(19)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局(12)發(fā)明專利(10)授權(quán)公告號(hào)CN116531271B(65)同一申請(qǐng)的已公布的文獻(xiàn)號(hào)(73)專利權(quán)人律恩澤雅集團(tuán)有限公司地址610021四川省成都市錦江區(qū)櫻花街1237號(hào)1樓(72)發(fā)明人李澤巧(74)專利代理機(jī)構(gòu)北京高沃律師事務(wù)所11569專利代理師霍苗A61K8/60(2006.01)審查員李小晶一種靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物及其制備方法和應(yīng)用本發(fā)明屬于化妝品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物，包括二葡糖基棓酸、光果甘草根提取物、油橄欖葉提取和余量的水。本發(fā)明提供的美白納米組合物能同時(shí)靶向作用黑素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，從抑制黑色生成相關(guān)酶活性、阻止黑色素轉(zhuǎn)移、激活蛋白酶體活性、減少氧化炎癥損傷以及UV刺激；且本發(fā)明提供的納米組合物能促進(jìn)上述四種功效成分021.一種靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物，其特征在于，按質(zhì)量百分含量計(jì)，包括：1～10%二葡糖基棓酸、1～10%光果甘草根提取物、1～10%油橄欖葉提取物、1~10%伸長(zhǎng)海條藻提取物、1～10%油脂、1～20%乳化劑、1～30%助乳化劑和余量的水；所述油脂為辛酸/癸酸甘油三酯和甘油三(乙基己酸)酯，或棕櫚酸甘油三酯；所述乳化劑為聚甘油-10油酸酯和辛基葡糖苷，或聚甘油-10二異硬脂酸酯；所述助乳化劑為1,2-戊二醇和1,2-己二醇，或1,3-丙二醇。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物，其特征在于，所述靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物的粒徑為10～500nm。3.權(quán)利要求1或2所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物的制備方法，其將所述油相與所述水相混合乳化后進(jìn)行微米化處理，得到微米級(jí)分散體；將所述微米級(jí)分散體進(jìn)行納米化處理，得到所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述微米化處理為剪切混合，所述剪切混合的轉(zhuǎn)速為4000～30000rpm,時(shí)間為1～20min。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述納米化處理為高壓均質(zhì)處理或高壓微射流處理；所述高壓均質(zhì)處理的壓力為300～1600bar,溫度為20～70℃,循環(huán)次數(shù)為1～10次；所述高壓微射流處理的壓力為3000～16000psi,溫度為20～70℃,循環(huán)次數(shù)為1～106.權(quán)利要求1或2所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物或權(quán)利要求3~5任一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物在制備美白化妝品中的應(yīng)用。3一種靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物及其制備方法和應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于化妝品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物及其制備方法和應(yīng)用。背景技術(shù)[0002]黑素細(xì)胞主要分布在皮膚表皮基底層，鑲嵌于表皮基底細(xì)胞之間，是產(chǎn)生黑色素當(dāng)黑素細(xì)胞受紫外線刺激時(shí)發(fā)生活化，促進(jìn)黑色素的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)，致使皮膚顏色變黑。研究發(fā)現(xiàn)，參與黑色素形成的關(guān)鍵酶主要包括酪氨酸酶(TYR)、DHICA氧化酶(TRP-1)以及多巴色素異構(gòu)酶(TRP-2),主要有3條信號(hào)通路參與調(diào)控，分別是環(huán)磷酸腺苷依賴的信號(hào)通路(cAMP信號(hào)通路)、蛋白質(zhì)Wnt介導(dǎo)激發(fā)的信號(hào)通路(Wnt信號(hào)通路)以及絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路(MAPK信號(hào)通路),其中小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)是各個(gè)通路的重要靶標(biāo)。[0003]位于真皮層的成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由間充質(zhì)細(xì)胞分化而糖胺聚糖和糖蛋白等基質(zhì)成分。成纖維細(xì)胞與黑素細(xì)胞在皮膚色素沉著過(guò)程中存在緊密聯(lián)系。基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)是成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞交流的關(guān)鍵蛋白，使酪氨酸酶處面，年齡增長(zhǎng)的同時(shí)蛋白酶體活性降低，蛋白酶體是蛋白酶解的主要降解途徑。其活性降低將引起蛋白質(zhì)和脂質(zhì)殘留物形成不能降解的脂褐質(zhì)，使皮膚黯淡出現(xiàn)色斑。通過(guò)對(duì)黑色素、脂褐素等相關(guān)物質(zhì)產(chǎn)生的關(guān)鍵酶活性、信號(hào)通路、作用因子等多方面調(diào)控，有望成為皮膚美皮膚，通過(guò)不同機(jī)制及途徑影響黑素細(xì)胞功能從而改變皮膚色度。[0004]但從市場(chǎng)美白產(chǎn)品成分可以看出，現(xiàn)階段大部分產(chǎn)品主要通過(guò)抑制、阻斷或影響黑色素生成以及轉(zhuǎn)移等達(dá)到相應(yīng)效果，部分產(chǎn)品采用促進(jìn)黑色素代謝及從角質(zhì)層脫離達(dá)到美白效果?？偟膩?lái)說(shuō)，當(dāng)前美白產(chǎn)品作用靶點(diǎn)有限，作用機(jī)制單一，最終導(dǎo)致美白作用效果并不理想。發(fā)明內(nèi)容[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供的美白納米組合物能同時(shí)靶向作用黑素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，從抑制黑色素生成路徑(MITF)、調(diào)控SDF-1通路、降低黑色素生成相關(guān)酶活性、阻止黑色素[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：[0007]本發(fā)明提供了一種靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物，按質(zhì)量百分含量計(jì)，包括：1～10%二葡糖基棓酸、1～10%光果甘草根提取物、1～10%油橄欖葉提取物、14~10%伸長(zhǎng)海條藻提取物、1～10%油脂、1～20%乳化劑、1～30%助乳化劑和余量的水；[0008]所述油脂包括辛酸/癸酸甘油三酯、棕櫚酸甘油三酯、棕櫚酸異丙酯、甘油三(乙基己酸)酯、肉豆蔻酸異丙酯、椰油酸乙基己酯、棕櫚酸乙基己酯中的一種或多種；[0009]所述乳化劑包括葡糖苷類、聚甘油類、聚山梨酯類、聚氧乙烯氫化蓖麻油類和磷脂類中的一種或多種；[0010]所述助乳化劑包括二乙醇二硬脂酸、乙氧基二甘醇、雙丙甘醇、甘油、丁二醇、山梨(糖)醇、異丙醇、1,2-己二醇、1,2-戊二醇和1,3-丙二醇中的一種或多種。[0011]優(yōu)選的，所述葡糖苷類包括辛基葡糖苷、椰油基葡糖苷和花生醇葡糖苷中的一種或多種；[0012]所述聚甘油類包括聚甘油-10油酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10二異硬脂酸酯、聚甘油-4油酸酯和聚甘油-6聚蓖麻醇酸酯中的一種或多種；[0013]所述聚山梨酯類包括聚山梨酯-20、聚山梨酯-40、聚山梨酯-60和聚山梨酯-80中的一種或多種；[0014]所述聚氧乙烯氫化蓖麻油類包括PEG-40氫化蓖麻油、PEG-60氫化蓖麻油和PEG-80氫化蓖麻油中的一種或多種；[0015]所述磷脂類包括氫化卵磷脂、卵磷脂和大豆卵磷脂中的一種或多種。[0016]優(yōu)選的，所述油脂包括辛酸/癸酸甘油三酯、甘油三(乙基己酸)酯和椰油酸乙基己酯中的一種或多種。[0017]優(yōu)選的，所述乳化劑包括辛基葡糖苷、聚甘油-10油酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯和卵磷脂中的一種或多種。[0018]優(yōu)選的，所述助乳化劑包括甘油、1,2-己二醇、1,2-戊二醇和1,3-丙二醇中的一種或多種。[0019]優(yōu)選的，所述靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物的粒徑為10～500nm。[0020]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物的制備方法，包括以下步驟：[0021]將光果甘草根提取物、油脂和乳化劑混合，得到油相；[0022]將二葡糖基棓酸、油橄欖葉提取物、伸長(zhǎng)海條藻提取物、助乳化劑和水混合，得到水相；[0023]將所述油相與所述水相混合乳化后進(jìn)行微米化處理，得到微米級(jí)分散體；[0024]將所述微米級(jí)分散體進(jìn)行納米化處理，得到所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物。[0025]優(yōu)選的，所述微米化處理為剪切混合，所述剪切混合的轉(zhuǎn)速為4000～30000rpm,時(shí)間為1～20min。[0026]優(yōu)選的，所述納米化處理為高壓均質(zhì)處理或高壓微射流處理；[0027]所述高壓均質(zhì)處理的壓力為300～1600bar,溫度為20～70℃,循環(huán)次數(shù)為1～10[0028]所述高壓微射流處理的壓力為3000～16000psi,溫度為20～70℃,循環(huán)次數(shù)為1~10次。[0029]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合5物或上述技術(shù)方案所述的制備方法制備得到的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物在制備美白化妝品中的應(yīng)用。[0030]本發(fā)明提供了一種靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物，按質(zhì)量百分含量計(jì)，包括：1～10%二葡糖基棓酸、1～10%光果甘草根提取物、1～10%油橄欖葉提取物、1~10%伸長(zhǎng)海條藻提取物、1～10%油脂、1～20%乳化劑、1～30%助乳化劑和余量的水；所述油脂包括辛酸/癸酸甘油三酯、棕櫚酸甘油三酯、棕櫚酸異丙酯、甘油豆蔻酸異丙酯、椰油酸乙基己酯、棕櫚酸乙基己酯中的一種或多種；所述乳化劑包括葡糖苷類、聚甘油類、聚山梨酯類、聚氧乙烯氫化蓖麻油類和磷脂類中的一種或多種；所述助乳化己二醇、1,2-戊二醇和1,3-丙二醇中的一種或多種。本發(fā)明綜合考慮多種美白機(jī)制，采用二葡糖基棓酸、光果甘草根提取物、油橄欖葉提取物和伸長(zhǎng)海條藻提取物配伍，實(shí)現(xiàn)多效多靶點(diǎn)功效成分協(xié)同增效，具體為：二葡糖基棓酸可通過(guò)抑制活性氧簇ROS產(chǎn)生，防止脂褐素在號(hào)途徑，抑制黑色素產(chǎn)生的關(guān)鍵基因MITF表達(dá)；同時(shí)可阻止毛孔內(nèi)的皮脂氧化，修護(hù)毛孔粗現(xiàn)象；光果甘草根提取物不僅對(duì)酪氨酸酶活性有明顯抑制作用，還可作用于多巴色素互變氧生成作用；伸長(zhǎng)海條藻產(chǎn)生的海藻多酚可以激活色素沉著障礙的關(guān)鍵靶點(diǎn)—SDF-1的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)成纖維母細(xì)胞對(duì)黑色素細(xì)胞的調(diào)控；油橄欖葉提取物具有抗炎作用，改善炎癥引起的紅血絲、炎癥后色素沉著；幫助提升皮膚自身清除氧自由基的能力，保護(hù)皮膚細(xì)胞不受紫外線的傷害。本發(fā)明提供上述四種美白功效組分的配伍，能有效靶向作用黑素細(xì)胞和成纖色素轉(zhuǎn)移、激活蛋白酶體活性、減少氧化炎癥損傷以及UV刺激，形成一種多功合物。另一方面：本發(fā)明采用上述油脂、乳化劑和助乳化劑對(duì)四種功效成分進(jìn)行納米化包裹遞送?；谏鲜鲇椭?、乳化劑和助乳化劑形成的納米載體結(jié)構(gòu)以及特性，本發(fā)明經(jīng)過(guò)納米化包裹得到的組合物，具有良好的穩(wěn)定性和水分散性，增大了多組分美白功效成分的溶解度，同時(shí)也改善了功效成分的刺激性，使得功效成分在產(chǎn)品中可以達(dá)到足夠的濃度從而發(fā)揮相應(yīng)的功能效果。在有效提高各功效成分溶解性的同時(shí)為其提供穩(wěn)定儲(chǔ)存空間，避免功效成分存儲(chǔ)與使用前發(fā)生非必要降解或失活，有利于提高美白產(chǎn)品中功效物質(zhì)濃度。更重要的，本發(fā)明充分利用了納米載體的經(jīng)皮滲透特性，生物相容性，控釋緩釋特性等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明提供的納米組合物能促進(jìn)上述四種功效成分高效透過(guò)皮膚屏障，能迅速到達(dá)黑色素細(xì)胞分布的基底層以及位于皮膚深處的真皮層。美白納米組合物皮膚滲透性和滯留性能良好，能在靶組織高濃度富集，長(zhǎng)時(shí)間滯留，緩釋控釋，有效被靶細(xì)胞攝取，提高功效成分的生物利用附圖說(shuō)明[0031]圖1為細(xì)胞安全性評(píng)價(jià)結(jié)果；[0032]圖2為雞胚刺激評(píng)價(jià)結(jié)果；[0033]圖3為皮膚累積透過(guò)量和皮膚儲(chǔ)留量結(jié)果；6[0034]圖4為激光共聚焦顯微鏡觀察皮膚滲透結(jié)果；[0035]圖5為激光共聚焦觀察B16F10細(xì)胞攝取行為結(jié)果；[0036]圖6為流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞攝取結(jié)果；[0037]圖7為黑素細(xì)胞酪氨酸酶活性的測(cè)定結(jié)果；[0038]圖8為黑素細(xì)胞黑素含量的測(cè)定結(jié)果；[0039]圖9為3D皮膚模型相關(guān)測(cè)定結(jié)果；[0040]圖10為使用美白納米組合物精華液前后變化對(duì)比結(jié)果；[0041]圖11為使用美白納米組合物精華液前后變化結(jié)果。具體實(shí)施方式[0042]本發(fā)明提供了一種靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物，按質(zhì)量百分含量計(jì)，包括：1～10%二葡糖基棓酸、1～10%光果甘草根提取物、1～10%油橄欖葉提取物、1~10%伸長(zhǎng)海條藻提取物、1～10%油脂、1～20%乳化劑、1～30%助乳化劑和余量的水；[0043]所述油脂包括辛酸/癸酸甘油三酯、棕櫚酸甘油三酯、棕櫚酸異丙酯、甘油三(乙基己酸)酯、肉豆蔻酸異丙酯、椰油酸乙基己酯、棕櫚酸乙基己酯中的一種或多種；[0044]所述乳化劑包括葡糖苷類、聚甘油類、聚山梨酯類、聚氧乙烯氫化蓖麻油類和磷脂類中的一種或多種；[0045]所述助乳化劑包括二乙醇二硬脂酸、乙氧基二甘醇、雙丙甘醇、甘油、丁二醇、山梨(糖)醇、異丙醇、1,2-己二醇、1,2-戊二醇和1,3-丙二醇中的一種或多種。[0046]在本發(fā)明中，若無(wú)特殊說(shuō)明，所有制備原料/組分均為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的市售產(chǎn)品。[0047]以質(zhì)量百分含量計(jì)，本發(fā)明提供的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物包括1～10%二葡糖基棓酸，優(yōu)選為1～5%。[0048]在本發(fā)明中，二葡糖基棓酸可通過(guò)抑制活性氧簇ROS產(chǎn)生，防止脂褐素在皮膚的生成；作用于黑素細(xì)胞，通過(guò)抑制酪氨酸酶的活性，有效阻止黑色素合成；通過(guò)Wnt信號(hào)途徑，抑制黑色素產(chǎn)生的關(guān)鍵基因MITF表達(dá)。同時(shí)可阻止毛孔內(nèi)的皮脂氧化，修護(hù)毛孔粗大現(xiàn)象；抑制UV導(dǎo)致DNA損傷，修護(hù)皮膚暗紅現(xiàn)象；抑制炎癥因子葡糖基棓酸還可抑制黑素小體從黑素細(xì)胞的樹突向角質(zhì)層轉(zhuǎn)運(yùn)，阻止皮膚黑化現(xiàn)象。[0049]以質(zhì)量百分含量計(jì)，本發(fā)明提供的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物包括1～10%光果甘草根提取物，優(yōu)選為1～5%。[0050]在本發(fā)明中，光果甘草根提取物是從光果甘草中提取的黃酮類物質(zhì)，主要活性物為光甘草定。其不僅對(duì)酪氨酸酶活性有明顯抑制作用，還可作用于多巴色素互變酶(TRP-2)、DHICA氧化酶和α-MSH促黑激素。另外光果甘草根提取物還具有抑制炎癥及活性氧生成作用，有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明光果甘草根提取物的美白效果比維生素C高出232倍。[0051]以質(zhì)量百分含量計(jì)，本發(fā)明提供的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物包括1～10%油橄欖葉提取物，優(yōu)選為1～5%。[0052]在本發(fā)明中，油橄欖葉提取物富含生物多酚、黃酮等活性分子，主要的活性成分是橄欖苦甙和羥基酪醇，可以刺激巨噬細(xì)胞活性，降低致炎因子表達(dá)，具有抗炎作用，改善炎癥引起的紅血絲、炎癥后色素沉著。橄欖苦苷可以幫助提升皮膚自身清除氧自由基的能力，7保護(hù)皮膚細(xì)胞不受紫外線的傷害。羥基酪醇是強(qiáng)力的抗氧化劑之一，抗氧化能力高于輔酶和年齡斑點(diǎn)。[0053]以質(zhì)量百分含量計(jì)，本發(fā)明提供的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物包括1～10%伸長(zhǎng)海條藻提取物，優(yōu)選為1～5%。[0054]在本發(fā)明中，伸長(zhǎng)海條藻產(chǎn)生的海藻多酚可以激活色素沉著障礙的關(guān)鍵靶點(diǎn)一SDF-1的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)成纖維母細(xì)胞對(duì)黑色素細(xì)胞的調(diào)控。試驗(yàn)顯示，其能使白種人志愿者黑斑中的黑色素含量顯著降低(一個(gè)月內(nèi)下降12.6%,效果是安慰劑的兩倍),亞洲人皮膚上可見斑點(diǎn)的數(shù)量顯著減少(一個(gè)月內(nèi)減少156%),而非洲人皮膚上色素沉著斑的黑色素含量顯著下降(2個(gè)月內(nèi)下降327%)。[0055]雖然科學(xué)選擇搭配不同美白機(jī)制，同時(shí)從數(shù)個(gè)靶點(diǎn)途徑起效，可有效提高整體美白效果。但是多靶點(diǎn)起效也意味著需要采用多種不同的功效成分組合，或搭配具有多功能的不同成分，在此過(guò)程中要避免成分相互干擾或反應(yīng)，才能夠增加整體美白作用效果。本發(fā)明創(chuàng)造性的采用二葡糖基棓酸、光果甘草根提取物、油橄欖葉提取物和伸長(zhǎng)海條藻提取物四種美白功效組分協(xié)同配伍，實(shí)現(xiàn)了組分間的協(xié)同增效，能夠?qū)崿F(xiàn)多功效美白，從而增強(qiáng)美[0056]本發(fā)明采用二葡糖基棓酸、光果甘草根提取物、油橄欖葉提取物和伸長(zhǎng)海條藻提取物四種美白功效組分協(xié)同配伍，四種美白功效組分的質(zhì)量百分含量不能過(guò)高也不能過(guò)低，當(dāng)所述美白納米組合物中功效成分含量過(guò)低時(shí)，其美白效果不顯著;隨功效成分含量增高，美白效果增加，但功效成分含量超過(guò)一定值時(shí)，會(huì)引起美白納米組合物粒徑大小顯著增[0057]以質(zhì)量百分含量計(jì)，本發(fā)明提供的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物包括1～10%油脂，優(yōu)選為1～8%。[0058]在本發(fā)明中，所述油脂包括辛酸/癸酸甘油三酯、棕櫚酸甘油三酯甘油三(乙基己酸)酯、肉豆蔻酸異丙酯、椰油酸乙基己酯、棕櫚酸乙基己酯中的一種或多種；更優(yōu)選包括辛酸/癸酸甘油三酯、甘油三(乙基己酸)酯和椰油酸乙基己酯中的一種或多種。[0059]以質(zhì)量百分含量計(jì)，本發(fā)明提供的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物包括1～20%乳化劑，優(yōu)選為5～20%。[0060]在本發(fā)明中，所述乳化劑包括葡糖苷類、聚甘油類、聚山梨酯類、聚氧乙烯氫化蓖麻油類和磷脂類中的一種或多種。[0061]在本發(fā)明中，所述葡糖苷類優(yōu)選包括辛基葡糖苷、椰油基葡糖苷和花生醇葡糖苷中的一種或多種。[0062]在本發(fā)明中，所述聚甘油類優(yōu)選包括聚甘油-10油酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10二異硬脂酸酯、聚甘油-4油酸酯和聚甘油-6聚蓖麻醇酸酯中的一種或多種。[0063]在本發(fā)明中，所述聚山梨酯類優(yōu)選包括聚山梨酯-20、聚山梨酯-40、聚山梨酯-60和聚山梨酯-80中的一種或多種。[0064]在本發(fā)明中，所述聚氧乙烯氫化蓖麻油類優(yōu)選包括PEG-40氫化蓖麻油、PEG-60氫化蓖麻油和PEG-80氫化蓖麻油中的一種或多種。8[0065]在本發(fā)明中，所述磷脂類優(yōu)選包括氫化卵磷脂、卵磷脂和大豆卵磷脂中的一種或[0066]在本發(fā)明中，所述乳化劑優(yōu)選包括辛基葡糖苷、聚甘油-10油酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯和卵磷脂中的一種或多種。[0067]以質(zhì)量百分含量計(jì)，本發(fā)明提供的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物包括1～30%助乳化劑，優(yōu)選為5～20%。選包括甘油、1,2-己二醇、1,2-戊二醇和1,3-丙二醇中的一種或多種。[0069]本發(fā)明采用上述限定的油脂、乳化劑、助乳化劑種類與質(zhì)量百分含量與本發(fā)明中四種美白功效組分配伍，能夠形成納米載體包裹結(jié)構(gòu)，制備的美白納米組合物粒徑更小、大[0070]以質(zhì)量百分含量計(jì)，本發(fā)明提供的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物包括余量的水。[0072]在本發(fā)明中，所述靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物的粒徑優(yōu)選為10~500nm,更優(yōu)選為10～200nm。本發(fā)明提供的美白納米組合物的粒徑優(yōu)選為10～200nm范圍[0073]本發(fā)明采用多中美白功效成分組合，由于各種功效成分的分子量大小、親疏水性、溶解性等存在差異，使其難以在目標(biāo)濃度下，在同一分散體系中長(zhǎng)時(shí)間保持充分溶解、分散狀態(tài)；會(huì)導(dǎo)致多種功效成分在體系中易發(fā)生析出、分層及沉淀等不穩(wěn)定現(xiàn)象，將直接影響產(chǎn)應(yīng)用時(shí)，這些物質(zhì)可能引起皮膚刺激甚至過(guò)敏反應(yīng)。本發(fā)明采用二葡糖基棓酸、光果甘草根提取物、油橄欖葉提取物和伸長(zhǎng)海條藻提取物四種美白功效組分協(xié)同配伍，同時(shí)采用上述限定的油脂、乳化劑、助乳化劑種類與質(zhì)量百分含量與四種美白功效組分配伍，得到的美白組合物具有良好的穩(wěn)定性和水分散性，增大了功效成分的溶解度，同時(shí)也改善了功效成分的刺激性，使得功效成分在產(chǎn)品中可以達(dá)到足夠的濃度從而發(fā)揮相應(yīng)的功能效果。在有效提高各功效成分溶解性的同時(shí)為其提供穩(wěn)定儲(chǔ)存空間，避免功效成分存儲(chǔ)與使用前發(fā)生非必要降解或失活。[0074]同時(shí)，本發(fā)明充分考慮了由于皮膚屏障的存在，以及多功效成分的理化性質(zhì)例如分子量，溶解度，油水分配系數(shù)等不同，會(huì)導(dǎo)致成分透過(guò)皮膚屏障進(jìn)入靶部位的效果存在顯著差異，甚至部分成分無(wú)法有效透過(guò)屏障。本發(fā)明將美白納米組合物的粒徑優(yōu)選為10~500nm,通過(guò)上述限定的油脂、乳化劑、助乳化劑種類與質(zhì)量百分含量形成美白功效組分的納米載體，充分利用納米載體的經(jīng)皮滲透特性，生物相容性，控釋緩釋特性等優(yōu)點(diǎn)，形成的納米組合物能促進(jìn)上述四種功效成分高效透過(guò)皮膚屏障，能迅速到達(dá)黑色素細(xì)胞分布的基底層以及位于皮膚深處的真皮層。美白納米組合物皮膚滲透性和滯留性能良好，能在靶組[0075]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合9[0077]將二葡糖基棓酸、油橄欖葉提取物、伸長(zhǎng)海條藻提取物、助乳化劑和水混合，得到水相；[0078]將所述油相與所述水相混合乳化后進(jìn)行微米化處理，得到微米級(jí)分散體；[0079]將所述微米級(jí)分散體進(jìn)行納米化處理，得到所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物。[0080]本發(fā)明將光果甘草根提取物、油脂和乳化劑混合(以下稱為第一混合),得到油相。在本發(fā)明中，所述第一混合的溫度優(yōu)選為40～50℃,更優(yōu)選為50℃。在本發(fā)明中，所述第一混合優(yōu)選在水浴加熱條件下進(jìn)行。[0081]本發(fā)明將二葡糖基棓酸、油橄欖葉提取物、伸長(zhǎng)海條藻提取物、助乳化劑和水混合(以下稱為第二混合),得到水相。在本發(fā)明中，所述第二混合的溫度優(yōu)選為40～50℃,更優(yōu)選為50℃。在本發(fā)明中，所述第二混合優(yōu)選在水浴加熱條件下進(jìn)行。[0082]得到水相和油相后，本發(fā)明將所述油相與所述水相混合乳化后進(jìn)行微米化處理，得到微米級(jí)分散體。在本發(fā)明中，所述水相和油相的混合優(yōu)選為：將所述水相滴加至所述油相中，所述滴加的速度優(yōu)選為8滴/秒。在本發(fā)明中，所述混合乳化在攪拌的條件下進(jìn)行，所述混合乳化的轉(zhuǎn)速優(yōu)選為500～600rpm,所述混合乳化的溫度優(yōu)選為40～50℃。[0083]在本發(fā)明中，所述微米化處理優(yōu)選為剪切混合，所述剪切混合的轉(zhuǎn)速優(yōu)選為4000~30000rpm,更優(yōu)選為10000～30000rpm;時(shí)間優(yōu)選為1～20min,更優(yōu)選為3～15min。所述微米化處理的溫度優(yōu)選為40～50℃。[0084]得到微米級(jí)分散體后，本發(fā)明將所述微米級(jí)分散體進(jìn)行納米化處理，得到所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物。[0085]在本發(fā)明中，所述納米化處理優(yōu)選為高壓均質(zhì)處理或高壓微射流處理。在本發(fā)明中，所述高壓均質(zhì)處理的壓力優(yōu)選為300～1600bar,更優(yōu)選為800～1400bar;溫度優(yōu)選為20~70℃,更優(yōu)選為30～50℃;循環(huán)次數(shù)為1～10次，更優(yōu)選為3～8次。在本發(fā)明中，所述高壓微射流處理的壓力優(yōu)選為3000～16000psi,更優(yōu)選為8000～14000psi;溫度優(yōu)選為20～70℃,更優(yōu)選為30～50℃;循環(huán)次數(shù)優(yōu)選為1～10次，更優(yōu)選為2～8次。[0086]本發(fā)明通過(guò)上述制備方法將上述四種功效成分共同包裹于納米載體中，包載后依然保持成分結(jié)構(gòu)的完整性和生物活性，同時(shí)提高功效成分光、熱穩(wěn)定性，改善難溶活性成分的溶解性和水分散性，降低部分活性成分刺激性，能夠有效促進(jìn)高含量的功效成分高效透過(guò)皮膚屏障，能迅速到達(dá)黑色素細(xì)胞分布的基底層以及位于皮膚深處的真皮層，長(zhǎng)時(shí)間滯[0087]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物或上述技術(shù)方案所述的制備方法制備得到的靶向成纖維細(xì)胞和黑素細(xì)胞的美白納米組合物在制備美白化妝品中的應(yīng)用。[0088]在本發(fā)明中，所述美白化妝品的形式包括但不限于爽膚水、膏霜、乳液、精華和凝膠。本發(fā)明所述美白納米組合物易溶于水，使用方便。本發(fā)明所述美白納米組合物在美白化妝品中添加的質(zhì)量百分含量?jī)?yōu)選為0.1～30%,更優(yōu)選為1～30%。[0089]為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)地描述，但不能將它們理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。[0091]按質(zhì)量百分比計(jì)，將2%光果甘草根提取物、3%辛酸/癸酸甘油三酯、3%甘油三(乙基己酸)酯、5%辛基葡糖苷、5%聚甘油-10油酸酯混合，50℃水浴加熱溶解，得到油相；[0092]將2%二葡糖基棓酸、2%油橄欖葉提取物、2%伸長(zhǎng)海條藻提取物、10%1,2-戊二醇、10%1,2-己二醇加到余量純化水中，50℃水浴加熱溶解，得到水相；[0093]將水相以8滴/秒的速度滴加至油相中并在50℃、600rpm的轉(zhuǎn)速下不斷攪拌，混合均勻后在10000rpm的轉(zhuǎn)速下高速剪切處理3min,得到微米級(jí)分散體；[0094]將微米級(jí)分散體在溫度為50℃,壓力為800bar的條件下進(jìn)行高壓均質(zhì)處理，循環(huán)4[0095]實(shí)施例2～12[0096]實(shí)施例2～12配方如表1所示，余量為純化水，制備方法與實(shí)施例1相同，區(qū)別在于配方中物質(zhì)種類或含量發(fā)生變化。[0098]配方與實(shí)施例1相同，區(qū)別在于，按照實(shí)施例1步驟獲得微米級(jí)分散體后，在壓力為8000psi,溫度為50℃的條件下進(jìn)行高壓微射流處理，循環(huán)2次，冷卻至室溫，得到美白納米組合物。[0100]配方與實(shí)施例1相同，區(qū)別在于，按照實(shí)施例1步驟獲得微米級(jí)分散體后，在壓力為500bar,溫度為50℃的條件下進(jìn)行高壓均質(zhì)處理，循環(huán)2次，冷卻至室溫，得到美白納米組合[0102]配方與實(shí)施例1相同，區(qū)別在于，按照實(shí)施例1步驟獲得微米級(jí)分散體后，在壓力為800bar,溫度為50℃的條件下進(jìn)行高壓均質(zhì)處理，循環(huán)2次，冷卻至室溫，得到美白納米組合物。[0103]表1實(shí)施例1～15組成11CN116531271B例12酯3聚甘油-10油酸酯51,2-戊二醇2物2351,2-己二醇228同實(shí)施例18物8831同實(shí)施例11物114同實(shí)施例1酯1同實(shí)施例115同實(shí)施例1酯5同實(shí)施例156同實(shí)施例16同實(shí)施例17同實(shí)施例11同實(shí)施例1聚甘油-10油酸酯18同實(shí)施例1同實(shí)施例1聚甘油-10油酸酯9同實(shí)施例1聚甘油-10二異硬脂同實(shí)施例1同實(shí)施例11,2-戊二醇21,2-己二醇2同實(shí)施例11,2-戊二醇1,2-己二醇同實(shí)施例11.3-丙二醇同實(shí)施例1同實(shí)施例1同實(shí)施例1[0107]對(duì)比例1[0108]配方如表2所示，余量為純化水，制備方法與實(shí)施例1相同，區(qū)別在油脂劑種類為環(huán)甲氧基硅氧烷和異壬酸異壬酯。[0109]對(duì)比例2[0110]配方如表2所示，余量為純化水，制備方法與實(shí)施例1相同，區(qū)別在乳化劑種類為吐溫80和司盤80。[0111]對(duì)比例3[0112]配方如表2所示，余量為純化水，制備方法與實(shí)施例1相同，區(qū)別在助乳化劑種類為正丁醇。[0113]對(duì)比例4～7[0114]配方如表2所示，余量為純化水，制備方法與實(shí)施例1相同，區(qū)別在于配方中功效成分種類含量發(fā)生變化。[0115]對(duì)比例8[0116]配方如表2所示，余量為純化水，將全部功效成分、油脂、助乳化劑與10%二甲基亞砜加入到純化水中，50℃超聲助溶，得到游離美白組合物。[0117]對(duì)比例9[0118]制備方法與實(shí)施例1相同，區(qū)別在于配方中功效成分僅為2%油橄欖葉提取物，得到含2%油橄欖葉提取物的單包納米載體。[0119]對(duì)比例10[0120]制備方法與實(shí)施例1相同，區(qū)別在于配方中功效成分為2%光果甘草根提取物、2%二葡糖基棓酸及2%伸長(zhǎng)海條藻提取物原料，得到含2%光果甘草根提取物、2%二葡糖基棓酸和2%伸長(zhǎng)海條藻提取物的納米組合物。[0121]表2對(duì)比例1～10組成對(duì)比例1同實(shí)施例13同實(shí)施例1異壬酸異壬酯32同實(shí)施例1吐溫805同實(shí)施例1司盤8053同實(shí)施例148同實(shí)施例158同實(shí)施例168同實(shí)施例178同實(shí)施例18同實(shí)施例1同實(shí)施例190同實(shí)施例10202同實(shí)施例1202[0124]應(yīng)用例1[0125]制備人體功效測(cè)試樣品[0126]將2.0%甘油、0.3%卡波姆，0.1%黃原膠、苯氧乙醇0.5%、和97.2%純化水于室溫下攪拌溶解，得到空白精華液。并按下表準(zhǔn)備各組測(cè)試樣品。[0127]表3測(cè)試精華制備方式[0128]對(duì)照組1空白精華對(duì)照組2空白精華液+5%對(duì)比例4所得樣品對(duì)照組3空白精華液+5%對(duì)比例5所得樣品對(duì)照組4空白精華液+5%對(duì)比例6所得樣品對(duì)照組5空白精華液+5%對(duì)比例7所得樣品對(duì)照組6空白精華液+5%對(duì)比例8所得樣品樣品組空白精華液+5%實(shí)施例1所得樣品[0129]測(cè)試?yán)?[0130]存儲(chǔ)穩(wěn)定性[0131]將實(shí)施例1～15以及對(duì)比例1～3制備得到的美白納米組合物置于密閉容器中，分別在常溫、4℃、45℃、條件下各放置3個(gè)月，并進(jìn)行凍融實(shí)驗(yàn)，檢查樣品在貯存前后各條件下的外觀，測(cè)試納米組合物在貯存前后各條件下的粒徑，綜合評(píng)價(jià)納米組合物的穩(wěn)定性。[0132]凍融實(shí)驗(yàn)：將樣品置于密閉容器中，于-20℃放置48小時(shí)后置于45℃放置48小時(shí)，[0133]納米組合物的粒徑與Zeta電位均采用ZetasizerNano-ZS90納米粒度電位儀檢測(cè)，取適量納米組合物，用超純水稀釋50倍，使樣液的平均光強(qiáng)為200～300,激光粒度儀粒徑測(cè)測(cè)試結(jié)果見表4。表4穩(wěn)定性結(jié)果樣品室溫3個(gè)月4℃3個(gè)月45℃3個(gè)月實(shí)施例1無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例2無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例3無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例5無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例6無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mVCN116531271B說(shuō)明書14/21頁(yè)實(shí)施例7無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例8無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例9無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例10無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例11無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例12無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例13無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV實(shí)施例15無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出電位/mV對(duì)比例1無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出表面浮油電位/mV-分層、析出分層、析出分層、析出分層、析出--電位/mV--無(wú)分層、析出無(wú)分層、析出析出無(wú)分層、析出大量析出電位/mV含量條件下制備的不同美白納米組合物外觀均一，在室溫、4℃、45℃下存儲(chǔ)3個(gè)月后無(wú)分層、析出等不穩(wěn)定現(xiàn)象，粒徑分布范圍為20～500nm,Zeta電位為-5～-50mV。按更優(yōu)選條件下配方制備的美白納米組合物(實(shí)施例1、3、4、8)粒徑更小，均小于100nm,在應(yīng)用時(shí)更具有射流處理獲得的納米組合物，其粒徑穩(wěn)定性均相比于同配方高壓均質(zhì)處理的納米組合物無(wú)明顯差別。高壓均質(zhì)壓力與均質(zhì)次數(shù)的調(diào)整會(huì)影響納米組合物性質(zhì)(實(shí)施例1、14、15),在800bar條件下處理4次后獲得納米組合物粒徑最優(yōu)(實(shí)施例1)。替換本發(fā)明所述的油脂、乳化劑、助乳化劑種類會(huì)導(dǎo)致納米組合物穩(wěn)定性降低，對(duì)比例1在45℃存儲(chǔ)3個(gè)月后出現(xiàn)明顯浮油，對(duì)比例2無(wú)法形成穩(wěn)定納米組合物，對(duì)比例[0142]化妝品用納米載體制品的離心穩(wěn)定性暫無(wú)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，因此在化妝品行業(yè)原料離心穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)規(guī)定的基礎(chǔ)上，選擇以3000、5000、8000、10000r[0143]表5美白納米組合物離心穩(wěn)定性樣品離心條件(r/min)實(shí)施例1均一、澄清透明均一、澄清透明均一、澄清透明均一、澄清透明均一、澄清透明均一、澄清透明均一、澄清透明均一、澄清透明實(shí)施例13均一、澄清透明均一、澄清透明良好的離心穩(wěn)定性。[0147]包封率及載藥量測(cè)定[0148]實(shí)施例1美白納米組合物稀釋后離心，測(cè)定游離光甘草定的含量W,同時(shí)樣品破乳后離心測(cè)定上清中光甘草定的含量W。按公式1計(jì)算美白納米組合物的載藥量(Drugloadingefficiency,DLE),按公式2計(jì)算美白納米組合物的包封率[0152]經(jīng)HPLC檢測(cè)，美白納米組合物中光甘草定的包封率為88.7±0.6%,載藥量為1.77性。[0163]選擇30例受試者，將10%實(shí)施例1～15所述美白納米組合物和空白對(duì)照均貼于受試者的前臂曲側(cè)持續(xù)24h,待壓痕消失后觀察皮膚反應(yīng)。組10%美白納米組合物精華液和對(duì)照組6所述10%游離美白組合物精華液中功效成分的單位面積累積透過(guò)量合單位面積皮膚儲(chǔ)留量。按公式3計(jì)算不同取樣時(shí)間功效成分的皮膚累物濃度，V?為擴(kuò)散池的體積即加入釋放介質(zhì)的量，V為Q./S,其中S為擴(kuò)散池的面積2.27cm2。[0170]計(jì)算試樣中光果甘草根提取物主活性物光甘草定的單位面積皮膚累積透過(guò)量和皮膚儲(chǔ)留量，結(jié)果見圖3(注：游離組合物相比，**P<0.01)。游離組合物精華液、納米組合物精華液中光甘草定的24h單位面積皮膚累積透過(guò)量分別為1.88μg/cm2和8.42μg/cm2,皮膚儲(chǔ)甘草定的單位面積皮膚累積透過(guò)量提高了347.87%,皮膚儲(chǔ)留量提高了317.38%,說(shuō)明活性成分經(jīng)納米載體包裹后能有效促進(jìn)功效成分的透皮吸收和在皮膚中的儲(chǔ)留量，提高其皮膚生物利用率。[0172]激光共聚焦顯微鏡觀察皮膚滲透行為[0173]本測(cè)試實(shí)驗(yàn)裝置同上述透皮實(shí)驗(yàn)裝置，將羅丹明B(RhodamineB,RhoB)標(biāo)記的應(yīng)用例1中樣品組10%美白納米組合物精華液和對(duì)照組6所述10%游離美白組合物精華液試驗(yàn)后樣品冷凍切片，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察。[0174]激光共聚焦顯微鏡觀察不同時(shí)間點(diǎn)游離RhoB、RhoB納米載體的皮膚組織滲透行為見圖4?？梢钥闯觯S著時(shí)間的延長(zhǎng)，皮膚的熒光滲透深度增加。結(jié)果表明，在相同時(shí)間內(nèi)，RhoB標(biāo)記美白納米組合物精華液在皮膚中熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于游離美白組合物精華液，美白納米組合物精華液可滲透進(jìn)入皮膚深層組織。納米載體能夠促進(jìn)包載成分快速滲透皮膚。[0176](1)激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞攝取行為[0177]將添加量為0.1%的異硫氰酸熒光素(FITC)代替美白功效成分，按照表1、2中實(shí)施例1和對(duì)比例8配方制備FITC標(biāo)記納米載體以及游離FITC。分別對(duì)B16F10細(xì)胞處理后染色，使用激光共聚焦顯微鏡觀察。[0178]激光共聚焦顯微鏡觀察B16F10細(xì)胞對(duì)納米載體攝取行為，結(jié)果見圖5,圖5中的游度微弱，而FITC納米載體熒光已進(jìn)入細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于游離FITC。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與游離FITC比較，F(xiàn)ITC納米載體能夠更多的被B16F10細(xì)胞攝取，將包載的活性物有效遞送進(jìn)入皮膚靶細(xì)胞發(fā)揮作用。[0180]B16F10細(xì)胞經(jīng)游離FITC、FITC納米載體處理后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度。[0181]流式細(xì)胞儀檢測(cè)B16F10細(xì)胞對(duì)納米載體攝取行為結(jié)果見圖6(注：與游離相比，**P光強(qiáng)度分別提高了175.40%和111.63%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明納米載體可以顯著提升B16F10細(xì)胞對(duì)其包載物的細(xì)胞攝取和細(xì)胞內(nèi)蓄積。[0183]細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶活性測(cè)定[0184]采用L-Dopa氧化法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶的活性。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的B16F10細(xì)胞，以5.0×10?個(gè)/孔的密度接種于24孔板，培養(yǎng)24h后，將細(xì)胞分為對(duì)照組、模型組和實(shí)驗(yàn)完全培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組加入含有100nmol/Lα-MSH和均稀釋2000倍的對(duì)比例8、對(duì)比例9、對(duì)比例10和實(shí)施例1所制備組合物的DMEM完全培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，每孔添加200μL含有1%(V%)TritonX-100的細(xì)胞裂解液，-80℃冷凍裂解30min,收集細(xì)胞裂解液離心，取100μL上清液于96孔板，并加入100μL0.1%(W/V)L-多巴溶液，37℃孵育2h,用酶標(biāo)儀于495nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度(A)。圖7為黑素細(xì)胞酪氨[0185]由圖7可知，與模型組相比，對(duì)比例8、對(duì)比例9、對(duì)比例10與實(shí)施例1均能顯著降低酪氨酸酶活性。與對(duì)比例8相比，實(shí)施例1對(duì)B16F10細(xì)胞酪氨酸酶活性降低效果更顯著(P<0.01)。與對(duì)比例9相比，實(shí)施例1對(duì)B16F10細(xì)胞酪氨酸酶活性降低效果更顯著(P<0.01)。與對(duì)比例10相比，實(shí)施例1對(duì)B16F10細(xì)胞酪氨酸酶活性降低效果更顯著(P<0.01)。結(jié)果表明，只加油橄欖葉提取物的單包納米載體(對(duì)比例9)酪氨酸酶活性抑制率為17%,加光果甘草根提取物、二葡糖基棓酸及伸長(zhǎng)海條藻提取物3種原料的納米組合物(對(duì)比例10)酪氨酸酶活性抑制率為28%,加光果甘草根提取物、二葡糖基棓酸、伸長(zhǎng)海條藻提取物及油橄欖葉提取物4種原料的納米組合物(實(shí)施例1)酪氨酸酶活性抑制率為66%,實(shí)施例1酪氨酸酶抑制率高于對(duì)比例9和對(duì)比例10酪氨酸酶抑制率的總和。與對(duì)比例9相比，實(shí)施例1酪氨酸酶活性抑制率提升了288%,與對(duì)比例10相比，實(shí)施例1酪氨酸酶活性抑制率提升了136%。加了4種原料的游離組合物(對(duì)比例8)酪氨酸酶活性抑制率為22%,與對(duì)比例8相比，實(shí)施例1酪氨酸酶活性抑制率提升了187%。證明油橄欖葉提取物與光果甘草根提取物、二葡糖基棓酸及伸長(zhǎng)海條藻提取物原料復(fù)配能夠促進(jìn)美白功效成分作用效果提升，且經(jīng)包裹后的納米組合物的美白功效比游離成分大大增強(qiáng)。[0187]細(xì)胞黑素含量的測(cè)定及生成情況觀察[0188]采用NaOH裂解法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)黑色素的含量。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的B16F10細(xì)胞，以5.0×10?個(gè)/孔的密度接種于24孔板，培養(yǎng)24h后，將細(xì)胞分為對(duì)照組、模型組和實(shí)驗(yàn)組，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。對(duì)照組僅加DMEM完全培養(yǎng)基，模型組僅加含有100nmol/La-MSH的DMEM完全培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組加入含有100nmol/La-MSH和和均稀釋2000倍的對(duì)比例8、對(duì)比例9、對(duì)比例10和實(shí)施例1所制備組合物的DMEM完全培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，將每孔細(xì)胞分別收集于離心管，向每個(gè)離心管加入200μL含10%DMSO的1mol/LNaOH溶液，然后將EP管置于80℃恒溫水浴鍋加熱1h,裂解細(xì)胞，溶解黑色素，離心，取上清于96孔板，用酶標(biāo)儀于405nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔[0189]由圖8可知，與模型組相比，對(duì)比例8、對(duì)比例9、對(duì)比例10與實(shí)施例1均能顯著降低胞內(nèi)黑素含量。與對(duì)比例8相比，實(shí)施例1對(duì)B16F10細(xì)胞胞內(nèi)黑素含量降低效果更顯著(P<0.01)。與對(duì)比例9相比，實(shí)施例1對(duì)B16F10細(xì)胞胞內(nèi)黑素含量降低效果更顯著(P<0.01)。與對(duì)比例10相比，實(shí)施例1對(duì)B16F10細(xì)胞胞內(nèi)黑素含量降低效果更顯著(P<0.01)。圖8結(jié)果表明，只加油橄欖葉提取物的單包納米載體(對(duì)比例9)胞內(nèi)黑素含量抑制率為13%,加光果甘草根提取物、二葡糖基棓酸及伸長(zhǎng)海條藻提取物3種原料的納米組合物(對(duì)比例10)胞內(nèi)黑素含量抑制率為22%,加光果甘草根提取物、二葡糖基棓酸、伸長(zhǎng)海條藻提取物及油橄欖葉提取物4種原料的實(shí)施例1胞內(nèi)黑素含量抑制率為59%,實(shí)施例1胞內(nèi)黑素含量抑制率高于對(duì)比例9和對(duì)比例10胞內(nèi)黑素含量抑制率的總和。與對(duì)比例9相比，實(shí)施例1胞內(nèi)黑素含量抑制率提升了353%,與對(duì)比例10相比，實(shí)施例1胞內(nèi)黑素含量抑制率提升了168%。加了4種原料的游離組合物(對(duì)比例8)胞內(nèi)黑素含量抑制率為19%,與對(duì)比例8相比，實(shí)施例1胞內(nèi)黑素含量抑制率提升了211%。證明油橄欖葉提取物與光果甘草根提取物、二葡糖基棓酸及伸長(zhǎng)海條藻提取物原料復(fù)配能夠促進(jìn)美白功效成分作用效果提升，且經(jīng)包裹后的納米組合物的美白功效比游離成分大大增強(qiáng)。[0191]3D皮膚黑素模型的美白功效評(píng)價(jià)[0192]利用3D黑素皮膚模型測(cè)定陰性對(duì)照(NC)、陽(yáng)性對(duì)照(PC,曲酸500μg/mL)及樣品組(實(shí)施例1所述美白納米組合物，含量為100μg/mL;)對(duì)3D皮膚黑素模型的表觀色度、表觀亮[0193]圖9中的(A)顯示，與空白組相比，各組經(jīng)UVB輻照處理后表觀色度明顯變黑，與陰性對(duì)照組相比，經(jīng)美白納米組合物處理后，皮膚模型的表觀色度明顯變白，且美白效果優(yōu)于高劑量的曲酸(PC500μg/mL)。[0194]圖9中的(B)顯示，與空白組相比，各組經(jīng)UVB輻照處理后表觀亮度顯著降低P<0.01),與陰性對(duì)照組相比，經(jīng)美白納米組合物處理后，皮膚模型的表觀亮度顯著升高(P<輻照處理后黑素含量顯上升(P<0.01),與陰性對(duì)