專題

開講精研重難點(diǎn)-鎖定二輪復(fù)習(xí)重心O一點(diǎn)一過綜合考法

環(huán)節(jié)

精研重難點(diǎn)（一）微生物的選擇培養(yǎng)、鑒定和計(jì)數(shù)

從“高度”上研究高考

［典例|（2022?全國甲卷）某同學(xué)從被石油污染的土壤中分離得到A和B兩株可以降解

石油的細(xì)菌，在此基礎(chǔ)上采用平板培養(yǎng)法比較二者降解石油的能力，并分析兩個(gè)菌株的其

他生理功能。

實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基成分如下。

培養(yǎng)基I：K2HPOi，MgSOoNHJNOJ,石油。

培養(yǎng)基n：K2HPO4,Mgso4,石油。

操作步驟：

①將A、B菌株分別接種在兩瓶液體培養(yǎng)基I中培養(yǎng)，得到A、B菌液；一^、

②液體培養(yǎng)基I、II中添加瓊脂，分別制成平板I、U,并按圖中所示A4

在平板上打甲、乙兩孔。（°°

回答下列問題。'―'

（1）實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基中作為碳源的成分是_____。培養(yǎng)基中NH4NO3的作用是為菌株的

生長提供氮源，氮源在菌體內(nèi)可以參與合成（答出2種即可）等生物大分子。

（2）步驟①中，在資源和空間不受限制的階段，若最初接種No個(gè)A細(xì)菌，繁殖〃代后

細(xì)菌的數(shù)量是______________o

（3）為了比較A、B降解石油的能力，某同學(xué)利用步驟②所得到的平板I、II進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，

結(jié)果如表所示（“+”表示有透明圈，“+”越多表示透明圈越大，“一”表示無透明圈），

推測該同學(xué)的實(shí)驗(yàn)思路是_________________________________________________________

菌株

透明圈大小

平板n平板1

A+++++

B++—

（4）現(xiàn)有一貧氮且被石油污染的土壤，根據(jù)上表所示實(shí)驗(yàn)結(jié)果，治理石油污染應(yīng)選用的

菌株是，理由是

［解析］（1）培養(yǎng)基的成分有碳源、氮源、無機(jī)鹽和水等，從組成培養(yǎng)基的物質(zhì)所含化學(xué)

元素可知，作為碳源的成分是石油。生物大分子DNA、RNA、蛋白質(zhì)都含有N元素，故氮

源在菌體內(nèi)可以參與合成這些物質(zhì)。（2）由題意“資源和空間不受限制“可知，細(xì)菌的增殖

呈“J”形曲線增長，由于DNA的半保留復(fù)制，細(xì)菌每繁殖一代就是上一代數(shù)量的2倍，根

據(jù)公式；=2,繁殖〃代后細(xì)菌的數(shù)量是刖）?2"。（3）分析表格數(shù)據(jù)可知，實(shí)驗(yàn)的結(jié)

果是在平板I上，A菌株降解石油的能力高于B菌株；在平板H上，A菌株仍然能降解石

油，而B菌株不能降解，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的單一變量和對照原則，推測該同學(xué)的思路。（4）由表格

數(shù)據(jù)可知，在平板U（無氮源的培養(yǎng)基）上，A菌株仍然能降解石油，而B菌株不能降解，所

以要治理貧氮且被石油污染的土堞，應(yīng)該選用A菌株，因?yàn)锳菌株降解石油的能力高于B

菌株，并且在沒有添加氮源的培冰基中也能生氏。

［答案］（1）石油DNA、RNA、蛋白質(zhì)

（2）M?2〃（3）在無菌條件下，將等量等濃度的A菌液和B菌液分別接種到平板I的甲

和乙兩孔處，平板n也進(jìn)行同樣的操作，在相同且適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，比較兩個(gè)平

板的兩孔處的透明圈大小并作記錄，根據(jù)透明圈大降解能力強(qiáng)，透明圈小降解能力弱，進(jìn)

而比較A、B降解石油的能力（4）AA菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在沒有添加

氮源的培養(yǎng)基中也能生長

從“深度”上提升知能

（一）選擇培養(yǎng)基四種常見的制備方法

1.加入某些特定的物質(zhì)

（前提是培養(yǎng)基具備全部營養(yǎng)成分）

依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的抗性，在培養(yǎng)基中

原理加入某些物質(zhì)，以“抑制”不需要的微生物的生長,

“促進(jìn)”所需要的微生物的生長

在培養(yǎng)基中加入青霉素時(shí)可抑制細(xì)菌、放線菌的

生長，從而分離得到酵母菌和霉菌

2.改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分

培養(yǎng)基缺乏可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生

氮源時(shí)□物因缺乏氮源而無法生存

培養(yǎng)基缺乏異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利

有機(jī)碳源時(shí)用空氣中的CO2制造有機(jī)物而生存

3.利用培養(yǎng)基“特定化學(xué)成分”分離

不能利用石油的微生物不能生存，能夠利

用石油的微生物能生存，從而分離出能降

解石油的微生物

不能利用尿素的微生物因缺乏包源而不能

正常生長，能夠分解尿素的微生物能利用

尿素作為氮源而正'常.生長

4.通過某些“特殊環(huán)境”分離

在高鹽可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時(shí)易失水而

環(huán)境中不能生存

在高溫可分高得到耐高溫的微生物，其他微生物在高

環(huán)境中溫中因酶失活而無法生存

（二）辨析統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)的兩種方法

直接計(jì)數(shù)法

比較項(xiàng)目間接計(jì)數(shù)法（稀釋涂布平板法）

（顯微計(jì)數(shù)法）

當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表

面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)

原理液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品

菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有中微生物的數(shù)量

多少活菌

每克樣品中的菌落數(shù)=C7VxC：

某稀釋度下平板上生長的平均菌落每亳升原液所含細(xì)菌數(shù)：每小格內(nèi)平

公式

數(shù)，V：涂布平板時(shí)所用的稀釋液的均細(xì)菌數(shù)X400X10，X稀釋倍數(shù)

體積（mL）,稀釋倍數(shù)

當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板

缺點(diǎn)不能區(qū)分細(xì)胞死活

上觀察到的只是一個(gè)菌落

結(jié)果比實(shí)際值偏小比實(shí)際值偏大

從“寬度”上拓展訓(xùn)練

1.（2022?蘇州一模）微生物的計(jì)數(shù)方法有多種，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.用濾膜法測定飲用水中大腸桿菌數(shù)目時(shí)，可利用鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)后計(jì)數(shù)

B.用平板劃線法和稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，結(jié)果往往比實(shí)際少

C.用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物顯微計(jì)數(shù)時(shí)，高倍鏡下觀察不到完整的計(jì)數(shù)室

D.用已知密度紅細(xì)胞懸液對待測菌液以比例計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，兩種液體需混合均勻

解析：選B測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目可取一定量的飲用水，之后按一定倍數(shù)稀

釋，再用加入伊紅?亞甲藍(lán)的塞別培養(yǎng)基培養(yǎng)，對深紫色金屬光澤菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，A正確；

平板劃線法常用來篩選分離微生物，不用于計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物顯

微計(jì)數(shù)時(shí)，高倍鏡下觀察不到完整的計(jì)數(shù)室，C正確；將已知顆粒(如霉菌瓶子或紅細(xì)胞)

濃度的液體與一待測細(xì)胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)

目，即可得未知菌液的細(xì)胞濃度，D正確。

2.聚羥基脂肪酸酯(PHA)是嗜鹽菌合成的一種胞內(nèi)聚酯，可用于制造“綠色塑料”。

從某咸水湖中獲得高產(chǎn)PHA菌種的流程：①取樣一②接種一③培養(yǎng)一④取單菌落培養(yǎng)一⑤

檢測PHA產(chǎn)量一⑥獲得目標(biāo)菌。下列敘述錯(cuò)誤的是()

A.②可用稀釋涂布平板法接種到含PHA較高的選擇培養(yǎng)基上

B.②所用培養(yǎng)基應(yīng)加入瓊脂以便挑取單菌落

C.③④要將培養(yǎng)皿倒置放入恒溫箱

D.培養(yǎng)基用過后要滅菌處理

解析：選A由題干信息分析可知，欲獲得高產(chǎn)PHA菌種應(yīng)將菌種在適宜其生長的培

養(yǎng)基中培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；由流程分析可知，篩選出目的菌株，需要形成菌落，故使用固體培

養(yǎng)基，即②所用培養(yǎng)基應(yīng)加入瓊脂以便挑取單菌落，B正確；③④要將培養(yǎng)皿倒置放入恒

溫箱，倒量培養(yǎng)能夠防止培養(yǎng)基中的水分過快蒸發(fā)，又能防止冷凝形成的水珠落入培養(yǎng)基，

C正確；培養(yǎng)基用過后要滅菌處理，防止污染環(huán)境或感染實(shí)驗(yàn)人員，D正確。

3.如圖所示為從土壤中分離、純化和擴(kuò)大培養(yǎng)某種微生物的流程圖?；卮鹣铝型}：

⑴稱量土樣時(shí)，土壤..(填“需要”或“不需要”)進(jìn)行消毒和滅菌。

(2)進(jìn)行梯度稀釋操作時(shí)，若取待稀釋菌液1mL,注入9mL的無菌水，則該1mL待

稀釋菌液被稀釋了______倍。

(3)平板澆注法分離指的是將1mL稀釋的樣品放于空白的無菌培養(yǎng)皿之后，將冷卻到

45?50°C的培養(yǎng)基倒入，輕搖混勻、凝固，然后放于恒溫箱中培養(yǎng)。從土壤中分離酵母菌

和醋酸菌時(shí)，可以使用平板澆注法的是______,理由是

(4)劃線純化階段，對圖示培養(yǎng)皿進(jìn)行劃線時(shí)接種環(huán)取菌液次，該培養(yǎng)皿劃線

完成時(shí)接種環(huán)共需進(jìn)行灼燒滅菌________次。

（5）擴(kuò)大培養(yǎng)階段，所用培養(yǎng)基是（填“液體”或“固體”）培養(yǎng)基。

解析：（1）因?yàn)橐獜耐淋χ蟹重嚓P(guān)的微生物，所以不需要對土壤進(jìn)行消毒和滅菌。（2）

若取待稀釋菌液1mL,注入9mL的無菌水，則菌液相當(dāng)于被稀釋了10倍。（3）平板澆注會(huì)

使部分菌體埋入培養(yǎng)基中，酵母菌是兼性厭氧型生物，可以在低氧甚至無氧環(huán)境下生存繁

殖，而醋酸菌是需氧生物，不能在無氧條件下生存，故從土壤中分離酵母菌和醋酸菌時(shí)，

只有酵母菌可以使用平板澆注法。（4）劃線純化階段，圖中只有一個(gè)培養(yǎng)皿，接種環(huán)取1次

菌液即可，每次接種前后都需對接種環(huán)進(jìn)行一次灼燒滅菌處理，圖中共劃了5個(gè)區(qū)，故共

灼燒6次。（5）擴(kuò)大培養(yǎng)常用液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，以增加微生物的數(shù)量。

答案：（1）不需要（2）10（3）酵母菌平板澆注會(huì)使部分菌體埋入培養(yǎng)基中，酵母菌是

兼性厭氧型生物，可以在低氧甚至無氧環(huán)境下生存繁殖（4）16（5）液體

［微課微練?一點(diǎn)一評］

1.回答下列與細(xì)菌培養(yǎng)相關(guān)的問題。

（1）在細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中能同時(shí)提供碳源、氮源的成分是（填“蛋白

陳”“葡萄糖”或“NaN（）3”）。通常，制備培養(yǎng)基時(shí)要根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基

的pH,其原因是_______________________________。硝化細(xì)菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上

（填“能夠”或“不能”）生長，原因是

_____________________________________________________________________________________________________________________________________O

（2）用平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)一般需要將平板（填“倒置”或“正置”）。

（3）單個(gè)細(xì)菌在平板上會(huì)形成菌落，研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小、顏色等特

征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是______________________________________________

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

（4）有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過_____處理，這種處理可以殺死丟棄物中所

有的微生物。

解析：（1）蛋白陳中含有碳元素和氮元素，可為細(xì)菌生長提供碳源和氮源，葡萄糖只能

提供碳源，NaN（h只能提供氮源。不同細(xì)菌生長繁殖所需要的最適pH不同，制備培養(yǎng)基

時(shí)要根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)菌種類的不同來調(diào)節(jié)pH。硝化細(xì)菌是自養(yǎng)生物，可通過化能合成作用利

用空氣中的CO2合成有機(jī)物，所以在沒有碳源的培養(yǎng)基上也能生長。⑵用平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，

一般將平板倒置，仿止皿盆上的水珠落入培養(yǎng)基中造成污染。（3）在一定的培養(yǎng)條件下，不

同微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，因此研究人員可根據(jù)菌落的形狀、大小、顏色等特

征初步區(qū)分微生物的種類。（4）消毒僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物，滅菌可殺死物體

內(nèi)外所有的微生物，包括芽花和施子。使用后的培養(yǎng)基丟棄前要進(jìn)行滅菌處理，防止其中

的微生物感染操作者或污染環(huán)境。

答案：（1）蛋白陳不同細(xì)菌生長繁殖所需的最適pH不同能夠硝化細(xì)菌可以利用

空氣中的CO2作為碳源（2）倒置（3）在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定

的菌落特征

（4）滅菌

2.（2020?全國卷I）某種物質(zhì)S（一種含有C、H、N的有機(jī)物）難以降解，會(huì)對環(huán)境造成

污染，只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S

的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機(jī)鹽、水和S,乙的組分為

無機(jī)鹽、水、S和Y。

落接升多次締選

④一R⑤_高效降解

/-\s的菌株

無菌水甲

回答下列問題：

（1）實(shí)驗(yàn)時(shí)，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用的方法進(jìn)行滅菌。乙培養(yǎng)基中的

Y物質(zhì)是________o甲、乙培養(yǎng)基均屬于培養(yǎng)基。

（2）實(shí)驗(yàn)中初步估測搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2XIO7個(gè)/mL,若要在每個(gè)平板上涂布100

ML稀釋后的菌液，且保證每個(gè)平板上長出的菌落數(shù)不超過200個(gè)，則至少應(yīng)將搖瓶M中

的菌液稀釋倍。

（3）在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時(shí)，某菌株對S的降解

量反而下降，其原因可能是（答出1點(diǎn)即可）。

（4）若要測定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)，請寫出主要實(shí)驗(yàn)步驟：

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

（5）上述實(shí)驗(yàn)中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細(xì)菌的生長提供

4類營養(yǎng)物質(zhì)，即o

解析：（1）實(shí)臉過程中，對盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶進(jìn)行滅菌時(shí)，常采用高壓蒸汽滅菌法。

據(jù)題圖分析可知，乙培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，與甲培養(yǎng)基相比，其特有的組分Y應(yīng)是凝固劑

瓊脂。甲、乙培養(yǎng)基均只允許能利用物質(zhì)S作為氮源和碳源的微生物生長，因此兩培養(yǎng)基

均為選擇培養(yǎng)基。（2）據(jù)題意可知，假設(shè)至少將搖瓶M中的菌液稀釋X倍，才能保證稀釋后

的100/L菌液中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)不超過200個(gè)，初步估測搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2XIO：個(gè)/mL,

則稀釋之前100pL菌液中有2x106個(gè)細(xì)菌，可得2X106X（1/X）=200,則X=10,因此至少

應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋IO4倍。（3）在篩選過程中，若培養(yǎng)基中S濃度過高，可能會(huì)導(dǎo)致

細(xì)胞失水，進(jìn)而抑制菌株的生長。（4）將含有能降解S的細(xì)菌的淤泥加入無菌水中，進(jìn)行適

當(dāng)稀釋后，利用稀釋涂布平板法，取適量的菌液涂布到乙培養(yǎng)基上，在適宜條件下進(jìn)行培

養(yǎng)，一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，即可估算出淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)。（5）本實(shí)驗(yàn)中，

甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細(xì)菌生長提供的營養(yǎng)物質(zhì)是水、碳源、

氮源和無機(jī)鹽。

答案：（1）高壓蒸汽滅菌瓊脂選擇（2）10’（3）S的濃度超過某一值時(shí)會(huì)抑制菌株的

生長（4）取淤泥加入無菌水中，涂布（或稀釋涂布）到乙培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)（5）水、碳

源、氮源和無機(jī)鹽

3.（2022?全AD乙繆）化合物S被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化工工業(yè)，用菌株C可生產(chǎn)S,

S的產(chǎn)量與菌株C培養(yǎng)所利用的碳源關(guān)系密切。為此，某小組通過實(shí)驗(yàn)比較不同碳源對菌

體生長和S產(chǎn)量的影響，結(jié)果見表。

碳源細(xì)胞干重/（g/L）S產(chǎn)量/(g/L)

葡萄糖

淀粉

制糖廢液2.30

回答下列問題。

（1）通常在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時(shí)，需要對所需的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法有

_____________________________________________________________（答出2點(diǎn)即可）。

（2）由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C生長的最適碳源是；用菌株C生產(chǎn)S的最適碳源是

<,菌株C的生長除需要碳源外，還需要（答出2

點(diǎn)即可）等營養(yǎng)物質(zhì)。

（3）由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，碳源為淀粉時(shí)菌株C不能生長，其原因是____________。

（4）若以制糖廢液作為碳源，為進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，某同學(xué)進(jìn)行了相關(guān)

實(shí)驗(yàn)。請筒要寫出實(shí)驗(yàn)思路：_________________________________________________________

（5）利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)現(xiàn)廢物利用,其意義是（答

出1點(diǎn)即可）。

解析：（1）玻璃器皿常用的滅菌的方法有干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌等。（2）由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可

知，以葡萄糖為碳源時(shí)菌株C的細(xì)胞干重最大，說明最適于菌株C生長的碳源是葡萄糖；

而以制糖廢液為碳源時(shí)，用菌株C生產(chǎn)S的產(chǎn)量最高，說明最適于生產(chǎn)S的碳源是制糖廢

液。微生物的生長一般都需要水、碳源、氮源和無機(jī)鹽，還需要滿足微生物生長對pH、氧

氣以及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求，故菌株C的生長除需要碳源外，還需要戴源、無機(jī)鹽、水等

營養(yǎng)物質(zhì)。（3）分析題圖可以看出在以淀粉為碳源的培養(yǎng)基中，菌株C不能生長，原因可能

是菌株C中缺少分解淀粉的酶，不能利用淀粉。（4）要測定生產(chǎn)S的最適以制糖廢液為碳源

的濃度，實(shí)驗(yàn)自變量為制糖廢液的濃度，可分別配制一系列不同濃度梯度的以制糖廢液為

唯一碳源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)菌株C,其他條件相同且適宜，一段時(shí)間后，測定并比較不同濃

度制糖廢液中的S的產(chǎn)量，S產(chǎn)量最高時(shí)對應(yīng)的制糖廢液濃度，即為生產(chǎn)S的最適碳源濃

度。（5）利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)現(xiàn)廢物利用，既有利于減少污染，節(jié)省原料，又能降低

生產(chǎn)成本。

答案：（1）高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌

（2）葡萄糖制糖廢液氮源、無機(jī)鹽、水

（3）缺少淀粉酶（4）分別配制一系列不同濃度梯度的以制糖廢液為唯一碳源的培養(yǎng)基，

培養(yǎng)菌株C,其他條件相同且適宜，一段時(shí)間后，測定并比較不同濃度制糖廢液中的S的

產(chǎn)量，S產(chǎn)量最高時(shí)對應(yīng)的制糖廢液濃度即為生產(chǎn)S的最適碳源濃度（5）減少污染、節(jié)省

原料、降低生產(chǎn)成本

4.微生物產(chǎn)生的胭酶能夠特異性分解尿素，在農(nóng)業(yè)、食品加工業(yè)和污水處理中用途廣

泛。例如，飲料酒在生產(chǎn)過程中會(huì)產(chǎn)生少量尿素，酒體呈酸性，廠家常用服酶分解酒體中

的尿素以改善飲料酒的品質(zhì)。請回答下列問題：

（1）從土壤中篩選產(chǎn)胭酶菌時(shí)，所配制的培養(yǎng)基以為唯一氮源。與固體培養(yǎng)基相

比，液體培養(yǎng)基更適于富集培養(yǎng)的原因是___________________________________________

（2）在微生物培養(yǎng)過程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是o復(fù)篩酸

性服酶菌的培養(yǎng)基為中性固體培養(yǎng)基，以酚紅為指示劑，在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表

面的菌液量不宜過多的原因是

_______________________________________________________o在挑選時(shí)，應(yīng)選擇

（填”有紅色圈的菌落”或“無紅色圈的菌落”）0

（3）在純化該菌時(shí)，為了得到單菌落，常用的接種方法有。

為了進(jìn)行計(jì)數(shù)，某同學(xué)吸取菌液1mL稀釋1000倍，然后吸取稀釋后的菌液0.2mL,接種

于固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。一段時(shí)間后觀察菌落并計(jì)數(shù)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，得到三個(gè)培養(yǎng)皿中菌

落數(shù)分別是78、88、74,則該菌的濃度是________個(gè)細(xì)菌/mL。若需較長時(shí)間保存該菌種,

可用的方法是o

解析：（1）配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌。

與固體培養(yǎng)基相比，液體培養(yǎng)基與菌體充分接觸，菌體繁殖快，更適于富集培養(yǎng)。（2）在微

生物培養(yǎng)過程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。復(fù)篩酸性腺酶菌的培養(yǎng)

基為中性固體培養(yǎng)基，以酚紅為指示劑，在涂布平板時(shí)，菌液過多會(huì)使培養(yǎng)基表面的菌懸

液出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果，因此滴加到培養(yǎng)基表面的菌液量不宜過多。

麻醉將尿素分解為氨，氯使培養(yǎng)基pH升高，酚紅變紅，因此在挑選時(shí)，應(yīng)選擇XI000=

4X104個(gè)細(xì)菌/mL）。若需較長時(shí)間保存該菌種，可用甘油管藏法。

答案：（1）尿素培養(yǎng)基與菌體充分接觸，菌體繁殖快（2）防止外來雜菌的入侵菌液

過多會(huì)使培養(yǎng)基表面的菌懸液出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果有紅色圈的菌落

⑶平板劃線法和稀釋涂布平板法4X10'甘油管藏法

5.反硝化細(xì)菌能在無氧環(huán)境中將硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氮?dú)?2NO3+10e-+12H+

-N2O-N2),在處理工業(yè)污水、治理水體富營養(yǎng)化中具有重要作用?？蒲腥藛T想從一

污水處理廠的活性污泥中篩選分離出耐高溫(42C)的反硝化細(xì)菌(目的菌)，用于提升溫度較

高的工業(yè)污水的脫氮效率，具體流程如圖所示(BTB培養(yǎng)基初始pH=6.8,BTB是酸堿指示

劑，酸性條件下為黃色，中性條件下為綠色，堿性條件下為藍(lán)色)：

(l)BTB培養(yǎng)基滅菌后待平板凝固后，應(yīng)倒置放在超凈臺上，目的是

(2)將污泥樣品梯度稀釋后，使用(填工具)將樣液均勻涂布在BTB培養(yǎng)基上，

放在____