ICS65.020.20

CCSB61

2301

黑龍江省哈爾濱市地方標準

DB2301/T212—2024

越桔組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

2024-12-30發(fā)布2025-02-05實施

哈爾濱市市場監(jiān)督管理局??發(fā)布

DB2301/T212—2024

目次

前言..................................................................................II

1范圍.................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.......................................................................1

3術(shù)語和定義...........................................................................1

4外植體的采集與消毒...................................................................1

4.1外植體采集.......................................................................1

4.2外植體的消毒.....................................................................1

5培養(yǎng)基制備...........................................................................1

5.1培養(yǎng)基配比.......................................................................1

5.2培養(yǎng)基滅菌.......................................................................2

5.3培養(yǎng)基保存.......................................................................2

6培養(yǎng)程序.............................................................................2

6.1初代培養(yǎng).........................................................................2

6.2繼代培養(yǎng).........................................................................2

6.3生根培養(yǎng).........................................................................2

7煉苗與移栽...........................................................................3

7.1煉苗.............................................................................3

7.2移栽.............................................................................3

8出圃.................................................................................3

9生產(chǎn)檔案.............................................................................3

I

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。

本文件由哈爾濱市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院鄉(xiāng)村振興科技研究所、中國科學院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究

所、哈爾濱市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站、黑龍江省林業(yè)科學院、雙鴨山市寶清縣龍頭鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)鄉(xiāng)村振興服務(wù)發(fā)展

中心、雙鴨山市寶清縣朝陽鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)鄉(xiāng)村振興服務(wù)發(fā)展中心、伊春市農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心。

本文件主要起草人：趙文博、段亞東、孫嬡麗、李靖彤、張鹍、宋鵬慧、周春薇、周雙、毛俊瑩、

劉爭、侯帥、溫智鈞、梁海婷、許志偉、肖珩、呂德寶、郝淑榮、張?zhí)鹛稹?/p>

II

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越桔組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了越桔（Vacciniumvitis-idaeaL.）組織培養(yǎng)育苗技術(shù)的外植體的采集與消毒、培養(yǎng)

基制備、培養(yǎng)程序、煉苗與移栽、出圃和生產(chǎn)檔案等。

本文件適用于越桔的組織培養(yǎng)育苗。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準則

LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4外植體的采集與消毒

4.1外植體采集

4月～7月份的晴天剪取葉片表面無露水、生長健壯且無病蟲害的當年生嫩枝，去掉葉片并留1mm～

2mm葉柄作為外植體。

4.2外植體的消毒

4.2.1將剪成帶1個芽的外植體莖段用流水沖洗10min～20min。

4.2.2用75%酒精對雙手及手腕消毒，將外植體置于已滅菌的燒杯中，先用75%酒精浸泡30s，無菌

水清洗3次，每次30s。

4.2.3再用10%次氯酸鈉溶液滅菌10min，無菌水清洗3次，每次30s。

4.2.4用無菌濾紙吸干外植體表面的水分備用。

4.2.5藥劑應(yīng)符合GB/T8321和NY/T1276的規(guī)定。

5培養(yǎng)基制備

5.1培養(yǎng)基配比

5.1.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基為WPM，基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制方法按LY/T1882中4.2.1規(guī)定執(zhí)行。

1

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5.1.2初代培養(yǎng)基

初代培養(yǎng)基按WPM1L+ZT2.0mg～4.0mg＋蔗糖30g＋瓊脂7g進行配置，pH值5.2～5.4。

5.1.3繼代培養(yǎng)基

繼代培養(yǎng)基按WPM1L+IBA0.1mg～0.2mg+ZT2.0mg～4.0mg＋蔗糖30g＋瓊脂7g進行配置，

pH值5.2～5.4。

5.1.4生根培養(yǎng)基

生根培養(yǎng)基按WPM1L+IBA3.0mg～4.0mg＋NAA0.4mg+蔗糖60g＋瓊脂14g進行配置，pH值

5.2～5.4。

5.2培養(yǎng)基滅菌

培養(yǎng)基在壓力0.105MPa、溫度121℃的條件下滅菌20min。滅菌物應(yīng)不超過滅菌鍋容積的3/4。

5.3培養(yǎng)基保存

滅菌后的培養(yǎng)基放入接種室，應(yīng)避免陽光直射，在18℃～22℃條件下存放不宜超過7d。

6培養(yǎng)程序

6.1初代培養(yǎng)

6.1.1接種

在超凈工作臺上將已消毒的外植體莖段垂直插入初代培養(yǎng)基，每個培養(yǎng)瓶接種3個～5個莖段，均

勻分布，接種后將培養(yǎng)瓶瓶口在酒精燈火焰上灼燒1s～2s，迅速蓋好瓶蓋，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。

6.1.2培養(yǎng)條件

白天25℃±2℃，夜間不低于15℃。黑暗培養(yǎng)7d后，轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)。相對空氣濕度70%～80%，

光照強度為2000Lux～3000Lux，光照時間為12h/d～16h/d。待嫩芽長出后，進行繼代培養(yǎng)。

6.2繼代培養(yǎng)

6.2.1接種

將初代培養(yǎng)后長出的嫩莖剪成1cm左右的莖段，插入新鮮的增殖培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)。

6.2.2培養(yǎng)條件

白天25℃±2℃，夜間不低于15℃。相對空氣濕度70%～80%，光照強度為2000Lux～3000Lux，

光照時間為12h/d～16h/d。

6.3生根培養(yǎng)

6.3.1接種

選取由繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯、高度大于2cm的無菌不定芽接入生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。

6.3.2培養(yǎng)條件

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繼續(xù)按6.2.2的要求培養(yǎng)。待生根后2周～3周，選取根長1.5cm～2.5cm、須根不少于3條的瓶苗，

將其放置溫室進行煉苗。

7煉苗與移栽

7.