2025年大學《生物技術(shù)》專業(yè)題庫——動物細胞培養(yǎng)技術(shù)在轉(zhuǎn)基因研究中的應用考試時間：______分鐘總分：______分姓名：______一、選擇題（每題2分，共20分）1.在動物細胞培養(yǎng)的常規(guī)培養(yǎng)基中，以下哪種成分是提供碳源和能源的主要來源？A.氨基酸B.維生素C.葡萄糖D.血清2.為了維持細胞培養(yǎng)環(huán)境的pH穩(wěn)定，培養(yǎng)箱中通常需要通入的氣體是？A.氮氣B.氧氣C.二氧化碳D.氫氣3.下列哪種方法通常用于將外源基因?qū)胍逊只膭游矬w細胞中？A.微注射法B.基因槍法C.電穿孔法D.逆轉(zhuǎn)錄病毒感染4.在基因工程中，用于篩選成功導入了抗性基因的轉(zhuǎn)化細胞的抗生素通常是？A.青霉素B.鏈霉素C.卡那霉素D.土霉素5.下列哪種細胞類型是研究基因功能、進行基因打靶和構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物模型的重要工具？A.成纖維細胞B.內(nèi)皮細胞C.胚胎干細胞(ES細胞)D.神經(jīng)膠質(zhì)細胞6.下列關(guān)于動物細胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的敘述，正確的是？A.都需要光照進行光合作用B.動物細胞培養(yǎng)需要動物血清，植物組織培養(yǎng)通常不需要C.兩者都只能在特定器官上增殖D.兩者使用的培養(yǎng)基成分完全相同7.產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動物常用的技術(shù)路線之一是先將基因?qū)肱咛ジ杉毎?，再將其移植入囊胚，最后移植入代孕母體。這一過程利用了細胞培養(yǎng)技術(shù)的哪方面能力？A.細胞增殖B.細胞分化誘導C.基因篩選D.胚胎體外操作8.在大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白時，選擇動物細胞作為生產(chǎn)體系的主要優(yōu)勢之一是？A.生產(chǎn)成本低B.可以利用簡單的發(fā)酵罐進行培養(yǎng)C.能進行正確的糖基化修飾D.細胞生長速度快9.下列哪項操作是動物細胞培養(yǎng)過程中的關(guān)鍵無菌控制措施？A.使用無菌的培養(yǎng)基和試劑B.在超凈工作臺中操作C.定期監(jiān)測培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度和CO2濃度D.所有以上選項都是10.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源基因整合到宿主細胞的染色體DNA中，并隨細胞分裂而傳代。與瞬時轉(zhuǎn)染相比，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的主要優(yōu)點是？A.轉(zhuǎn)染效率更高B.轉(zhuǎn)基因表達量通常更高且更穩(wěn)定C.操作過程更簡單D.對宿主細胞的毒性更小二、填空題（每空1分，共15分）1.動物細胞培養(yǎng)通常需要在_哺乳動物血清_存在的培養(yǎng)基中才能獲得良好的生長效果，但這可能導致產(chǎn)品_異源蛋白_污染。2.為了防止細胞培養(yǎng)過程中的污染，需要采取嚴格的無菌操作措施，包括_消毒_、_滅菌_和操作環(huán)境的控制。3.將外源DNA導入宿主細胞的過程稱為_轉(zhuǎn)化_或_轉(zhuǎn)染_。4.在利用選擇標記篩選轉(zhuǎn)染細胞時，如果使用抗生素作為選擇壓力，則通常需要同時加入_抗性基因_和相應的_抗生素_。5.動物細胞培養(yǎng)的基本要求包括_無菌_、_適宜的溫度和pH_、_充足的氧氣供應_和_合適的培養(yǎng)基_。6.利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)病毒載體（如腺病毒載體）時，通常需要先在_包裝細胞系_中擴增病毒載體。三、名詞解釋（每題3分，共12分）1.動物細胞培養(yǎng)2.轉(zhuǎn)基因技術(shù)3.瞬時轉(zhuǎn)染4.選擇標記四、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述動物細胞體外培養(yǎng)需要滿足的基本條件。2.比較電穿孔法和脂質(zhì)體介導法兩種將外源基因?qū)雱游锛毎某Ｓ梅椒ǖ脑砗吞攸c。3.簡述利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)重組蛋白的一般流程。4.在利用胚胎干細胞進行基因打靶研究時，通常需要哪些關(guān)鍵步驟？并簡述基因打靶的原理。五、論述題（10分）結(jié)合你所學的知識，論述動物細胞培養(yǎng)技術(shù)在現(xiàn)代轉(zhuǎn)基因研究中扮演的關(guān)鍵角色，并舉例說明其在不同研究領(lǐng)域的具體應用。試卷答案一、選擇題1.C2.C3.D4.C5.C6.B7.A8.C9.D10.B二、填空題1.哺乳動物血清異源蛋白2.消毒滅菌操作環(huán)境的控制3.轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染4.抗性基因抗生素5.無菌適宜的溫度和pH充足的氧氣供應合適的培養(yǎng)基6.包裝細胞系三、名詞解釋1.動物細胞培養(yǎng)：指在體外人工控制條件下，將動物細胞分離、培養(yǎng)、繁殖，使其維持生命活動或表現(xiàn)出特定功能的技術(shù)。2.轉(zhuǎn)基因技術(shù)：指將外源基因通過人工手段導入生物體基因組中，并使其穩(wěn)定遺傳的技術(shù)。3.瞬時轉(zhuǎn)染：指外源基因僅暫時進入細胞質(zhì)或細胞核，并未整合到宿主細胞基因組中，轉(zhuǎn)染效果是暫時的。4.選擇標記：指能夠賦予宿主細胞某種選擇性存活能力的基因，常用于篩選成功導入了外源基因的細胞。四、簡答題1.動物細胞體外培養(yǎng)需要滿足的基本條件：無菌環(huán)境、適宜的溫度（通常37℃）和pH（7.2-7.4）、充足的氧氣供應和二氧化碳調(diào)節(jié)、合適的培養(yǎng)基（提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸、糖類、維生素、無機鹽等）、適宜的滲透壓、適宜的pH緩沖系統(tǒng)、防止細胞衰老和分化。2.電穿孔法：利用高電壓瞬間在細胞膜上形成暫時性孔道，使外源DNA進入細胞。特點：轉(zhuǎn)染效率高，尤其對貼壁細胞效果好，但可能對細胞有較大毒性，操作要求較高。脂質(zhì)體介導法：利用脂質(zhì)體（人工膜泡）與細胞膜融合，將外源DNA包裹帶入細胞。特點：轉(zhuǎn)染效率相對較高，對細胞毒性較低，應用廣泛，但效率可能受細胞類型影響。3.利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)重組蛋白的一般流程：選擇合適的宿主細胞系（如CHO細胞、B細胞等）→基因克隆與表達載體構(gòu)建（將目標蛋白基因插入表達載體）→將表達載體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)染入宿主細胞→篩選和克隆高效表達細胞株→優(yōu)化細胞培養(yǎng)條件（培養(yǎng)基、生長因子等）→在生物反應器中大規(guī)模培養(yǎng)細胞→提取和純化重組蛋白。4.基因打靶的步驟：構(gòu)建包含目標基因突變或報告基因的打靶載體→將打靶載體轉(zhuǎn)染入胚胎干細胞（ES細胞）→在選擇性培養(yǎng)基上篩選成功整合打靶載體的ES細胞克隆→對陽性克隆進行基因型鑒定（如PCR、Southernblot）→篩選出發(fā)生特異性靶向突變的細胞克隆→將陽性ES細胞克隆注射入囊胚→移植入代孕母體→獲得轉(zhuǎn)基因動物。原理：利用同源重組的原理，將攜帶特定修飾（如突變）的外源DNA（打靶載體）通過隨機整合或定點整合的方式替換掉基因組中對應位置的靶基因，從而改變基因功能。五、論述題動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是現(xiàn)代轉(zhuǎn)基因研究不可或缺的關(guān)鍵平臺。首先，它為基因操作提供了基礎(chǔ)載體，幾乎所有轉(zhuǎn)基因技術(shù)（如基因轉(zhuǎn)染、基因編輯、細胞核移植等）都必須在體外培養(yǎng)的細胞中進行。其次，動物細胞培養(yǎng)是進行基因功能研究的核心工具，通過瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，可以在細胞水平上研究基因的表達、調(diào)控及其生物學效應。再次，在基因治療領(lǐng)域，利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)可以生產(chǎn)治療性蛋白質(zhì)（如抗體、酶）和基因治療載體（如病毒載體），或用于體外基因矯正研究。此外，動物細胞培養(yǎng)技術(shù)也是構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物模型的重要環(huán)節(jié)，如利用胚胎干細胞進行基因打靶，或通過體外培養(yǎng)胚胎進行基因?qū)?。例如，生產(chǎn)單克隆抗體需要利用雜