環(huán)糊精包合對(duì)陳皮揮發(fā)油體外抗氧化性的影響摘要目的：研究環(huán)糊精包合對(duì)陳皮揮發(fā)油體外抗氧化的影響。方法：本實(shí)驗(yàn)所用的陳皮揮發(fā)油采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行提取，再用飽和水溶液法對(duì)其進(jìn)行包合，以包合率和收得率為指標(biāo)評(píng)價(jià)包合效果，通過(guò)DPPH自由基清除能力和鐵還原能力來(lái)研究包合物的體外抗氧化性，并與包合前的體外抗氧化進(jìn)行對(duì)比，從而評(píng)價(jià)包合對(duì)陳皮揮發(fā)油體外抗氧化性的影響。結(jié)果：隨著陳皮揮發(fā)油濃度增加，其體外抗氧化能力也增大，且環(huán)糊精包合后揮發(fā)油的DPPH自由基清除能力及鐵還原能力較包合前的都降低。結(jié)論：環(huán)糊精包合對(duì)陳皮揮發(fā)油體外抗氧化性有一定的影響。Abstract

Objective:

To

study

the

effect

of

cyclodextrin

inclusion

on

the

anti-oxidation

of

volatile

oil

of

orange

peel.

Method:

In

this

experiment,

steam

distillation

method

was

used

to

extract

the

volatile

oil

of

tangerine

peel,

and

then

it

was

clathrated

by

the

saturated

aqueous

solution

method.

The

clathrate

efficiency

and

yield

rate

were

used

to

evaluate

the

clathrate

effect.

The

in

vitro

oxidation

resistance

of

the

inclusion

compound

was

studied

and

compared

with

the

in

vitro

oxidation

resistance

before

inclusion

to

evaluate

the

effect

of

inclusion

on

the

in

vitro

oxidation

resistance

of

volatile

oil

of

orange

peel.

Results:

As

the

concentration

of

volatile

oil

in

tangerine

peel

increased,

its

antioxidant

capacity

in

vitro

also

increased,

and

the

DPPH

free

radical

scavenging

ability

and

iron

reducing

ability

of

volatile

oil

after

cyclodextrin

inclusion

were

reduced

compared

with

those

before

inclusion.

Conclusion:

The

inclusion

of

cyclodextrin

has

a

certain

effect

on

the

antioxidant

activity

of

volatile

oil

of

orange

peel.關(guān)鍵詞：陳皮；揮發(fā)油；β-環(huán)糊精包合；鐵還原；DPPH自由基清除陳皮（CitrusReticulataPericarpium）為蕓香科植物橘（CitrusreticulataBlanco）及其栽培變種的干燥成熟果皮，主要分布在我國(guó)福建、廣西、廣東、四川等地。陳皮最早收載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，在我國(guó)已有幾千年的悠久歷史，陳皮氣香，性溫味辛而苦，歸脾肺經(jīng)，主要有理氣健脾、燥濕化痰的功效，如在平胃散、保和丸、異功散中都有使用，中醫(yī)臨床多用于治療脘腹脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多，現(xiàn)代研究表明其化學(xué)成分主要含有揮發(fā)油，橙皮苷、檸檬醛和檸檬烯等成分，其藥理作用主要有刺激胃腸道和呼吸道的分泌。其中，陳皮揮發(fā)油含有多種活性成分，如檸檬烯、γ-松油烯等，是陳皮主要有效成分之一，具有抗氧化、祛痰、抑菌、抗癌、促消化等作用。但是中藥揮發(fā)油存在的問(wèn)題是揮發(fā)性較強(qiáng)，常溫下全部或部分揮發(fā)，且極易被氧化分解，目前提高揮發(fā)油穩(wěn)定性已經(jīng)成為廣大醫(yī)藥工作者的主要課題。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，改善陳皮揮發(fā)油穩(wěn)定性的方法主要采用環(huán)糊精包合、微囊化、乳化等技術(shù)，其中β環(huán)糊精包合成為目前最常用的提高揮發(fā)油穩(wěn)定性的方法，為了切實(shí)將陳皮揮發(fā)油β環(huán)糊精包合技術(shù)應(yīng)用于實(shí)際生活，本實(shí)驗(yàn)以β環(huán)糊精作為主體，陳皮揮發(fā)油作為客體，采用飽和水溶液法對(duì)其進(jìn)行包合，再做包合物的體外抗氧化實(shí)驗(yàn)與包合前的體外抗氧化實(shí)驗(yàn)進(jìn)行對(duì)比，考察包合對(duì)陳皮揮發(fā)油體外抗氧化性的影響，其中，體外抗氧化性以揮發(fā)油的DPPH自由基清除能力和鐵還原抗氧化能力為評(píng)價(jià)指標(biāo)。材料與儀器1.1藥材與試劑陳皮（產(chǎn)地：浙江，批號(hào)：191213）；水（純化水）；無(wú)水硫酸鈉;DPPH（批號(hào)：1898664）;揮發(fā)油(本實(shí)驗(yàn)室制備);無(wú)水乙醇(批號(hào):130922);磷酸二氫鈉;磷酸氫二鈉(批號(hào):20161114);鐵氰化鉀;三氯乙酸(批號(hào):20180322);β環(huán)糊精(批號(hào):20170601);三氯化鐵(批號(hào):20150805);試劑均為分析純；1.2儀器HDM-2000D數(shù)顯攪拌電熱套、電子分析天平、電子天平、揮發(fā)油測(cè)定器、紫外分光光度計(jì)、HB-05加熱鍋、鼓風(fēng)干燥箱（型號(hào)：DHG-9055A）、磁力攪拌器（艾卡儀器設(shè)備有限公司）、抽濾泵實(shí)驗(yàn)方法2.1陳皮揮發(fā)油提取工藝稱取130g陳皮，放置在2000ml圓底燒瓶，加10倍蒸餾水，浸泡30min，搭建揮發(fā)油提取裝置，加熱至沸騰，保持其微沸狀態(tài)，提取7h，冷卻，用無(wú)水硫酸鈉脫水干燥后得到陳皮揮發(fā)油，于40C下避光保存。2.2包合工藝2.2.1包合物制備稱取16gβ環(huán)糊精，加蒸餾水160ml于水浴鍋上加熱使其溶解，放涼，至40℃下成為飽和溶液，再將此飽和溶液放于恒溫磁力攪拌器上，在轉(zhuǎn)速為750r/min、溫度為55℃的條件下緩慢滴加陳皮揮發(fā)油乙醇溶液（體積比為1:1）2ml，攪拌2.5h后，靜置冷藏12h，取出后用布氏漏斗進(jìn)行抽濾，棄去濾液，濾餅用無(wú)水乙醇洗滌三次，每次5ml，抽干后放于50℃的干燥箱中干燥，最后得白色粉末狀的包合物。2.2.2包合物實(shí)際含油量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)稱取定量的包合物于500ml燒瓶中，加200ml的蒸餾水，連接揮發(fā)油測(cè)定器，使沸騰0.5h，停止加熱，放置室溫后讀取油量。2.3DPPH自由基清除能力將包合物置于1000ml容量瓶中，加蒸餾水200ml，按照上述“2.2.2”項(xiàng)下測(cè)定法操作，收集揮發(fā)油，按附錄溶液配制法配成體積分?jǐn)?shù)為1%、2%、3%、4%、5%、6%的陳皮揮發(fā)油乙醇溶液。精密移取體積分?jǐn)?shù)分別為1%、2%、3%、4%、5%、6%的揮發(fā)油乙醇溶液2ml置具塞試管，加2ml0.1mmol/LDPPH溶液，混合均勻，于室溫下反應(yīng)30min，在517nm處測(cè)其吸光度值（A1）。按上述方式測(cè)2ml樣品液和2ml無(wú)水乙醇混合液的吸光度值（A2）；以同樣方式測(cè)2mlDPPH溶液和2ml無(wú)水乙醇混合液的吸光度值（A0）。每一組重復(fù)測(cè)三次，取平均值。按照如下公式計(jì)算不同濃度揮發(fā)油乙醇溶液對(duì)DPPH自由基清除能力：清除率=[1-（A1-A2）/A0]*100%以縱坐標(biāo)（y）為DPPH自由基的清除率，橫坐標(biāo)（x）為樣品濃度做回歸方程，并計(jì)算其相關(guān)系數(shù)（R2）。2.4還原能力將包合物置于1000ml容量瓶中，加蒸餾水200ml，按照上述“2.2.2”項(xiàng)下測(cè)定法操作，收集揮發(fā)油，按附錄溶液配制法配成體積分?jǐn)?shù)為1%、2%、3%、4%、5%、6%的陳皮揮發(fā)油乙醇溶液。取磷酸鹽緩沖溶液2ml五份，分別加入裝有2ml不同濃度揮發(fā)油乙醇溶液的試管中，再加入1%鐵氰化鉀溶液2ml，振蕩，混合均勻后，在50℃水浴鍋中反應(yīng)20min，急速冷卻，加入10%三氯乙酸溶液2ml，用微孔濾膜過(guò)濾。取續(xù)濾液4ml，加入蒸餾水4ml和0.1%FeCl30.8ml，混合均勻，室溫下靜置10min，在700nm處測(cè)定其吸光度。每一組重復(fù)測(cè)三次，取平均值。結(jié)果3.1DPPH清除能力結(jié)果圖3-1-1和3-1-2所示，由圖可以看出，陳皮揮發(fā)油具有一定的DPPH自清除自由基能力增強(qiáng)，表明清除自由基能力與體積分?jǐn)?shù)呈一定量效關(guān)系。同時(shí)通過(guò)對(duì)比陳皮揮發(fā)油包合前DPPH自由基清除率，明顯可以看出包合前陳皮揮發(fā)油的自由基清除能力優(yōu)于等體積包合后陳皮揮發(fā)油的清除能力，由此可以說(shuō)明β環(huán)糊精包合后對(duì)揮發(fā)油的DPPH自由基清除能力具有一定的影響。DPPH是一種較穩(wěn)定的氮中心的自由基，在517nm處有最大吸收波長(zhǎng)，本實(shí)驗(yàn)利用抗氧化劑捕捉DPPH自由基的孤對(duì)電子，使其在517nm處的吸光度值下降，吸光值的下降表明其抗氧化活性增強(qiáng)，以此指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)陳皮揮發(fā)油的抗氧化能力。圖3-1-1圖3-1-23.2總還原能力結(jié)果如圖3-2-1和3-2-2所示，陳皮揮發(fā)油具有一定的鐵還原能力，且隨著揮發(fā)油體積分?jǐn)?shù)的增加，吸光度值相應(yīng)增加，鐵還原能力也隨之增大。且通過(guò)陳皮揮發(fā)油包合前后總還原能力的對(duì)比圖，不難發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油包合后的總還原能力低于包合前的總還原能力，表明環(huán)糊精包合對(duì)揮發(fā)油總還原能力具有一定的影響。本實(shí)驗(yàn)方法又稱普魯士藍(lán)法，是利用揮發(fā)油可以把鐵氰化鉀還原成亞鐵氰化鉀，亞鐵氰化鉀在酸性條件和Fe3+絡(luò)合形成了普魯士藍(lán)，使吸光度值增大且700nm處吸光度值最大的原理。此實(shí)驗(yàn)方法通過(guò)測(cè)定揮發(fā)油的總還原能力，反映不同濃度揮發(fā)油供應(yīng)電子的能力，此供應(yīng)電子既可以與氧化物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，又可以和自由基反應(yīng)，從而發(fā)揮抗氧化的作用。圖3-2-1圖3-2-2結(jié)論通過(guò)本實(shí)驗(yàn)鐵還原法及DPPH自由基法的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析可知，陳皮揮發(fā)油的體外抗氧化活性與濃度呈顯著的量效關(guān)系，并且通過(guò)對(duì)比環(huán)糊精包合前和包合后的DPPH自由基清除能力及總還原能力，發(fā)現(xiàn)包合后體外抗氧化能力下降，因此可以得出環(huán)糊精包合后會(huì)對(duì)陳皮揮發(fā)油的體外抗氧化造成一定影響的結(jié)論，但目前包合對(duì)體外抗氧化造成影響的機(jī)制尚不明確，且國(guó)內(nèi)對(duì)此類研究鮮有報(bào)道，需要進(jìn)一步深入探討。附錄1%、2%、3%、4%、5%、6%揮發(fā)油乙醇溶液精密量取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml,,加乙醇分別定容至25ml容量瓶0.1mmol/LDPPH精密稱取0.0039gDPPH粉末置100ml容量瓶，加乙醇定容至刻度。磷酸緩沖溶液取A液（0.2mol/LNa2HPO4溶液：Na2HPO40.20g定容至100ml）37.5ml和B液（0.2mol/LNaH2PO4溶液：NaH2PO40.20g定容至100ml）62.5ml混合制成PH=6.6的磷酸鹽緩沖溶液1%鐵氰化鉀稱取1g鐵氰化鉀加蒸餾水定容至100ml容量瓶即得10%三氯乙酸稱取10g三氯乙酸加蒸餾水定容至100ml容量瓶即得0.1%FeCl3溶液稱取0.1g三氯化鐵加蒸餾水定容至100ml容量瓶即得參考文獻(xiàn)[1]中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:89[2]崔佳韻,梁建芬.不同年份新會(huì)陳皮揮發(fā)油的抗氧化活性評(píng)價(jià)[J].食品科技,2019,44(01):98-102[3]王斌,喬妍,武倩男等.香茅葉揮發(fā)油的化學(xué)成分及其體外抗氧化活性[J].中成藥,2016,38(4):841-845[4]何華,李先寬,宋新,霍艷,王冰.五味子揮發(fā)油抗氧化性研究[J].食品科技,2012,37(5):248-251[5]張海麗.陳皮提取物的抗氧化活性研究[J].黑龍江醫(yī)藥,2014,26(2):306-308[6]劉麗娜,徐玉娟,肖更生,吳繼軍,余元善,傅曼琴.不同年份陳皮黃酮成分分析及抗氧化活性評(píng)價(jià)[J].2020,51(3):623-629[7]吳廣通,張夏華,李鳳前.改善中藥揮發(fā)油穩(wěn)定性的制劑學(xué)研究進(jìn)展[J].藥學(xué)服