ICS65.020.20

CCSB23

15

內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB15/T3699—2024

馬鈴薯種質(zhì)資源離體培養(yǎng)及保存技術(shù)規(guī)程

Technicalcodeofpracticefortissuecultureandpreservationof

potatogermplasmresources

2024-10-25發(fā)布2024-11-25實(shí)施

內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB15/T3699—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起

草。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧廳提出。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAM/TC20)歸口。

本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院。

本文件主要起草人：曹春梅、逯春杏、王曉嬌、許飛、韓藝、張翠玲、胡嘉鑫。

I

DB15/T3699—2024

馬鈴薯種質(zhì)資源離體培養(yǎng)及保存技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了馬鈴薯種質(zhì)資源離體培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程及保存的莖尖剝離（脫毒）材料的選取、脫毒與培養(yǎng)、

試管苗保存、試管薯誘導(dǎo)等技術(shù)要求。

本文件適用于馬鈴薯種質(zhì)資源離體培養(yǎng)及保存。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文

件。

NY/T401脫毒馬鈴薯種薯（苗）病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

莖尖剝離apicalstripping

應(yīng)用莖尖分生組織培養(yǎng)技術(shù)，選取馬鈴薯芽頂端部分（直徑0.1mm～0.3mm），帶有1～2個(gè)葉原基的

莖尖分生組織，移植到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

離體培養(yǎng)isolatedculture

選取馬鈴薯莖尖、莖段或其他離體組織通過(guò)無(wú)菌操作接種在特定的培養(yǎng)基上，在人工控制條件下進(jìn)行

培養(yǎng)，已獲得的完整植株可保持其體內(nèi)所含遺傳物質(zhì)的完整性，從而達(dá)到保存目的的方法。

4莖尖剝離（脫毒）材料的選取

選取無(wú)類(lèi)病毒(PSTVd)、健壯且具備馬鈴薯品種（系）典型農(nóng)藝性狀植株的頂芽、腋芽或健康塊莖的莖

尖作為材料。

5脫毒與培養(yǎng)

脫毒材料的預(yù)處理

收獲脫毒材料，將塊莖放置在溫室或培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行催芽處理。待芽萌發(fā)2cm時(shí)，在溫度35℃~37℃

進(jìn)行高溫鈍化處理15d，光照/黑暗12h，光照強(qiáng)度2000Lx。

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DB15/T3699—2024

培養(yǎng)基的制備

選用MS+0.5mg/L萘乙酸+0.1mg/L6-芐氨基腺嘌呤或MS+0.2mg/L萘乙酸配方配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基

pH值調(diào)至5.8~6.0。分裝后在121℃條件下，滅菌25min~30min，待培養(yǎng)基冷卻凝固，觀(guān)測(cè)24h，確保無(wú)

菌后備用。

脫毒材料的消毒處理

5.3.1取材

選取經(jīng)處理的馬鈴薯塊莖上頂芽或側(cè)芽組織2cm左右，或選取經(jīng)處理的馬鈴薯植株頂芽、腋芽2cm左

右作為脫毒材料。

5.3.2清洗

將選取的脫毒材料放入玻璃燒杯內(nèi)，放在水龍頭下，采用小水流，用毛刷輕刷塵土，隨后在燒杯上扎

塊紗布，置于流動(dòng)的小水流下沖洗時(shí)間30min。

5.3.3消毒

在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將脫毒材料放置在滅菌的燒杯內(nèi)，先用75%的酒精浸泡30s，隨后用無(wú)菌水沖洗3遍，

控干水分后再用5%漂白粉溶液或10%次氯酸鈉溶液中浸泡5min~10min；最后用無(wú)菌水沖洗3遍，濾干水分

備用。

莖尖剝離與接種

解剖鏡下，用無(wú)菌解剖針或手術(shù)刀剝?nèi)в?~2個(gè)葉原基的莖尖分生組織，剝離后的莖尖分生組織直

徑0.1mm~0.3mm，接種到滅菌的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶或試管外壁寫(xiě)好編號(hào)和日期。

莖尖培養(yǎng)條件

光照培養(yǎng)14h，保持24℃，光照強(qiáng)度1500Lx~2000Lx，暗培養(yǎng)10h，保持18℃。

莖尖成苗

待愈傷分化成苗后，及時(shí)剪出生長(zhǎng)點(diǎn)，轉(zhuǎn)移到MS培養(yǎng)基上。待植株生長(zhǎng)到3~4個(gè)葉片時(shí)，單節(jié)切斷快繁，

同時(shí)標(biāo)明該種質(zhì)資源品種（系）名稱(chēng)、日期等信息，常規(guī)培養(yǎng)。

病毒檢測(cè)

按照NY/T401對(duì)擴(kuò)繁苗進(jìn)行PVX、PVY、PVS、PVA、PVM、PLRV病毒檢測(cè)。

6試管苗保存

保存培養(yǎng)基配方

MS+20g/L甘露醇，pH值5.8~6.0。

保存條件

將用保存培養(yǎng)基擴(kuò)繁的試管苗置于溫度22℃~24℃、光照強(qiáng)度2000Lx~3000Lx、光照時(shí)間16h/d

條件下培養(yǎng)2w，待生根后將培養(yǎng)溫度調(diào)為8℃~10℃、光照時(shí)間12h/d、光照強(qiáng)度2000Lx~3000Lx，持

續(xù)培養(yǎng)。建議每隔3個(gè)月進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

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DB15/T3699—2024

采用紫外線(xiàn)、熏蒸法，每隔10d對(duì)培養(yǎng)室進(jìn)行一次消毒，及時(shí)取出污染的試管苗并進(jìn)行高溫滅菌處理。

7試管薯誘導(dǎo)

誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方

MS+100g/L蔗糖+4.5g/L瓊脂粉+1g/L活性炭，pH值為5.8~6.0。

誘導(dǎo)條件

將正常培養(yǎng)4w的試管苗置于溫度17℃~18℃、光照時(shí)間8h/d、光照強(qiáng)度1000Lx，進(jìn)行試管薯誘導(dǎo)，

60d后可形成試管薯。

試管薯保存

將試管薯