凝血因子Ⅷ抑制物定量檢測(cè)專家共識(shí)CONTENTS01020304FⅧ抑制物的相關(guān)概念啟動(dòng)FⅧ抑制物定量檢測(cè)的時(shí)機(jī)FⅧ抑制物定量檢測(cè)方法FⅧ抑制物定量檢測(cè)步驟及注意事項(xiàng)FⅧ抑制物的相關(guān)概念FⅧ抑制物是能夠減少正?；旌涎獫{中FⅧ活性的物質(zhì)，其含量以Bethesda單位（BU）表示。FⅧ抑制物的定義根據(jù)來(lái)源不同，F(xiàn)Ⅷ抑制物可分為血友病A患者的抗FⅧ同種抑制物和獲得性血友病A患者的抗FⅧ自身抑制物。FⅧ抑制物的分類FⅧ抑制物陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)為連續(xù)兩次檢測(cè)中，患者血漿稀釋度的倒數(shù)≥0.6BU/ml。FⅧ抑制物的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)基本概念FⅧ抑制物的分類滴度分類動(dòng)力學(xué)特征FⅧ抑制物可分為HA患者的抗FⅧ同種抑制物及AHA患者的抗FⅧ自身抑制物。前者多為1型抑制物，而后者多為2型抑制物。根據(jù)FⅧ抑制物滴度，可將其分為低滴度抑制物（即抑制物滴度5.0BU/ml）和高滴度抑制物（即抑制物滴度≥5.0BU/ml）。1型抑制物的結(jié)合位點(diǎn)通常是FⅧ的A2或C2結(jié)構(gòu)域，破壞了FⅧ與凝血因子Ⅸ復(fù)合物的形成，呈現(xiàn)1型反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特征；2型抑制物的結(jié)合位點(diǎn)通常是FⅧ的C2結(jié)構(gòu)域，干擾了磷脂和血管性血友病因子的結(jié)合位點(diǎn)，呈現(xiàn)2型反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特征。分類010203FⅧ抑制物滴度分類低滴度抑制物定義高滴度抑制物定義根據(jù)FⅧ抑制物滴度的不同，可將其分為低滴度和高滴度抑制物。低滴度抑制物定義為抑制物滴度小于或等于5.0BU/ml。高滴度抑制物定義為抑制物滴度大于或等于5.0BU/ml。滴度劃分啟動(dòng)FⅧ抑制物定量檢測(cè)的時(shí)機(jī)首次確診HA患者已確診HA患者的監(jiān)測(cè)時(shí)機(jī)ITI治療前的檢測(cè)對(duì)于首次擬確診的HA患者，尤其是輕型和中間型患者，在接受替代治療前需進(jìn)行FⅧ抑制物定量檢測(cè)以與AHA進(jìn)行鑒別診斷。對(duì)于已確診的HA患者，除預(yù)防治療時(shí)需定期監(jiān)測(cè)FⅧ抑制物外，若治療效果欠佳、出血頻率增加或靶關(guān)節(jié)出血等情況應(yīng)及時(shí)進(jìn)行FⅧ抑制物定量檢測(cè)。對(duì)于抑制物持續(xù)陽(yáng)性的重型HA患者，應(yīng)立即接受免疫耐受誘導(dǎo)治療（ITI），F(xiàn)Ⅷ抑制物定量檢測(cè)對(duì)ITI的療效預(yù)測(cè)、劑量選擇及療效評(píng)估等均有重要的臨床意義。HA患者的檢測(cè)時(shí)機(jī)TITLEHEREAHA患者的檢測(cè)時(shí)機(jī)AHA患者確診前檢測(cè)對(duì)于擬確診的AHA患者，應(yīng)進(jìn)行FⅧ抑制物定量檢測(cè)以明確診斷。治療前檢測(cè)頻率在治療前6周，門診患者應(yīng)每周進(jìn)行1次FⅧ抑制物定量檢測(cè)，住院患者應(yīng)每周進(jìn)行2次。完全緩解后的檢測(cè)完全緩解后（即FⅧ抑制物滴度0.6BU/ml，F(xiàn)Ⅷ∶C≥50%，免疫抑制劑停用或恢復(fù)至發(fā)病前劑量）可根據(jù)臨床需求進(jìn)行FⅧ抑制物定量檢測(cè)。啟動(dòng)FⅧ抑制物定量檢測(cè)的時(shí)機(jī)ITI療效預(yù)測(cè)與劑量選擇ITI治療后監(jiān)測(cè)對(duì)于首次擬確診的HA患者，在接受替代治療前需進(jìn)行FⅧ抑制物定量檢測(cè)以與AHA進(jìn)行鑒別診斷。FⅧ抑制物定量檢測(cè)對(duì)免疫耐受誘導(dǎo)治療（ITI）的療效預(yù)測(cè)、劑量選擇及療效評(píng)估均有重要的臨床意義。對(duì)于抑制物持續(xù)陽(yáng)性的重型HA患者，應(yīng)立即接受免疫耐受誘導(dǎo)治療，并在治療過(guò)程中定期進(jìn)行FⅧ抑制物定量檢測(cè)。ITI治療中的監(jiān)測(cè)FⅧ抑制物定量檢測(cè)方法010203一期凝固法發(fā)色底物法方法比較一期凝固法基于檢測(cè)待測(cè)樣本對(duì)乏FⅧ基質(zhì)血漿活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）的糾正能力，通過(guò)檢測(cè)混合后血漿的APTT可計(jì)算得到樣本的FⅧ∶C結(jié)果。發(fā)色底物法的原理是基于檢測(cè)FⅧ作為輔因子與活化的凝血因子Ⅸ形成的復(fù)合物活化凝血因子Ⅹ的能力，通過(guò)檢測(cè)生成的活化凝血因子Ⅹ的量來(lái)計(jì)算樣本的FⅧ∶C結(jié)果。一期凝固法抗干擾能力較弱，易受其他凝血因子抑制物、狼瘡抗凝物質(zhì)和肝素等影響；而發(fā)色底物法抗干擾能力強(qiáng)，適用于FⅧ抑制物與其他凝血因子抑制物或狼瘡抗凝物質(zhì)的鑒別診斷。按檢測(cè)原理區(qū)分Bethesda法Nijmegen法兩種方法的區(qū)別Bethesda法是1975年提出的標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)方法，通過(guò)混合患者血漿與NPP后測(cè)定剩余FⅧ活性來(lái)計(jì)算抑制物滴度。Nijmegen法于1995年在Bethesda法基礎(chǔ)上改良，提高了檢測(cè)特異性，使用咪唑緩沖液調(diào)整NPPpH及乏FⅧ血漿作為稀釋液，減少假陽(yáng)性。Bethesda法和Nijmegen法的主要區(qū)別在于使用的稀釋液和pH調(diào)整方式，Nijmegen法通過(guò)這些改進(jìn)提升了檢測(cè)的特異性和準(zhǔn)確性。按檢測(cè)體系區(qū)分01”02”03”抗人FⅧ抑制物定量檢測(cè)抗rpFⅧ抑制物定量檢測(cè)NPP的來(lái)源和制備按正常混合血漿來(lái)源區(qū)分使用商品化的正?；旌涎獫{（NPP）進(jìn)行檢測(cè)，需確保其來(lái)源可靠且質(zhì)量符合標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于成人AHA患者，需要額外檢測(cè)抗重組豬凝血因子Ⅷ（rpFⅧ）的抑制物，使用rpFⅧ作為NPP。自制NPP時(shí)需注意選擇健康人群的血漿，避免特定疾病或治療狀態(tài)的個(gè)體，確保FⅧ∶C結(jié)果在95%~105%之間。FⅧ抑制物定量檢測(cè)步驟及注意事項(xiàng)抗凝劑使用及調(diào)整樣本處理與保存滅活步驟及注意事項(xiàng)采集樣本時(shí)應(yīng)使用含0.109mol/L（3.2%）枸櫞酸三鈉抗凝劑，對(duì)紅細(xì)胞比容≥55%的患者需調(diào)整抗凝劑或采血量。采集后樣本應(yīng)確認(rèn)無(wú)血凝塊，離心分離得到乏血小板血漿，建議當(dāng)天內(nèi)完成檢測(cè)；無(wú)法及時(shí)檢測(cè)時(shí)，可置于-20℃或-70℃保存。在FⅧ抑制物定量檢測(cè)前，樣本需置于56℃孵育30分鐘以滅活殘留的FⅧ，減少其對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。樣本采集及制備樣本滅活滅活的必要性滅活方法與條件滅活后的處理步驟樣本滅活可以有效減少殘留的FⅧ對(duì)FⅧ抑制物定量檢測(cè)結(jié)果的干擾，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。通常采用56℃孵育30分鐘的方法滅活樣本，滅活后需離心取上清液進(jìn)行后續(xù)稀釋處理。滅活后應(yīng)使用一定的離心速度和時(shí)間離心，取上清液進(jìn)行后續(xù)的樣本稀釋，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。010203根據(jù)公式，將FⅧ抑制物滴度計(jì)算系數(shù)代入公式中計(jì)算樣本