ICS65.020.20CCSB05DB23黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布Ⅰ本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責(zé)任。本文件由黑龍江省林業(yè)和草原局提出。本文件起草單位：東北林業(yè)大學(xué)、綏棱縣國有林場三吉臺林場、海倫市森林資源保護中心、國營明水縣明水林場。本文件主要起草人：王玲、付海靜、弓悅、孫振明、李誠、王磊、葉王斌、史恭發(fā)、閆蕾、呂汝彤、趙蕊陽、劉桂伶、楊娟、裴艷春。1溪蓀組培繁殖技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了溪蓀（IrissanguineaDonn.exHorn.）組培繁殖的環(huán)境與設(shè)備消毒、培養(yǎng)基配制、培養(yǎng)條件、無菌苗培育、外植體獲取和處理、愈傷組織誘導(dǎo)、愈傷組織增殖、不定芽分化、生根培養(yǎng)、煉苗、移栽和生產(chǎn)檔案。本文件適用于溪蓀組培繁殖。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用性文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程NY/T2306—2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4環(huán)境與設(shè)備消毒4.1接種室消毒接種室消毒按NY/T2306—2013中8.6的規(guī)定執(zhí)行。4.2培養(yǎng)室消毒培養(yǎng)室消毒按NY/T2306—2013中8.7的規(guī)定執(zhí)行。4.3超凈工作臺消毒超凈工作臺消毒按NY/T2306—2013中8.5和8.6的規(guī)定執(zhí)行。4.4接種器具消毒接種器具按NY/T2306—2013中8.4的規(guī)定執(zhí)行。5培養(yǎng)基配制5.1母液配制培養(yǎng)基母液配制按NY/T2306—2013中7.3的規(guī)定執(zhí)行。25.2培養(yǎng)基配制5.2.1培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基配制成分如下：a)初代培養(yǎng)基為添加30g/L蔗糖+3g/L瓊脂粉的MS培養(yǎng)基，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8；b)繼代培養(yǎng)基為添加30g/L蔗糖的MS固體培養(yǎng)基，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8～6.0；c)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為添加6-BA1.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+NAA0.4mg/L+蔗糖30g/L的MS固體培養(yǎng)基，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8～6.0；d)愈傷組織增殖培養(yǎng)基為添加6-BA0.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+蔗糖30g/L的MS固體培養(yǎng)基，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8～6.0；e)分化培養(yǎng)基為添加6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L的MS固體培養(yǎng)基，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8～6.0；f)生根培養(yǎng)基為添加NAA0.5mg/L+活性炭1.0g/L+蔗糖30g/L的MS固體培養(yǎng)基，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8～6.0。5.2.2培養(yǎng)基配制方法培養(yǎng)基配制方法按NY/T2306—2013中7.4的規(guī)定執(zhí)行。5.3培養(yǎng)基滅菌及保存培養(yǎng)基滅菌及保存方法按LY/T1882—2010中4.2的規(guī)定進行。6培養(yǎng)條件光照周期14h/d、光照強度3000Lux～5000Lux，培養(yǎng)溫度24℃~26℃,空氣相對濕度60%～80%。7無菌苗培育7.1種子消毒挑選顆粒飽滿的種子，用稀釋50倍的洗潔劑水溶液攪拌清洗后，流水沖洗干凈，在室溫下用初始溫度為80℃的水浸泡種子24h，倒掉水后吸干。在超凈工作臺內(nèi)，將種子用75%乙醇浸泡30s，無菌水沖洗3遍～5遍，再用4％次氯酸鈉水溶液浸泡并搖動20min，用無菌水沖洗5次并浸泡10min，水倒掉后將種子放到濾紙上吸干備用。7.2無菌接種消毒后的種子接入初代培養(yǎng)基上培養(yǎng)。8外植體獲取和處理種子萌發(fā)幼苗具3片～4片葉時，在無菌條件下將根部剪掉，葉片保留2.0cm～3.0cm長，接種到繼代培養(yǎng)基中萌發(fā)根系，剪取帶有二級須根的一級須根，切除二級須根后備用。9愈傷組織誘導(dǎo)3將須根切至長度為1.0cm～1.5cm，接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。10愈傷組織增殖從根段上切取黃色、顆粒明顯的愈傷組織接入愈傷組織增殖培養(yǎng)基中。對產(chǎn)生內(nèi)生菌的愈傷組織，可轉(zhuǎn)到添加了100mg/L青霉素G鈉的增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)。待內(nèi)生菌消失后，再移回增殖培養(yǎng)基中。11不定芽分化將增殖后的愈傷組織分割成直徑5mm的小塊，接入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)。12生根培養(yǎng)當不定芽高度≥3cm時，將不定芽單獨切離下來，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)。13煉苗當組培苗根系長度≥3cm時，打開組培瓶煉苗3d，煉苗期間應(yīng)對葉表面噴灑自來水保濕。煉苗后可在溫室內(nèi)移栽。14移栽14.1移栽準備將高溫消毒的草炭土與蛭石按照1:1的比例混合后裝入50孔穴盤中，并將穴盤底部浸入水中至盆中土壤濕潤。14.2移栽取出組培苗，用清水洗凈基部培養(yǎng)基，修剪根，保留2cm，移栽至穴盤中，澆透水。14.3移栽后管理移栽初期，保持空氣濕度≥80%，適時澆水，保持基質(zhì)濕潤，溫度控制在18℃~25℃,逐步增加光照。在