ICS11.100CCSC05CITST/CITS324—2025前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14風(fēng)險(xiǎn)管理 14.1新建立或者變更引發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)管理要求 14.2運(yùn)行中的風(fēng)險(xiǎn)管理要求 15通用要求 25.1標(biāo)本采集要求 25.2檢驗(yàn)質(zhì)量控制要求 25.3結(jié)果報(bào)告要求 25.4檢驗(yàn)后標(biāo)本保存和處置要求 36檢測(cè)技術(shù)要求 36.1正確度 36.2重復(fù)性 36.3線(xiàn)性（適用時(shí)） 36.4最低檢測(cè)限 36.5檢測(cè)特異性 37檢測(cè)結(jié)果判讀 37.1通用要求 47.2免疫熒光染色判讀 47.3熒光原位雜交判讀 4參考文獻(xiàn) 6T/CITS324—2025本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院、杭州華得森生物技術(shù)有限公司和國(guó)軍標(biāo)（北京）標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)研究院提出。本文件由中國(guó)檢驗(yàn)檢測(cè)學(xué)會(huì)歸口。本文件起草單位：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院、杭州華得森生物技術(shù)有限公司、國(guó)軍標(biāo)（北京）標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)研究院、南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院、中國(guó)食品藥品檢定研究院、國(guó)家納米中心、安徽省胸科醫(yī)院、安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院、安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院、北京航空航天大學(xué)杭州研究院、北京水木濟(jì)衡生物技術(shù)有限公司、北京醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)、重慶大學(xué)城醫(yī)院、重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院、大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院、福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院、廣州安方生物科技有限公司、廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第六醫(yī)院、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院、河南省腫瘤醫(yī)院、華中科技大學(xué)協(xié)和深圳醫(yī)院、江蘇省腫瘤醫(yī)院、陸軍軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院、南京鼓樓醫(yī)院、美納里尼（中國(guó)）投資有限公司、山東大學(xué)齊魯醫(yī)院、山東大學(xué)齊魯醫(yī)院（青島）、山東第二醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院、濰坊市第二人民醫(yī)院（濰坊呼吸病醫(yī)院）、武漢大學(xué)中南醫(yī)院、新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院、粵北人民醫(yī)院、云南省第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科、云南省腫瘤醫(yī)院、浙江大學(xué)附屬邵逸夫醫(yī)院、浙江大學(xué)附屬第二醫(yī)院、鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院、中國(guó)康復(fù)研究中心、中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院、中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院、中山大學(xué)附屬孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院、珠海圣美生物診斷技術(shù)有限公司。本文件主要起草人：崔巍、張開(kāi)山、劉萬(wàn)陽(yáng)、張玉娟、劉明洋、郭志敏、田華、鄭磊、郭世富、祝捷敏、胡志遠(yuǎn)、劉周、王琴、王中新、高陽(yáng)、王冰、劉定華、鄧?yán)?、王琪、杜小慧、曹穎平、韓超、周強(qiáng)、許青霞、高海燕、孫軼華、羅迪賢、嚴(yán)楓、黃慶、楊軍、吳帆、杜魯濤、張義、王謙、楊桂茂、周韻斕、曲梅花、汪付兵、馬秀敏、郭文佳、杜日昌、孫鹥、周永春、張鈞、陶志華、李晟磊、王屹、陳倩、李琦、馮品寧、段朝暉、張京璐。T/CITS324—20251循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)質(zhì)量保證要求本文件規(guī)定了循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)質(zhì)量保證過(guò)程中的風(fēng)險(xiǎn)管理、通用要求、檢測(cè)技術(shù)要求和結(jié)果判讀要求。本文件適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)開(kāi)展循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)的質(zhì)量保證工作。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB39707醫(yī)療廢物處理處置污染控制標(biāo)準(zhǔn)GB/T42060醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室樣品采集、運(yùn)送、接收和處理的要求3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1循環(huán)腫瘤細(xì)胞circulatingtumorcell；CTC從實(shí)體腫瘤病灶（原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶）脫落并進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞。[來(lái)源：T/CITS235—2025，3.1]3.2質(zhì)量保證qualityassurance；QA質(zhì)量管理的一部分，致力于提供質(zhì)量要求會(huì)得到滿(mǎn)足的信任。[來(lái)源：GB/T19000—2016，3.2.11]3.3醫(yī)學(xué)決定水平medicaldecisionlevel；MDL對(duì)疾病診斷、治療或排除起決定作用的某一被測(cè)成分的濃度（數(shù)量）。4風(fēng)險(xiǎn)管理4.1新建立或者變更引發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)管理要求實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)新建CTC檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行全面驗(yàn)證，當(dāng)主要檢測(cè)系統(tǒng)發(fā)生改變或?qū)嶒?yàn)室環(huán)境發(fā)生較大改變時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行性能驗(yàn)證/確認(rèn)，驗(yàn)證方案應(yīng)進(jìn)行充分的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。4.2運(yùn)行中的風(fēng)險(xiǎn)管理要求4.2.1實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行CTC檢測(cè)時(shí)，應(yīng)評(píng)估各項(xiàng)風(fēng)險(xiǎn)，并作出風(fēng)險(xiǎn)管理措施。不應(yīng)出現(xiàn)不正確的檢測(cè)結(jié)果、延遲的檢測(cè)結(jié)果和不正確的隨附結(jié)果信息。4.2.2識(shí)別導(dǎo)致風(fēng)險(xiǎn)增加的原因包括但不限于以下方面。T/CITS324—20252a)異常故障狀態(tài)：1)批內(nèi)或批間不一致性；2)賦值的不可溯源性；3)試劑的非特異性；4)標(biāo)本或試劑的攜帶污染；5)材料的不穩(wěn)定性（如運(yùn)輸、貯存或使用不當(dāng)）；6)系統(tǒng)故障；7)數(shù)字故障；8)軟件應(yīng)用故障。b)正常使用中發(fā)生的潛在風(fēng)險(xiǎn)：1)定量檢測(cè)程序相關(guān)的測(cè)量不確定度；2)結(jié)果錯(cuò)誤分類(lèi)為“異?！被虺鰠⒖紖^(qū)間；3)標(biāo)本中干擾物質(zhì)的影響；4)標(biāo)本基質(zhì)的多變性；5)儀器配置不足或儀器性能受限。c)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室錯(cuò)誤使用可能包括的事件：1)忽視特殊要求；2)未按順序執(zhí)行操作，包括檢測(cè)前和檢測(cè)后的過(guò)程；3)數(shù)據(jù)輸入錯(cuò)誤（如患者姓名等）；4)標(biāo)本量不足；5)試劑未正確裝載。5通用要求5.1標(biāo)本采集要求標(biāo)本采集依據(jù)GB/T42060的規(guī)定執(zhí)行，包括但不限于：a)應(yīng)選擇適合檢測(cè)方法的抗凝采血管（常用的抗凝劑有EDTA-K2、ACD等）或收集裝置，并確認(rèn)采血器皿的潔凈；b)采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)做好防護(hù)，采集工作結(jié)束后應(yīng)脫掉手套并洗手；c)標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢和處理，必要時(shí)，根據(jù)操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行標(biāo)本保存；d)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定標(biāo)本接收和拒收標(biāo)準(zhǔn)，必要時(shí)，重新采集標(biāo)本；e)臨床醫(yī)生可根據(jù)患者治療周期、治療方案等實(shí)際情況選擇相應(yīng)的采血部位和采血時(shí)間點(diǎn)；f)診療過(guò)程中標(biāo)本采集條件相對(duì)固定。5.2檢驗(yàn)質(zhì)量控制要求開(kāi)展CTC檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制要求至少應(yīng)涵蓋：a)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定檢測(cè)前、檢測(cè)中、檢測(cè)后全過(guò)程的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（standardoperationprocedure，SOP并定期審核、修訂、培訓(xùn)；b)檢驗(yàn)設(shè)備、設(shè)施、試劑、耗材及環(huán)境等的質(zhì)量、數(shù)量及安全性應(yīng)滿(mǎn)足檢測(cè)的需要；c)檢驗(yàn)人員應(yīng)定期進(jìn)行能力評(píng)估；d)檢驗(yàn)前應(yīng)進(jìn)行CTC檢測(cè)方法學(xué)的性能驗(yàn)證；e)每批次試驗(yàn)應(yīng)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，對(duì)照的設(shè)置應(yīng)合理、有效；f)應(yīng)通過(guò)參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)或?qū)嶒?yàn)室間比對(duì)評(píng)估檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，必要時(shí)，可通過(guò)臨床診療狀態(tài)評(píng)估檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；g)涉及圖像自動(dòng)判讀分析時(shí)，圖像采集及分析軟件應(yīng)納入質(zhì)量控制，包括但不限于熒光顯微鏡所選通道與采集系統(tǒng)的匹配、熒光光源的使用時(shí)間、電腦系統(tǒng)運(yùn)行情況等，每次圖像采集前應(yīng)將本次采集的相關(guān)參數(shù)進(jìn)行保存。5.3結(jié)果報(bào)告要求3T/CITS324—2025報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包括患者信息、標(biāo)本信息、數(shù)值報(bào)告、必要的圖像報(bào)告及解釋性注釋等。5.4檢驗(yàn)后標(biāo)本保存和處置要求檢驗(yàn)后標(biāo)本保存和處置要求包括但不限于：a)應(yīng)規(guī)定檢驗(yàn)后標(biāo)本的保存時(shí)限及儲(chǔ)存條件；b)應(yīng)明確檢驗(yàn)后保存標(biāo)本的來(lái)源識(shí)別；c)應(yīng)明確標(biāo)本用于附加檢測(cè)的適宜性；d)檢驗(yàn)后標(biāo)本廢棄處理應(yīng)按照《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》執(zhí)行，并符合GB39707的要求。6檢測(cè)技術(shù)要求6.1正確度6.1.1正確度由系統(tǒng)測(cè)量誤差決定，可采用回收試驗(yàn)進(jìn)行CTC檢測(cè)系統(tǒng)的正確度評(píng)價(jià)。6.1.2通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品模擬血樣確定CTC富集表征全流程的回收率，至少檢測(cè)低（醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)）、中（＜100個(gè)）、高(≥100個(gè)）三個(gè)濃度水平的樣品，每個(gè)濃度水平重復(fù)檢測(cè)3次。低值水平樣品最低回收率應(yīng)不低于50中、高值樣品的最低回收率應(yīng)不低于75％。6.1.3標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)胞宜采用相應(yīng)癌種細(xì)胞系制備，常用癌種細(xì)胞系示例見(jiàn)表1。表1常見(jiàn)癌種細(xì)胞系示例6.2重復(fù)性將低（醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)）、中（＜100個(gè)）、高(≥100個(gè)）數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)胞分別投入到表觀健康人全血上機(jī)量的標(biāo)本中，按照SOP進(jìn)行CTC檢測(cè)，每個(gè)濃度水平重復(fù)檢測(cè)至少10次，計(jì)算CV值或極差。低濃度水平樣品極差應(yīng)不高于1/2的醫(yī)學(xué)決定水平或CV不高于45％，中值和高值濃度水平樣品的CV應(yīng)不高于15％。6.3線(xiàn)性（適用時(shí)）將標(biāo)準(zhǔn)品從高到低稀釋5個(gè)～7個(gè)細(xì)胞水平，最高水平為1000個(gè)～2000個(gè)、最低水平為1個(gè)～9個(gè)。通過(guò)CTC計(jì)數(shù)檢測(cè)，評(píng)估回收檢測(cè)數(shù)量和投入數(shù)量之間的線(xiàn)性，相關(guān)系數(shù)應(yīng)不小于0.975。6.4最低檢測(cè)限將不同數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)胞投入到表觀健康人全血上機(jī)量的標(biāo)本中，按照SOP進(jìn)行CTC計(jì)數(shù)檢測(cè)，可獲取最低檢測(cè)數(shù)量。6.5檢測(cè)特異性將不具備CTC檢測(cè)特征的細(xì)胞投入到表觀健康人全血上機(jī)量的標(biāo)本中，或者直接采用表觀健康人全血標(biāo)本，按照SOP進(jìn)行CTC計(jì)數(shù)檢測(cè)，結(jié)果應(yīng)為陰性未檢出。7檢測(cè)結(jié)果判讀T/CITS324—202547.1通用要求通用要求包括但不限于：a)每例標(biāo)本宜至少由兩名有資質(zhì)的檢測(cè)人員判讀計(jì)數(shù)，結(jié)果采用盲法進(jìn)行比對(duì)，差異較大時(shí)應(yīng)由第三人復(fù)檢并記錄；b)對(duì)于異?；蚩梢山Y(jié)果，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行復(fù)查和驗(yàn)證，復(fù)查方法應(yīng)能夠排除因操作失誤或設(shè)備故障等原因?qū)е碌腻e(cuò)誤結(jié)果。7.2免疫熒光染色判讀7.2.1通用型免疫熒光化學(xué)染色的判讀包括但不限于：a)應(yīng)采用免疫熒光染色與細(xì)胞核形態(tài)相結(jié)合的方式綜合判讀；b)觀察細(xì)胞核形態(tài)，排除核型為U型或馬蹄型的白細(xì)胞；c)應(yīng)使用穩(wěn)定性較高的固態(tài)光學(xué)質(zhì)控品調(diào)節(jié)熒光顯微鏡的設(shè)置；d)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立干擾物質(zhì)的檢測(cè)清單和避免措施，并在檢測(cè)報(bào)告中注明可能的干擾因素，如患者標(biāo)本中不應(yīng)存在帶有熒光的干擾物（如鏈霉素）；如患者正在使用含熒光的藥物，進(jìn)行CTC檢測(cè)前應(yīng)至少停藥7d以上。7.2.2特殊表型（如PD-L1、Her2等）免疫熒光化學(xué)染色的判讀包括但不限于：a)特殊表型蛋白標(biāo)志物的判讀，應(yīng)參照通用型判讀標(biāo)準(zhǔn)；b)如果特殊表型蛋白標(biāo)志物是在通用型標(biāo)志物的基礎(chǔ)上追加染色，應(yīng)注意臨近熒光通道的干擾；c)如果需要對(duì)表達(dá)量定性分析，應(yīng)設(shè)置參考標(biāo)準(zhǔn)，如根據(jù)細(xì)胞的相對(duì)熒光強(qiáng)度區(qū)分強(qiáng)陽(yáng)性、中陽(yáng)性和弱陽(yáng)性（如Her2+++、++、+）d)細(xì)胞的相對(duì)熒光強(qiáng)度可采用公式（1）計(jì)算：細(xì)胞的相對(duì)熒光強(qiáng)度=A/B.........................（1）式中：A——各濾光器通道中的采集的細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度；B——背景熒光強(qiáng)度。7.3熒光原位雜交判讀7.3.1通用型熒光原位雜交判讀標(biāo)準(zhǔn)包括但不限于：a)應(yīng)在一定數(shù)量的細(xì)胞中計(jì)數(shù)雜交信號(hào)，當(dāng)具有陽(yáng)性信號(hào)的細(xì)胞數(shù)達(dá)到一定數(shù)值（即為閾值，cut-off值）時(shí)，視為陽(yáng)性，閾值設(shè)定應(yīng)參照對(duì)應(yīng)CTC試劑使用說(shuō)明書(shū)、行業(yè)指南/共識(shí)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證后使用；b)檢測(cè)結(jié)果判讀前應(yīng)確認(rèn)雜交探針信號(hào)清晰、明亮且易于分辨，背景無(wú)點(diǎn)狀或朦朧熒光干擾；c)細(xì)胞核應(yīng)完整、邊界清晰，無(wú)過(guò)度重疊或聚集，如可判讀細(xì)胞核數(shù)量不足，應(yīng)重復(fù)檢測(cè)；d)根據(jù)不同的檢測(cè)目的和探針特性，應(yīng)選用試劑使用說(shuō)明書(shū)標(biāo)明的方案設(shè)立相應(yīng)的陽(yáng)性、陰性和異常結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)過(guò)驗(yàn)證和評(píng)估：1)正常（陰性）信號(hào)：每個(gè)探針對(duì)應(yīng)染色體區(qū)域顯示2個(gè)信號(hào)點(diǎn)；2)異常（陽(yáng)性）信號(hào)：—缺失：?jiǎn)蝹€(gè)探針僅顯示1個(gè)信號(hào)點(diǎn)；—擴(kuò)增：?jiǎn)蝹€(gè)探針顯示≥3個(gè)信號(hào)點(diǎn)；—分裂信號(hào)：如兩個(gè)信號(hào)通過(guò)可見(jiàn)的鏈接相連，計(jì)為1個(gè)信號(hào)點(diǎn)；—彌散信號(hào)：如信號(hào)彌散且連續(xù)，計(jì)為1個(gè)信號(hào)點(diǎn)。e)重疊細(xì)胞團(tuán)中單個(gè)細(xì)胞核數(shù)量應(yīng)明確記錄，單個(gè)完整細(xì)胞計(jì)為1個(gè)，重疊細(xì)胞團(tuán)按實(shí)際可分辨的細(xì)胞核數(shù)量計(jì)數(shù)。7.3.2特殊熒光原位雜交判讀標(biāo)準(zhǔn)包括但不限于：a)擴(kuò)增探針：應(yīng)結(jié)合細(xì)胞核大小，區(qū)分多倍體與異常擴(kuò)增；b)缺失探針：如有部分片段缺失，應(yīng)仔細(xì)觀察信號(hào)點(diǎn)大小，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)確認(rèn)是否為有效片段缺失；c)融合探針：?jiǎn)涡盘?hào)點(diǎn)基本重合判定為陽(yáng)性信號(hào)，有小片段插入時(shí)，應(yīng)使用單色熒光通道觀察確T/CITS324—20255認(rèn)；d)分離探針：信號(hào)點(diǎn)之間的距離應(yīng)大于單信號(hào)點(diǎn)大小的2倍及以上可判定為陽(yáng)性，有小片段丟失時(shí)，應(yīng)使用單色熒光通道觀察鑒別；e)針對(duì)特定基因位點(diǎn)或染色體異常的探針組合（如3p22.1/10q22.3和3q29/CEP10等判讀應(yīng)結(jié)合探針特性及臨床意義，并參照試劑說(shuō)明書(shū)建立判讀標(biāo)準(zhǔn)。T/CITS324—20256參考文獻(xiàn)[1]GB/T19000—2016質(zhì)量管理體系基礎(chǔ)和術(shù)語(yǔ)[2]GB/T43278—2023醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室風(fēng)險(xiǎn)管理在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用[3]WS/T402—2024臨床實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定[4]WS/T408—2012臨床化學(xué)設(shè)備