CAVTechnicalGuidelinesforHumanParainfluenzaVirusNucleicAcidI 4 5 6前言第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。心、內(nèi)蒙古自治區(qū)疾病預防控制中心、江西省疾病預防控制中心、廣州市婦女兒童醫(yī)療中心。人副流感病毒是引發(fā)嬰幼兒及青少年急性呼吸道感染的重要病原體。國內(nèi)外流行病學監(jiān)測數(shù)據(jù)顯吸道合胞病毒。目前，人副流感病毒已被列為我國急性呼吸道傳染病哨點監(jiān)測的重要病原體之及疾病防控具有關鍵作用。實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈式反應因其高靈敏度與特異性，成為人副流1人副流感病毒核酸檢測技術指南本文件規(guī)定了人副流感病毒核酸檢測的操作方法和生物安全WS233病原微生物實驗室生物安全通用準則3.13.2HPIV1和HPIV3屬于呼吸道病毒屬，HPIV2和HPIV4屬于腮腺炎病毒屬。4縮略語Ct值：熒光信號超過背景閾值所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)（cyclethresholdReal-timeRT-PCR：實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈反應（real-timefluorescencequantittranscriptionpolymerasechainreactioRNA：核糖核酸（ribonucleicaRNase：核糖核酸酶（ribonucleasRNaseP：核糖核酸酶P（ribonuclease5.1.2痰液標本需經(jīng)蛋白酶K消化或痰液消化液5.1.3標本采集后24h內(nèi)檢測，需于2℃~8℃保存；若無法在24h內(nèi)完成檢測，應于-60℃~-80℃病毒RNA提取應嚴格遵循試劑盒或全自動核酸提取儀操作說明執(zhí)行，若計劃在24h內(nèi)使用，需于2℃~8℃保存；如需長期保存，應于-60℃~-80℃超低溫環(huán)境保存，避免反復凍融。2合成四種血清型HPIV的特異性引物和探針，探針分別標記不同的熒光報告基團，用于不同血清型5.4反應體系配制HPIV四種血清型單通道核酸檢測Real-timeRT-PCR反應體系，包含預混反應緩沖液、逆轉錄/應體系、反應條件和結果判定則以廠家說明5.6結果判定5.6.1Ct值＜35.0，出現(xiàn)典5.6.2Ct值＞38.0或無數(shù)值，擴增5.7質量控制5.7.1設立陰性對照、陽性對照和提取對照監(jiān)測核酸檢測有效性；設立RNaseP對照監(jiān)測采集的d)RNaseP對照檢測結果陽性代表采集的標本質量符合要求。在HPIV核酸檢測結果判定為陰性5.7.3定期對標本處理、核酸提取和檢測等實驗場所進行消毒和效果驗證，避免核酸污染。5.8.2檢測信息：檢測項目、檢測人員、檢測日期、檢測依據(jù)、檢測方法、試劑名稱、試劑批號、試5.8.3實驗室信息：檢測場所、儀器設備編號、儀器校準日期和使用狀態(tài)。34），痰液充分消化后，進行病毒RNA提取。痰液消化液的儲5FAM-TATCTRCACATCCTTGAVIC-CTCCKATCATTGAGGCTC-BHQ1ATCTCTCATACCTTYAACATCY5-CATGYTCTCTAGCACTexasRed-TATCATCATCTGCCAAATCGGC6[2]姬奕昕,毛乃穎,王煥煥