極小種群野生植物華蓋木組培繁殖技術(shù)規(guī)程2025-06-07發(fā)布2025-09-07實(shí)施I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1極小種群野生植物華蓋木組培繁殖技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了極小種群野生植物華蓋木(Manglietiastrumsinicum)組織培養(yǎng)的基本要求、外植體采集與處理、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。分布地域狹窄或呈間斷分布、種群和個(gè)體數(shù)量少、人為干擾將消毒后的外植體接種到特定培養(yǎng)基中，經(jīng)過一段時(shí)間的培養(yǎng)，使之長(zhǎng)出愈傷組織瓶苗煉苗bottleplantletaccl2MS:培養(yǎng)基發(fā)明人名字的縮寫(Murashigeand6-BA:6-芐基腺嘌呤(6-benzyladenined。IBA:吲哚-3-丁酸(indole-3-butyricaci培養(yǎng)基配制、消毒、接種操作、接種器械清洗與消毒、接種室及培養(yǎng)室管理執(zhí)行LY/T1882,其中外植體消毒及誘導(dǎo)、增殖、生根等環(huán)節(jié)涉及的轉(zhuǎn)接、切分均應(yīng)于超凈工作臺(tái)進(jìn)行。培養(yǎng)室培養(yǎng)條件：溫度23℃30℃,光照強(qiáng)度1300Lux～1800Lux,光照時(shí)間10h/d。2月～4月、9月～12月。采集的外植體宜當(dāng)天消毒接種。若需長(zhǎng)途運(yùn)輸，控制在3d內(nèi)，75%酒精擦拭表面后，用干凈的紙a)剪去外植體上葉片，保留葉柄0.3cm~0.5cm,剪成1.5cm～2cm帶芽的莖段，于1%的肥皂液中浸泡10min后用流動(dòng)的自來水清洗干凈；b)用75%酒精消毒8s～10s,無菌水沖洗3次后，用0.1%氯化汞溶液消毒5min～8min,再用無菌水沖洗3次～5次。3MS+6-BA0.5mg/L～3.0mg/L+IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L,pH5.8。MS基本培養(yǎng)基母將消毒外植體葉柄和莖段兩端切去0.2cm～0.5cm,按照芽生長(zhǎng)方向朝上原則，豎直或者傾斜接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每個(gè)培養(yǎng)瓶接1個(gè)芽或者莖段，誘導(dǎo)腋芽和頂芽生長(zhǎng)。MS+6-BA0.0mg/L～2.0mg/L+IAA0.1mg/L～1.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L,pH5.8。腋芽和頂芽生長(zhǎng)至2cm～3cm時(shí)，將其切成帶1個(gè)~2個(gè)節(jié)的莖段，接種于增殖培養(yǎng)基，增殖周期50d～60d。MS+IBA0.1mg/L~2.0mg/b-IA0.1mg/L～2.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L,pH5.8。增殖培養(yǎng)的莖段生長(zhǎng)至3cm～4cm時(shí)，切下生長(zhǎng)健壯、形態(tài)正常、帶頂芽、長(zhǎng)2cm~3cm的莖段進(jìn)行壯苗與生根培養(yǎng)。a)植株生長(zhǎng)健壯、葉形葉色正常，具2片～3片展開葉；a)株高3cm~5cm;b)根數(shù)量多于2條，根長(zhǎng)1cm～2cm。將組培瓶苗移植于遮光率60%～70%、濕度<50%的大棚內(nèi)，閉瓶煉苗7d～10d,使組培苗適應(yīng)自4pH5.8～6.8,覆蓋塑料膜密封消毒7d。準(zhǔn)備規(guī)格為6cm×7cm栽培容器。a)移栽到大棚后30d內(nèi)，溫度20℃~30℃,遮光率75%～85%,空氣濕度70%～80%,基質(zhì)含水量40%～50%;b)移栽30d后，逐步增加光照強(qiáng)度，每7d噴施70%甲基托布津可濕性粉劑800倍液1次和全營(yíng)養(yǎng)素葉面肥500倍液1次，連續(xù)噴施4次～5次。移栽培育1年，生長(zhǎng)健壯，苗高≥20cm,地徑≥0.2cm。5(資料性)MS基本培養(yǎng)基母液組分及配制方法表A.1給出了MS基本培養(yǎng)基母液組分及配制方法。表A.1MS基本培養(yǎng)基母液組分及配制方法數(shù))配制1L培養(yǎng)量(ml)硝酸鉀按藥品稱取量，用密封保存。磷酸二氫鉀按藥品稱取量，用后混合，定容至1存。碘化鉀乙二胺四乙酸二鈉按藥品稱取量，用密封保存。物2按藥品稱取量，用后混合，定容至1VB?或者VPP6(資料