通遼市中醫(yī)院免疫熒光技術(shù)考核一、單選題（每題2分，共20題）1.免疫熒光技術(shù)中，常用的熒光素標(biāo)記抗體不包括以下哪種？A.異硫氰酸熒光素（FITC）B.藻紅蛋白（TRITC）C.四乙基羅丹明（TexasRed）D.堿性磷酸酶（AP）2.在免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，若細(xì)胞核呈紅色熒光，最可能使用的熒光標(biāo)記抗體是？A.FITC標(biāo)記的IgGB.TRITC標(biāo)記的核抗原抗體C.PE標(biāo)記的細(xì)胞質(zhì)蛋白抗體D.APC標(biāo)記的細(xì)胞表面標(biāo)志物3.免疫熒光技術(shù)中，熒光淬滅的主要原因是？A.熒光素分子降解B.光照強(qiáng)度過(guò)高C.樣品pH值不適宜D.抗體與靶抗原結(jié)合不充分4.以下哪種顯微鏡最適合進(jìn)行免疫熒光觀察？A.普通光學(xué)顯微鏡B.熒光顯微鏡C.電子顯微鏡D.共聚焦顯微鏡（非必需）5.免疫熒光技術(shù)中，封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)最常用的試劑是？A.胰蛋白酶B.甘氨酸C.牛血清白蛋白（BSA）D.蛋白酶K6.若免疫熒光實(shí)驗(yàn)中背景熒光過(guò)高，可能的原因是？A.抗體濃度過(guò)高B.封閉不充分C.熒光標(biāo)記抗體質(zhì)量差D.以上都是7.免疫熒光技術(shù)中，熒光強(qiáng)度最強(qiáng)的熒光素是？A.FITCB.TRITCC.AlexaFluor488D.Cy58.在免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，若觀察結(jié)果出現(xiàn)彌散熒光，可能的原因是？A.抗體稀釋比例不當(dāng)B.樣品固定不充分C.熒光淬滅效應(yīng)D.以上都是9.免疫熒光技術(shù)中，熒光淬滅可通過(guò)以下哪種方法緩解？A.增加熒光素濃度B.使用抗淬滅劑C.降低光照時(shí)間D.以上都是10.以下哪種方法可用于提高免疫熒光實(shí)驗(yàn)的特異性？A.使用多克隆抗體B.優(yōu)化抗體稀釋比例C.增加封閉時(shí)間D.以上都是二、多選題（每題3分，共10題）1.免疫熒光技術(shù)中，常用的熒光素包括哪些？A.FITCB.TRITCC.AlexaFluor系列D.堿性磷酸酶2.免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，以下哪些步驟可能導(dǎo)致背景熒光升高？A.抗體濃度過(guò)高B.封閉不充分C.樣品固定過(guò)度D.熒光標(biāo)記抗體純度低3.免疫熒光技術(shù)中，熒光顯微鏡的濾光片系統(tǒng)包括哪些？A.發(fā)射濾光片B.吸收濾光片C.對(duì)比度增強(qiáng)濾光片D.熒光淬滅濾光片4.以下哪些因素會(huì)影響免疫熒光實(shí)驗(yàn)的熒光強(qiáng)度？A.抗體質(zhì)量B.熒光素類型C.樣品保存條件D.顯微鏡光源強(qiáng)度5.免疫熒光技術(shù)中，常用的封閉劑包括哪些？A.BSAB.牛血清去脂奶粉C.胰蛋白酶D.甘氨酸6.免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，以下哪些方法可用于提高特異性？A.使用單克隆抗體B.優(yōu)化抗體孵育時(shí)間C.增加洗滌次數(shù)D.使用多色熒光標(biāo)記7.免疫熒光技術(shù)中，熒光淬滅的原因包括哪些？A.熒光素分子間聚集B.光照強(qiáng)度過(guò)高C.樣品pH值不適宜D.抗體與靶抗原結(jié)合不充分8.以下哪些方法可用于提高免疫熒光實(shí)驗(yàn)的靈敏度？A.增加抗體濃度B.使用直接法檢測(cè)C.優(yōu)化熒光素標(biāo)記比例D.延長(zhǎng)孵育時(shí)間9.免疫熒光技術(shù)中，常用的樣品固定方法包括哪些？A.甲醇固定B.甲醛固定C.冰凍切片D.蛋白酶K消化10.免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，以下哪些因素會(huì)導(dǎo)致熒光信號(hào)減弱？A.抗體稀釋比例不當(dāng)B.樣品保存不當(dāng)C.熒光標(biāo)記抗體降解D.顯微鏡光源強(qiáng)度不足三、判斷題（每題2分，共10題）1.免疫熒光技術(shù)只能檢測(cè)細(xì)胞表面抗原。（×）2.熒光顯微鏡必須使用油鏡才能觀察免疫熒光信號(hào)。（×）3.免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，封閉不充分會(huì)導(dǎo)致背景熒光升高。（√）4.熒光淬滅是免疫熒光實(shí)驗(yàn)中不可避免的現(xiàn)象。（√）5.免疫熒光技術(shù)中，TRITC的熒光強(qiáng)度高于FITC。（√）6.免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，抗體稀釋比例越高，熒光信號(hào)越強(qiáng)。（×）7.免疫熒光技術(shù)只能檢測(cè)蛋白質(zhì)類抗原。（×）8.免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，樣品固定過(guò)度會(huì)導(dǎo)致熒光信號(hào)減弱。（√）9.免疫熒光技術(shù)中，熒光淬滅可通過(guò)增加熒光素濃度緩解。（×）10.免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，多色熒光標(biāo)記會(huì)增加背景熒光。（×）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述免疫熒光技術(shù)的基本原理。2.列舉三種提高免疫熒光實(shí)驗(yàn)特異性的方法。3.解釋熒光淬滅的概念及其影響因素。4.說(shuō)明免疫熒光實(shí)驗(yàn)中樣品固定的意義及常用方法。五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合通遼地區(qū)臨床常見(jiàn)疾?。ㄈ珙愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、布魯氏菌病等），論述免疫熒光技術(shù)在疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。2.分析免疫熒光技術(shù)在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究中的優(yōu)勢(shì)與局限性，并提出改進(jìn)建議。答案與解析一、單選題答案與解析1.D.堿性磷酸酶（AP）——堿性磷酸酶常用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），而非熒光標(biāo)記抗體。2.B.TRITC標(biāo)記的核抗原抗體——TRITC呈紅色熒光，常用于標(biāo)記細(xì)胞核。3.A.熒光素分子降解——熒光素降解會(huì)導(dǎo)致熒光信號(hào)減弱。4.B.熒光顯微鏡——免疫熒光需通過(guò)熒光顯微鏡觀察熒光信號(hào)。5.C.牛血清白蛋白（BSA）——BSA可封閉非特異性位點(diǎn)，減少背景熒光。6.D.以上都是——抗體濃度過(guò)高、封閉不充分、抗體質(zhì)量差均會(huì)導(dǎo)致背景熒光升高。7.D.Cy5——Cy5的熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，穿透力也更高。8.D.以上都是——抗體稀釋不當(dāng)、固定不充分、熒光淬滅均會(huì)導(dǎo)致彌散熒光。9.D.以上都是——增加熒光素濃度、使用抗淬滅劑、降低光照時(shí)間均可緩解熒光淬滅。10.D.以上都是——多克隆抗體、優(yōu)化稀釋比例、充分封閉均能提高特異性。二、多選題答案與解析1.A,B,C——FITC、TRITC、AlexaFluor系列是常用熒光素；堿性磷酸酶是酶標(biāo)記，非熒光素。2.A,B,C,D——抗體濃度過(guò)高、封閉不充分、固定過(guò)度、抗體純度低均會(huì)導(dǎo)致背景熒光升高。3.A,B,D——發(fā)射濾光片、吸收濾光片、熒光淬滅濾光片是熒光顯微鏡核心濾光片；對(duì)比度增強(qiáng)濾光片非必需。4.A,B,C,D——抗體質(zhì)量、熒光素類型、樣品保存條件、顯微鏡光源強(qiáng)度均影響熒光強(qiáng)度。5.A,B——BSA和牛血清去脂奶粉常用作封閉劑；胰蛋白酶和甘氨酸非封閉劑。6.A,B,C,D——單克隆抗體特異性高；優(yōu)化孵育時(shí)間、增加洗滌次數(shù)、多色標(biāo)記均能提高特異性。7.A,B,C——熒光素聚集、光照過(guò)強(qiáng)、pH不適宜均會(huì)導(dǎo)致淬滅；抗體結(jié)合不足非淬滅原因。8.A,B,C,D——增加抗體濃度、直接法檢測(cè)、優(yōu)化熒光素比例、延長(zhǎng)孵育時(shí)間均能提高靈敏度。9.A,B,C——甲醇、甲醛、冰凍切片是常用固定方法；蛋白酶K是消化酶，非固定方法。10.A,B,C,D——抗體稀釋不當(dāng)、樣品保存不當(dāng)、抗體降解、光源強(qiáng)度不足均會(huì)導(dǎo)致信號(hào)減弱。三、判斷題答案與解析1.×——免疫熒光可檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞表面抗原。2.×——油鏡非必需，高數(shù)值物鏡也可觀察熒光信號(hào)。3.√——封閉不充分會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合，背景熒光升高。4.√——熒光淬滅是熒光信號(hào)減弱的常見(jiàn)現(xiàn)象，可通過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件緩解。5.√——TRITC的熒光強(qiáng)度高于FITC。6.×——抗體稀釋過(guò)低會(huì)導(dǎo)致信號(hào)減弱。7.×——免疫熒光也可檢測(cè)糖類等抗原。8.√——固定過(guò)度會(huì)破壞抗原結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致信號(hào)減弱。9.×——增加熒光素濃度非解決淬滅的方法。10.×——多色標(biāo)記可通過(guò)優(yōu)化濾光片系統(tǒng)減少背景熒光。四、簡(jiǎn)答題答案與解析1.免疫熒光技術(shù)基本原理：通過(guò)抗體與靶抗原特異性結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的抗體或第二抗體進(jìn)行檢測(cè)，最后在熒光顯微鏡下觀察熒光信號(hào)，從而確定抗原的位置和分布。2.提高特異性的方法：使用單克隆抗體、優(yōu)化抗體稀釋比例、充分封閉非特異性位點(diǎn)、增加洗滌次數(shù)、使用直接法檢測(cè)。3.熒光淬滅的概念及影響因素：熒光淬滅指熒光信號(hào)減弱的現(xiàn)象，主要由熒光素聚集、光照過(guò)強(qiáng)、pH不適宜、樣品透光性差等因素導(dǎo)致。4.樣品固定的意義及方法：固定可保存抗原結(jié)構(gòu)，提高檢測(cè)特異性。常用方法包括甲醇、甲醛固定，或冰凍切片保存。五、論述題答案與解析1.免疫熒光技術(shù)在通遼地區(qū)疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值：-類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎：免疫熒光可檢測(cè)關(guān)節(jié)滑膜中的RF和抗CCP抗體，輔助診斷。-布魯氏菌?。嚎蓹z測(cè)血清中的布魯氏菌抗體，快速篩查。-腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)：通過(guò)免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物（如CD19、CD20），輔助腫瘤診斷。-自身免疫病：檢測(cè)抗核