(19)國家知識產(chǎn)權(quán)局(10)授權(quán)公告號CN1177509(21)申請?zhí)?02280050928.3(65)同一申請的已公布的文獻(xiàn)號(66)本國優(yōu)先權(quán)數(shù)據(jù)(85)PCT國際申請進(jìn)入國家階段日WO2023/030524ZH20(73)專利權(quán)人北京茵諾醫(yī)藥科技有限公司樓3層101-301號(72)發(fā)明人馬茜陳小明鄧拓王惠靖(74)專利代理機(jī)構(gòu)北京市柳沈律師事務(wù)所專利代理師孫治國A61K31/405(2006.01)A61K45/06(2006.01)A61K31/616(2006.01)A61K31/505(2006.01)A61K31/4465(2006.01)A61K31/40(2006.01)A61K47/69(2017.01)A61K31/22(2006.01)A61K31/4174(2006.01)A61K31/47(2006.01)A61K31/192(2006.01)A61K47/61(2017.01)A61K31/195(2006.01)A61P9/10(2006.01)A61K49/00(2006.01)(56)對比文件acidmodifiedptargetedintracellulardeliveryofdoxorubicin.《JournalofLiposomeResearch》.2016,第26卷(第4期),第276-287頁.靶向動脈粥樣硬化脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)及其制備方法脂質(zhì)體載體及其主動包封的用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)；其中，所述納米載體遞送系統(tǒng)的制備包括通過加入造成脂質(zhì)體內(nèi)外溶液酸度梯度的鹽溶液水化所述脂質(zhì)體載體主動包封所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)的步驟，還提供了其制備方法和應(yīng)用。21.一種主動包封脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)包括脂質(zhì)體載體及其主動包封的用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)；所述動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病選自以下一種或多種：冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、腦動脈粥樣硬化癥和外周血管動脈粥樣硬化癥；所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)選自以下一種或多種：他汀類藥物、貝特類藥物、抗血小板藥物、抗凝藥物、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制所述脂質(zhì)體載體的材料包含磷脂、膽固醇和DSPE-PEG2000;所述脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)還包括靶向配體，其與脂質(zhì)體載體共同孵育而修飾，所述靶向配體為透明質(zhì)酸鈉和DSPE-PEG2000-NH2通過酰胺鍵縮合形成的化合物；所述脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)中，靶向配體的最終濃度為10-100μg/mL。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述磷脂選自以下一二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰絲氨酸、二油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰絲氨酸、二油酰磷脂酰乙醇胺-磷脂酰膽堿、二肉桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉桂酰磷脂酰絲氨酸、二肉桂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二芥酰磷脂酰膽堿、二芥酰磷脂酰乙醇胺、二芥酰磷脂酰絲氨酸、二芥酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、鞘磷脂、卵磷脂酰膽堿、卵磷脂酰乙醇胺和卵磷脂酰甘油。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于.所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)和所述脂質(zhì)體載體的質(zhì)量比為1:4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)和所述脂質(zhì)體載體的質(zhì)量比為1:5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)和所述脂質(zhì)體載體的質(zhì)量比為1:6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述透明質(zhì)酸鈉的平均分子量為1.2-1.6萬。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)選自以下一種或多種：洛伐他汀、吉非貝齊、阿司匹林、阿西美辛、奧扎格雷鈉、貝列前素鈉和替羅非班以及它們的藥效片段或藥學(xué)上可接受的鹽。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述用于預(yù)防和/或3治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)為水溶性他汀類藥物。9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)為瑞舒伐他汀、普伐他汀、阿托伐他汀。10.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)為瑞舒伐他汀，所述靶向配體的濃度為100±24μg/mL。11.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述脂質(zhì)體載體選自小單室脂質(zhì)體、大單室脂質(zhì)體或多室脂質(zhì)體。12.一種制備如權(quán)利要求1至11中任一項所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)的方法，包括通過加入鹽溶液水化所述脂質(zhì)體載體并分離造成脂質(zhì)體內(nèi)外溶液酸度梯度的步驟。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的制備脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)的方法，其特征在于，所述鹽為弱酸強(qiáng)堿鹽。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的制備脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)的方法，其特征在于，所述鹽的陰離子部分選自以下一種或多種：鋅離子。15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的制備脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)的方法，其特征在于，所述鹽16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：(1)將脂質(zhì)體載體材料溶于良溶劑；(2)向步驟(1)所得產(chǎn)物中加入造成脂質(zhì)體內(nèi)外溶液酸度梯度的鹽溶液對其進(jìn)行水化，分散成粗脂液；(3)降低步驟(2)所得粗脂液的粒徑，得到精制脂質(zhì)體；(4)對步驟(3)所得到的精制脂質(zhì)體溶液通過純化去除外部離子，脂質(zhì)體內(nèi)外形成酸度(5)在步驟(4)所得到的脂質(zhì)體溶液加入待包被物質(zhì)溶液，孵育使藥物進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)部，得到所述脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)。17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其特征在于，所述步驟(1)中還包括蒸發(fā)去除溶劑的使所述脂質(zhì)體形成脂膜的步驟。18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其特征在于，所述蒸發(fā)溫度為40～80℃。19.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其特征在于，所述蒸發(fā)溫度為50～70℃。20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其特征在于，所述蒸發(fā)溫度為50～60℃。21.根據(jù)權(quán)利要求17至20中任一項的方法，其特征在于，所述蒸發(fā)方式為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其特征在于，所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)速度為50～200r/min。23.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其特征在于，所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)速度為70～120r/min。24.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其特征在于，所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)速度為80～100r/min。425.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述良溶劑選自以下一26.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述脂質(zhì)體載體材料所述磷脂濃度為0.1～500mg/mL;和/或所述膽固醇濃度為0.05～200mg/mL。27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述脂質(zhì)體載體材料中，所述磷脂濃度為0.1～200mg/mL;和/或所述膽固醇濃度為0.1～100mg/mL。28.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述脂質(zhì)體載體材料中，所述磷脂濃度為0.2-100mg/mL;和/或所述膽固醇濃度為0.1-50mg/mL。29.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述鹽溶液的濃度為100～500mM;和/或所述水化溫度為30～90℃。30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述脂質(zhì)體載體材料中，所述鹽溶液的濃度為200～300mM;和/或所述水化溫度為40～80℃。31.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述脂質(zhì)體載體材料中，所述鹽溶液的濃度為200～250mM;和/或所述水化溫度為45～65℃。32.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述降低粒徑的的方法為通過將所述粗脂液通過濾膜擠出。33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，所述濾膜為聚碳酸酯膜。34.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，所述濾膜孔徑為30～800nm。35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于，所述濾膜孔徑為50～400nm。36.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于，所述濾膜孔徑為100～200nm。37.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于，所述濾膜孔徑為30nm、50nm、100nm、38.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于，所述濾膜孔徑為100-150nm。39.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述去除外部離子的方法選自以下一種或多種：超濾膜包分離、透析分離和離子交換。40.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的方法，其特征在于，步驟(5)中，所述包被物質(zhì)溶液濃度為0.01～100mg/mL。41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其特征在于，步驟(5)中，所述包被物質(zhì)溶液濃度為42.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其特征在于，步驟(5)中，所述包被物質(zhì)溶液濃度為543.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其特征在于，步驟(5)中，所述包被物質(zhì)溶液濃度為44.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的方法，其特征在于，步驟(5)中，所述孵育溫度為20～8045.根據(jù)權(quán)利要求44所述的方法，其特征在于，步驟(5)46.根據(jù)權(quán)利要求44所述的方法，其特征在于，步驟(5)47.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的方法，其特征在于，當(dāng)所述脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)通過靶向配體修飾時，所述方法還包括以下步驟：(6)將所述靶向配體與步驟(5)所得的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)共同孵育，得到所述修飾后的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)。48.一種藥物，其特征在于，所述藥物包含權(quán)利要求1至11中任一項所述的納米載體遞送系統(tǒng)或按照權(quán)利要求12至47中任一項所述的制備方法而制得的納米載體遞送系統(tǒng)，以及藥學(xué)上可接受的載體。49.權(quán)利要求1至11中任一項所述的納米載體遞送系統(tǒng)、按照權(quán)利要求12至47中任一項所述的制備方法而制得的納米載體遞送系統(tǒng)、權(quán)利要求48所述的藥物在制備用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用；其中，所述動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病選自以下一種或多種：冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、腦動脈粥樣硬化癥和外周血管動脈粥樣硬化癥。50.權(quán)利要求49的應(yīng)用，其中，所述冠狀動脈粥樣硬化性心臟病選自急性冠脈綜合征、51.權(quán)利要求49的應(yīng)用，其中，所述腦動脈粥樣硬化癥選自缺血性腦卒中和出血性腦卒52.權(quán)利要求49的應(yīng)用，其中，所述外周血管動脈粥樣硬化癥選自頸動脈粥樣硬化癥、椎動脈粥樣硬化癥、鎖骨下動脈粥樣硬化癥、閉塞性周圍動脈粥樣硬化、視網(wǎng)膜動脈粥樣硬化癥、腎動脈粥樣硬化癥、下肢動脈粥樣硬化癥、上肢動脈粥樣硬化癥、腸系膜動脈粥樣硬化癥和動脈粥樣硬化性陽痿。53.權(quán)利要求1至11中任一項所述的納米載體遞送系統(tǒng)、按照權(quán)利要求12至47中任一項所述的制備方法而制得的納米載體遞送系統(tǒng)、權(quán)利要求48所述的藥物在制備用于治療動脈斑塊的藥物中的應(yīng)用。54.權(quán)利要求53的應(yīng)用，其中，所述藥物用于遏制動脈斑塊進(jìn)展、逆轉(zhuǎn)動脈斑塊和/或減小動脈斑塊體積。6靶向動脈粥樣硬化脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)及其制備方法技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種主動包封脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)及其制備方法和應(yīng)用。背景技術(shù)[0002]心腦血管疾病是高致殘率、高病死率、高醫(yī)療風(fēng)險及高醫(yī)療費用的第一大慢性疾病，是全球第一位的死亡原因。心腦血管病占居民全部死因的40%以上，而動脈粥樣硬化相關(guān)疾病是心腦血管疾病的重中之重。根據(jù)統(tǒng)計，全球動脈粥樣硬化患者4.66億，其中冠心病患者1.54億，每年新發(fā)2.73千萬。全球每年新發(fā)急性心肌梗死1900萬，患者死亡率為34%至42%,即使患者僥幸存活，心梗后1-5年全因死亡和心血管事件的相對危險度至少比一般人群高30%。[0003]2018年《中國心血管病報告》顯示：根據(jù)2010年我國第六次人口普查數(shù)據(jù)，目前我國冠心病患者達(dá)到1100萬人，每年新增患者人數(shù)超過100萬，每年死于心血管疾病的患者多達(dá)390萬，占居民疾病死亡構(gòu)成的40%以上。大量研究證實，動脈粥樣硬化是導(dǎo)致患者發(fā)生心肌梗死、缺血性腦卒中的主要原因，該類患者也最易發(fā)生猝死或心功能不全、腦梗塞后遺癥等嚴(yán)重不良事件，給家庭和社會帶來沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。[0004]然而，面對如此重大的疾病，全球范圍內(nèi)尚無較好的防治手段。對于動脈粥樣硬化目前的治療仍是全身用藥。口服藥物僅能延緩斑塊進(jìn)展，而無法明顯逆轉(zhuǎn)斑塊，更無法將疾病徹底治愈。而國人對他汀等藥物的耐受性差，易誘發(fā)肝功能異常、新發(fā)糖尿病、橫紋肌溶臨很多藥物副反應(yīng)。例如口服他汀類藥物治療動脈粥樣硬化需要采用強(qiáng)化大劑量才能具有穩(wěn)定斑塊的作用，而全身大劑量使用他汀類藥物治療也存在嚴(yán)重副作用(例如肝功能異常、橫紋肌溶解、II型糖尿病等)發(fā)生率升高的風(fēng)險。[0005]對于現(xiàn)有的全身性給藥而言，藥物在進(jìn)入體內(nèi)后通常僅有極少一部分有效成分能夠真正作用于病變部位。尤其是動脈粥樣硬化，位于血管壁中，血流速度快，藥物無法進(jìn)入斑塊，更無法在斑塊中聚集。這是制約藥物療效，并導(dǎo)致藥物毒副作用的根本原因。靶向給藥系統(tǒng)是指具有靶向給藥能力的給藥系統(tǒng)。在經(jīng)某種途徑給藥以后，靶向給藥系統(tǒng)所包含的藥物會由于粒度或電性等特異性富集于靶部位，或通過帶有靶向探針的載體特異性地富集于靶部位。靶向給藥系統(tǒng)能夠使藥物瞄準(zhǔn)特定的病變部位，并在目標(biāo)病變部位釋放有效成分。因此，靶向給藥系統(tǒng)可以使藥物在目標(biāo)病變部位形成相對較高的濃度，并減少血液循環(huán)中的藥量，從而在提高藥效的同時抑制毒副作用，減少對正常組織和細(xì)胞的傷害。[0006]脂質(zhì)體為常用的靶向給藥系統(tǒng)。脂質(zhì)體具有提高藥效、降低藥物毒副作用、提升藥物的生物利用度、生物安全性強(qiáng)等明顯優(yōu)勢。ZL201980001843.4公開了一項通過被動包封法制備靶向CD44的脂質(zhì)體納米藥物，可利用易損斑塊內(nèi)主要存在的巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的表面上的CD44的表達(dá)狀態(tài)及其與透明質(zhì)酸(HA)的親和能力，構(gòu)建靶向斑塊或與易損斑塊相關(guān)的疾病的能夠?qū)崿F(xiàn)藥物的脂質(zhì)體藥物遞送體系用于診7斷或治療易損斑塊并持續(xù)釋放的靶向給藥系統(tǒng)，但是目前手段僅限于被動載藥方法。ZL201980001833.0公開了通過薄膜水化、探頭超聲兩步法，將一系列具有親水或疏水的治療藥物和造影劑包被在親水內(nèi)腔或者疏水脂質(zhì)層中，進(jìn)一步與靶向配體偶聯(lián)。這種策略屬于被動包封，雖然普適性強(qiáng)，但包封率往往不夠高，治療[0007]另外，對脂溶性強(qiáng)的他汀類藥物制備成脂質(zhì)體的研究表明，可以通過對脂溶性強(qiáng)他汀藥物采用薄膜水化或逆向蒸發(fā)法，將藥物包在脂質(zhì)體雙層膜內(nèi)，達(dá)到提高代謝時間、提高生物利用度等目的。但是這些方法對于具有一定水溶性的他汀藥物并不適用。為了解決這些問題，本專利申請的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)并公開了通過主動載藥方法將具有一定水溶性的他汀藥物進(jìn)行主動包封，達(dá)到靶向給藥的方法。[0008]在靶向納米制劑領(lǐng)域，制劑粒徑和靶向配體偶聯(lián)密度對治療效果的影響密切相關(guān)，但是結(jié)論并不統(tǒng)一，即針對不同適應(yīng)癥的納米制劑的尺寸和表面配體偶聯(lián)濃度沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)且針對不同適應(yīng)癥差異較大。對于動脈粥樣硬化這一疾病來說，探索適宜尺寸的粒徑和配體濃度對藥效發(fā)揮至關(guān)重要的作用。本專利申請公開了一種新的載藥工藝，以及使用特定納米結(jié)構(gòu)和特定配體密度進(jìn)行針對動脈粥樣硬化疾病的治療的配方。發(fā)明內(nèi)容[0009]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供一種主動包封脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，及其制備方法和應(yīng)用。同時本發(fā)明披露了在靶向納米藥物中，特定粒徑和表面配體密度對藥效的影響。[0010]在闡述本發(fā)明內(nèi)容之前，定義本申請中所使用的術(shù)語如下：[0011]術(shù)語“靶向給藥系統(tǒng)”是指：具有靶向給藥能力的給藥系統(tǒng)。在經(jīng)某種途徑給藥以后，靶向給藥系統(tǒng)所包含的藥物會通過特殊載體或靶向彈頭(例如，靶向配體)的作用特異性地富集于靶部位。目前已知的用于實現(xiàn)靶向給藥的手段包括利用各種微粒給藥系統(tǒng)的被動靶向性能、在微粒給藥系統(tǒng)的表面進(jìn)行化學(xué)修飾、利用一些特殊的理化性能、利用抗體介導(dǎo)靶向給藥、利用配體介導(dǎo)靶向給藥、利用前體藥物靶向給藥等。[0012]術(shù)語“動脈粥樣硬化”是指：一組稱為動脈硬化的血管病中常見而最重要的一種，特點為受累動脈病變從內(nèi)膜開始，先后有脂質(zhì)和復(fù)合糖類積聚、出血和血栓形成、纖維組織增生和鈣質(zhì)沉著，并有動脈中層的逐漸退變和鈣化。由于在動脈內(nèi)膜積聚的脂質(zhì)外觀呈黃[0013]術(shù)語“主動包封脂質(zhì)體”是指：使用跨膜pH梯度或離子梯度將某些親水性或兩親性化合物裝載到預(yù)制的脂質(zhì)體中。該技術(shù)被稱為主動或遠(yuǎn)程包封。[0014]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的第一方面提供了一種主動包封脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)。所述脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)包括脂質(zhì)體載體及其主動包封的用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)。[0015]根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其中，所述脂質(zhì)體載體的材料包含磷脂和膽固醇；[0016]優(yōu)選地，所述磷脂選自以下一種或多種：氫化大豆磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?、二硬硬脂酰磷脂酰絲氨酸、二油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰絲氨酸、二8油酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二肉桂酰磷脂酰膽堿、二肉桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉桂酰磷脂酰絲氨酸、二肉桂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二酰磷脂酰乙醇胺、二芥酰磷脂酰絲氨酸、二芥酰磷脂酰乙醇胺-聚乙膽堿、卵磷脂酰乙醇胺和卵磷脂酰甘油。[0017]根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其中，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)和所述脂質(zhì)體載體的質(zhì)量比為1:0.1~50,優(yōu)選為1:0.2～30,更優(yōu)選為1:0.5～20?？蛇x擇的是，所述納米載體遞送系統(tǒng)的制備進(jìn)一步包括使用鹽溶液水化后的所述脂質(zhì)體載體主動包封所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)的步驟。[0018]根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其中，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)為弱酸性物質(zhì)；[0019]優(yōu)選地，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的其藥學(xué)上可接受的鹽，以及所述藥物或物質(zhì)的活性制劑；[0020]更優(yōu)選地，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病們的藥效片段或藥學(xué)上可接受的鹽。[0021]根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其中，所述脂質(zhì)體納米載體遞[0022]優(yōu)選地，所述靶向配體選自透明質(zhì)酸、絲甘蛋白聚糖(serglycin)、膠原、纖黏連蛋[0023]根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其中，所述脂質(zhì)體載體選自小單室脂質(zhì)體、大單室脂質(zhì)體和多室脂質(zhì)體。[0024]本發(fā)明的第二方面提供了第一方面所述的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)的制備方法，包括通過加入鹽溶液水化所述脂質(zhì)體載體并分離造成脂質(zhì)體內(nèi)外溶液酸度梯度的步驟。[0025]根據(jù)本發(fā)明第二方面的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)，其中，所述鹽為子和鋅離子；[0028]更優(yōu)選地，所述鹽選自以下一種或多種：醋酸鈣、碳酸氫鈣、枸櫞酸鎂和葡萄糖酸銅。[0029]根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中該制備方法可以包括以下步驟：[0030](1)將脂質(zhì)體載體材[0031](2)向步驟(1)所得產(chǎn)物中加入造成脂質(zhì)體內(nèi)外溶液酸度梯度的鹽溶液對其進(jìn)行9[0033](4)對步驟(3)所得到的精制脂質(zhì)體溶液通過純化去除外部離子，脂質(zhì)體內(nèi)外形成酸度梯度；[0034](5)在步驟(4)所得到的脂質(zhì)體溶液加入待包被物質(zhì)溶液，孵育使藥物進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)部，得到所述脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)。[0035]根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中，所述步驟(1)中還包括蒸發(fā)去除溶劑的使所述脂質(zhì)體形成脂膜的步驟；[0036]優(yōu)選地，所述蒸發(fā)溫度為40～80℃,優(yōu)選為50～70℃,更優(yōu)選為50～60℃;[0038]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)速度為50～200r/min,優(yōu)選為70～120r/min,更優(yōu)選為80～100r/min。[0039]根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中，步驟(1)中，所述良溶劑選自以下一種或烷。[0040]根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中，步驟(1)中，所述脂質(zhì)體載體材料包含磷脂和膽固醇；[0041]優(yōu)選地，所述磷脂濃度為0.1～500mg/mL,優(yōu)選為0.1～200mg/mL,更優(yōu)選為0.2-100mg/mL;和/或[0042]所述膽固醇濃度為0.05～200mg/mL,優(yōu)選為0.1～100mg/mL,更優(yōu)選為0.1-50mg/[0043]根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中，步驟(2)中，所述鹽溶液的濃度為100~[0044]所述水化溫度為30～90℃,優(yōu)選為40～80℃,更優(yōu)選為45～65℃。[0045]根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中，步驟(3)中，所述降低粒徑的方法為通過將所述粗脂液通過濾膜擠出；[0047]更優(yōu)選地，所述濾膜孔徑為30～800nm,例如50～400nm,例如100～200nm,例如[0048]根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中，步驟(4)中，所述去除外部離子的方法選[0049]根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中，步驟(5)中，所述包被物質(zhì)溶液濃度為0.01～100mg/mL,優(yōu)選為0.05～50mg/mL,更優(yōu)選為0.1～20mg/mL,進(jìn)一步優(yōu)選為0.1-10mg/[0050]根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中，步驟(5)中，所述孵育溫度為20～80℃,優(yōu)選為25～70℃[0051]根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中，當(dāng)所述脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)通過靶向配體修飾時，所述方法還包括以下步驟：[0052](6)將所述靶向配體與步驟(5)所得的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)共同孵育，得到所述修飾后的脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)。[0053]本發(fā)明的第三方面提供了一種藥物，所述藥物包含第一方面所述的納米載體遞送系統(tǒng)或按照第二方面所述的制備方法而制得的納米載體遞送系統(tǒng)，以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體。[0054]本發(fā)明的第四方面提供了第一方面所述的納米載體遞送系統(tǒng)、按照第二方面所述的制備方法而制得的納米載體遞送系統(tǒng)、第三方面所述的藥物在制備用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。[0055]優(yōu)選地，所述動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病選自以下一種或多種：動脈粥樣硬化癥、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(包括急性冠脈綜合征、無癥狀心肌缺血-隱匿性冠心病、心絞痛、血性腦卒中)、外周血管動脈粥樣硬化癥(包括頸動脈粥樣硬化癥、椎動脈粥樣硬化癥、鎖骨下動脈粥樣硬化癥、閉塞性周圍動脈粥樣硬化、視網(wǎng)膜動脈粥樣硬化癥、腎動脈粥樣硬化癥、下肢動脈粥樣硬化癥、上肢動脈粥樣硬化癥、腸系膜動脈粥樣硬化癥、動脈粥樣硬化性[0056]本發(fā)明的第五方面提供了第一方面所述的納米載體遞送系統(tǒng)、按照第二方面所述的制備方法而制得的納米載體遞送系統(tǒng)、第三方面所述的藥物在制備用于治療血管斑塊的藥物中的應(yīng)用；[0058]更優(yōu)選地，所述藥物用于遏制動脈斑塊進(jìn)展、逆轉(zhuǎn)動脈斑塊和/或減小動脈斑塊體[0059]本發(fā)明屬于靶向制劑領(lǐng)域，涉及一種主動靶向脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)及其制備方法和應(yīng)用，尤其是靶向動脈粥樣硬化的主動包封脂質(zhì)體納米藥物的創(chuàng)新性制備方法和用途，例如在動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的診斷、預(yù)防和治療中的用途。[0060]為了進(jìn)一步提升納米藥物遞送系統(tǒng)的治療效果，提高納米載體的載藥量和包封率，增強(qiáng)靶向納米藥物臨床轉(zhuǎn)化能力，本專利申請公開了通過主動載藥制備靶向脂質(zhì)體納米藥物的工藝路線，而且本專利發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)適宜尺寸的粒徑和配體濃度對藥效發(fā)揮至關(guān)重要的作用。本專利申請公開了載藥工藝、特定載體納米結(jié)構(gòu)和特定配體密度，以及針對動脈粥樣硬化疾病治療的新方法，實現(xiàn)了多種動脈粥樣硬化、抗炎、抗血小板等藥物在動脈粥樣硬化處的高效富集。[0061]本專利申請公開了一系列靶向脂質(zhì)體藥物主動載藥新系統(tǒng)、方法和工藝，使其對藥物包封率可以達(dá)到90%以上，體現(xiàn)了其作為藥物載體的明顯優(yōu)勢，并進(jìn)一步在模型動物體內(nèi)驗證了其卓越的治療效果，拓展了靶向動脈粥樣硬化脂質(zhì)體藥物載體的應(yīng)用。0.1-10mg/mL,其中藥物與脂質(zhì)材料的質(zhì)量比在1:0.5到1:20之間。[0063]根據(jù)本發(fā)明的一種實施方式，本專利申請?zhí)峁┝艘环N通過主動包封裝載藥物用于動脈粥樣硬化治療的脂質(zhì)體制劑，粒徑為50～300nm,磷脂0.2-100mg/mL、膽固醇0.1-50mg/mL、藥物0.1-10mg/mL,其中藥物與脂質(zhì)材料的質(zhì)量比在1:0.5到1:20之間。優(yōu)選地，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的物質(zhì)選自他汀類藥物、貝劑、MMPs抑制劑、β受體阻滯劑和糖皮質(zhì)激素，以及它們的藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種，包括這些種類藥物或物質(zhì)的活性制劑。[0064]更優(yōu)選地，所述用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病環(huán)丙貝特、吉非貝齊、阿司匹林、阿西美辛、奧扎格雷鈉和替羅非班以及它們的藥效片段或藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種，以及它們的藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種。[0065]本發(fā)明的一種實施方式提供了納米載體遞送系統(tǒng)的制備方法，所述方法包括以下步驟：[0066](1)將磷脂類膜材溶于良溶劑，可以蒸發(fā)除去溶劑或不除去；[0067](2)向步驟(1)所得溶液或蒸干物中加入造成脂質(zhì)體內(nèi)外溶液酸度梯度的鹽溶液[0069](4)對步驟(3)所得到的脂質(zhì)體溶液通過純化去除外部離子，脂質(zhì)體內(nèi)外形成酸度梯度；[0070](5)在步驟(4)所得到的脂質(zhì)體溶液加入待包被藥液，使藥物進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)部；[0071](6)基于插入法將靶向配體組裝在脂質(zhì)體表面。[0072]本發(fā)明提供了一種主動包封的脂質(zhì)體在制備用于動脈粥樣硬化或與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病的診斷、預(yù)防和治療的產(chǎn)品中的應(yīng)用。[0073]本發(fā)明的納米載體遞送系統(tǒng)可以具有但不限于以下有益效果：[0074]本發(fā)明提供了一種制備主動包封脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)的工藝路線及其優(yōu)化過程，同時驗證了所得靶向遞送體系的逆轉(zhuǎn)斑塊能力。該體系具有高包封率和載藥量，對包封藥物保護(hù)性強(qiáng)，長期放置藥物不會釋放，藥物在體內(nèi)的緩慢釋放，能夠提高藥物在病灶局的兼容性好，生物相容性好、安全性高，易于進(jìn)行靶向配體修飾，所得靶向藥物對動脈粥樣硬化的治療具有很好的效果。附圖說明[0075]當(dāng)與附圖一起閱讀時，將更好地理解前面的發(fā)明內(nèi)容以及下面的發(fā)明詳述。為了說明本公開，該附圖說明了一些但不是全部的替代性實施方案。但是，應(yīng)該理解，該公開不限于所示的精確的設(shè)置和手段。這些圖，其已并入本說明書并且是本說明書的構(gòu)成部分，有助于解釋本公開的原則。[0076]圖1例示透明質(zhì)酸鈉(HA)和靶向斑塊透明質(zhì)酸靶材(HPD)的紅外光譜圖。[0077]圖2例示乙醇注入法主動包封瑞舒伐他汀的納米脂質(zhì)體LP/R?、LP/RA?20和LP/RA150的冷凍電鏡(A,B,C)和水合粒徑結(jié)果(D,E,F)。冷凍電鏡(A,B,C)和水合粒徑結(jié)果(D,E,F)。的冷凍電鏡(A,B,C)和水合粒徑結(jié)果(D,E,F)。[0080]圖5例示靶向瑞舒伐他汀主動包封脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)HA@LP/R的冷凍電鏡(A)和水合粒徑結(jié)果(B)。圖6例示靶向阿托伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA-LP/A冷凍電鏡和水合粒徑(Dynamic圖7例示靶向阿司匹林主動包封藥物脂質(zhì)體HA-LP/Aspc冷凍電鏡和DLS。圖8例示靶向匹伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA-LP/P冷凍電鏡和DLS。圖9例示靶向洛伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA-LP/L冷凍電鏡和DLS。圖10例示靶向辛伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Sc冷凍電鏡和DLS。圖11例示靶向普伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Pc冷凍電鏡和DLS。圖12例示靶向苯扎貝特主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Bc冷凍電鏡和DLS。圖13例示靶向環(huán)丙貝特主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Cc冷凍電鏡和DLS。圖14例示靶向阿西美辛主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Amc冷凍電鏡和DLS。圖15例示靶向奧扎格雷主動包封脂質(zhì)體HA-LP/0c冷凍電鏡和DLS。圖16例示靶向替羅非班主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Tc冷凍電鏡和DLS。圖17例示靶向瑞舒伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA@LP/R冷凍電鏡和DLS。圖18例示靶向阿托伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA@LP/A冷凍電鏡和DLS。圖19例示靶向環(huán)丙貝特主動包封脂質(zhì)體HA@LP/Ca冷凍電鏡和DLS。圖20例示靶向苯扎貝特主動包封脂質(zhì)體HA-LP/B冷凍電鏡和DLS。圖21例示本發(fā)明的納米遞送系統(tǒng)的長期穩(wěn)定性考察結(jié)果。圖22例示本發(fā)明的HA-LP/R納米藥物遞送系統(tǒng)與各對照組的斑塊體積進(jìn)展百分圖23例示主動脈對不同治療藥物的富集程度比較圖24a和圖24b例示不同HA/脂質(zhì)材料質(zhì)量比藥效對比。圖25例示細(xì)胞內(nèi)吞實驗細(xì)胞裂解液熒光值對比。圖26a例示LP/Rc脂質(zhì)體細(xì)胞內(nèi)吞實驗活細(xì)胞檢測熒光顯微鏡照片；圖26b例示HA@LP/Rc納米載體遞送系統(tǒng)細(xì)胞內(nèi)吞實驗活細(xì)胞檢測熒光顯微鏡照片；藍(lán)色為Hoechst33342染的細(xì)胞核，紅色為細(xì)胞內(nèi)的Cy5.5標(biāo)記的脂質(zhì)體。[0102]圖27例示不同時間條件下熒光標(biāo)記的HA@LP/Rc和LP/Rc體內(nèi)分布和代謝結(jié)果。[0103]圖28例示給藥HA@LP/R后動物的體重變化。[0104]圖29例示HPD測定參考標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體實施方式[0105]下面通過具體的實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但是，應(yīng)當(dāng)理解為，這些實施例僅僅是用于更詳細(xì)具體地說明之用，而不應(yīng)理解為用于以任何形式限制本發(fā)明。[0106]本部分對本發(fā)明試驗中所使用到的材料以及試驗方法進(jìn)行描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚，在上下文中，如果未特別說明，本發(fā)明所用材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的。[0107]以下實施例中使用的試劑和儀器如下：[0108]試劑：[0110]氯仿，無水乙醇，碳酸氫鈉，EDC,NHS,醋[0119]實施例1構(gòu)建靶向斑塊透明質(zhì)酸靶材(HPD)合成[0120]在本實施例中，以平均分子量為1.2-1.6萬的透明質(zhì)酸鈉(HA)和DSPE-PEG2000-NH2(DPN)為原料，在EDC和NHSS作用下，兩者通過酰胺鍵縮合，經(jīng)析晶、乙醇洗滌得到靶向反應(yīng)≥10小時。反應(yīng)結(jié)束后向反應(yīng)液中加入等體積或大于一倍體積的無水乙醇攪拌均勻后靜置20分鐘以上。靜置后的溶液離心收集沉淀或經(jīng)膜包濃縮后離心收集沉淀，用乙醇重懸洗滌沉淀并離心，重復(fù)洗滌2次以上，洗滌后得到的離心沉淀采用真空干燥或凍干，控制終產(chǎn)品中含水量小于10%。[0123]實施例2乙醇注入法主動包封瑞舒伐他汀的納米脂質(zhì)體制備[0124]在本實施例中，采用乙醇注入&主動包封法制備載瑞舒伐他汀的納米脂質(zhì)體。解。加醋酸鈣水溶液(大于等于150mM)在40-60℃的保溫攪拌條件下將乙醇相注入水相醋酸鈣溶液中使脂材溶液充分水化，形成粗脂質(zhì)體懸浮液(醋酸鈣水相和乙醇相溶液的體積比大于2)。使用擠出儀分別經(jīng)600nm、400nm、200nm和100nm的聚碳酸酯膜或其多層組合膜擠出3次以上。擠出后的納米脂質(zhì)體溶液采用純化水稀釋20倍及以上，通過控制膜孔徑獲得粒徑0.2。使用透析袋或超濾膜包透析分離未包封的醋酸鈣，收集內(nèi)液，與瑞舒伐他汀鈣溶液或瑞舒伐他汀鈣和蔗糖的混合溶液混勻后(瑞舒伐他汀鈣和總脂材的質(zhì)量比小于0.25),于4-66℃條件下孵育15分鐘或以上，得到主動包封瑞舒伐他汀鈣的納米脂質(zhì)體。所制備的納米脂質(zhì)體對API的包封率大于80%,最終制劑中API的濃度小于等于20mg/mL。[0126]從圖2中，可以看到本實施例中乙醇注入法主動包封瑞舒伐他汀的納米脂質(zhì)體LP/[0127]實施例3混合水化主動包封瑞舒伐他汀的納米脂質(zhì)體制備[0128]在本實施例中，采用混合水化&主動包封法制備瑞舒伐他汀的納米脂質(zhì)體。稱取(150mM或大于150mM)在40-60℃保溫條件下采用三通管、微流控等其他混合器按恒比例混合乙醇相和水相，使脂材充分水化，形成粗脂質(zhì)體懸浮液(醋酸鈣水相和乙醇相溶液的體積出3次以上。擠出后的脂質(zhì)體溶液采用純化水稀釋20倍及以上，通過控制膜孔徑和擠出次伐他汀鈣溶液或瑞舒伐他汀鈣和蔗糖的混合溶液混勻后(瑞舒伐他汀鈣和總脂材的質(zhì)量比小于0.25),于4-66℃條件下孵育15分鐘或以上，得到主動包封瑞舒伐他汀鈣的納米脂質(zhì)體。所制備的納米脂質(zhì)體對API的包封率大于80%,最終制劑中API的濃度小于等于20mg/[0129]從圖3中可以看出，本實施例中混合水化主動包封瑞舒伐他汀的納米脂質(zhì)體LP/[0131]如上述實施例1所制備的靶向材料HPD插入實施例2所制備的150nm載藥納米脂質(zhì)汀鈣的納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的HPD,得到最終產(chǎn)品中[0133]試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被透明質(zhì)酸衍生物(HA)胺(DSPE-PEG2000)(質(zhì)量比為3:0.5:1:1),上述脂材用氯仿溶解。通過緩慢旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(55℃在45℃的恒溫水浴鍋中使脂膜充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。使用擠出儀分別經(jīng)過[0137]制備的瑞舒伐他汀鈣納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HA水溶液混合加入偶聯(lián)劑EDC和NHSS,在25℃或大于25℃保溫條件下反應(yīng)2小時以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未偶聯(lián)的HA,得到最終產(chǎn)品中HA濃度為10-200μg/mL的靶向載藥脂質(zhì)體HA@[0138]實施例6靶向的阿托伐他汀主動包封脂質(zhì)體納米載體的制備[0139]在本實施例中，采用乙醇注入-主動包封法、插入法制備負(fù)載治療劑的脂質(zhì)體HA-[0140]稱取DSPC、膽固醇、DSPE-PEG2000(質(zhì)量比為3:1:1),乙醇溶解。加醋酸鈣水溶液(250mM)在65℃的恒溫水浴鍋中使脂材溶液充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。使用擠出儀分別經(jīng)過200nm、100nm的聚碳酸酯膜擠出控制粒徑最終為130nm。使用超濾膜包分離未包封得到主動包封藥物脂質(zhì)體LP/Ac。[0141]制備的載阿托伐他汀鈣的納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未[0142]從圖6中，可以看到本實施例中靶向阿托伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Ac冷凍電[0143]實施例7靶向的阿司匹林主動包封脂質(zhì)體納米載體的制備[0144]在本實施例中，采用乙醇注入-主動包封法、后插入法制備HA-LP/Aspc阿司匹林1),乙醇溶解。加醋酸鈣水溶液(250mM)在65℃的恒溫水浴鍋中使脂材溶液充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。使用擠出儀分別經(jīng)過200nm、100nm的聚碳酸酯膜擠出。使用超濾膜包分離未包封的醋酸鈣，收集內(nèi)液，取2mL與1mL阿司匹林水溶液混勻后，于40℃條件下孵育10min,得到主動包封藥物脂質(zhì)體LP/Aspc[0145]制備的載阿司匹林納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的[0146]圖7顯示了本實施例中靶向阿司匹林主動包封藥物脂質(zhì)體HA-LP/Aspc冷凍電鏡和[0147]實施例8靶向的匹伐他汀主動包封脂質(zhì)體納米載體的制備[0148]在本實施例中，采用乙醇注入-主動包封法、后插入法制備醇溶解。加醋酸鈣水溶液(250mM)在65℃的恒溫水浴鍋中使脂材溶液充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。使用擠出儀分別經(jīng)過200nm、100nm的聚碳酸酯膜擠出。使用主動包封藥物脂質(zhì)體LP/Pc。[0150]制備的載匹伐他汀納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的[0151]圖8顯示了本實施例中靶向匹伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Pc冷凍電鏡和DLS。[0152]實施例9靶向的洛伐他汀主動包封脂質(zhì)體納米載體的制備[0153]在本實施例中，采用乙醇注入-主動包封、后插入法制備HA-LP/L洛伐他汀水溶乙醇溶解。加醋酸鈣水溶液(250mM)在65℃的恒溫水浴鍋中使脂材溶液充分水化，形成粗制離未包封的醋酸鈣，收集內(nèi)液，取2mL與1mL洛伐他汀水溶液混勻后，于65℃條件下孵育10min,得到主動包封藥物脂質(zhì)體LP/Lc。[0154]制備的載洛伐他汀納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的[0155]圖9顯示了本實施例中靶向洛伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Lc冷凍電鏡和DLS。[0156]實施例10靶向的辛伐他汀主動包封脂質(zhì)體納米載體的制備[0157]在本實施例中，采用乙醇注入、主動包封法、后插入法制備HA-LP/Sc。辛伐他汀水溶液(Simv,1mg/mL)用NaOH調(diào)節(jié)pH并加入10%的2-羥基丙基-β-環(huán)糊精使其溶解。稱取DSPC、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)(質(zhì)量比為3:1:1),乙醇溶解。加醋酸鈣水溶液(250mM)在65℃的恒溫水浴鍋中使脂材溶液充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。使用擠出儀分別經(jīng)過200nm、100nm的聚碳酸酯膜擠出10次。使用超濾膜包分離未到主動包封藥物脂質(zhì)體LP/Sc[0158]制備的載辛伐他汀納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的[0159]圖10顯示了本實施例中靶向辛伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Sc冷凍電鏡和DLS。[0160]實施例11靶向的普伐他汀主動包封脂質(zhì)體納米載體的制備[0161]在本實施例中，采用乙醇注入-主動包封法、后插入法制備HA-LP/P。普伐他汀水溶液(Pravas,1mg/mL)。稱取DSPC、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE-PEG2000)(質(zhì)量比為3:1:1),乙醇溶解。加醋酸鈣水溶液(250mM)在65℃的恒溫水浴鍋中使脂材溶液充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。勻后，于40℃條件下孵育30min,得到主動包封藥物脂質(zhì)體LP/Pc。[0162]制備的載普伐他汀納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的HPD,得到最終產(chǎn)品中HPD濃度為10[0163]圖11顯示了本實施例中靶向普伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Pc冷凍電鏡和DLS。[0164]實施例12靶向的苯扎貝特主動包封脂質(zhì)體納米載體的制備[0165]在本實施例中，采用乙醇注入-主動包封、后插入法制備HA-LP/Bc苯扎貝特水溶膽固醇、聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE-PEG2000)(質(zhì)量比為3:1:1),脂材用乙醇溶解。加醋酸鈣水溶液(250mM)在65℃的恒溫水浴鍋中使脂材溶液充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。使用擠出儀分別經(jīng)過200nm得到主動包封藥物脂質(zhì)體LP/BC130°[0166]制備的苯扎貝特納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的HPD,得到最終產(chǎn)品中HPD濃度為10[0167]圖12顯示了本實施例中靶向苯扎貝特主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Bc冷凍電鏡和DLS。[0168]實施例13靶向的環(huán)丙貝特主動包封脂質(zhì)體納米載體的制備[0169]在本實施例中，采用乙醇注入、主動包封、后插入法制備HA-LP/Cc。環(huán)液(Cipro,1.5mg/mL)用NaOH調(diào)節(jié)pH為6.0使其溶解。稱取二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE-PEG2000)(質(zhì)量比為3:1:1)脂材用乙醇溶解。加醋酸鈣水溶液(250mM)在65℃的恒溫水浴鍋中使脂材溶液充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。使用擠出儀分別經(jīng)過200nm、100nm的聚碳酸主動包封藥物脂質(zhì)體LP/Cc。[0170]制備的環(huán)丙貝特納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的[0171]圖13顯示了本實施例中靶向環(huán)丙貝特主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Cc冷凍電鏡和DLS。[0172]實施例14靶向的阿西美辛主動包封脂質(zhì)體納米載體的制備液(Acemet,1mg/mL)加入10%的2-羥基丙基-β-環(huán)糊精使其溶解。稱取二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)(質(zhì)量比為3:1:1),脂材用乙醇溶解。加醋酸鈣水溶液(250mM)在65℃的恒溫水浴鍋中使脂材溶液充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。使用擠出儀分別經(jīng)過200nm、100nm的聚碳酸酯膜擠出10次。使用超濾膜30min,得到主動包封藥物脂質(zhì)體LP/Amc。[0174]制備的阿西美辛納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的[0175]圖14顯示了本實施例中靶向阿西美辛主動包封脂質(zhì)體HA-LP/Amc冷凍電鏡和DLS。[0176]實施例15靶向的奧扎格雷主動包封脂質(zhì)體納米載體的制備[0177]在本實施例中，采用乙醇注入、主動包封、后插入法制備LP/0c奧扎格雷水溶液(0zagrel,2mg/mL)加入10%的2-羥基丙基-β-環(huán)糊精使其溶解。稱取二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)(質(zhì)量比為3:1:1),脂材用乙醇溶解。加醋酸鈣水溶液(250mM)在65℃的恒溫水浴鍋中使脂材溶液充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。使用擠出儀分別經(jīng)過200nm、100nm的聚碳酸酯膜擠出10次。使用超濾膜包分離未包封的醋酸鈣，收集內(nèi)液，取2mL與1mLOzagrel水溶液混勻后，于室溫條件下孵育30min,得到主動包封藥物脂質(zhì)體LP/0c。[0178]制備的奧扎格雷納米脂質(zhì)體溶液和預(yù)先溶解好的HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的[0181]在本實施例中，采用乙醇注入、主動包封、后插入法制LP/Tc。替羅非班水溶液(Tirofiban,2mg/mL)加入10%的2-羥基丙基-β-環(huán)糊精使其溶解。稱取二硬脂酰磷脂酰膽25℃保溫條件下孵育5分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的[0184]實施例17靶向的瑞舒伐他汀主動包封脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)(HA@LP/R.)的制備[0185]稱取氫化大豆磷脂酰膽堿、DPN、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺浴，90r/min,30min)除去有機(jī)溶劑，從而在容器壁上形成脂膜。加葡萄糖酸銅水溶液[0186]HA水溶液混合加入偶聯(lián)劑EDC和NHSS,將其和LP/R[0187]圖17顯示了本實施例中靶向瑞舒伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA@LP/R冷凍電鏡和[0188]實施例18靶向的阿托伐他汀主動包封脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)(HA@LP/A)的制備[0189]稱取二棕櫚酰磷脂酰膽堿、DPN、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?5℃的恒溫水浴鍋中使脂膜充分水化，形成粗制脂質(zhì)體懸浮液。使用擠出儀分別經(jīng)過質(zhì)體LP/ACN117750943B說明書14/21頁[0191]圖18顯示了本實施例中靶向阿托伐他汀主動包封脂質(zhì)體HA@LP/Aa冷凍電鏡和[0192]實施例19靶向環(huán)丙貝特主動包封脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)(HA@LP/C)的制備[0194]由實施例1所制備HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育30分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的HPD,得到最終產(chǎn)品中HPD濃度為[0196]實施例20靶向苯扎貝特主動包封脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)(HA-LP/B)的制備檸檬酸鎂水溶液中使脂材溶液充分水化，形成粗脂質(zhì)體懸浮液(檸檬酸鎂水相和乙醇相溶貝特溶液混勻后(苯扎貝特和總脂材的質(zhì)量比小于0.25),于4-66℃條件下孵育15分鐘或以上，得到主動包封苯扎貝特的納米脂質(zhì)體。所制備的納米脂質(zhì)體對API的包封率大于20%,[0199]由實施例1所制備HPD水溶液混合，在25℃或大于25℃保溫條件下孵育30分鐘以上，孵育結(jié)束后使用透析袋或超濾膜包透析分離未插入的HPD,得到最終產(chǎn)品中HPD濃度為體HA-LP/B過采用HPLC-UV法，藥物溶液的濃度(X)對HPLC色譜峰的峰面積(Y)建立標(biāo)準(zhǔn)定量方程。酸：水：乙腈(1:24:75)。柱溫：40℃,型號：InertsilODS-3(150*3.0)mm。平衡系統(tǒng)，等基線穩(wěn)定后進(jìn)樣。[0206]2.水合粒徑的測定：[0207]本發(fā)明的遞送系統(tǒng)的粒度測定由馬爾文智能激光粒度儀測定。結(jié)果如表1所示。[0209]試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被透明質(zhì)酸衍生物(HA)洗滌，去除未結(jié)合的組分，再加入HRP標(biāo)記的抗小鼠免疫球蛋白G(酶標(biāo)二抗),經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面抗體的免疫復(fù)合物。加底物A和B,底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液(2M硫酸)作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，顏色的深淺和樣品中的透明質(zhì)酸(HA)呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),擬合標(biāo)準(zhǔn)品曲線，可以計算出樣本中透明質(zhì)酸(HA)的濃度。[0210]采用透明質(zhì)酸(HA)定量檢測ELISA試劑盒進(jìn)行檢測，準(zhǔn)確稱取HPD適量，加水配制成約2.5mg/mL的對照儲備液，采用等比例水稀釋的方式，配制線性工作溶液(0～1.25mg/mL),取無HPD的制劑溶液適量，分別與各線性工作溶液混合作為標(biāo)準(zhǔn)線性溶液；取制劑溶液適量，根據(jù)需要加無HPD的制劑溶液進(jìn)行稀釋，并加入適量水使制劑測定溶液與標(biāo)準(zhǔn)線性溶液中的脂質(zhì)體比例相同，作為供試品溶液；在ELISA試劑盒測定前，標(biāo)準(zhǔn)線性溶液和供試品溶液分別加入10%Triton溶液進(jìn)行溶解，混合均勻，依照ELISA試劑盒操作程序進(jìn)行，用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),四參數(shù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出供試品中HPD的濃度。[0211]參考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如圖29所示，擬合方程：y=(A-D)/[1+(x/C)^B]+D其中：A=2.763;B=1.777;C=3.681;D=0.146;r2=0.999.[0212]4.包封率的測定：[0213]取一定量納米載體，HPLC法測游離藥物和總藥物量，并通過以下公式1計算包封[0214]包封率(%)=(1-M游離藥物量/M總藥物量)*100%……………公式1表1本發(fā)明的納米載體遞送系統(tǒng)工藝簡述、平均粒徑和包封率結(jié)果CN117750943B說明書16/21頁名稱工藝描述水合粒徑藥物包封率乙醇注入法混合水化乙醇注入法主動包封、HPD后薄膜分散法、主動乙醇注入-主動包封乙醇注入-主動包封乙醇注入-主動包封乙醇注入-主動包封乙醇注入-主動包封乙醇注入-主動包封乙醇注入-主動包封乙醇注入-主動包封乙醇注入-主動包封乙醇注入-主動包封采用乙醇注入、主薄膜水化、主動包葡萄糖酸銅薄膜水化、主動包醋酸鈣薄膜水化、主動包碳酸氫鈣乙醇注入、主動包[0218]5.長期穩(wěn)定性考察[0219]將本發(fā)明的納米遞送系統(tǒng)在4℃儲存，于不同的時間點取樣，并通過激光粒度儀檢[0220]試驗例2本發(fā)明的靶向脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)靶向能力驗證[0221]本試驗例的目的是驗證本發(fā)明所述的靶向脂質(zhì)體納米藥物載體遞送系統(tǒng)，例如HA@LP/R載體遞送系統(tǒng)，對于動脈粥樣硬化斑塊的靶向能力。具體的，由于動脈粥樣硬化斑活化，通過與經(jīng)熒光標(biāo)記的靶向HA@LP/R或非靶向LP/Rc一起孵育，然后進(jìn)行活細(xì)胞顯微觀察和熒光值檢測。通過對比具有HA靶頭和非靶向脂質(zhì)體組結(jié)果，評估對HA靶向脂質(zhì)體對于高表達(dá)CD44受體的激活的巨噬細(xì)胞的靶向性。[0222]1.實驗試劑和儀器：[0223]表2實驗使用試劑列表廠家型號武漢普諾賽生命科技有限公司西安瑞禧超濾管(MWCD50KD)表3實驗使用儀器列表名稱廠家型號熒光讀板儀智能活細(xì)胞檢測系統(tǒng)醫(yī)藥低速水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)北京白洋[0227]2.實驗步驟[0228]2.1供試品的熒光標(biāo)記[0229]精確稱量1.0mgCy5.5染料溶解于1ml無水乙醇，配制成1mg/mlCy5.5溶液。分別取5ml靶向HA@LP/R,或者非靶向LP/R?脂質(zhì)體，加入0.1mL1mg/ml的Cy5.5溶液，150rpm攪拌12h,進(jìn)行熒光標(biāo)記。然后用超濾管過濾，去除未反應(yīng)的熒光分子。使用熒光酶標(biāo)儀對于過濾后得到的熒光標(biāo)記的脂質(zhì)體進(jìn)行熒光檢測。檢測后的熒光標(biāo)記的脂質(zhì)體用于后續(xù)的細(xì)胞內(nèi)吞實驗。[0230]2.2細(xì)胞內(nèi)吞實驗[0231]操作步驟參照本平臺細(xì)胞復(fù)蘇操作流程，培養(yǎng)基用本平臺常規(guī)THP1細(xì)胞培養(yǎng)基(RPMI1640+10%FBS)。細(xì)胞復(fù)蘇后重懸密度為5×10?/ml,接種于T75培養(yǎng)瓶。將懸浮生長的10mlTHP1細(xì)胞移至15ml離心管中，1000rpm離心5分鐘，并重懸于1ml培養(yǎng)基中并細(xì)胞計數(shù)，配制成1×10?/200μl的濃度的細(xì)胞懸液。往1×10?/200μl的細(xì)胞懸液中加入PMA至終濃度為100ng/ml?；旌暇鶆蚝?，把細(xì)胞懸液接種于96孔板中，200μl/孔，持續(xù)刺激72h。刺激72小時后，棄去原先的培養(yǎng)基，加入含有脂多糖(LPS)的新鮮培養(yǎng)基(LPS溶液1000倍稀釋于新鮮培養(yǎng)基中，配制的終濃度為2.5μg/mL)。LPS處理2小時。[0232]實驗設(shè)兩組，分別加入。取1ml熒光標(biāo)記的脂質(zhì)體，按體積10倍稀釋于新鮮的培養(yǎng)基中，此時瑞舒伐他汀濃度為0.2mg/ml。96孔板棄去含有LPS的培養(yǎng)液，加入稀釋好的熒光標(biāo)記的供試品，每組三個重復(fù)，于37℃繼續(xù)孵育30min。[0233]PBS洗板1次，把2μlHoechst33342母液稀釋于10ml新鮮的培養(yǎng)基中配制成稀釋好的Hoechst33342溶液，并把稀釋好的Hoechst33342溶液和細(xì)胞孵育10min進(jìn)行細(xì)胞核的染色。于LionheartFX智能活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)進(jìn)行拍照。將拍照后的孔板，棄去染色液，加入100μlRIPA細(xì)胞裂解液，采用熒光讀板儀檢測孔板中熒光強(qiáng)度。獲得的試驗數(shù)據(jù)使用GraphPadPrism8軟件計算均值和標(biāo)準(zhǔn)差并進(jìn)行t檢驗的統(tǒng)計學(xué)分析，p<0.05為統(tǒng)計學(xué)上顯著。[0234]3.試驗結(jié)果組的3倍。熒光顯微鏡觀察也顯示(見圖26),HA@LP/R.組的細(xì)胞內(nèi)紅色熒光比非靶向LP/R,組其對非靶向脂質(zhì)體的內(nèi)吞效率。[0236]結(jié)果顯示，靶向組中顯紅色熒光的細(xì)胞顯著多于非靶向脂質(zhì)體組。且與非靶向脂質(zhì)體組相比，靶向組熒光值也顯著增加?？傻贸鼋Y(jié)論，含有HA靶頭的脂質(zhì)體可以被高表達(dá)CD44受體的激活的巨噬細(xì)胞特異性攝取。[0237]試驗例3本發(fā)明的靶向脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)在體內(nèi)的分布和代謝研究[0238]本試驗例的目的是初步揭示本發(fā)明所述的靶向脂質(zhì)體納米藥物載體遞送系統(tǒng)在動物體內(nèi)的分布和代謝情況。本試驗將試驗例2中細(xì)胞內(nèi)吞實驗的HA@LP/R和LP/R脂質(zhì)體繼續(xù)用于動物體內(nèi)分布和代謝初步研究。[0239]具體地，將6周齡ApoE-/-小鼠高脂飲食飼養(yǎng)28周，主動脈斑塊生成造成AS動物模型。靶向納米他汀制劑(HA@LP/Rc,劑量5mg/kg)和非靶向納米制劑對模型動物靜脈給藥后組織分布和代謝情況。如圖27所示，可見納米制劑在體內(nèi)主要富集在肝部，不可跨越血腦屏障，靶向和非靶體藥物在體內(nèi)分布代謝未見明顯區(qū)別。[0242]瑞舒伐他汀靜脈注射組：以0.5mg瑞舒伐他汀HA@LP/Rc/kg體重的劑量進(jìn)行靜脈注射給藥處理；[0243]治療組的治療每隔一天進(jìn)行1次，共計給藥11次。[0244]動物體重隨著治療時間變化的曲線如圖28所示。由圖28可見治療期間動物體重增[0245]試驗例4本發(fā)明的靶向脂質(zhì)體納米載體遞送系統(tǒng)對動脈粥樣硬化的影響的體內(nèi)實驗[0246]本試驗例的目的是驗證本發(fā)明所述的靶向脂質(zhì)體納米藥物載體遞送系統(tǒng)，例如[0247]1.動物模型的建立和實驗動物分組[0248](1)配制游離瑞舒伐他汀的生理鹽水溶液，并采用上述實施例2中所述的方法制備負(fù)載治療劑的納米遞送系統(tǒng)。[0249](2)ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化模型的建立：[0250]取SPF級ApoE-/-小鼠(42只，5-6周齡，體重20±1g)作為實驗動物。給予小鼠適應(yīng)性高脂飲食(脂肪10%(w/w),膽固醇2%(w/w),膽酸鈉0.5%(w/w),其余部分為小鼠普通飼料)喂養(yǎng)4周后，用1%的戊巴比妥鈉(配制方法為將1mg戊巴比妥鈉加入至100mL的生理鹽水[0258]斑塊體積進(jìn)展百分比=(治療后斑塊體積-治療前斑塊體積)/治療前的斑塊體積。[0259]圖22和23示出了本發(fā)明所述的HA-LP/RA150載體遞送系統(tǒng)對動脈粥樣硬化的體內(nèi)的主動脈富集功能，相比較于非靶向遞送體系(LP/RA150),這種富集效應(yīng)在靶向納米制劑成功的動物按血脂和體重隨機(jī)分為斑塊模型對照組，非靶向納米他汀制劑組(LP/RA150,5mg/kg),靶向納米他汀制劑-1(HA?-LP/RA?50,劑量5mg/kg),靶向納米他汀制劑-2(HA-LP/現(xiàn)約顯著的斑塊逆轉(zhuǎn)。[0262]以上研究表明，開發(fā)配體偶聯(lián)的主動靶向納米遞送體系需要關(guān)注配體在納米載體表面的偶聯(lián)密度，作為具有特殊生理功能的配體分子，低密度或過量偶聯(lián)均不能起到良好的靶向效果，提示我們在開發(fā)此類產(chǎn)品是尤其需要實現(xiàn)可控的偶聯(lián)工藝。[0263]圖24a和圖24b顯示了不同HA