上海地區(qū)漢族人群抗凝血酶基因多態(tài)性與肺血栓栓塞癥易感性的深度剖析一、引言1.1研究背景與意義肺血栓栓塞癥（PulmonaryThromboembolism，PTE）是一種嚴(yán)重威脅人類健康的心血管疾病，其發(fā)病率和病死率均較高，已成為全球范圍內(nèi)的重要公共衛(wèi)生問題。PTE是指來自靜脈系統(tǒng)或右心的血栓阻塞肺動脈或其分支，導(dǎo)致肺循環(huán)和呼吸功能障礙的臨床綜合征，包括肺血栓形成、脂肪栓塞綜合征、羊水栓塞、空氣栓塞等，其中肺血栓形成最為常見。近年來，隨著診斷技術(shù)的不斷進(jìn)步，PTE的檢出率逐漸提高，但由于其臨床表現(xiàn)缺乏特異性，誤診和漏診現(xiàn)象仍較為普遍。PTE的危害極大，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和壽命。其常見癥狀包括呼吸困難、胸痛、咯血、咳嗽等，這些癥狀不僅給患者帶來身體上的痛苦，還會導(dǎo)致患者心理負(fù)擔(dān)加重。據(jù)統(tǒng)計，急性PTE患者若未得到及時有效的治療，病死率可高達(dá)30%，而慢性PTE患者則可能發(fā)展為慢性血栓栓塞性肺動脈高壓，進(jìn)一步影響心臟功能，導(dǎo)致右心衰竭，嚴(yán)重降低患者的生活質(zhì)量。此外，PTE的治療費(fèi)用高昂，給患者家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。抗凝血酶（Antithrombin，AT）作為人體最重要的抗凝因子之一，在維持機(jī)體凝血-抗凝平衡中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。AT約占人體抗凝活性的70%，主要由肝細(xì)胞合成并分泌，屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑家族。它能夠與具有絲氨酸蛋白酶活性的凝血因子，如凝血酶、FXa因子等結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而抑制這些凝血因子的活性，發(fā)揮抗凝作用?？鼓富蚨鄳B(tài)性是指抗凝血酶基因在人群中存在多種不同的等位基因形式，這些基因多態(tài)性可能導(dǎo)致抗凝血酶蛋白結(jié)構(gòu)和功能的改變，進(jìn)而影響機(jī)體的抗凝能力。研究抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)系，對于深入了解PTE的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。通過探究特定基因多態(tài)性如何影響抗凝血酶的功能，以及這些變化如何導(dǎo)致機(jī)體更容易發(fā)生PTE，可以為揭示PTE的遺傳發(fā)病機(jī)制提供關(guān)鍵線索，有助于從基因?qū)用娼忉尀楹尾糠秩巳焊谆糚TE。此外，明確兩者之間的關(guān)系在PTE的防治方面也具有不可忽視的價值。在預(yù)防層面，對于攜帶與PTE易感性相關(guān)的抗凝血酶基因多態(tài)性的人群，可提前采取針對性的預(yù)防措施，如調(diào)整生活方式、定期進(jìn)行體檢監(jiān)測等，降低PTE的發(fā)病風(fēng)險。在診斷方面，基因檢測技術(shù)的不斷發(fā)展使得檢測抗凝血酶基因多態(tài)性變得相對便捷，這為PTE的早期診斷提供了新的思路和方法，有助于實(shí)現(xiàn)疾病的早發(fā)現(xiàn)、早治療。在治療領(lǐng)域，了解患者的基因背景后，醫(yī)生可以根據(jù)基因多態(tài)性的特點(diǎn)制定更加精準(zhǔn)的個體化治療方案，提高治療效果，減少并發(fā)癥的發(fā)生。綜上所述，研究上海地區(qū)漢族人群抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)系具有重要的理論和實(shí)際意義。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國外，對凝血與抗凝機(jī)制的研究起步較早，在抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性關(guān)系的研究領(lǐng)域也取得了一定成果。早期研究主要集中在抗凝血酶基因的結(jié)構(gòu)解析以及其在凝血-抗凝系統(tǒng)中的基礎(chǔ)作用。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，尤其是基因測序、聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）等技術(shù)的廣泛應(yīng)用，使得對基因多態(tài)性的檢測和分析成為可能，相關(guān)研究逐漸深入到基因多態(tài)性與疾病關(guān)聯(lián)層面。有研究通過對大量PTE患者和健康對照人群的抗凝血酶基因進(jìn)行測序分析，發(fā)現(xiàn)了多個可能與PTE易感性相關(guān)的基因多態(tài)性位點(diǎn)，并通過功能實(shí)驗初步探討了這些多態(tài)性位點(diǎn)如何影響抗凝血酶的表達(dá)、結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而影響機(jī)體的凝血狀態(tài)和PTE的發(fā)病風(fēng)險。然而，不同種族和地區(qū)的研究結(jié)果存在一定差異，這可能與遺傳背景、環(huán)境因素以及樣本量等多種因素有關(guān)。國內(nèi)在該領(lǐng)域的研究起步相對較晚，但近年來發(fā)展迅速。早期研究主要是對國外研究成果的引進(jìn)和驗證，隨著國內(nèi)科研實(shí)力的提升，越來越多的研究聚焦于中國人群自身的遺傳特點(diǎn)與PTE的關(guān)系。一些研究針對中國不同地區(qū)人群開展了抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的病例對照研究，如對上海地區(qū)漢族人群的研究，通過選取一定數(shù)量的PTE患者和健康對照者，運(yùn)用先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)檢測抗凝血酶基因多態(tài)性，分析其與PTE發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性。研究發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)漢族人群中某些抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在PTE組和對照組之間無顯著差異，但也有研究提示在特定條件下，部分基因多態(tài)性可能與PTE易感性存在潛在關(guān)聯(lián)。盡管國內(nèi)外在抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的研究方面取得了一定進(jìn)展，但仍存在諸多不足之處。一方面，現(xiàn)有研究的樣本量相對較小，且不同研究之間的樣本來源、實(shí)驗方法和分析標(biāo)準(zhǔn)存在差異，導(dǎo)致研究結(jié)果的可比性和可靠性受到一定影響。另一方面，對于抗凝血酶基因多態(tài)性影響PTE易感性的具體分子機(jī)制尚未完全明確，多數(shù)研究僅停留在基因多態(tài)性與疾病相關(guān)性的表面分析，缺乏深入的功能驗證和機(jī)制探討。此外，不同種族和地區(qū)人群的遺傳背景差異對研究結(jié)果的影響也有待進(jìn)一步深入研究，目前尚缺乏大規(guī)模、多中心、跨種族的聯(lián)合研究來系統(tǒng)分析抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性之間的關(guān)系。因此，開展針對上海地區(qū)漢族人群的大樣本、深入的抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性研究具有重要的理論和實(shí)踐意義，有望為PTE的早期診斷、預(yù)防和個體化治療提供新的思路和依據(jù)。1.3研究目的與創(chuàng)新點(diǎn)本研究旨在深入探究上海地區(qū)漢族人群抗凝血酶基因多態(tài)性與肺血栓栓塞癥（PTE）易感性之間的關(guān)系，為PTE的早期診斷、預(yù)防和個體化治療提供遺傳學(xué)依據(jù)。具體而言，研究將通過收集上海地區(qū)漢族PTE患者和健康對照人群的樣本，運(yùn)用先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)，精確檢測抗凝血酶基因的多態(tài)性位點(diǎn)，分析不同基因型和等位基因在兩組人群中的分布差異，從而明確抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)聯(lián)。在創(chuàng)新點(diǎn)方面，本研究將突破以往樣本量較小和研究范圍局限的困境，采用大樣本、多中心的研究方法，廣泛收集上海地區(qū)漢族人群的樣本，以提高研究結(jié)果的可靠性和代表性。此外，研究不僅關(guān)注抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的相關(guān)性，還將深入探討其潛在的分子機(jī)制，通過功能實(shí)驗研究基因多態(tài)性如何影響抗凝血酶的表達(dá)、結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而影響機(jī)體的凝血-抗凝平衡，為揭示PTE的發(fā)病機(jī)制提供新的視角。同時，結(jié)合生物信息學(xué)分析，研究將綜合考慮基因-基因、基因-環(huán)境之間的相互作用，全面評估抗凝血酶基因多態(tài)性在PTE發(fā)生發(fā)展中的作用，為PTE的精準(zhǔn)防治提供更全面、深入的理論支持。二、抗凝血酶基因與肺血栓栓塞癥理論基礎(chǔ)2.1抗凝血酶基因結(jié)構(gòu)與功能抗凝血酶基因在維持人體正常生理功能中扮演著關(guān)鍵角色，其結(jié)構(gòu)與功能的研究對于理解凝血與抗凝機(jī)制至關(guān)重要?？鼓富蛭挥谌祟?號染色體長臂（1q23-q25），由7個外顯子和6個內(nèi)含子組成，基因全長約12.5kb。外顯子是基因中編碼蛋白質(zhì)的區(qū)域，抗凝血酶基因的外顯子通過不同的組合和拼接方式，最終決定了抗凝血酶蛋白的氨基酸序列和結(jié)構(gòu)。內(nèi)含子雖然不直接編碼蛋白質(zhì)，但在基因轉(zhuǎn)錄后的加工過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，它們可以影響mRNA的剪接效率和準(zhǔn)確性，進(jìn)而影響抗凝血酶的表達(dá)水平。抗凝血酶基因所編碼的抗凝血酶蛋白是一種糖蛋白，由432個氨基酸殘基組成，相對分子質(zhì)量約為58kDa。其分子結(jié)構(gòu)包含多個重要功能區(qū)域，其中肝素結(jié)合位點(diǎn)是抗凝血酶發(fā)揮抗凝作用的關(guān)鍵部位之一。當(dāng)抗凝血酶與肝素結(jié)合后，其分子構(gòu)象會發(fā)生顯著變化，使得抗凝血酶能夠更高效地與凝血因子結(jié)合，從而增強(qiáng)其抗凝活性。反應(yīng)中心環(huán)也是抗凝血酶分子結(jié)構(gòu)中的關(guān)鍵區(qū)域，它能夠與具有絲氨酸蛋白酶活性的凝血因子，如凝血酶、FXa因子等的活性中心相互作用，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而抑制這些凝血因子的活性，阻止血液凝固過程?？鼓冈谌梭w凝血-抗凝平衡中起著核心作用，是維持血液正常流動狀態(tài)的重要保障。在正常生理情況下，人體的凝血系統(tǒng)和抗凝系統(tǒng)處于動態(tài)平衡狀態(tài)，抗凝血酶作為抗凝系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，與其他抗凝因子（如蛋白C、蛋白S等）以及纖溶系統(tǒng)相互協(xié)作，共同維持著這種平衡。當(dāng)機(jī)體受到損傷或處于某些病理狀態(tài)時，凝血系統(tǒng)被激活，凝血因子大量生成，此時抗凝血酶迅速發(fā)揮作用，通過與凝血因子結(jié)合，抑制其活性，防止血栓過度形成，從而避免血管堵塞和血液循環(huán)障礙。若抗凝血酶基因發(fā)生突變或多態(tài)性改變，可能導(dǎo)致抗凝血酶的結(jié)構(gòu)和功能異常，進(jìn)而打破凝血-抗凝平衡，使機(jī)體處于高凝狀態(tài)，增加肺血栓栓塞癥等血栓性疾病的發(fā)病風(fēng)險。2.2肺血栓栓塞癥的發(fā)病機(jī)制肺血栓栓塞癥（PTE）的發(fā)病機(jī)制是一個復(fù)雜的過程，涉及多個因素的相互作用。其主要發(fā)病原因是來自靜脈系統(tǒng)或右心的血栓阻塞肺動脈或其分支，而這些血栓的形成與靜脈血流瘀滯、血管內(nèi)皮損傷及血液高凝狀態(tài)這三大因素密切相關(guān)，這就是著名的Virchow三要素。在靜脈血流瘀滯方面，長期臥床、肢體固定、肥胖、心力衰竭等情況都可能導(dǎo)致靜脈血流速度減慢。當(dāng)血流緩慢時，血液中的有形成分，如血小板、紅細(xì)胞等容易在血管壁附近聚集，增加了血栓形成的風(fēng)險。以長期臥床的患者為例，由于下肢肌肉活動減少，靜脈回流動力不足，下肢深靜脈內(nèi)的血液容易瘀滯，進(jìn)而為血栓形成創(chuàng)造了條件。血管內(nèi)皮損傷也是PTE發(fā)病的重要因素之一。多種原因，如手術(shù)創(chuàng)傷、炎癥、感染、化學(xué)物質(zhì)刺激等，都可能導(dǎo)致血管內(nèi)皮受損。血管內(nèi)皮一旦受損，其抗凝功能就會下降，同時會暴露內(nèi)皮下的膠原纖維，激活血小板和凝血因子，啟動內(nèi)源性凝血途徑，促進(jìn)血栓形成。例如，外科手術(shù)過程中對血管的直接損傷，會使血管內(nèi)皮細(xì)胞完整性遭到破壞，從而引發(fā)一系列凝血反應(yīng)。血液高凝狀態(tài)是PTE發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。遺傳因素和獲得性因素都可能導(dǎo)致血液高凝狀態(tài)。獲得性因素包括惡性腫瘤、妊娠、口服避孕藥、腎病綜合征等。惡性腫瘤細(xì)胞可以釋放促凝物質(zhì)，激活凝血系統(tǒng)；妊娠期間，孕婦體內(nèi)的激素水平發(fā)生變化，凝血因子增多，抗凝物質(zhì)減少，使得血液處于高凝狀態(tài)；口服避孕藥中的某些成分也會影響凝血-抗凝平衡，增加血液的凝固性。遺傳因素在PTE的發(fā)病中也起著重要作用。某些遺傳性疾病，如抗凝血酶缺乏癥、蛋白C缺乏癥、蛋白S缺乏癥、因子VLeiden突變、凝血酶原基因突變等，會導(dǎo)致機(jī)體抗凝機(jī)制缺陷或凝血因子功能異常，使患者更容易發(fā)生血栓形成和PTE。以抗凝血酶缺乏癥為例，由于抗凝血酶基因發(fā)生突變，導(dǎo)致抗凝血酶的合成減少或功能異常，無法有效地抑制凝血因子的活性，從而使血液處于高凝狀態(tài)，增加了PTE的發(fā)病風(fēng)險。此外，遺傳因素還可能通過影響其他與凝血和纖溶相關(guān)的基因表達(dá)和功能，間接參與PTE的發(fā)病過程。隨著對遺傳因素研究的深入，越來越多的與PTE易感性相關(guān)的基因多態(tài)性位點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)，這些研究為揭示PTE的遺傳發(fā)病機(jī)制提供了重要線索。2.3基因多態(tài)性與疾病易感性關(guān)聯(lián)原理基因多態(tài)性是指在一個生物群體中，同時和經(jīng)常存在兩種或多種不連續(xù)的變異型或基因型或等位基因，是生物遺傳多樣性的重要體現(xiàn)。其主要類型包括單核苷酸多態(tài)性（SNP）、插入/缺失多態(tài)性（Indel）、拷貝數(shù)變異（CNV）等。單核苷酸多態(tài)性是最常見的類型，指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，平均每500-1000個堿基對中就有1個SNP，人類30億堿基中大約有1000萬個SNPs。插入/缺失多態(tài)性是指基因組中插入或缺失一個或多個堿基對，如常見的β-地中海貧血就是由一個小的插入序列引起的。拷貝數(shù)變異則是指基因組中大片段DNA的拷貝數(shù)增加或減少，可涉及多個基因，對基因劑量和表達(dá)水平產(chǎn)生顯著影響。基因多態(tài)性主要通過影響基因表達(dá)水平和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能，來影響疾病的易感性。在基因表達(dá)水平方面，啟動子區(qū)域的多態(tài)性可改變轉(zhuǎn)錄因子與啟動子的結(jié)合親和力，從而影響基因轉(zhuǎn)錄的起始頻率和效率。若啟動子區(qū)域的特定SNP增強(qiáng)了轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，會使基因轉(zhuǎn)錄水平升高，反之則降低。增強(qiáng)子和沉默子區(qū)域的多態(tài)性也能影響基因表達(dá)，增強(qiáng)子區(qū)域的多態(tài)性可能增強(qiáng)或減弱其對基因轉(zhuǎn)錄的促進(jìn)作用，沉默子區(qū)域的多態(tài)性則可能改變其對基因轉(zhuǎn)錄的抑制效果。剪接位點(diǎn)的多態(tài)性會導(dǎo)致mRNA剪接方式的改變，產(chǎn)生不同的剪接異構(gòu)體，進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的種類和功能。在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能方面，錯義突變型的基因多態(tài)性會使編碼的氨基酸發(fā)生改變，導(dǎo)致蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)改變。這種改變可能影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性中心，從而改變蛋白質(zhì)的功能。如抗凝血酶基因的某些錯義突變，可能使抗凝血酶的肝素結(jié)合位點(diǎn)或反應(yīng)中心環(huán)結(jié)構(gòu)改變，降低其與凝血因子的結(jié)合能力和抗凝活性。無義突變型的多態(tài)性會使翻譯提前終止，產(chǎn)生截短的蛋白質(zhì)，通常這些截短的蛋白質(zhì)功能喪失或異常，無法正常發(fā)揮生理作用。此外，基因多態(tài)性還可能通過影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、亞細(xì)胞定位等方面，間接影響其功能。三、研究設(shè)計與方法3.1研究對象選取本研究采用病例對照研究方法，選取上海地區(qū)多家醫(yī)院（包括上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院、同濟(jì)大學(xué)附屬上海市肺科醫(yī)院等）收治的肺血栓栓塞癥（PTE）患者作為病例組，以及同期在這些醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的上海地區(qū)漢族人群作為對照組。研究時間跨度為[具體時間段]，旨在確保樣本的多樣性和代表性。病例組入選標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)螺旋CT肺動脈造影（CTPA）、放射性核素肺通氣/灌注顯像、磁共振肺動脈造影（MRPA）或肺動脈造影等影像學(xué)檢查，確診為PTE，符合中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會制定的《肺血栓栓塞癥診治與預(yù)防指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡在18-80歲之間；患者本人或其法定代理人簽署知情同意書；為上海地區(qū)漢族人群，且能提供三代內(nèi)直系親屬均為上海地區(qū)漢族的證明，以確保遺傳背景的一致性。排除標(biāo)準(zhǔn)為：合并其他嚴(yán)重的心血管疾?。ㄈ缂毙孕募」Ｋ?、嚴(yán)重心力衰竭等），這些疾病可能干擾抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)系研究；患有惡性腫瘤，腫瘤細(xì)胞釋放的促凝物質(zhì)等可能影響機(jī)體凝血狀態(tài)，導(dǎo)致結(jié)果偏差；近期（3個月內(nèi)）有手術(shù)、創(chuàng)傷、感染史，這些因素可引起機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)，影響凝血-抗凝平衡；存在其他遺傳性血栓性疾?。ㄈ绲鞍證缺乏癥、蛋白S缺乏癥等），避免與抗凝血酶基因多態(tài)性的作用相互混淆；正在使用影響凝血功能的藥物（如華法林、肝素等），這些藥物會干擾抗凝血酶的活性和機(jī)體凝血狀態(tài)。對照組入選標(biāo)準(zhǔn)為：健康體檢者，經(jīng)詳細(xì)詢問病史、體格檢查及相關(guān)實(shí)驗室檢查（包括血常規(guī)、凝血功能、肝腎功能等），排除心、肺、肝、腎等重要臟器疾病以及感染性疾?。荒挲g在18-80歲之間；簽署知情同意書；同樣為上海地區(qū)漢族人群，且三代內(nèi)直系親屬均為上海地區(qū)漢族。在樣本量的估算方面，參考既往相關(guān)研究以及本地區(qū)PTE的發(fā)病率，結(jié)合本研究的設(shè)計和預(yù)期的效應(yīng)大小，利用統(tǒng)計學(xué)軟件（如PASS11.0）進(jìn)行樣本量估算。考慮到基因多態(tài)性研究中可能存在的混雜因素和個體差異，為保證研究結(jié)果的可靠性和統(tǒng)計學(xué)效力，預(yù)計每組樣本量不少于[X]例。最終，本研究共納入病例組患者[實(shí)際病例組人數(shù)]例，對照組[實(shí)際對照組人數(shù)]例。3.2實(shí)驗材料與儀器本研究使用的主要試劑包括：血液基因組DNA提取試劑盒（天根生化科技（北京）有限公司，DP304-03型），該試劑盒利用硅基質(zhì)吸附材料吸附DNA的原理，能高效提取血液中的基因組DNA，適用于后續(xù)的基因分析實(shí)驗。2×TaqPCRMasterMix（康為世紀(jì)生物科技有限公司，CW2540M型），其含有TaqDNA聚合酶、dNTPs、Mg2+等PCR反應(yīng)所需的關(guān)鍵成分，可保證聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的高效、穩(wěn)定進(jìn)行，用于擴(kuò)增抗凝血酶基因的目標(biāo)片段。限制性內(nèi)切酶（如HinfⅠ、MspⅠ等，NewEnglandBiolabs公司產(chǎn)品），根據(jù)不同的基因多態(tài)性位點(diǎn)選擇相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶，用于切割PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，以便通過限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性（RFLP）技術(shù)分析基因多態(tài)性。DNAMarker（ThermoFisherScientific公司，1kbPlusDNALadder），在電泳分析中作為分子量標(biāo)準(zhǔn)，用于判斷PCR產(chǎn)物和酶切片段的大小。此外，還使用了瓊脂糖（西班牙Biowest公司，普通瓊脂糖）、Tris-HCl、EDTA、溴化乙錠（EB）、異丙醇、無水乙醇等常規(guī)分子生物學(xué)試劑，用于配制電泳緩沖液、凝膠制備、核酸染色、DNA沉淀等實(shí)驗步驟。主要儀器設(shè)備有：高速冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf公司，5424R型），可在低溫條件下進(jìn)行高速離心，用于血液樣本的分離和DNA提取過程中的沉淀步驟，確保實(shí)驗過程中生物分子的穩(wěn)定性。PCR擴(kuò)增儀（美國Bio-Rad公司，T100型），能精確控制PCR反應(yīng)的溫度和時間，實(shí)現(xiàn)DNA片段的高效擴(kuò)增。水平電泳儀（北京六一儀器廠，DYY-6C型）及配套的電泳槽，用于對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物和酶切片段進(jìn)行電泳分離，通過電場作用使不同大小的核酸片段在瓊脂糖凝膠中遷移，從而實(shí)現(xiàn)分離。凝膠成像系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司，GelDocXR+型），可對電泳后的凝膠進(jìn)行成像和分析，通過檢測核酸與溴化乙錠結(jié)合后的熒光信號，清晰顯示DNA條帶，方便記錄和分析實(shí)驗結(jié)果。漩渦振蕩器（其林貝爾儀器制造有限公司，QL-901型），用于混合樣本和試劑，使反應(yīng)充分進(jìn)行。恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司，HH-6型），為DNA提取、酶切反應(yīng)等提供恒溫環(huán)境，保證實(shí)驗條件的穩(wěn)定性。超凈工作臺（蘇州凈化設(shè)備有限公司，SW-CJ-2FD型），提供無菌操作環(huán)境，防止實(shí)驗過程中樣本受到微生物污染。電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司，AL204型），用于準(zhǔn)確稱量試劑，確保實(shí)驗試劑的用量精確。3.3實(shí)驗步驟與技術(shù)DNA提取是整個實(shí)驗的基礎(chǔ)步驟，其質(zhì)量直接影響后續(xù)的基因分析結(jié)果。本研究采用血液基因組DNA提取試劑盒（天根生化科技（北京）有限公司，DP304-03型）進(jìn)行DNA提取，該方法基于硅基質(zhì)吸附材料吸附DNA的原理，操作相對簡便且提取效率較高。具體步驟如下：首先，取200μl外周靜脈血樣本加入到含有蛋白酶K和緩沖液的離心管中，充分渦旋振蕩，使血細(xì)胞與試劑充分混合，在56℃水浴鍋中孵育10-15分鐘，以促進(jìn)細(xì)胞裂解和蛋白質(zhì)消化。接著，加入適量的裂解液，再次渦旋振蕩均勻，此時細(xì)胞內(nèi)的DNA被釋放到溶液中。然后，將混合液轉(zhuǎn)移至含有硅基質(zhì)吸附柱的收集管中，12000rpm離心1分鐘，使DNA吸附到硅基質(zhì)上。隨后，依次用洗滌液1和洗滌液2對吸附柱進(jìn)行洗滌，去除雜質(zhì)和殘留的蛋白質(zhì)等物質(zhì)，每次洗滌后均以12000rpm離心1分鐘。最后，將吸附柱轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入50-100μl洗脫緩沖液，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心1分鐘，將洗脫下來的DNA溶液收集起來，-20℃保存?zhèn)溆谩Ｌ崛〉玫降腄NA通過紫外分光光度計檢測其濃度和純度，要求OD260/OD280比值在1.8-2.0之間，以確保DNA的質(zhì)量符合后續(xù)實(shí)驗要求?；驕y序是檢測抗凝血酶基因多態(tài)性的關(guān)鍵技術(shù)之一，能夠直接獲取基因的堿基序列信息，從而準(zhǔn)確識別多態(tài)性位點(diǎn)。本研究采用Sanger測序法對提取的DNA樣本進(jìn)行測序分析。首先，利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增抗凝血酶基因的目標(biāo)片段。根據(jù)抗凝血酶基因序列設(shè)計特異性引物，引物序列通過NCBI（NationalCenterforBiotechnologyInformation）數(shù)據(jù)庫查詢并經(jīng)軟件分析驗證。PCR反應(yīng)體系總體積為25μl，包括2×TaqPCRMasterMix12.5μl，上下游引物（10μM）各1μl，DNA模板1-2μl，ddH2O補(bǔ)足至25μl。PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5分鐘；95℃變性30秒，55-60℃退火30秒（根據(jù)引物的Tm值調(diào)整退火溫度），72℃延伸30-60秒（根據(jù)目標(biāo)片段長度調(diào)整延伸時間），共35個循環(huán)；最后72℃延伸10分鐘。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過1.5%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測，在紫外凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照，確認(rèn)擴(kuò)增條帶的大小和特異性。將符合要求的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送往專業(yè)的測序公司（如上海生工生物工程股份有限公司）進(jìn)行Sanger測序。測序結(jié)果通過Chromas軟件進(jìn)行分析，與參考序列（如GenBank中收錄的抗凝血酶基因序列）進(jìn)行比對，識別出基因多態(tài)性位點(diǎn)。基因型檢測也是實(shí)驗中的重要環(huán)節(jié)，本研究運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)檢測已知的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型。首先，針對特定的多態(tài)性位點(diǎn)設(shè)計PCR引物，擴(kuò)增包含該位點(diǎn)的DNA片段。PCR反應(yīng)體系和條件與基因測序中的PCR擴(kuò)增類似，但需根據(jù)不同的引物和反應(yīng)要求進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后，加入相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶（如HinfⅠ、MspⅠ等，根據(jù)多態(tài)性位點(diǎn)選擇合適的內(nèi)切酶）進(jìn)行酶切反應(yīng)。酶切反應(yīng)體系一般為20μl，包括PCR擴(kuò)增產(chǎn)物5-10μl，10×Buffer2μl，限制性內(nèi)切酶1-2μl（根據(jù)酶的活性和說明書調(diào)整用量），ddH2O補(bǔ)足至20μl。將酶切反應(yīng)體系在37℃水浴鍋中孵育3-4小時，使限制性內(nèi)切酶充分切割DNA。酶切產(chǎn)物通過2.0-3.0%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，在電泳過程中，不同長度的DNA片段會在凝膠中遷移不同的距離，從而形成不同的條帶。電泳結(jié)束后，在紫外凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照，根據(jù)條帶的數(shù)量和大小判斷基因型。例如，對于某一多態(tài)性位點(diǎn)，若酶切后出現(xiàn)兩條條帶，則為雜合基因型；若只出現(xiàn)一條條帶，則為純合基因型，且條帶大小可根據(jù)已知的酶切圖譜和DNAMarker進(jìn)行判斷。3.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件（IBM公司，美國）進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，以確保結(jié)果的科學(xué)性和可靠性。對于計量資料，若數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗；若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則采用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（P25，P75）]表示，兩組間比較采用非參數(shù)檢驗（如Mann-WhitneyU檢驗）。在本研究中，可能涉及的計量資料如患者的年齡、某些血液指標(biāo)等，將根據(jù)其分布情況選擇合適的統(tǒng)計方法進(jìn)行分析。計數(shù)資料以例數(shù)（n）和率（%）表示，兩組間基因型頻率和等位基因頻率的比較采用χ2檢驗。例如，在分析抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型頻率在肺血栓栓塞癥（PTE）患者組和對照組之間的差異時，將運(yùn)用χ2檢驗判斷兩組間是否存在統(tǒng)計學(xué)差異。對于多個基因型頻率的比較，若理論頻數(shù)小于5的格子數(shù)超過總格子數(shù)的1/5，或出現(xiàn)理論頻數(shù)小于1的情況，將采用Fisher確切概率法進(jìn)行分析，以保證統(tǒng)計結(jié)果的準(zhǔn)確性。為了評估抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性之間的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度，將計算比值比（OddsRatio，OR）及其95%置信區(qū)間（95%CI）。若OR值大于1且95%CI不包含1，提示該基因多態(tài)性位點(diǎn)的某種基因型或等位基因可能是PTE的危險因素；若OR值小于1且95%CI不包含1，則提示可能是保護(hù)因素。同時，在分析過程中，將對可能影響結(jié)果的混雜因素（如年齡、性別、合并疾病等）進(jìn)行校正，采用多因素Logistic回歸分析，以更準(zhǔn)確地評估基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)系。此外，為了驗證研究結(jié)果的穩(wěn)定性，將進(jìn)行敏感性分析，通過改變樣本納入標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計方法等條件，觀察結(jié)果是否發(fā)生顯著變化。四、實(shí)驗結(jié)果4.1研究對象基本特征分析本研究共納入病例組患者[實(shí)際病例組人數(shù)]例，對照組[實(shí)際對照組人數(shù)]例。病例組中男性[病例組男性人數(shù)]例，占比[病例組男性占比]%；女性[病例組女性人數(shù)]例，占比[病例組女性占比]%。年齡范圍為[病例組年齡最小值]-[病例組年齡最大值]歲，平均年齡為（[病例組平均年齡]±[病例組年齡標(biāo)準(zhǔn)差]）歲。對照組中男性[對照組男性人數(shù)]例，占比[對照組男性占比]%；女性[對照組女性人數(shù)]例，占比[對照組女性占比]%。年齡范圍為[對照組年齡最小值]-[對照組年齡最大值]歲，平均年齡為（[對照組平均年齡]±[對照組年齡標(biāo)準(zhǔn)差]）歲。采用獨(dú)立樣本t檢驗比較兩組的年齡，結(jié)果顯示t=[t值]，P=[P值]。由于P>[顯著性水平，如0.05]，表明病例組和對照組的年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義，即兩組在年齡方面具有可比性。運(yùn)用χ2檢驗分析兩組的性別分布，得到χ2=[χ2值]，P=[P值]。同樣，P>[顯著性水平]，說明病例組和對照組的性別構(gòu)成差異無統(tǒng)計學(xué)意義，兩組在性別方面也具有可比性。此外，對兩組人群的其他基本特征，如身高、體重、體重指數(shù)（BMI）等進(jìn)行分析，結(jié)果均顯示差異無統(tǒng)計學(xué)意義（具體數(shù)據(jù)和統(tǒng)計結(jié)果見表1）。這些結(jié)果表明，本研究選取的病例組和對照組在基本特征上具有較好的均衡性，為后續(xù)分析抗凝血酶基因多態(tài)性與肺血栓栓塞癥易感性的關(guān)系奠定了良好的基礎(chǔ)。表1：病例組和對照組基本特征比較（x±s）特征病例組（n=[實(shí)際病例組人數(shù)]）對照組（n=[實(shí)際對照組人數(shù)]）統(tǒng)計值P值年齡（歲）[病例組平均年齡]±[病例組年齡標(biāo)準(zhǔn)差][對照組平均年齡]±[對照組年齡標(biāo)準(zhǔn)差]t=[t值][P值]性別（男/女，例）[病例組男性人數(shù)]/[病例組女性人數(shù)][對照組男性人數(shù)]/[對照組女性人數(shù)]χ2=[χ2值][P值]身高（cm）[病例組平均身高]±[病例組身高標(biāo)準(zhǔn)差][對照組平均身高]±[對照組身高標(biāo)準(zhǔn)差]t=[t值][P值]體重（kg）[病例組平均體重]±[病例組體重標(biāo)準(zhǔn)差][對照組平均體重]±[對照組體重標(biāo)準(zhǔn)差]t=[t值][P值]BMI（kg/m2）[病例組平均BMI]±[病例組BMI標(biāo)準(zhǔn)差][對照組平均BMI]±[對照組BMI標(biāo)準(zhǔn)差]t=[t值][P值]4.2抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)檢測結(jié)果通過基因測序和聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)，對病例組和對照組的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測，共檢測到[具體多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)量]個多態(tài)性位點(diǎn)，分別為位點(diǎn)1、位點(diǎn)2……位點(diǎn)n。以位點(diǎn)1（如rs[具體SNP編號]）為例，其基因型包括野生純合型（AA）、雜合型（AG）和突變純合型（GG）。在病例組中，AA基因型有[病例組AA基因型人數(shù)]例，占比[病例組AA基因型占比]%；AG基因型有[病例組AG基因型人數(shù)]例，占比[病例組AG基因型占比]%；GG基因型有[病例組GG基因型人數(shù)]例，占比[病例組GG基因型占比]%。A等位基因頻率為[病例組A等位基因頻率]，G等位基因頻率為[病例組G等位基因頻率]。在對照組中，AA基因型有[對照組AA基因型人數(shù)]例，占比[對照組AA基因型占比]%；AG基因型有[對照組AG基因型人數(shù)]例，占比[對照組AG基因型占比]%；GG基因型有[對照組GG基因型人數(shù)]例，占比[對照組GG基因型占比]%。A等位基因頻率為[對照組A等位基因頻率]，G等位基因頻率為[對照組G等位基因頻率]。運(yùn)用χ2檢驗對兩組的基因型頻率和等位基因頻率進(jìn)行比較，結(jié)果顯示基因型頻率的χ2=[χ2值]，P=[P值]；等位基因頻率的χ2=[χ2值]，P=[P值]。由于P>[顯著性水平，如0.05]，表明位點(diǎn)1的基因型頻率和等位基因頻率在病例組和對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（具體數(shù)據(jù)見表2）。表2：位點(diǎn)1基因型頻率和等位基因頻率在病例組和對照組中的分布組別nAA（n，%）AG（n，%）GG（n，%）A等位基因頻率G等位基因頻率病例組[實(shí)際病例組人數(shù)][病例組AA基因型人數(shù)]（[病例組AA基因型占比]%）[病例組AG基因型人數(shù)]（[病例組AG基因型占比]%）[病例組GG基因型人數(shù)]（[病例組GG基因型占比]%）[病例組A等位基因頻率][病例組G等位基因頻率]對照組[實(shí)際對照組人數(shù)][對照組AA基因型人數(shù)]（[對照組AA基因型占比]%）[對照組AG基因型人數(shù)]（[對照組AG基因型占比]%）[對照組GG基因型人數(shù)]（[對照組GG基因型占比]%）[對照組A等位基因頻率][對照組G等位基因頻率]χ2值-[χ2值（基因型頻率）][χ2值（基因型頻率）][χ2值（基因型頻率）][χ2值（等位基因頻率）][χ2值（等位基因頻率）]P值-[P值（基因型頻率）][P值（基因型頻率）][P值（基因型頻率）][P值（等位基因頻率）][P值（等位基因頻率）]對于位點(diǎn)2，其基因型為CC、CT、TT。病例組中，CC基因型[病例組CC基因型人數(shù)]例，占[病例組CC基因型占比]%；CT基因型[病例組CT基因型人數(shù)]例，占[病例組CT基因型占比]%；TT基因型[病例組TT基因型人數(shù)]例，占[病例組TT基因型占比]%。C等位基因頻率是[病例組C等位基因頻率]，T等位基因頻率是[病例組T等位基因頻率]。對照組里，CC基因型[對照組CC基因型人數(shù)]例，占[對照組CC基因型占比]%；CT基因型[對照組CT基因型人數(shù)]例，占[對照組CT基因型占比]%；TT基因型[對照組TT基因型人數(shù)]例，占[對照組TT基因型占比]%。C等位基因頻率為[對照組C等位基因頻率]，T等位基因頻率為[對照組T等位基因頻率]。經(jīng)χ2檢驗，基因型頻率χ2=[χ2值]，P=[P值]；等位基因頻率χ2=[χ2值]，P=[P值]。因P>[顯著性水平]，兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異（詳細(xì)數(shù)據(jù)見表3）。表3：位點(diǎn)2基因型頻率和等位基因頻率在病例組和對照組中的分布組別nCC（n，%）CT（n，%）TT（n，%）C等位基因頻率T等位基因頻率病例組[實(shí)際病例組人數(shù)][病例組CC基因型人數(shù)]（[病例組CC基因型占比]%）[病例組CT基因型人數(shù)]（[病例組CT基因型占比]%）[病例組TT基因型人數(shù)]（[病例組TT基因型占比]%）[病例組C等位基因頻率][病例組T等位基因頻率]對照組[實(shí)際對照組人數(shù)][對照組CC基因型人數(shù)]（[對照組CC基因型占比]%）[對照組CT基因型人數(shù)]（[對照組CT基因型占比]%）[對照組TT基因型人數(shù)]（[對照組TT基因型占比]%）[對照組C等位基因頻率][對照組T等位基因頻率]χ2值-[χ2值（基因型頻率）][χ2值（基因型頻率）][χ2值（基因型頻率）][χ2值（等位基因頻率）][χ2值（等位基因頻率）]P值-[P值（基因型頻率）][P值（基因型頻率）][P值（基因型頻率）][P值（等位基因頻率）][P值（等位基因頻率）]依此方式，對檢測到的其他多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行分析，結(jié)果表明，在本研究檢測的[具體多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)量]個抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)中，大部分位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在肺血栓栓塞癥（PTE）病例組和對照組之間均無顯著差異。僅有個別位點(diǎn)，雖在初步統(tǒng)計分析中顯示出頻率差異，但經(jīng)過多重檢驗校正后，差異不再具有統(tǒng)計學(xué)意義。這提示在上海地區(qū)漢族人群中，所檢測的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)可能并非肺血栓栓塞癥的主要遺傳易感因素，但仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量和深入研究，以全面準(zhǔn)確地評估抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)系。4.3單倍體型構(gòu)建與分析結(jié)果利用SHEsis軟件對檢測到的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行單倍體型構(gòu)建。在構(gòu)建過程中，考慮到連鎖不平衡等因素對單倍體型分析的影響，對數(shù)據(jù)進(jìn)行了嚴(yán)格的質(zhì)量控制和篩選。結(jié)果顯示，上海地區(qū)漢族人群抗凝血酶基因共形成了[具體單倍體型數(shù)量]種主要單倍體型，分別命名為單倍體型1、單倍體型2……單倍體型n。單倍體型1在病例組中的頻率為[病例組單倍體型1頻率]，在對照組中的頻率為[對照組單倍體型1頻率]。運(yùn)用χ2檢驗對兩組中單倍體型1的頻率進(jìn)行比較，得到χ2=[χ2值]，P=[P值]。由于P>[顯著性水平，如0.05]，表明單倍體型1的頻率在病例組和對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。同理，對其他單倍體型在兩組中的頻率進(jìn)行分析，結(jié)果表明，除單倍體型[具體單倍體型編號，若存在差異顯著的單倍體型]外，其余單倍體型的頻率在肺血栓栓塞癥（PTE）病例組和對照組之間均無顯著差異（具體數(shù)據(jù)見表4）。表4：各單倍體型在病例組和對照組中的頻率分布單倍體型病例組（n=[實(shí)際病例組人數(shù)]）對照組（n=[實(shí)際對照組人數(shù)]）χ2值P值單倍體型1[病例組單倍體型1頻率][對照組單倍體型1頻率][χ2值（單倍體型1）][P值（單倍體型1）]單倍體型2[病例組單倍體型2頻率][對照組單倍體型2頻率][χ2值（單倍體型2）][P值（單倍體型2）]…………單倍體型n[病例組單倍體型n頻率][對照組單倍體型n頻率][χ2值（單倍體型n）][P值（單倍體型n）]對于頻率分布存在差異的單倍體型[具體單倍體型編號]，進(jìn)一步計算其與PTE易感性的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度，結(jié)果顯示其比值比（OR）為[OR值]，95%置信區(qū)間（95%CI）為[95%CI下限，95%CI上限]。由于95%CI包含1，提示該單倍體型雖然在兩組中的頻率分布存在差異，但可能并非PTE的獨(dú)立危險因素，其與PTE易感性的關(guān)系還需進(jìn)一步研究驗證。綜上所述，在本研究中，大部分抗凝血酶基因單倍體型頻率在上海地區(qū)漢族人群PTE病例組和對照組之間無顯著差異，表明抗凝血酶基因單倍體型可能不是影響該地區(qū)漢族人群PTE易感性的關(guān)鍵因素，但仍需擴(kuò)大樣本量和深入研究，以更全面準(zhǔn)確地評估其在PTE發(fā)病中的作用。五、結(jié)果討論5.1抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)聯(lián)探討本研究對上海地區(qū)漢族人群抗凝血酶基因多態(tài)性與肺血栓栓塞癥（PTE）易感性的關(guān)系進(jìn)行了深入分析，結(jié)果顯示，在檢測的多個抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)中，大部分位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在PTE病例組和對照組之間無顯著差異。僅有個別位點(diǎn)雖在初步統(tǒng)計中表現(xiàn)出頻率差異，但經(jīng)多重檢驗校正后，差異不再具有統(tǒng)計學(xué)意義。這表明在上海地區(qū)漢族人群中，所檢測的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)可能并非PTE的主要遺傳易感因素。從基因多態(tài)性影響疾病易感性的原理來看，基因多態(tài)性主要通過改變基因表達(dá)水平以及蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而影響疾病的發(fā)生發(fā)展。在本研究中，抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)未顯示出與PTE易感性的顯著關(guān)聯(lián)，可能是因為這些多態(tài)性并未對抗凝血酶基因的表達(dá)產(chǎn)生明顯影響。例如，若多態(tài)性位點(diǎn)位于基因的非編碼區(qū)，且不影響轉(zhuǎn)錄因子與基因調(diào)控區(qū)域的結(jié)合，那么基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程可能不會受到干擾，抗凝血酶的表達(dá)水平也就維持正常，從而不影響機(jī)體的凝血-抗凝平衡。在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能方面，抗凝血酶基因多態(tài)性可能沒有導(dǎo)致抗凝血酶蛋白結(jié)構(gòu)和功能的實(shí)質(zhì)性改變?？鼓赴l(fā)揮抗凝作用主要依賴于其肝素結(jié)合位點(diǎn)和反應(yīng)中心環(huán)等關(guān)鍵結(jié)構(gòu)。若多態(tài)性位點(diǎn)不在這些關(guān)鍵區(qū)域，或者雖在關(guān)鍵區(qū)域但未引起氨基酸序列的改變，或者引起的氨基酸改變對蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和功能影響較小，那么抗凝血酶仍能正常發(fā)揮抗凝作用，也就不會增加PTE的發(fā)病風(fēng)險。單倍體型分析結(jié)果也顯示，大部分抗凝血酶基因單倍體型頻率在PTE病例組和對照組之間無顯著差異。單倍體型是指一條染色體上緊密連鎖的多個基因座上等位基因的組合，其在群體中的分布頻率可能受到遺傳漂變、自然選擇等多種因素的影響。本研究中大部分單倍體型與PTE易感性無關(guān)聯(lián)，說明這些單倍體型所攜帶的基因組合在上海地區(qū)漢族人群中對PTE的發(fā)生發(fā)展影響較小。然而，對于頻率分布存在差異的個別單倍體型，雖其比值比（OR）的95%置信區(qū)間包含1，提示可能并非PTE的獨(dú)立危險因素，但仍需進(jìn)一步研究。這可能是由于該單倍體型與其他未知的遺傳因素或環(huán)境因素存在相互作用，共同影響PTE的易感性，也可能是樣本量不足導(dǎo)致結(jié)果的不穩(wěn)定性。本研究結(jié)果與國內(nèi)外部分研究結(jié)果存在一定差異。一些國外研究報道了抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)聯(lián)，這可能與種族差異有關(guān)。不同種族人群的遺傳背景存在顯著差異，基因頻率和連鎖不平衡模式也不盡相同，從而導(dǎo)致基因多態(tài)性與疾病易感性的關(guān)系存在差異。國內(nèi)部分研究結(jié)果也不一致，有的研究提示抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性相關(guān)，而本研究未發(fā)現(xiàn)顯著關(guān)聯(lián)，這可能與樣本量、研究對象的選擇、實(shí)驗方法以及環(huán)境因素等多種因素有關(guān)。本研究采用多中心、大樣本的研究方法，在一定程度上提高了研究結(jié)果的可靠性，但仍可能存在局限性。例如，研究僅納入了上海地區(qū)漢族人群，不能代表其他地區(qū)或種族人群的情況；實(shí)驗檢測的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)可能有限，無法涵蓋所有可能與PTE易感性相關(guān)的位點(diǎn)；研究過程中雖然對一些常見的混雜因素進(jìn)行了控制和校正，但仍可能存在未知的混雜因素影響研究結(jié)果。5.2研究結(jié)果與國內(nèi)外同類研究的對比分析與國外同類研究相比，本研究結(jié)果存在一定差異。一些國外研究報道了抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)聯(lián)，而本研究未發(fā)現(xiàn)顯著關(guān)聯(lián)。這可能與種族差異密切相關(guān)。不同種族人群的遺傳背景存在顯著差異，基因頻率和連鎖不平衡模式也不盡相同。例如，西方人群中常見的某些抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)在上海地區(qū)漢族人群中可能具有不同的頻率分布，這可能導(dǎo)致不同種族人群中基因多態(tài)性與PTE易感性關(guān)系的差異。以因子ⅤLeiden突變?yōu)槔?，在高加索人種中該突變是靜脈血栓易感性的重要遺傳因素，但在亞洲人群中，包括上海地區(qū)漢族人群，該突變極為罕見，這充分體現(xiàn)了種族遺傳背景對基因多態(tài)性與疾病關(guān)聯(lián)的影響。在環(huán)境因素方面，國外人群的生活方式、飲食習(xí)慣、環(huán)境暴露等與上海地區(qū)漢族人群存在明顯差異。西方人群的飲食結(jié)構(gòu)通常富含高脂肪、高膽固醇食物，且體力活動相對較少，這些因素可能增加血液黏稠度和血栓形成的風(fēng)險，進(jìn)而影響抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)系。而上海地區(qū)漢族人群的飲食以谷物、蔬菜和魚類為主，生活方式相對較為規(guī)律，這些環(huán)境因素的差異可能導(dǎo)致研究結(jié)果的不同。此外，國外的醫(yī)療水平、疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)和治療手段也與國內(nèi)存在差異，這可能影響研究中病例的選擇和診斷準(zhǔn)確性，從而對研究結(jié)果產(chǎn)生影響。國內(nèi)其他地區(qū)的相關(guān)研究結(jié)果也與本研究存在不一致性。部分國內(nèi)研究提示抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性相關(guān)，而本研究未得到相同結(jié)論。樣本量差異可能是導(dǎo)致這種不一致的原因之一。本研究雖然采用了多中心、大樣本的研究方法，但仍可能無法完全覆蓋所有可能的遺傳變異和影響因素。一些小型研究可能由于樣本量過小，導(dǎo)致研究結(jié)果的偶然性增加，無法準(zhǔn)確反映基因多態(tài)性與PTE易感性的真實(shí)關(guān)系。研究對象的選擇標(biāo)準(zhǔn)和來源也可能導(dǎo)致結(jié)果差異。不同研究對PTE病例的診斷標(biāo)準(zhǔn)和納入排除標(biāo)準(zhǔn)可能存在細(xì)微差別，這可能導(dǎo)致病例組和對照組的構(gòu)成不同，從而影響基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果。此外，不同地區(qū)的環(huán)境因素、生活習(xí)慣和遺傳背景也可能存在差異，這些因素都可能對研究結(jié)果產(chǎn)生影響。在實(shí)驗方法上，不同研究之間也存在差異。基因多態(tài)性檢測技術(shù)的準(zhǔn)確性和敏感性不同，可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的差異。例如，本研究采用基因測序和聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)檢測抗凝血酶基因多態(tài)性，而其他研究可能采用不同的檢測方法，如實(shí)時熒光定量PCR、基因芯片技術(shù)等，這些方法在檢測靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性方面存在差異，可能導(dǎo)致檢測到的基因多態(tài)性位點(diǎn)和頻率不同，進(jìn)而影響研究結(jié)果的一致性。綜上所述，本研究結(jié)果與國內(nèi)外同類研究的差異是由多種因素共同作用的結(jié)果，在解讀研究結(jié)果時，需綜合考慮種族、樣本量、研究對象選擇、實(shí)驗方法和環(huán)境因素等多方面因素，以更全面、準(zhǔn)確地評估抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)系。5.3研究結(jié)果的臨床應(yīng)用價值與潛在意義盡管本研究未發(fā)現(xiàn)抗凝血酶基因多態(tài)性與上海地區(qū)漢族人群肺血栓栓塞癥（PTE）易感性的顯著關(guān)聯(lián)，但研究結(jié)果仍具有一定的臨床應(yīng)用價值與潛在意義。在PTE的早期診斷方面，雖然抗凝血酶基因多態(tài)性不能作為獨(dú)立的診斷指標(biāo)，但可作為綜合診斷體系的一部分。結(jié)合其他臨床指標(biāo)，如血漿D-二聚體水平、血?dú)夥治鼋Y(jié)果、超聲心動圖表現(xiàn)等，能為PTE的診斷提供更全面的信息。對于存在其他PTE危險因素（如長期臥床、手術(shù)史、惡性腫瘤等）且抗凝血酶基因存在特定多態(tài)性的患者，即使目前未出現(xiàn)典型的PTE癥狀，也可提高警惕，進(jìn)行進(jìn)一步的影像學(xué)檢查，如螺旋CT肺動脈造影（CTPA）等，有助于早期發(fā)現(xiàn)PTE，為及時治療爭取時間。在PTE的預(yù)防領(lǐng)域，研究結(jié)果為制定個性化預(yù)防策略提供了參考。雖然抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性無明顯關(guān)聯(lián)，但對于攜帶某些多態(tài)性位點(diǎn)的人群，可針對性地加強(qiáng)對其他危險因素的管控。對于攜帶特定抗凝血酶基因多態(tài)性且肥胖的人群，建議其通過合理飲食和運(yùn)動控制體重，以降低血液黏稠度和血栓形成風(fēng)險；對于有手術(shù)計劃且基因多態(tài)性可能影響凝血功能的患者，術(shù)前可進(jìn)行全面的凝血功能評估，并在術(shù)后采取適當(dāng)?shù)目鼓A(yù)防措施，如早期活動、使用低分子肝素等。這體現(xiàn)了精準(zhǔn)預(yù)防的理念，即根據(jù)個體的遺傳和臨床特征，制定針對性的預(yù)防措施，提高預(yù)防效果。從治療角度來看，盡管抗凝血酶基因多態(tài)性未顯示出與PTE易感性的密切關(guān)系，但在PTE患者的抗凝治療過程中，了解患者的抗凝血酶基因多態(tài)性仍具有潛在價值。不同的基因多態(tài)性可能影響抗凝血酶的活性和對藥物的反應(yīng)性。某些基因多態(tài)性可能導(dǎo)致抗凝血酶對肝素等抗凝藥物的敏感性改變。因此，在臨床治療中，對于攜帶特定抗凝血酶基因多態(tài)性的PTE患者，可在治療過程中密切監(jiān)測抗凝指標(biāo)，如活化部分凝血活酶時間（APTT）、國際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）等，并根據(jù)監(jiān)測結(jié)果及時調(diào)整抗凝藥物的劑量，以確保抗凝治療的有效性和安全性，實(shí)現(xiàn)個體化治療，提高治療效果，減少出血等并發(fā)癥的發(fā)生。此外，本研究結(jié)果也為后續(xù)研究提供了基礎(chǔ)，有助于進(jìn)一步探索其他潛在的遺傳和環(huán)境因素在PTE發(fā)病中的作用，為PTE的防治提供更多的理論支持。5.4研究的局限性與未來研究方向展望本研究在探究上海地區(qū)漢族人群抗凝血酶基因多態(tài)性與肺血栓栓塞癥（PTE）易感性關(guān)系方面取得了一定成果，但也存在一些局限性。從樣本量來看，盡管本研究采用多中心、大樣本的研究方法，納入了[實(shí)際病例組人數(shù)]例PTE患者和[實(shí)際對照組人數(shù)]例健康對照者，但相對于上海地區(qū)龐大的漢族人群基數(shù)而言，樣本量仍顯不足。較小的樣本量可能導(dǎo)致研究結(jié)果的穩(wěn)定性和代表性受限，無法充分涵蓋所有可能的遺傳變異和影響因素。此外，研究僅納入了上海地區(qū)漢族人群，不能代表其他地區(qū)或種族人群的情況。不同地區(qū)和種族人群的遺傳背景、生活環(huán)境和飲食習(xí)慣等存在差異，這些因素可能影響抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)系。因此，本研究結(jié)果的外推性存在一定局限。在研究方法上，本研究檢測的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)可能有限。雖然通過基因測序和聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)檢測了多個多態(tài)性位點(diǎn)，但可能遺漏了一些與PTE易感性相關(guān)的罕見或低頻多態(tài)性位點(diǎn)。隨著基因檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，如全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS）、外顯子組測序等技術(shù)的應(yīng)用，可以更全面地檢測基因多態(tài)性。此外，研究過程中雖然對一些常見的混雜因素進(jìn)行了控制和校正，但仍可能存在未知的混雜因素影響研究結(jié)果。例如，環(huán)境因素中的空氣污染、化學(xué)物質(zhì)暴露等，以及其他尚未被發(fā)現(xiàn)的遺傳因素，都可能干擾抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)系。針對本研究的局限性，未來研究可從以下幾個方向展開。擴(kuò)大樣本量和研究范圍是關(guān)鍵。一方面，應(yīng)進(jìn)一步增加上海地區(qū)漢族人群的樣本數(shù)量，以提高研究結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性。另一方面，開展跨地區(qū)、跨種族的研究，納入不同地區(qū)和種族的人群，全面分析抗凝血酶基因多態(tài)性在不同人群中的分布特點(diǎn)及其與PTE易感性的關(guān)系，有助于揭示遺傳背景和環(huán)境因素對兩者關(guān)系的影響。在技術(shù)應(yīng)用上，采用更先進(jìn)的基因檢測技術(shù)，如GWAS、外顯子組測序等，對全基因組或外顯子組進(jìn)行掃描，以發(fā)現(xiàn)更多與PTE易感性相關(guān)的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)。結(jié)合生物信息學(xué)分析方法，綜合考慮基因-基因、基因-環(huán)境之間的相互作用，深入探討抗凝血酶基因多態(tài)性影響PTE易感性的分子機(jī)制。例如，通過構(gòu)建基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，分析抗凝血酶基因與其他凝血和抗凝相關(guān)基因之間的相互作用關(guān)系，以及環(huán)境因素如何影響這些基因的表達(dá)和功能。未來研究還可從功能驗證方面深入展開。對于發(fā)現(xiàn)的與PTE易感性相關(guān)的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)，通過細(xì)胞實(shí)驗和動物模型進(jìn)行功能驗證。利用基因編輯技術(shù)，如CRISPR-Cas9技術(shù)，構(gòu)建攜帶特定基因多態(tài)性的細(xì)胞模型和動物模型，研究基因多態(tài)性對抗凝血酶表達(dá)、結(jié)構(gòu)和功能的影響，以及這些變化如何導(dǎo)致機(jī)體凝血-抗凝平衡失調(diào)，進(jìn)而增加PTE的發(fā)病風(fēng)險。此外，開展前瞻性研究也是未來研究的重要方向之一。通過對攜帶特定抗凝血酶基因多態(tài)性的人群進(jìn)行長期隨訪，觀察其PTE的發(fā)病情況，進(jìn)一步驗證基因多態(tài)性與PTE易感性的關(guān)系，為PTE的預(yù)防和早期干預(yù)提供更有力的證據(jù)。六、結(jié)論6.1研究主要成果總結(jié)本研究通過對上海地區(qū)漢族人群抗凝血酶基因多態(tài)性與肺血栓栓塞癥（PTE）易感性關(guān)系的深入探究，取得了一系列具有重要意義的成果。在樣本選取方面，采用多中心、大樣本的病例對照研究方法，共納入[實(shí)際病例組人數(shù)]例PTE患者和[實(shí)際對照組人數(shù)]例健康對照者，確保了研究對象的代表性和研究結(jié)果的可靠性。通過嚴(yán)格的入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)，對病例組和對照組進(jìn)行篩選，保證了兩組人群在年齡、性別等基本特征上的可比性，為后續(xù)分析奠定了堅實(shí)基礎(chǔ)。在實(shí)驗檢測中，運(yùn)用基因測序和聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)，對樣本的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，在檢測的[具體多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)量]個抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)中，大部分位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在PTE病例組和對照組之間無顯著差異。僅有個別位點(diǎn)雖在初步統(tǒng)計分析中顯示出頻率差異，但經(jīng)過多重檢驗校正后，差異不再具有統(tǒng)計學(xué)意義。這表明在上海地區(qū)漢族人群中，所檢測的抗凝血酶基因多態(tài)性位點(diǎn)可能并非PTE的主要遺傳易感因素。在單倍體型構(gòu)建與分析方面，利用SHEsis軟件構(gòu)建抗凝血酶基因單倍體型，結(jié)果顯示上海地區(qū)漢族人群抗凝血酶基因共形成了[具體單倍體型數(shù)量]種主要單倍體型。大部分單倍體型頻率在PTE病例組和對照組之間無顯著差異，僅有個別單倍體型頻率存在差異，但進(jìn)一步分析其與PTE易感性的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度后發(fā)現(xiàn)，該單倍體型可能并非PTE的獨(dú)立危險因素。這說明抗凝血酶基因單倍體型在上海地區(qū)漢族人群中對PTE易感性的影響較小。綜上所述，本研究未發(fā)現(xiàn)抗凝血酶基因多態(tài)性與上海地區(qū)漢族人群PTE易感性的顯著關(guān)聯(lián)。這一結(jié)果為深入理解PTE的遺傳發(fā)病機(jī)制提供了重要信息，同時也為臨床實(shí)踐中PTE的早期診斷、預(yù)防和個體化治療提供了有價值的參考依據(jù)。6.2對肺血栓栓塞癥防治的啟示本研究雖未發(fā)現(xiàn)抗凝血酶基因多態(tài)性與上海地區(qū)漢族人群PTE易感性存在顯著關(guān)聯(lián)，但從側(cè)面為PTE的防治提供了獨(dú)特的啟示。在PTE的預(yù)防方面，盡管抗凝血酶基因多態(tài)性未表現(xiàn)出明顯的風(fēng)險關(guān)聯(lián)，但這并不意味著可以忽視遺傳因素在PTE發(fā)病中的作用。對于具有PTE家族史或其他遺傳性易栓癥傾向的人群，仍應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測和預(yù)防措施。例如，建議這類人群定期進(jìn)行凝血功能檢查，包括抗凝血酶活性、D-二聚體水平等指標(biāo)的檢測，以便及時發(fā)現(xiàn)潛在的凝血異常。同時，積極干預(yù)其他可改變的危險因素，如鼓勵長期臥床者定期進(jìn)行肢體活動，以促進(jìn)靜脈回流；指導(dǎo)肥胖者通過合理飲食和運(yùn)動控制體重，降低血液黏稠度；建議吸煙者戒煙，減少對血管內(nèi)皮的損傷等，從而降低PTE的發(fā)病風(fēng)險。從診斷角度來看，本研究結(jié)果提示在臨床診斷PTE時，不能僅依賴抗凝血酶基因多態(tài)性檢測。然而，基因檢測技術(shù)的發(fā)展為PTE的診斷提供了新的思路?？梢越Y(jié)合其他分子標(biāo)志物和臨床指標(biāo)，構(gòu)建更加全面的診斷模型。除了常見的血漿D-二聚體檢測、血?dú)夥治觥⑿碾妶D等檢查外，還可考慮檢測其他與凝血和纖溶相關(guān)的基因多態(tài)性，如凝血酶原基因、因子VLeiden突變等，綜合評估患者的發(fā)病風(fēng)險。此外，隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，基于多組學(xué)技術(shù)的診斷方法，如基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)等，有望為PTE的早期診斷和精準(zhǔn)診斷提供更有力的支持。在治療方面，雖然抗凝血酶基因多態(tài)性與PTE易感性無明顯關(guān)聯(lián)，但了解患者的基因背景仍有助于制定個性化的治療方案。對于接受抗凝治療的PTE患者，不同的基因多態(tài)性可能影響抗凝藥物的療效和安全性。某些基因多態(tài)性可能導(dǎo)致患者對抗凝藥物的代謝和反應(yīng)性不同。因此，在治療過程中，可根據(jù)患者的基因檢測結(jié)果，合理選擇抗凝藥物的種類和劑量。對于攜帶特定基因多態(tài)性且對抗凝藥物敏感的患者，可適當(dāng)降低藥物劑量，以減少出血等并發(fā)癥的發(fā)生；而對于對抗凝藥物反應(yīng)不佳的患者，則可考慮調(diào)整治療方案，如聯(lián)合使用其他抗凝藥物或采用新型抗凝治療方法。同時，加強(qiáng)對患者的治療監(jiān)測，定期檢測凝血指標(biāo)，根據(jù)檢測結(jié)果及時調(diào)整治療方案，以確保治療的有效性和安全性。七、參考文獻(xiàn)[1]張奕杰，劉錦銘，樂軍，等。上海地區(qū)漢族人群抗凝血酶基因多態(tài)性與肺血栓栓塞癥風(fēng)險的相關(guān)性研究[J].國際呼吸雜志，2010,30(8):481-486.[2]白巧紅，劉錦銘，王鵬，等?？鼓富駻la384Ser多態(tài)性與肺血栓栓塞癥相關(guān)性研究[J].國際呼吸雜志，2009,29(6):339-342.[3]中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會肺血栓栓塞癥的診斷與治療指南（草案）[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2001,24(5):259-264.[4]李相磊，趙軼敏，馬春燕，等。肺血栓栓塞癥患者血漿蛋白S、蛋白C和抗凝血酶Ⅲ活性變化及其臨床價值分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2018,28(8):981-983.[5]王增智，趙秀清，郭偉，等。肺血栓栓塞癥患者易栓癥的分析研究[J].心肺血管病雜志，2010,29(5):357-359.[6]李保端，楊曉紅，鄔超，等。肺血栓栓塞癥患者蛋白C活性研究[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2011,25(5):482-483.[7]陳環(huán)，張鵬，劉軍鋒。蛋白C、抗凝血酶及凝血因子Ⅷ活性變化與肺癌合并肺栓塞后治療的關(guān)系[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2014,29(10):995-999.[8]袁雅冬，宮小薇，楊媛華。肺血栓栓塞癥發(fā)生再栓塞相關(guān)因素的薈萃分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2012,92(34):2419-2425.[9]鞠彥秀，趙鳳芹，胡娟。蛋白C、蛋白S缺乏與肺血栓栓塞癥的相關(guān)性研究進(jìn)展[J].國際呼吸雜志，2017,37(18):1437-1440.[10]牛靈，劉琦。血漿蛋白C及蛋白S在肺栓塞患者血清中的表達(dá)及意義[J].中國康復(fù)，2011,26(4):267-268.[11]劉芳，諸蘭艷，陳平，等。蛋白C、蛋白S缺乏癥相關(guān)肺動脈血栓栓塞2例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J].中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2013,38(9):971-976.[12]黃俊偉，張晨，張尉華。肺血栓栓塞癥患者相關(guān)危險因素[J].中國老年學(xué)雜志，2015,35(6):1532-1534.[2]白巧紅，劉錦銘，王鵬，等?？鼓富駻la384Ser多態(tài)性與肺血栓栓塞癥相關(guān)性研究[J].國際呼吸雜志，2009,29(6):339-342.[3]中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會肺血栓栓塞癥的診斷與治療指南（草案）[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2001,24(5):259-264.[4]李相磊，趙軼敏，馬春燕，等。肺血栓栓塞癥患者血漿蛋白S、蛋白C和抗凝血酶Ⅲ活性變化及其臨床價值分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2018,28(8):981-983.[5]王增智，趙秀清，郭偉，等。肺血栓栓塞癥患者易栓癥的分析研究[J].心肺血管病雜志，2010,29(5):357-359.[6]李保端，楊曉紅，鄔超，等。肺血栓栓塞癥患者蛋白C活性研究[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2011,25(5):482-483.[7]陳環(huán)，張鵬，劉軍鋒。蛋白C、抗凝血酶及凝血因子Ⅷ活性變化與肺癌合并肺栓塞后治療的關(guān)系[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2014,29(10):995-999.[8]袁雅冬，宮小薇，楊媛華。肺血栓栓塞癥發(fā)生再栓塞相關(guān)因素的薈萃分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2012,92(34):2419-2425.[9]鞠彥秀，趙鳳芹，胡娟。蛋白C、蛋白S缺乏與肺血栓栓塞癥的相關(guān)性研究進(jìn)展[J].國際呼吸雜志，2017,37(18):1437-1440.[10]牛靈，劉琦。血漿蛋白C及蛋白S在肺栓塞患者血清中的表達(dá)及意義[J].中國康復(fù)，2011,26(4):267-268.[11]劉芳，諸蘭艷，陳平，等。蛋白C、蛋白S缺乏癥相關(guān)肺動脈血栓栓塞2例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J].中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2013,38(9):971-976.[12]黃俊偉，張晨，張尉華。肺血栓栓塞癥患者相關(guān)危險因素[J].中國老年學(xué)雜志，2015,35(6):1532-1534.[3]中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會肺血栓栓塞癥的診斷與治療指南（草案）[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2001,24(5):259-264.[4]李相磊，趙軼敏，馬春燕，等。肺血栓栓塞癥患者血漿蛋白S、蛋白C和抗凝血酶Ⅲ活性變化及其臨床價值分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2018,28(8):981-983.[5]王增智，趙秀清，郭偉，等。肺血栓栓塞癥患者易栓癥的分析研究[J].心肺血管病雜志，2010,29(5):357-359.[6]李保端，楊曉紅，鄔超，等。肺血栓栓塞癥患者蛋白C活性研究[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2011,25(5):482-483.[7]陳環(huán)，張鵬，劉軍鋒。蛋白C、抗凝血酶及凝血因子Ⅷ活性變化與肺癌合并肺栓塞后治療的關(guān)系[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2014,29(10):995-999.[8]袁雅冬，宮小薇，楊媛華。肺血栓栓塞癥發(fā)生再栓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