ICS65.020.21

CCSB30

15

內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB15/T1056—2024

代替DB15/T1056-2016

香菇菌種制作技術(shù)規(guī)程

Regulationofstrainmanufactureforlentinulaedodes

2024-07-31發(fā)布2024-08-31實(shí)施

內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB15/T1056—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件代替DB15/T1056-2016《香菇菌種制作技術(shù)規(guī)程》，與DB15/T1056-2016相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整

和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化如下：

a)更改了母種培養(yǎng)基要求（見5.1，2016版5.1）；

b)增加了母種容器要求（見5.2，2016版5.2）；

c)增加了母種檢測要求（見5.4）；

d)更改了母種培養(yǎng)要求（見5.6，2016版5.5）；

e)更改了原種、栽培種培養(yǎng)基要求（見6.1.1，2016版6.1.1）；

f)更改了原種、栽培種培養(yǎng)要求（見6.1.6，2016版6.1.6）；

g)更改了原種、栽培種貯存要求（見6.1.7，2016版6.1.7）；

h)增加了瓶裝液體菌種檢驗(yàn)要求（見6.2.2.4）；

i)更改了菌種罐液體菌種裝罐和滅菌要求（見6.2.3.1，2016版6.2.3.1）；

j)更改了母種、原種、栽培種感官要求（見7.1.1、7.1.2、7.1.3，2016版7.1.1、7.1.2、7.1.3）；

k)更改了入庫要求（見7.2，2016版7.2）；

l)刪除了留樣要求（見2016版7.3）。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧廳提出。

本文件由內(nèi)需古自區(qū)果蔬標(biāo)準(zhǔn)化技木委會(huì)（SAM/TC25）歸口。

本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院、克什克騰旗農(nóng)牧技術(shù)推廣中心、清水河縣搖鈴溝農(nóng)

業(yè)科技發(fā)展有限公司。

本文件主要起草人：李亞嬌、王海燕、孫國琴、于傳宗、龐杰、王永、楊景杰、李炳華、吳靜、李

松樹葉、狄潔增、呂永偉、蘇永梅、趙宏宇、劉曉蕊、劉瑞。

本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：

——2016年首次發(fā)布為DB15/T1056-2016；

——本次為第一次修訂。

I

DB15/T1056—2024

香菇菌種制作技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了香菇菌種制作的菌種生產(chǎn)要求、母種生產(chǎn)、原種和栽培種生產(chǎn)、檢驗(yàn)、入庫等技術(shù)流

程要點(diǎn)。

本文件適用于香菇母種、原種和栽培種菌種制作要求。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

NY/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

香菇lentinulaedodes

又名香蕈、香信、香菌、冬菇、椎茸(日本)。類臍菇科（Omphalotaceae）、香菇屬（Lentinula）、

香菇種的一類木腐菌，子實(shí)體肉質(zhì)或近肉質(zhì)。

菌種spawn

通過生產(chǎn)試驗(yàn)驗(yàn)證具有特異性、均一性和穩(wěn)定性，豐產(chǎn)性好、抗性強(qiáng)的香菇菌株或品種，生長在

適宜基質(zhì)上具結(jié)實(shí)性的菌絲培養(yǎng)物，包括母種、原種和栽培種。

母種stockculture

經(jīng)分離、雜交、誘變等各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，以玻璃

試管和培養(yǎng)皿為培養(yǎng)容器和使用單位，也稱為一級種、試管種。

原種pre-culturespawn

由母種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物，也稱為二級種。

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DB15/T1056—2024

栽培種spawn

由原種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物，栽培種只能用于栽培，不可再次擴(kuò)大繁殖菌種，也

稱為三級種。

固體菌種solidspawn

以富含木質(zhì)素、纖維素和淀粉等天然有機(jī)物為主要原料，添加適量的有機(jī)氮源和無機(jī)鹽類，具有一

定水分含量的培養(yǎng)基培養(yǎng)的純菌絲體。

液體菌種liquidspawn

在液體培養(yǎng)基中，通過搖瓶震蕩培養(yǎng)或深層發(fā)酵技術(shù)快速獲得的大量的純雙核菌絲體。

4菌種生產(chǎn)要求

場地

總體要求交通運(yùn)輸便利，地勢較高，通風(fēng)良好，有充足的水源和電源，排水通暢，遠(yuǎn)離污染源。

廠房

菌種生產(chǎn)廠房要求有各自隔離的攤曬場、原材料庫、配料分裝庫。配套有配料室、攪拌室、裝袋（瓶）

室、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室（通風(fēng)好，有紗窗）、菌種檢測室及菌種冷藏庫等各環(huán)節(jié)的設(shè)施。

冷卻室、接種室，培養(yǎng)室都要有凈化設(shè)施。菌種生產(chǎn)廠房條件符合NY/T1731規(guī)定。

生產(chǎn)設(shè)備

菌種生產(chǎn)需要粉碎機(jī)、電子秤、攪拌機(jī)、裝袋（瓶）機(jī)、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、離子凈化器、

超凈工作臺或接種箱、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、搖床、液體菌種灌（30L～250L）、冰箱、顯微鏡等設(shè)

備。菌種生產(chǎn)設(shè)備條件符合NY/T1731規(guī)定。

5母種生產(chǎn)

培養(yǎng)基

馬鈴薯200g加水1200ml煮沸20min，濾液定容至1000ml，加入葡萄糖10g、蔗糖10g、蛋白胨

1.5g、酵母粉1.5g、硫酸鎂（MgSO4）0.5g、磷酸二氫鉀（KH2PO4）1g、瓊脂粉8g～10g，pH自然；

麥粒100g加水1200ml煮沸20min，濾液定容至1000ml，加入葡萄糖10g、蔗糖10g、蛋白胨5

g、硫酸鎂（MgSO4）0.5g、磷酸二氫鉀（KH2PO4）1g、瓊脂粉8g～10g，pH自然；

馬鈴薯200g加水600ml煮沸20min，濾液定容至500ml；麥麩100g加水600ml煮沸20min，濾液

定容至500ml，二者混合，加入葡萄糖10g、蔗糖10g、蛋白胨1.8g、硫酸鎂（MgSO4）0.5g、磷酸二

氫鉀（KH2PO4）1g、瓊脂粉8g～10g，pH自然。

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DB15/T1056—2024

容器

試管選用18mm×180mm或者20mm×200mm；培養(yǎng)皿選用直徑7cm～9cm玻璃培養(yǎng)皿或一次性塑

料培養(yǎng)皿，三角瓶規(guī)格300ml～500ml。

分裝和滅菌

5.3.1試管分裝和滅菌

分裝培養(yǎng)基至試管1/4處，用棉塞或硅膠塞子封閉試管口，每5支試管為1把，牛皮紙包棉塞，橡皮

筋扎緊，棉塞向上放置。棉塞應(yīng)采用梳棉，不能使用脫脂棉。在121℃～122℃（0.11MPa～0.12MPa）

下恒溫滅菌25min。

降溫至（65±5）℃時(shí)取出試管，在空氣清潔的室內(nèi)擺斜面，斜面長度不超過試管長度的2/3。自然

降溫凝固后成斜面。

5.3.2培養(yǎng)皿分裝和滅菌

培養(yǎng)基裝入300ml～500ml三角瓶至刻度的2/3處，用帶濾膜的封口膜封口后滅菌。培養(yǎng)皿用報(bào)紙

包好，放入滅菌鍋。121℃～122℃（0.11MPa～0.12MPa）恒溫滅菌25min。

降溫至（65±5）℃時(shí)，在超凈工作臺內(nèi)將三角瓶中的培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)基占培養(yǎng)皿高

度的1/3～1/2。

檢測

抽取3%～5%滅菌后的試管和培養(yǎng)皿，在28℃下培養(yǎng)48h，無微生物長出為滅菌合格。

接種

超凈工作臺或接種箱內(nèi)紫外燈照射30min后吹風(fēng)，之后用75%酒精進(jìn)行表面消毒。接菌過程嚴(yán)格執(zhí)

行無菌操作，接種后及時(shí)貼好標(biāo)簽并做好記錄。

將3mm～5mm菌塊接種在培養(yǎng)皿或試管培養(yǎng)基的中部。培養(yǎng)皿用石臘膜密封。

培養(yǎng)

在通風(fēng)避光、22℃～26℃下培養(yǎng)。

接種后每隔2d～3d檢驗(yàn)一次，剔除菌種未活、污染和生長不良的不合格培養(yǎng)物。

菌絲長滿培養(yǎng)基表面即可使用。

6原料、栽培種生產(chǎn)

固體菌種

6.1.1培養(yǎng)基

糧食培養(yǎng)基：谷粒、麥?；蛴衩琢?9%，檸條粉、棉籽殼、木屑、玉米芯粉或豆秸粉9%，石膏1%、

過磷酸鈣%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH6.0～pH6.6。

組合培養(yǎng)基：木屑78%，麥麩或細(xì)米糠20%，石膏1%，過磷酸鈣1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)

節(jié)pH值到6～6.6；

檸條粉60%，玉米芯20%，麩子18%，石膏1%，過磷酸鈣1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值

到6～6.6；

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DB15/T1056—2024

豆秸粉60%，玉米芯20%，麩子18%，石膏1%，過磷酸鈣1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值

到6～6.6；

硬雜木屑87%，麥麩12%，石膏1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值到6～6.6；

硬雜木屑84%，麩皮12%，高粱殼3%，石膏1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值到6～6.6。

6.1.2容器

原種選用耐126℃高溫、有透氣膜封口的透明瓶子，或選用（12～17）cm×（22～28）cm×（0.04～

0.05）mm的聚丙烯塑料袋。

栽培種選用（15～17）cm×（33～35）cm×（0.04～0.05）mm的聚丙烯塑料袋。

6.1.3裝袋（瓶）

采用裝袋（瓶）機(jī)或人工進(jìn)行裝袋（瓶），人工裝袋（瓶）需用打孔器在袋口處打孔，孔直徑1cm～

1.5cm深度為8cm～12cm，每袋（瓶）裝培養(yǎng)基500g～600g。塑料袋用無棉蓋體套環(huán)封口。培養(yǎng)基

質(zhì)裝袋（瓶）后4h內(nèi)進(jìn)行滅菌。

6.1.4滅菌

高壓滅菌：組合培養(yǎng)基在121℃～122℃（0.11MPa～0.12MPa）下滅菌2h；糧食培養(yǎng)基在121℃～

122℃（0.11MPa～0.12MPa）下滅菌2.5h。

常壓滅菌：在3h之內(nèi)使溫度升至100℃，恒溫保持100℃10h～12h。

6.1.5接種

超凈工作臺或接種箱內(nèi)接種。每個(gè)原種袋（瓶）接入2cm～3cm大小母種1～2塊；每個(gè)栽培種袋接

入原種量不應(yīng)少于15g。

每批接種應(yīng)為單一品種，如中途換品種時(shí)采用75%酒精對超凈工作臺或接種箱及接種工具進(jìn)行表面

擦拭消毒。

6.1.6培養(yǎng)

通風(fēng)避光、22℃～27℃下培養(yǎng)。

6.1.7貯存

原種和栽培種0℃～4℃下貯存，貯存期不超過50d。

液體菌種生產(chǎn)

6.2.1培養(yǎng)基

不加瓊脂，其他同5.1。

6.2.2瓶裝液體培養(yǎng)基生產(chǎn)

6.2.2.1裝瓶

采用150ml～500ml三角瓶，培養(yǎng)基添加至刻度的2/3處，用帶濾膜的封口膜封口后滅菌。

6.2.2.2滅菌

在121℃～122℃（0.11MPa～0.12MPa）保持25min。

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6.2.2.3接種和培養(yǎng)

取3mm～5mm大小母種10～15塊接入30℃以下的液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度在23℃～25℃，130

r/min～160r/min下振蕩培養(yǎng)6d～10d。

6.2.2.4檢驗(yàn)

接種后第3天對三角瓶逐個(gè)進(jìn)行純度檢驗(yàn)，及時(shí)清理未活或污染的培養(yǎng)物。

6.2.3菌種罐液體菌種生產(chǎn)條件

6.2.3.1裝罐和滅菌

將液體培養(yǎng)基裝至菌種罐體積的2/3進(jìn)行滅菌，在121℃下滅菌40min。待液體培養(yǎng)基冷卻至30℃

以下時(shí)進(jìn)行接種。

6.2.3.2接種和培養(yǎng)

將培養(yǎng)好的三角瓶液體菌種接入到菌種罐中，接種量為培養(yǎng)基總體積的8%～10%，在21℃～25℃，

140r/min～180r/min，灌壓0.04MPa，下培養(yǎng)5d～7d。

液體菌種可作為原種或栽培種使用，液體菌種接種在出菇袋中要采用專用液體菌種接種槍進(jìn)行，嚴(yán)

格執(zhí)行無菌操作，每袋接種10ml～15ml。

7檢驗(yàn)、入庫

檢驗(yàn)

7.1.1母種感官要求

香菇母鐘感官要求見表1。

表1香菇母種感官要求

項(xiàng)目要求

容器完整、無損、潔凈

棉塞或無棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能滿足透氣和過濾要求

培養(yǎng)基灌入量為試管總?cè)莘e的1/4，培養(yǎng)皿高度的1/3~1/2

菌絲生長量長滿斜面或培養(yǎng)皿

菌絲體特征潔白、平整、無角變

菌種外觀菌絲體分泌物無

菌落邊緣整齊

雜菌菌落無

斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮，顏色均勻，無暗斑、無色素

7.1.2原種感官要求

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香菇原種感官要求見表2。

表2香菇原種感官要求

項(xiàng)目要求

容器完整、無損、潔凈

棉塞或無棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能滿足透氣和濾菌要求

培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口的距離（50±5）mm

菌絲生長量長滿容器

菌絲體特征潔白濃密、生長旺健、整齊

培養(yǎng)物表面菌絲體生長均勻、無高溫抑制線

菌種外觀培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶壁、無干縮

菌絲分泌物無或少量無色至棕黃色水珠

雜菌菌落無

子實(shí)體原基無

7.1.3栽培種感官要求

香菇栽培種感官要求見表3。

表3香菇栽培種感官要求

項(xiàng)目要求

容器完整、無損、潔凈

棉塞或無棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能滿足透氣和濾菌要求

培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口的距離（50±5）mm

菌絲生長量長滿容器

菌絲體特征生長均勻、色澤一致、無角變、無高溫抑制線

菌

種培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶壁、無干縮

外