ICS65.020.30

CCSB44

14

山西省地方標(biāo)準

DB14/T2663—2023

實驗用小型豬遺傳質(zhì)量控制

2023-01-18發(fā)布2023-04-18實施

山西省市場監(jiān)督管理局??發(fā)布

DB14/T2663—2023

目次

前言..................................................................................II

1范圍................................................................................1

2規(guī)范性引用文件......................................................................1

3術(shù)語和定義..........................................................................1

4遺傳分類及命名......................................................................1

5繁殖方法............................................................................2

6遺傳質(zhì)量監(jiān)測........................................................................2

7判定結(jié)論............................................................................6

8報告................................................................................6

I

DB14/T2663—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由山西省科學(xué)技術(shù)廳提出、組織實施和監(jiān)督檢查。

山西省市場監(jiān)督管理局對標(biāo)準的組織實施情況進行監(jiān)督檢查。

本文件由山西省實驗動物標(biāo)準化技術(shù)委員會歸口。

本文件起草單位：山西醫(yī)科大學(xué)。

本文件主要起草人：宋國華、高繼萍、陳朝陽、王曉堂、宋曉娜、楊鈞婷、閆曉如、郭永昌。

II

DB14/T2663—2023

實驗用小型豬遺傳質(zhì)量控制

1范圍

本文件規(guī)定了實驗用小型豬的遺傳分類與命名、繁殖方法、遺傳質(zhì)量監(jiān)測、判定結(jié)論和報告。

本文件適用于實驗用小型豬的遺傳質(zhì)量控制。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB14923實驗動物哺乳類實驗動物的遺傳質(zhì)量控制

NY/T1673畜禽微衛(wèi)星DNA遺傳多樣性檢測技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

實驗用小型豬experimentalminipig

經(jīng)人工飼育，對其攜帶的病原微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學(xué)研

究、教學(xué)、生產(chǎn)、檢定以及其他科學(xué)實驗的小型豬。

近交系inbredstrain

經(jīng)連續(xù)20代及以上的全同胞兄妹或親代與子代交配培育而成，品系內(nèi)所有個體都可追溯到起源于

第20代或以后代數(shù)的一對共同祖先。近交系數(shù)（inbreedingcoefficient）應(yīng)大于99%。

封閉群closedcolony

以非近親交配方式進行繁殖生產(chǎn)的實驗動物種群，在不從外部引入新個體的條件下，至少連續(xù)繁殖

4代以上。

4遺傳分類及命名

遺傳分類

根據(jù)遺傳特點的不同，實驗用小型豬分為近交系和封閉群。

命名

4.2.1近交系命名

近交系一般以大寫英文字母或加阿拉伯?dāng)?shù)字命名，符號應(yīng)盡量簡短，如WSZ。

4.2.2近交代數(shù)

1

DB14/T2663—2023

近交代數(shù)用大寫英文字母F表示。例如當(dāng)一個近交系的近交代數(shù)為30代時，寫成（F30）。

4.2.3其它近交系

亞系、重組近交系、重組同類系、同源突變近交系、同源導(dǎo)入近交系的定義和命名按照GB14923

執(zhí)行。

4.2.4封閉群命名

封閉群的命名按照GB14923執(zhí)行。

5繁殖方法

近交系實驗用小型豬繁殖方法

5.1.1原則

保持近交系實驗用小型豬的同基因性及基因純合性。

5.1.2引種

近交系實驗用小型豬繁殖用種子應(yīng)來自于近交系的基礎(chǔ)群或血緣擴大群，遺傳背景明確，有完整的

資料（包括品系名稱、來源、近交代數(shù)、遺傳基因特點及主要生物學(xué)特征等）。

5.1.3方法

基礎(chǔ)群、血緣擴大群和生產(chǎn)群的繁殖方法按照GB14923執(zhí)行。當(dāng)近交系小型豬生產(chǎn)供應(yīng)數(shù)量不是

很大時，一般不設(shè)血緣擴大群，僅設(shè)基礎(chǔ)群和生產(chǎn)群。

封閉群實驗用小型豬繁殖方法

5.2.1原則

保持封閉群小型豬的基因異質(zhì)性和多態(tài)性，以非近親交配方式進行繁殖,避免近交系數(shù)隨繁殖代數(shù)

增加而過快上升。

5.2.2引種

5.2.2.1封閉群小型豬繁殖用種子應(yīng)遺傳背景明確，有完整的資料（包括種群名稱、來源、近交代數(shù)、

遺傳基因特點及主要生物學(xué)特性等）。

5.2.2.2根據(jù)繁殖方式，在保證每代近交系數(shù)增量不大于1%的前提下，決定最小引種規(guī)模。宜采用

循環(huán)交配方式，最小引種規(guī)模為13對無血緣關(guān)系（三代以內(nèi)無共同祖先）的公母豬；若采用隨機交配

的方式，最小引種規(guī)模為25對無血緣關(guān)系的公母豬。

5.2.3方法

具體繁殖方法按照GB14923執(zhí)行。

6遺傳質(zhì)量監(jiān)測

近交系實驗用小型豬的遺傳質(zhì)量監(jiān)測

2

DB14/T2663—2023

6.1.1監(jiān)測方法

采用微衛(wèi)星DNA標(biāo)記檢測方法。具體方法按照NY/T1673執(zhí)行，各微衛(wèi)星DNA標(biāo)記的染色體位

置、等位基因數(shù)、等位基因分布范圍、引物序列、熒光標(biāo)記、退火溫度、鎂離子濃度等見表1。

表1各微衛(wèi)星位點的名稱、引物序列、PCR反應(yīng)的退火溫度、鎂離子濃度（Mg2+）、熒光標(biāo)記、染色體

位置、等位基因數(shù)、等位基因分布范圍

退火溫度Mg2+5'熒光染色體等位基等位基因分布

座位名稱引物序列5'→3'

（℃）(mmol/L)標(biāo)記位置因數(shù)范圍（bp）

F-ATAGACATTATGTAAGTTGCTGAT

CGA552.5FAM1q12250-320

R-GAACTTTCACATCCCTAAGGTCGT

F-AGAAATTAGTGCCTCAAATTGG

SW240551.5TAMRA2P896-115

R-AAACCATTAAGTCCCTAGCAAA

F-ATCAGAACAGTGCGCCGT

SW72551.5TAMRA3P8100-116

R-GTTTGAAAATGGGGTGTTTCC

F-TCCTTCCCTCCTGGTAACTA

S0005553.0FAM5q10205-248

R-GCACTTCCTGATTCTGGGTA

F-CCAAGACTGCCTTGTAGGTGAATA

S0090551.5TAMRA12q4244-251

R-GCTATCAAGTATTGTACCATTAGG

F-GGTATGACCAAAAGTCCTGGG

SW769553.0HEX137106-140

R-TCTGCTATGTGGGAAGAATGC

F-F-TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACC

SW857551.5TAMRA146144-160

R-GATCCTCCTCCAAATCCCAT

F-TCTGGCTCCTACACTCCTTCTTGATG

S0355553.0HEX1514243-277

R-GTTTGGGTGGGTGCTGAAAAATAGGA

F-CTTTGGGTGGAGTGTGTGC

SW24551.5FAM17896-121

R-ATCCAAATGCTGCAAGCG

F-GTGTAGGCTGGCGGTTGT

S0218551.5TAMRAX8164-184

R-CCCTGAACCCTAAAGCAAAG

注：F表示正向引物，R表示反向引物。

6.1.2時間間隔

近交系實驗用小型豬生產(chǎn)群每年至少進行1次遺傳質(zhì)量檢測。

6.1.3抽樣

對基礎(chǔ)群，凡在子代留有種豬的雙親動物都應(yīng)進行檢測。

對生產(chǎn)群，按照表2要求從每個近交系中隨機抽取非同窩成年實驗用小型豬，公母各半。

表2近交系實驗用小型豬生產(chǎn)群遺傳監(jiān)測抽樣要求

3

DB14/T2663—2023

生產(chǎn)群中母豬數(shù)量（N頭）抽樣數(shù)量（頭）

N≤504

50<N≤1006

N>100>6

6.1.4結(jié)果判定

近交系實驗用小型豬遺傳質(zhì)量監(jiān)測結(jié)果判定按照表3執(zhí)行。

表3近交系實驗用小型豬遺傳質(zhì)量監(jiān)測結(jié)果判定

監(jiān)測結(jié)果判定

與標(biāo)準遺傳概貌完全一致未發(fā)現(xiàn)遺傳變異，合格

有一個位點的標(biāo)記基因與標(biāo)準遺傳概貌不一致遺傳發(fā)生變異，不合格

封閉群實驗用小型豬遺傳質(zhì)量監(jiān)測

6.2.1監(jiān)測方法

采用微衛(wèi)星DNA標(biāo)記檢測方法。具體方法按照NY/T1673執(zhí)行，各微衛(wèi)星DNA標(biāo)記的染色體位

置、等位基因數(shù)、等位基因分布范圍、引物序列、退火溫度、鎂離子濃度等見表4。

表4各微衛(wèi)星位點的名稱、引物序列、PCR反應(yīng)的退火溫度、鎂離子濃度（Mg2+）、染色體位置、等位

基因數(shù)、等位基因分布范圍

退火溫鎂離子濃度染色體等位基等位基因分布

座位名稱引物序列（5'→3'）

度(℃)(mmol/L)位置因數(shù)范圍（bp）

GGTGAAGTTTTTGCTTTGAACC

SW974582.0117129-175

GAAAGAAATCCAAATCCAAACC

TCTACTCCAGGAGATAAGCCAGAT

S0091551.521496-174

CAGTGACTCCATGCACAGTTATGA

AGAAATTAGTGCCTCAAATTGG

SW240581.521192-114

AAACCATTAAGTCCCTAGCAAA

GCAGGATGAACCACCCTG

SW1066602.0319166-214

CTCTTGAGGCAACCTGCTG

TTTTCCCCTTCACTCACCC

SW1089581.5410142-190

GATCAAAGTCCCTTACTCCGG

TCCTTCCCTCCTGGTAACTA

S0005542.0511204-244

GCACTTCCTGATTCTGGGTA

TCCCCTGTTGTACAGATTGATG

SW1057582.0614142-191

TCCAATTCCAAGTTCCACTAGC

TGGGTTGAAAGATTTCCCAA

SW632542.079148-173

GGAGTCAGTACTTTGGCA

CCAATCCTATTCACGAAAAAGC

OPN592.0812138-170

CAACCCACTTGCTCCCAC

4

DB14/T2663—2023

表4各微衛(wèi)星位點的名稱、引物序列、PCR反應(yīng)的退火溫度、鎂離子濃度（Mg2+）、染色體位置、等位

基因數(shù)、等位基因分布范圍（續(xù)）

退火溫鎂離子濃度染色體等位基等位基因分布

座位名稱引物序列（5'→3'）

度(℃)(mmol/L)位置因數(shù)范圍（bp）

AGGGTGGCTAAAAAAGAAAAGG

SW29612.0812133-187

ATCAAATCCTTACCTCTGCAGC

CTCAGTTCTTTGGGACTGAACC

SW911602.0914151-178

CATCTGTGGAAAAAAAAAGCC

AAGCAGGAATCCCTGCATC

SW511621.5912161-196

CCCAGCCACCAGTCTGAC

TCCAATTCAACTCCTGGCTC

SWr158602.01018158-200

GAATGTGCACATACCACATGC

TTTCACAACTCTGGCACCAG

SW951581.51014108-142

GATCGTGCCCAAATGGAC

TTCCAGTGGCTTTCTGTGC

SW271581.51113111-144

CATTCATTCCCAGTGAAACTTG

TCCTGGGTCTTATTTTCTA

S0386482.01112155-178

TTTTTATCTCCAACAGTAT

CCTTCAACCTTTGAGCAAGAAC

S0068622.01310210-256

AGTGGTCTCTCTCCCTCTTGCT

ACAGCCACCAACAGTGTTTG

SWr1008622.0131698-256

GAACTTCCATATGCTGCAAGTG

TTACTTCTTGGATCATGTC

S0007542.01415142-192

GTCCCTCCTCATAATTTCTG

TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACC

SW857582.01416129-173

GATCCTCCTCCAAATCCCAT

ATCCGTGCGTGTGTGCAT

SWr312641.51511116-136

CTGGTGGCTACAGTTCCGAT

GATCTGGTCCTGCACAGGG

SW81601.5168128-144

GGGGCTCTCAGGAAGGAG

CAAATGGAACCCATTACAGTCC

SWr1120