RNA干擾（RNAi）技術(shù)研究國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)綜述RNA干擾（RNAi）是調(diào)節(jié)基因表達(dá)的一種自然的基因沉默過(guò)程。RNAi的發(fā)現(xiàn)是革命性的突破，并獲得2006年世界諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。RNA干擾是一種新穎和創(chuàng)新的方法，可以特異地靶向并沉默任何導(dǎo)致疾病的基因，包括那些不能被其他常規(guī)方法靶向的目標(biāo)。作為RNAi治療學(xué)開(kāi)發(fā)的領(lǐng)導(dǎo)者，Alnylam已將RNAi推進(jìn)到創(chuàng)新研究性療法的強(qiáng)有力管線(xiàn)中，并致力于證明創(chuàng)新的科學(xué)、毅力和激情能夠匯聚在一起，改善患者的生活。1.1RNAi的原理真核細(xì)胞有許多復(fù)雜的方式來(lái)控制基因的表達(dá)，在復(fù)雜的細(xì)胞環(huán)境中，這些機(jī)制需要靶向精準(zhǔn)。雙鏈RNA選擇性滅活靶基因?qū)?yīng)的mRNA可實(shí)現(xiàn)RNA干擾。進(jìn)入胞漿的雙鏈RNA可將其激活。沉默機(jī)制可導(dǎo)致靶mRNA的降解，也會(huì)導(dǎo)致siRNA的特異性mRNA翻譯產(chǎn)生。小RNA有幾種類(lèi)型：小干擾RNA、微小RNA、shRNA等。RNA干擾途徑中基因沉默的兩個(gè)重要研究方向是雙鏈小干擾RNA（siRNA）和短發(fā)夾RNA（shRNA）。大多數(shù)siRNA和有大約21個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度，短的雙鏈RNA與Argonaute蛋白結(jié)合，選擇其中一條RNA鏈作為引導(dǎo)鏈，保持與Argonaute蛋白的結(jié)合。RNA與Argonaute蛋白及其他蛋白的結(jié)合稱(chēng)為RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物（RISC）。MiRNA也引導(dǎo)RISC與信使RNA結(jié)合。通常只有miRNA中的一部分區(qū)域（種子序列）能與信使RNA配對(duì)。這種不精確的配對(duì)是的microRNA可以靶向數(shù)百種內(nèi)源信使RNA。被微小RNA靶向的信使RNA會(huì)被降解或抑制翻譯。在植物、動(dòng)物、真菌和一些細(xì)菌中，發(fā)現(xiàn)Argonaute蛋白和相應(yīng)的小調(diào)控RNA分子，它們?cè)谠S多生物過(guò)程中的重要性和在工具方面的作用仍有待了解。圖2.siRNA與shRNA的結(jié)構(gòu)（A）siRNA；（B）shRNA；（C）shRNA的構(gòu)建Figure2.StructureofsiRNAandshRNA（A)siRNA；（B)shRNA；（C)TheconstructionofshRNA1.2小干擾RNA（siRNA）小干擾RNA（或稱(chēng)為siRNA），由較長(zhǎng)的雙鏈RNA衍生而來(lái)，這些雙鏈RNA可由細(xì)胞本身產(chǎn)生，或通過(guò)實(shí)驗(yàn)人工導(dǎo)入細(xì)胞中。SiRNA或雙鏈RNA的引入被廣泛用于操縱基因表達(dá)。SiRNA是一種短的寡核苷酸雙鏈體，與靶mRNA互補(bǔ)，可引導(dǎo)RISC結(jié)合到特定的mRNA上，該過(guò)程具有靶向性，因?yàn)樗怯蓅iRNA和靶信使RNA之間的堿基配對(duì)決定的。SiRNA通常與靶向位點(diǎn)有很好的互補(bǔ)性，一旦結(jié)合，Argonaute催化信使RNA的切割，被切斷的RNA隨后被降解。SiRNA功能鏈的序列引導(dǎo)RISC復(fù)合體定向到mRNA的靶點(diǎn)，RISC復(fù)合體通過(guò)降解mRNA來(lái)阻止mRNA代碼中特定蛋白質(zhì)的合成，siRNA可用于精確、有效地沉默特定基因，減少多達(dá)99%的表達(dá)。此外，承載功能鏈的RISC可以靶向同一mRNA的更多副本并破壞它們。因此，siRNA起催化作用。1.3微小RNA（miRNA）微小RNAs是另一種小RNA。大多數(shù)微小RNA來(lái)自于在細(xì)胞核中轉(zhuǎn)錄的RNA，這些RNA經(jīng)過(guò)折疊然后以雙鏈miRNA前體的形式被輸送到細(xì)胞質(zhì)中。在人體內(nèi)，細(xì)胞使用miRNA達(dá)到基因沉寂，mRNA是將遺傳信息轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)所必需的，而miRNA可以通過(guò)令mRNA失活來(lái)關(guān)閉基因。這樣，基因沉默。MiRNA還參與調(diào)控細(xì)胞從發(fā)育到死亡的過(guò)程，一旦失調(diào)會(huì)對(duì)我們的身體造成嚴(yán)重后果，可能會(huì)導(dǎo)致癌癥和心臟病等一系列疾病。MiRNA和我們的生活息息相關(guān)，非常值得進(jìn)一步研究。與蛋白相似，編碼miRNA的基因也存在于DNA的細(xì)胞核，并通過(guò)RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄。它催化核糖核酸轉(zhuǎn)錄，合成mRNA。典型發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA，經(jīng)過(guò)加工，成為具有調(diào)控功能的miRNA。目的基因的mRNA與配對(duì)的miRNA序列互補(bǔ)，一旦結(jié)合，有兩種辦法使miRNA失活：一來(lái)，蛋白質(zhì)和復(fù)合物可以簡(jiǎn)單地切斷mRNA，然后進(jìn)一步摧毀它；另一種可能是抑制翻譯，在這種情況下RISC復(fù)合物會(huì)阻止核糖體亞基結(jié)合。這兩種情況下mRNA都不會(huì)被翻譯，基因沉默。在生物過(guò)程中，miRNA起著重要作用，是醫(yī)藥學(xué)界的巨大的潛力，是研究治療各種疾病的關(guān)鍵。1.4短發(fā)夾RNA（shRNA）短發(fā)夾RNA（shRNA），具有一段緊密的形似發(fā)夾環(huán)的序列，可用作RNA干擾技術(shù)中使基因沉默的一種表達(dá)手段，受pollⅡ啟動(dòng)子控制。ShRNA的發(fā)夾結(jié)構(gòu)可被切割成siRNA，切割形成的siRNA與RISC結(jié)合，結(jié)合產(chǎn)物中的RISC同時(shí)與mRNA結(jié)合，并使結(jié)合的mRNA降解。ShRNA在經(jīng)過(guò)聚合酶Ⅲ的轉(zhuǎn)錄后，其產(chǎn)物在哺乳動(dòng)物體內(nèi)存在會(huì)促使細(xì)胞產(chǎn)生干擾素的現(xiàn)象，而miRNA則不會(huì)。SShRNA相較于siRNA具有以下優(yōu)點(diǎn)：①可使用病毒載體轉(zhuǎn)染；②可克服某些細(xì)胞不能進(jìn)行轉(zhuǎn)染的難題；③穩(wěn)定性高，可長(zhǎng)期表達(dá)；④能減少脫靶效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)中選用shRNA，可進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染并具有較為穩(wěn)定的效果。同時(shí)，shRNA可以整合到細(xì)胞基因中，進(jìn)行長(zhǎng)期的穩(wěn)定表達(dá)。參考文獻(xiàn)：王俊.卵巢癌的早期癥狀卵巢癌應(yīng)該這樣治療[J].科普論壇,2021:[2] 周琦,唐小珂,曾莉,龍玲,林睿.人乳頭狀瘤病毒感染與卵巢癌的關(guān)系研究[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志,2017,12:4[3] SiegelR.L.,MillerK.D.,JemalA.Cancerstatistics,2019[J].CACancerJClin,2019,69(1):7-34[4] ChenW.,ZhengR.,BaadeP.D.,ZhangS.,ZengH.,BrayF.,JemalA.,YuX.Q.,HeJ.CancerstatisticsinChina,2015[J].CACancerJClin,2016,66(2):115-132[5] 王曉妮,茜王,田小娟,索玉平.卵巢癌的治療現(xiàn)狀及進(jìn)展[J].腫瘤藥學(xué),2020,10:5[6] 江霞,趙長(zhǎng)久.siRNA在卵巢癌靶向治療中的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2021,29:4[7] 楊興升.卵巢癌診療現(xiàn)狀_楊興升[J].中國(guó)醫(yī)刊,2021,56:3[8] 劉鳳娟,仝進(jìn)毅.神經(jīng)生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在上皮性卵巢癌中表達(dá)及意義研究[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志,2017,33:3[9] MIEllina,PBouris,AJAletras.EGFＲandHEＲ2exertdistinctrolesoncoloncancercellfunctionalproper-tiesandexpressionofmatrixmacromolecules[J].BiochimBiophysActa,2014,1840:11[10] CressR.D.,ChenY.S.,MorrisC.R.,PetersenM.,LeiserowitzG.S.CharacteristicsofLong-TermSurvivorsofEpithelialOvarianCancer[J].ObstetGynecol,2015,126(3):491-497[11] AebiS.,CastiglioneM.,GroupEsmoGuidelinesWorking.Newlyandrelapsedepithelialovariancarcinoma:ESMOclinicalrecommendationsfordiagnosis,treatmentandfollow-up[J].AnnOncol,2009,20Suppl4:21-23[12] HellstromIngegerd,HellstromKarlErik.SMRPandHE4asBiomarkersforOvarianCarcinomaWhenUsedAloneandinCombinationwithCA125and/orEachOther[J].AdvExpMedBiol,2008,622:7[13] YeungT.L.,LeungC.S.,YipK.P.,AuYeungC.L.,WongS.T.,MokS.C.Cellularandmolecularprocessesinovariancancermetastasis.AReviewintheTheme:CellandMolecularProcessesinCancerMetastasis[J].AmJPhysiolCellPhysiol,2015,309(7):C444-456[14] DionL.,CartonI.,JaillardS.,NyangohTimohK.,HennoS.,SardainH.,FoucherF.,LevequeJ.,delaMotteRougeT.,BrousseS.,LavoueV.TheLandscapeandTherapeuticImplicationsofMolecularProfilesinEpithelialOvarianCancer[J].JClinMed,2