AbMole|BS3助力揭秘衣康酸轉(zhuǎn)運體ABCG2抑制免疫抗菌能力來自中國科學院生物物理研究所的ChaoChen和XinjianLi等多名研究人員在CellMetab期刊（IF=29）上，發(fā)表了題為“ABCG2isanitaconateexporterthatlimitsantibacterialinnateimmunitybyalleviatingTFEB-dependentlysosomalbiogenesis”的研究成果，該研究使用了購自AbMole的Bis(sulfosuccinimidyl)suberate(BS3，M9872)，并揭示了ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G2（ABCG2）是一種衣康酸轉(zhuǎn)運體，能將衣康酸轉(zhuǎn)運到細胞外，從而抑制衣康酸誘導的TFEB活化和溶酶體生成，最終抑制先天免疫抗菌防御能力。衣康酸是一種由免疫應答基因1(IRG1)對TCA循環(huán)中間產(chǎn)物順烏頭酸進行脫羧而合成的代謝產(chǎn)物，隨后被轉(zhuǎn)運到細胞質(zhì)中，從而在巨噬細胞中發(fā)揮多種調(diào)節(jié)作用。然而，衣康酸從巨噬細胞中排出的機制仍不清楚。研究人員通過構建gRNA文庫進行CRISPR-Cas9篩選，并在篩選的結(jié)果中，將ABCG2作為潛在的衣康酸輸出體進行進一步研究。隨后研究人員敲除了THP-1細胞和永生化小鼠骨髓衍生巨噬細胞（iBMDMs）中的ABCG2/Abcg2。免疫印跡和生化分析結(jié)果表明，在LPS刺激下，ABCG2/Abcg2基因敲除（KO）不會改變IRG1的水平，但是細胞內(nèi)衣康酸水平升高，而培養(yǎng)上清液中的衣康酸水平下降，提示ABCG2能促進衣康酸從LPS激活的巨噬細胞中輸出。接下來通過引入點突變，削弱ABCG2介導的ATP水解活性。生化分析表明ABCG2ATP水解缺失突變體的重組表達能導致細胞內(nèi)衣康酸水平升高，培養(yǎng)上清液中衣康酸水平下降。然后研究人員通過測定野生型和ATP水解缺陷突變體在脂質(zhì)體中重組后的體外ATP酶和衣康酸轉(zhuǎn)運活性，發(fā)現(xiàn)ABCG2的轉(zhuǎn)運活性依賴于水解ATP。之前的研究發(fā)現(xiàn)，衣康酸能通過激活轉(zhuǎn)錄因子TFEB誘導溶酶體生成。在本研究中，免疫熒光和細胞分餾分析等實驗結(jié)果表明，ABCG2/Abcg2KO或ABCG2ATP水解缺陷突變體的重組表達能促進LPS刺激的TFEB核易位，促進溶酶體基因表達和溶酶體區(qū)室的形成。此外，免疫印跡分析和ELISA結(jié)果表明，ABCG2/Abcg2的缺失，在LPS刺激下會升高NRF2和ATF3的蛋白水平，抑制IL-1b分泌。同時，ASC寡聚化試驗也表明，ABCG2/Abcg2缺失會導致大型多聚ASC復合物減少，提示ABCG2缺乏能促進衣康酸誘導的溶酶體生物生成，并抑制巨噬細胞的炎癥程序激活。隨后，研究人員用鼠傷寒沙門菌（S.typhimurium）感染THP-1細胞和iBMDMs，并發(fā)現(xiàn)鼠傷寒沙門菌感染能以ABCG2依賴性方式誘導IRG1表達，并且BCG2/Abcg2KO或ABCG2ATP水解缺陷突變體的重組表達會導致細菌滴度下降，提示ABCG2是巨噬細胞先天免疫抗菌防御的有效負調(diào)控因子。接下來，研究人員構建了髓細胞特異性Abcg2-KO小鼠模型，并采用鼠傷寒沙門菌感染小鼠模型進一步進行體內(nèi)實驗。結(jié)果表明，ABCG2的缺失會以IRG1依賴性的方式促進體內(nèi)的先天免疫抗菌防御。最后，為了確定該研究結(jié)果與人類的相關性，研究人員使用人巨噬細胞進行驗證，生化分析和亞細胞分餾分析等研究表明，在LPS激活的人巨噬細胞中，ABCG2的表達與衣康酸的輸出相關，阻斷ABCG2可促進TFEB激活和TFEB依賴性溶酶體生物生成。本研究使用了AbMole的Bis(sulfosuccinimidyl)suberate(BS3，M9872)，BS3是一種活性交聯(lián)劑，常用于蛋白質(zhì)、多肽和細胞表面的交聯(lián)反應中。它可以通過酰胺鍵結(jié)合到含有羥基、胺基或硫代基的官能團上，從而