連云港市人民醫(yī)院蛋白電泳技術(shù)考核一、單選題（每題2分，共20題）1.蛋白電泳技術(shù)中最常用的支持介質(zhì)是（）。A.硅膠凝膠B.聚丙烯酰胺凝膠C.瓊脂糖凝膠D.淀粉凝膠2.在蛋白電泳中，SDS主要用于（）。A.分離核酸片段B.分離蛋白質(zhì)亞基C.檢測(cè)糖蛋白D.分析脂質(zhì)組成3.蛋白電泳后，常用的染色方法不包括（）。A.CoomassieBrilliantBlue染色B.銀染C.同位素標(biāo)記染色D.免疫熒光染色4.蛋白質(zhì)分子量大小與電泳遷移率的關(guān)系是（）。A.分子量越大，遷移率越快B.分子量越小，遷移率越快C.分子量與遷移率無(wú)關(guān)D.遷移率受電荷影響更大5.IEF（等電聚焦）電泳主要用于分離（）。A.按分子量大小分離蛋白質(zhì)B.按電荷差異分離蛋白質(zhì)C.按糖基化程度分離蛋白質(zhì)D.按脂質(zhì)含量分離蛋白質(zhì)6.蛋白電泳中，凝膠濃度越高，其分離效果（）。A.越差B.越好C.不變D.受樣品影響更大7.蛋白質(zhì)電泳后，若出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，可能的原因是（）。A.樣品濃度過(guò)高B.電泳緩沖液pH值不合適C.凝膠濃度過(guò)低D.電壓設(shè)置過(guò)高8.雙向電泳（2-DE）的第一步通常是（）。A.等電聚焦B.SDSC.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)D.薄層色譜9.蛋白電泳中，銀染相比Coomassie染色的優(yōu)點(diǎn)是（）。A.更穩(wěn)定B.更靈敏C.操作更簡(jiǎn)單D.成本更低10.蛋白質(zhì)電泳后進(jìn)行質(zhì)譜分析前，通常需要進(jìn)行（）。A.脫鹽處理B.堿化處理C.酶解處理D.重金屬沉淀二、多選題（每題3分，共10題）1.蛋白電泳技術(shù)的應(yīng)用包括（）。A.蛋白質(zhì)鑒定B.蛋白質(zhì)純化C.蛋白質(zhì)定量D.蛋白質(zhì)修飾分析2.影響蛋白電泳遷移率的因素有（）。A.分子量大小B.等電點(diǎn)C.凝膠濃度D.電場(chǎng)強(qiáng)度3.蛋白質(zhì)電泳后，常見(jiàn)的后處理技術(shù)包括（）。A.切膠酶解B.質(zhì)譜分析C.免疫印跡D.糖鏈分析4.雙向電泳（2-DE）的優(yōu)缺點(diǎn)包括（）。A.分離度高B.操作復(fù)雜C.成本低D.適用于大量樣品分析5.蛋白電泳中，SDS和IEF的區(qū)別在于（）。A.分離原理不同B.緩沖體系不同C.凝膠類(lèi)型不同D.應(yīng)用場(chǎng)景不同6.蛋白質(zhì)電泳中，樣品前處理的目的包括（）。A.去除鹽離子B.酶活抑制C.蛋白質(zhì)變性D.蛋白質(zhì)濃縮7.蛋白電泳中，凝膠電泳的常見(jiàn)問(wèn)題包括（）。A.電泳條帶模糊B.條帶拖尾C.凝膠破碎D.遷移率不一致8.蛋白質(zhì)電泳后，可用于定量分析的方法包括（）。A.酶標(biāo)儀定量B.火焰原子吸收光譜法C.免疫印跡定量D.圖像分析軟件定量9.蛋白電泳技術(shù)的局限性包括（）。A.分辨率有限B.重復(fù)性差C.適用于高豐度蛋白D.不適用于糖蛋白分析10.蛋白電泳中，影響染色效果的因素有（）。A.染色時(shí)間B.染色溫度C.樣品濃度D.pH值三、判斷題（每題1分，共10題）1.蛋白電泳技術(shù)可以完全按分子量大小分離所有蛋白質(zhì)。（×）2.IEF電泳的pH梯度范圍通常為0-14。（√）3.SDS可以用于測(cè)定蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。（×）4.雙向電泳（2-DE）可以同時(shí)分離蛋白質(zhì)的分子量和等電點(diǎn)。（√）5.銀染比Coomassie染色更靈敏，適用于低豐度蛋白檢測(cè)。（√）6.蛋白電泳后，所有蛋白質(zhì)都可以直接進(jìn)行質(zhì)譜分析。（×）7.蛋白電泳的凝膠濃度越高，分離效果越好。（×）8.蛋白電泳中，電壓設(shè)置過(guò)高會(huì)導(dǎo)致凝膠過(guò)熱，影響分離效果。（√）9.蛋白電泳技術(shù)適用于所有類(lèi)型的蛋白質(zhì)樣品。（×）10.蛋白電泳后，條帶拖尾可能是樣品濃度過(guò)高導(dǎo)致的。（√）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共5題）1.簡(jiǎn)述SDS的原理及其應(yīng)用。2.比較IEF和SDS在蛋白質(zhì)分離方面的優(yōu)缺點(diǎn)。3.簡(jiǎn)述雙向電泳（2-DE）的基本步驟及其優(yōu)勢(shì)。4.簡(jiǎn)述蛋白電泳后進(jìn)行質(zhì)譜分析的流程。5.簡(jiǎn)述影響蛋白電泳遷移率的因素及其調(diào)節(jié)方法。五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合連云港地區(qū)臨床檢驗(yàn)需求，論述蛋白電泳技術(shù)在醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值。2.分析蛋白電泳技術(shù)的局限性，并提出改進(jìn)方法。答案與解析一、單選題答案1.B聚丙烯酰胺凝膠是蛋白電泳中最常用的支持介質(zhì)。2.BSDS通過(guò)SDS使蛋白質(zhì)變性并帶負(fù)電荷，按分子量大小分離。3.C同位素標(biāo)記染色不屬于常規(guī)蛋白電泳染色方法。4.B分子量越小，遷移率越快，這是凝膠電泳的基本規(guī)律。5.BIEF通過(guò)pH梯度分離蛋白質(zhì)電荷差異。6.B凝膠濃度越高，分離效果越好，但樣品通量會(huì)降低。7.BpH值不合適會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)電荷異常，影響遷移。8.A雙向電泳第一步是IEF，按等電點(diǎn)分離。9.B銀染比Coomassie染色更靈敏，適用于低豐度蛋白。10.C質(zhì)譜分析前需酶解蛋白質(zhì)為肽段。二、多選題答案1.ABCD蛋白電泳可用于鑒定、純化、定量及修飾分析。2.ABCD影響遷移率的因素包括分子量、等電點(diǎn)、凝膠濃度和電場(chǎng)強(qiáng)度。3.ABC后處理技術(shù)包括切膠酶解、質(zhì)譜分析和免疫印跡。4.AB優(yōu)點(diǎn)是分離度高，缺點(diǎn)是操作復(fù)雜。5.ABCDIEF和SDS原理、緩沖體系、凝膠類(lèi)型和應(yīng)用場(chǎng)景均不同。6.ABCD樣品前處理需去鹽、抑制酶活、變性及濃縮。7.ABCD常見(jiàn)問(wèn)題包括條帶模糊、拖尾、破碎和遷移率不一致。8.ACD酶標(biāo)儀定量、免疫印跡定量和圖像分析軟件定量常用。9.ABC局限性包括分辨率有限、重復(fù)性差和適用于高豐度蛋白。10.ABCD染色效果受時(shí)間、溫度、樣品濃度和pH值影響。三、判斷題答案1.×蛋白電泳無(wú)法完全按分子量分離所有蛋白質(zhì)，尤其對(duì)復(fù)雜樣品。2.√IEFpH梯度范圍為0-14。3.×SDS不能測(cè)定等電點(diǎn)，需IEF。4.√2-DE可同時(shí)分離分子量和等電點(diǎn)。5.√銀染更靈敏，適用于低豐度蛋白。6.×需先酶解才能質(zhì)譜分析。7.×濃度過(guò)高分離效果反而不佳。8.√過(guò)高電壓會(huì)導(dǎo)致凝膠過(guò)熱。9.×蛋白電泳對(duì)某些樣品不適用，如糖蛋白。10.√樣品濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致條帶拖尾。四、簡(jiǎn)答題答案1.SDS原理及應(yīng)用：SDS通過(guò)SDS使蛋白質(zhì)變性并帶負(fù)電荷，按分子量大小分離。應(yīng)用包括蛋白質(zhì)鑒定、純化、定量及亞基分析。2.IEF與SDS比較：IEF按pH梯度分離電荷，SDS按分子量分離。IEF適用于復(fù)雜樣品，SDS分辨率高，但I(xiàn)EF操作復(fù)雜。3.雙向電泳步驟及優(yōu)勢(shì)：第一步IEF按等電點(diǎn)分離，第二步SDS按分子量分離。優(yōu)勢(shì)是高分辨率，適用于大規(guī)模蛋白質(zhì)分析。4.質(zhì)譜分析流程：電泳切膠→酶解→肽段提取→質(zhì)譜分析→數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)。5.影響遷移率的因素及調(diào)節(jié)方法：分子量、等電點(diǎn)、凝膠濃度、電場(chǎng)強(qiáng)度。調(diào)節(jié)方法包括優(yōu)化凝膠濃度、調(diào)整pH值及電壓。五、論述題答案1.蛋白電泳在連云港臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用：連云港地區(qū)以港口和旅游業(yè)為主，