豆芽中喹諾酮類藥物的快速檢測膠體金免疫層析法國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布本方法規(guī)定了豆芽中喹諾酮類藥物的快速檢測膠體金免疫層析法。本方法根據(jù)競爭抑制免疫層析原理。樣品中的喹諾酮類藥物經(jīng)提取、稀釋后，與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和檢測線(T線)上的抗原結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測線(T線)顏色變化。通過檢測線(T線)與控制線(C線)顏色深淺比較，對樣品中的喹諾酮類藥物進(jìn)行定性判定。3試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。3.1.1磷酸二氫鉀(KH?PO?)。3.1.2乙腈(CH?CN)。喹諾酮類參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1,純度≥95%。注：或等同可溯源物質(zhì)。中文名稱CAS號恩諾沙星工2磷酸二氫鉀溶液(0.1mol/L):稱取磷酸二氫鉀(3.1.1)6.8g,用水溶解并稀釋至500mL,pH為3.4.1喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1mg/mL):稱取喹諾酮類參考物質(zhì)10mg(精確至0.01mg)至燒杯中，用適量乙腈溶解(必要時(shí)加入適量甲酸),并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶，乙腈定容，制成質(zhì)量1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。-18℃以下避光保存，有效期6個(gè)月。4.2電子天平：感量為0.01mg和0溫度15℃~35℃。器，-18℃以下避光保存。稱取2g試樣(精確至0.01g)于15mL離心管，加入5mL提取液(3.3),渦旋振蕩2min,4000r/吸取200μL待測液，加入至金標(biāo)微孔，上下抽吸5次～10次直至微孔試劑全部溶解，室溫孵育35min。將試紙條下端插入金標(biāo)微孔中，反應(yīng)5min。從微孔中取出試紙條，去掉下端樣品墊，在5min內(nèi)判讀結(jié)果。6.4.1每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。6.4.2空白試驗(yàn)：稱取空白試樣2g(精確至0.01g),按照6.2和6.3步驟與樣品同法操作。6.4.3加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)：稱取空白試樣2g(精確至0.01g),加入一定體積恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(3.4.2),使恩諾沙星含量為30μg/kg,按照6.2和6.3步驟與樣品同法操作。7結(jié)果判定通過對比檢測線(T線)與控制線(C線)顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視判定示意圖見圖1。結(jié)果有以下幾種：a)無效結(jié)果：控制線(C線)不顯色，無論檢測線(T線)是否顯色，均表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效。b)陰性結(jié)果：控制線(C線)顯色，若檢測線(T線)顏色深于或等于控制線(C線),表示試樣中不含待測組分或待測組分含量低于方法檢出限，視為陰性。c)陽性結(jié)果：控制線(C線)顯色，若檢測線(T線)不顯色或顏色淺于控制線(C線),表示試樣中含有待測組分且其含量高于方法檢出限，視為陽性。無效陰性陽性圖1目視判定示意圖空白試驗(yàn)測定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測定結(jié)果應(yīng)為陽性。當(dāng)檢測結(jié)果為陽性時(shí)，采用參比方法對結(jié)果進(jìn)行確證。9性能指標(biāo)氟沙星檢出限為15.0μg/kg。靈敏度≥95%。特異性≥95%。9.4交叉反應(yīng)率本方法對豆芽中可能共存的6-芐基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸、甲硝唑、尿素以及氯吡脲等常見藥物無交叉反應(yīng)。假陰性率≤5%。假陽性率≤5%。本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不作限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，應(yīng)對其進(jìn)行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。本方法參比方法為BJS201909《豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中喹諾酮類化合物的測定》(包含其所有修改單和最新版本)。本方法檢測喹諾酮類藥物時(shí)，不與6-芐基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸、甲硝唑、氯吡脲、尿素發(fā)生交叉反應(yīng)。本方法起草單位：四川省