(chǎn)生較多

的四環(huán)素。此外，金色鏈毒菌在30℃如下時，合成金霉素口勺能力較強；當溫度超過3/C時

則只合成四環(huán)素。

本試驗中，運用澳離子在生物合成過程中對氯離子有競爭性克制劑作用H勺原理，以及

加入2-硫醵基苯并睡嚏（即M-增進劑，分子式：C7H5NS2,一般作為橡膠硫化增進劑）克制氯

化酶的作用，從而增長四環(huán)素口勺產(chǎn)量。

三、試驗材料和試劑

金霉素鏈霉菌（購于中國微生物菌種保藏管理委員會?般微生物中心）、M-增進劑、數(shù)

皮、K2Hpe＞八MgSO4?7H2O^（NH4）2Hpeh、瓊脂

四、試驗環(huán)節(jié)

1.配制斜面培養(yǎng)基

（1）秋皮36.0g,K2HEO40.2g,MgS5?7比。0.1g，（NH4）2HPO43g,瓊脂15~

20g,定容至IL,pH7o

（2）可溶性淀粉20g,KNO31g,K2HPO40.5g,MgSO4?7H2O0.5g,NaCI05g,

FeSO4-7H2O0.01g,定容至IL,pH7.2~7.5。

2.制備斜面抱子：將保藏11勺菌種接種于液體培養(yǎng)基中（不加瓊脂U勺斜面培養(yǎng)基），28℃下

200r/min振蕩培養(yǎng)，將活化Id后U勺金霉素鏈霉菌種接入斜面培養(yǎng)基，28℃培養(yǎng)5?7天，

待狗子長成灰色，于4℃冰箱中保藏。

3.種子培養(yǎng):將在斜面上生長良好的菌體用接種鏟挑取lcm2左右接入裝有50ml四環(huán)素種

子培養(yǎng)基"勺250ml錐形瓶中，230r/min、28°。下振蕩培養(yǎng)20?24h。

4.發(fā)酵培養(yǎng)：以剪口移液槍頭取10ml種子液接入裝有100ml發(fā)酵培養(yǎng)液的500ml錐形瓶

中，230r/min、28℃下振蕩培養(yǎng)5d。用于背面的測定效價和薄層層析試驗。

試驗十四環(huán)素、金霉素的薄層層析鑒定

一、試驗?zāi)康?/p>

掌握薄層層析的原理，四環(huán)素族抗生素日勺定性鑒定措施

二、試驗原理

層析（色譜，chromaiograpby）是相稱重要、且相稱常見的一種技術(shù)，在把微細分散的

固體或是附著于固體表面的液體作為固定相，把液體（與上述液體不相混合日勺）或氣體作為

移動相的系統(tǒng)中（根據(jù)移動相種類的不?樣，分為液相層析和氣相層析二種），使試料混合

物中的各成分邊保持向兩相分布的平衡狀態(tài)邊移動，運用各成分對固定相親和力不一樣所引

起的移動速度差，將它們彼此分離開的定性與定量分析措施，稱為層析，亦稱色譜法。用作

固定相的有硅膠、活性炭、氧化鋁、離子互換樹脂、離子互換纖維等，或是在硅藻土和纖維

素那樣的無活性的載體上附著合適II勺液體。將作為固定相的微細粉末狀物質(zhì)裝入細長形圓筒

中進行的層析稱為柱層析（columnchromatography）,在玻璃板上涂上一層薄而均H勺支持物

（硅膠、纖維素和淀粉等）作為固定相的稱為薄層層析（thinlayerchromatography）,或者

用濾紙作為固定相的紙上層析。層析根據(jù)固定相與溶質(zhì)（試料）間親和力U勺差異分為吸附型、

分派型、離子互換型層析等三種類型。但這并不是很嚴格"勺，有時常見到其中間類型。比外,

近來也應(yīng)用親和層析，即溶與基質(zhì)類似的化合物（一般為共價鍵）結(jié)合到固定相上，再運用

其特異的親和性沉淀與其對應(yīng)的特定的酶或蛋白質(zhì)。

分派層析在支持物上形成部分互溶的兩相系統(tǒng)。一般是水相和有機溶劑相。常用支持

物是硅膠、纖維素和淀粉等親水物質(zhì)，這些物質(zhì)能儲留相稱量的水。被分離物質(zhì)在兩相中都

能溶解，但分派系數(shù)不一樣，展層時就會形成以不一樣速度向前移動的區(qū)帶。一種溶質(zhì)在兩

種互不混溶的溶劑系統(tǒng)中分派時，在一定溫度下到達平衡后，溶質(zhì)在固定相和流動相溶劑中

的濃度之比為一常數(shù)，稱為分派系數(shù)。當欲被分離吶多種物質(zhì)在固定相和流動相中的分派系

數(shù)不一樣步，它們就能被分離開。分派系數(shù)大的移動快（阻力?。?。

薄層層析是以薄層材料為支持物，在密閉容器中，樣品在其上展開。當斑點不易為肉

眼觀測時，可運用合適日勺顯色劑，或通過紫外燈卜.產(chǎn)生熒光口勺措施進行觀測。通過這種展開

操作，各成分呈斑點狀移動到各自的位置上，再根據(jù)Rf值的測定進行鑒定。薄層色譜法具

有分離與鑒定H勺雙重功能，通過薄層圖譜與對照品日勺圖譜相比較，除了能鑒出有效成分或特

性成分外，還以完整日勺色譜圖作為?種整體對制劑加以鑒別。薄層色譜分析法由于簡便、迅

速，能有效地、直觀地反應(yīng)藥物地真實性、穩(wěn)定性，現(xiàn)已成為藥物制劑的鑒別和質(zhì)量控制的

行之有效的措施之一。薄層層析是鑒別抗生素的措施之一，層析后進行顯色，并繪制層析圖

譜，根據(jù)層析圖譜對抗生素進行鑒定。本試驗以四環(huán)素、金霉素原則品溶液作為對照對發(fā)酵

液進行鑒定。

三、試驗儀器和設(shè)備

玻璃層析缸、層析板、毛細玻璃管或微量注射器、紫外投射儀、四環(huán)素、金霉素原則品、

正丁醉、醋酸、凡士林

四、試驗環(huán)節(jié)

1.層析板處理

層析板105c烘烤過夜，均勻噴上0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（PH4.5）,于空氣中晾干、備用。

2.點樣

選用兩種定向發(fā)酵液約1ml于1.5ml離心管中，10000rpm,5min,備用。在距層析板

底邊2.5?3cm起始線上（用鉛筆劃線，做出點樣點記號），用毛細玻璃管在薄層層析板上點四

環(huán)素原則品和金霉素原則品溶液3次，發(fā)酵液上清點8?10次，點樣點不不小于0.4cm,每

次都要吹干后再點。（一般效價在lOOOu/ml以上點3次，500-1000u/ml點4次，200?

500u/ml點5次）。

3.層析（展開）

用正丁醇：醋酸：水（4：1：5州勺上相作展開劑。層沂前需預(yù)先用展開劑預(yù)平衡層析缸,

可在缸中倒入2cm高H勺展開劑，密閉，一般保持15—30分鐘。然后將層析板置于盛有展開

劑的］層析缸中，在室溫下展層6?8h（與溫度有關(guān)）。封II不嚴可涂抹凡士林。

4.熒光顯影

待溶劑前沿展至板的二分之一以上時將層析板取出.標出溶劑前沿，于通風(fēng)櫥中晾干,

用氨水熏數(shù)秒鐘后即可在紫外燈下顯影，畫出黃色斑點，分別算出Rf值。（四環(huán)素原則品慢

和金霉素原則品快）

無水四環(huán)素在波長365nm下顯黃色熒光，根據(jù)與原則對照可定性測定。

五、注意事項

1.要控制好點樣量，樣品太少，斑點不清晰，難以觀測，但樣品量太多時往往出現(xiàn)斑點太

大或拖尾現(xiàn)象。

2.若因樣品溶液太稀，可反復(fù)點樣，但應(yīng)待前次點樣的溶劑揮發(fā)后方可重新點樣，以防樣

點過大，導(dǎo)致拖尾、擴散等現(xiàn)象，而影響分離效果。

3.點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

4.作展開劑中很少許強極性溶劑（0.5%）或pH值的變化可明顯改善拖尾現(xiàn)象。

試驗十一四環(huán)素效價測定

一、試驗?zāi)康模?/p>

I.理解抗生素效價H勺表達措施

2.學(xué)習(xí)抗生素口勺測定措施

二、試驗原理:

試驗運用比色法測定四環(huán)素和金霉素時效價。效價（titer或titre）是評價抗生素效能H勺原

則，它代表抗生素對微生物的抗菌效力，也是衡量發(fā)酵液中抗生素含量的尺度，人們以Wg

金霉素或四環(huán)素原則品為1個單位，0.6pg青霉素G鈉鹽為1個單位。

四環(huán)素和金霉素在酸性條件下，加熱，可產(chǎn)生黃色的脫水金霉素和脫水四環(huán)素，其色度

與含量成正比。

（黃色）

Ri=H脫水四環(huán)素，Ri=Cl脫水金霉素

在堿性條件下,四環(huán)素較穩(wěn)定，而金霉素則生成無色的異金霉素:

WNaOH

（無色）

根據(jù)上述原理，可以在酸性條件下，運用比色法測定四環(huán)素、金霉素混合液的總效價;

而四環(huán)素效價”勺測定可在臧性條件下，使金霉素生成無色口勺異金霉素，然后再在酸性條件下,

使四環(huán)素牛.成黃色的脫水四環(huán)素，經(jīng)比色測得四環(huán)素效價。總效價與四環(huán)素效價兩者之差即

為金霉素的效價。本試驗只測定四環(huán)素的效價。

發(fā)酵液中，由于雜質(zhì)的干擾，將影響比色口勺對的性，因此加入乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA）

作為整合劑，掩飾金屬離子H勺干擾，變化四環(huán)素脫水條件（減少酸度或延長加熱時間），可以

減少雜質(zhì)對比色反應(yīng)的干擾。

三、試驗環(huán)節(jié)

取各定向發(fā)酵液10ml于50ml容量瓶中，加入1ml濃度為ig/100mlEDTA溶液，加蒸

儲水5ml,再加入5ml濃度為3moi/L的］NaOH,在20~25℃下保溫15min后，加入5ml濃

度為6mol/L日勺HCL水浴煮沸15min后，冷卻，稀釋至刻度，在分光光度計上于3B0nm

處測定其吸光度值。

對照樣品（不加誘導(dǎo)劑）的前處理措施與上述環(huán)節(jié)同樣，只是在加入HC1后，不加熱,

稀釋至刻度，作為測定樣品的空白對照，調(diào)零。

四環(huán)素原則品（1000U/ml）取1ml于50ml容量瓶中,加1ml濃度為6moi/L的HCI,

水浴煮沸15min后,冷卻,稀釋至50ml,380nm測吸光度。（以蒸儲水作為空白測定）

以定向發(fā)酵培養(yǎng)基中的對照組作為空白對照，測定其他三個處理組的吸光度。（有時也

許因?qū)φ战M處理不妥而使其他組的讀數(shù)為負值，這時可以以蒸儲水作為空白。）

計算公式：

A發(fā)肝

發(fā)酵液中四環(huán)素的效價二----------＜四環(huán)素原則品的效價X1/10

A四環(huán)索原則

試驗十二人參細胞培養(yǎng)與人參皂昔提取

一、試驗?zāi)康?/p>

1.掌握人參皂或日勺提取、精制措施，深入鞏固和熟悉人參皂式的性質(zhì)。

2.熟悉和掌握人參皂忒的水解條件和措施。

3.熟悉和掌握柱層析分離人參皂或元的原理措施及基本操作技術(shù)。

二、試驗原理

人參日勺重要成分為人參皂甘，總皂昔含量約4%,人參皂甘大多數(shù)是白色無定形粉末或

無色結(jié)晶，味微甘苦，具有吸濕性。人參皂昔易溶于水，甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、

乙酸乙酯，不溶于乙醴、笨等親脂性有機溶劑。水溶液經(jīng)振搖后可產(chǎn)生大量的泡沫。人參總

皂昔無溶血作用，分離后.B型和c型人參皂首有明顯的溶血作用，而A型人參皂昔有抗溶

血作用。

人參中除具有皂昔外，還具有脂溶性成分如揮發(fā)油，脂肪、笛體化合物及大量的糖類等,

這些類成分對人參皂甘的分離和精制有干擾，因此必須除去，方可得到純度較高的皂昔。

人參皂氟元與多種分子糖結(jié)合成或，具杓較強口勺親水性，易溶于水和低級靜類，試驗室采用

熱水提取人參皂忒，提取液加堿（CaO）除雜。再用酸調(diào)至中性，上大孔樹脂柱，先用水洗

去色素至無色，再用70%的氨性醉洗至無色，人參皂城便溶于乙醉洗脫，回收乙醉，便得

到人參總皂忒。

人參總皂貳和稀HC1在醉液中進行溫和酸水解，匕得到三種皂貳元，齊墩果酸、人參

二醇和人參三醇。而不能得到原人參二醇和原人參三醉，這是由于在酸水解過程中側(cè)鏈的

20一位碳原子上的羥基（-OH）與該鏈上的雙鍵（C=C）易閉環(huán)，而形成帶有三甲基四氫

毗喃環(huán)的人參二醇和人參三醇。水解后，除去醇、氯仿萃取物經(jīng)硅膠柱層析分離即可得到三

種單體皂忒元，經(jīng)重結(jié)晶獲得純品，分別與已知皂忒"勺紅外光譜相一致。

三、試驗內(nèi)容

人參皂貳提取和貳元分離工藝流程

人參莖葉粗粉20g

|--------L熱水提取1小時，］粗濾,（棉花）

提取液藥渣

?加0.6g是會乳沉淀，并調(diào)至PH9-10,放置10分鐘，抽濾

沉淀物濾液

?濃硫酸調(diào)PH7,放置10分鐘。

中性心取液

1回收后，上大孔樹脂柱，先用水洗至無色，再用

70%氨性醇洗至綠色。

乙醇方脫液

回收乙醇

人參總皂虱（黃白色）