ICS65.020.01

CCSB16

46

海南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB46/T700—2025

芒小果普癭蚊檢疫鑒定規(guī)范

SpecificationfordetectionandidentificationofProcontarinia

fructiculi

2025-06-29發(fā)布2025-09-01實(shí)施

海南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB46/T700—2025

目次

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語和定義.........................................................................1

4方法原理...........................................................................1

5器材和試劑.........................................................................1

5.1器材...........................................................................1

5.2試劑...........................................................................1

6鑒定特征...........................................................................2

6.1普癭蚊屬形態(tài)特征...............................................................2

6.2芒小果普癭蚊形態(tài)特征...........................................................2

6.3與近似種的鑒別.................................................................3

7現(xiàn)場檢疫...........................................................................3

8室內(nèi)檢測...........................................................................3

8.1鏡檢...........................................................................3

8.2分子檢測.......................................................................3

9結(jié)果判定...........................................................................3

10標(biāo)本保存..........................................................................4

11檔案管理..........................................................................4

附錄A（資料性）芒小果普癭蚊生物學(xué)特性...............................................4

附錄B（資料性）芒小果普癭蚊成蟲形態(tài)特征圖...........................................6

附錄C（資料性）芒小果普癭蚊及其近似種鑒別...........................................7

附錄D（規(guī)范性）芒小果普癭蚊的分子檢測...............................................8

參考文獻(xiàn)..............................................................................9

I

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起

草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由海南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所。

本文件主要起草人：韓冬銀、王建赟、葉政培、李磊、符悅冠、張方平、趙菁、邱海燕。

II

DB46/T700—2025

芒小果普癭蚊檢疫鑒定規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了植物檢疫中芒小果普癭蚊的檢疫鑒定方法，包括方法原理、器材和試劑、鑒定特征、

現(xiàn)場檢疫、室內(nèi)檢測、結(jié)果判定等要求，描述了標(biāo)本保存及檔案管理等證實(shí)方法。

本文件適用于芒小果普癭蚊的檢疫鑒定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

SN/T2122進(jìn)出境植物及植物產(chǎn)品檢疫抽樣方法

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

芒小果普癭蚊mangofruit-feedinggallmidge

學(xué)名：ProcontariniafructiculiJiao,Wang,Bu&Kolesik，隸屬于雙翅目Diptera、癭蚊科

Cecidomyiidae、普癭蚊屬Procontarinia的為害芒果的一種害蟲。

注：芒小果普癭蚊生物學(xué)特性見附錄A。

4方法原理

以芒小果普癭蚊形態(tài)特征為主要鑒定依據(jù)，COI基因的序列特征為輔助鑒定依據(jù)。芒小果普癭蚊在

GenBank系統(tǒng)的序列號(hào)為MG637425、MG637426。

5器材和試劑

5.1器材

PCR儀，電泳儀，紫外分光光度計(jì)，凝膠成像系統(tǒng)，冰箱，低溫冰箱，制冰機(jī)，水浴鍋，離心機(jī)，

電子天平，微量加樣器，體視顯微鏡，相機(jī)，放大鏡，小毛筆，鑷子，剪刀，白瓷盤，解剖針，指形管，

標(biāo)簽等。

5.2試劑

TE緩沖液，Tris-鹽酸，EDTA，氯化鈉，蛋白酶K，氯仿，異戊醇，無水乙醇，75%乙醇，Taq聚合酶，

瓊脂糖，DNA提取試劑盒，PCR反應(yīng)試劑盒等。

1

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6鑒定特征

6.1普癭蚊屬形態(tài)特征

普癭蚊屬成蟲形態(tài)特征見表1。

表1普癭蚊屬成蟲形態(tài)特征

部位雄成蟲雌成蟲

具12個(gè)鞭小節(jié)，第１和第２鞭小節(jié)融合

觸角鞭小節(jié)呈雙結(jié)狀，端結(jié)和基結(jié)形狀大小接觸角鞭小節(jié)除少數(shù)種類呈與雄蟲相似的雙結(jié)狀外，

觸角

近，其上分別具一圈發(fā)達(dá)的大環(huán)狀環(huán)絲，其頸部大多呈單結(jié)狀，結(jié)部具帶狀環(huán)絲，其頸部相對(duì)雄蟲

相對(duì)較長較短

透明，R1脈在翅基部1/2靠前處與Ｃ脈匯合；R5脈較直且在翅端處或翅端稍靠前處與Ｃ脈匯合；Cu脈分叉

翅

抱器基節(jié)通常具中基瓣；陽莖顯著突出，端部錐

生殖器狀或較為平鈍，其上著生一定數(shù)量且較小的無毛產(chǎn)卵器具有一定的伸縮性或不可伸縮

感覺孔

通常寬大愈合且其端緣中央略微凹陷，少數(shù)種類

尾須整體愈合或部分分離

明顯分２瓣

肛下板端緣中央略微凹陷寬圓但不分瓣

6.2芒小果普癭蚊形態(tài)特征

芒小果普癭蚊成蟲形態(tài)特征見表2，成蟲特征實(shí)物圖見圖B.1,雄成蟲各部位特征示意圖見圖B.2。

表2芒小果普癭蚊成蟲形態(tài)特征

部位雄成蟲雌成蟲

眼頭頂復(fù)眼橋長6～7個(gè)小眼直徑。單眼突微隆起具單眼突，微隆起

下顎須下顎須4節(jié)，向端部逐節(jié)漸長

具12節(jié)，第1節(jié)與第2節(jié)融合；梗節(jié)亞球形，略

微比柄節(jié)長；鞭節(jié)為雙亞節(jié)，每個(gè)亞節(jié)具一圈

鞭節(jié)柱狀，第3節(jié)中部略縊縮，頸部約為小節(jié)長的1/3；

環(huán)毛；第3鞭節(jié)中部的無毛區(qū)約為基亞節(jié)長度

觸角環(huán)毛緊貼表面，由2條水平方向和2條垂直方向的環(huán)帶

的0.6～0.7倍，頸部長約為端亞節(jié)長的1.0～

交聯(lián)而成

1.1倍；基亞節(jié)的環(huán)毛伸至端亞節(jié)中部，端亞

節(jié)環(huán)毛伸達(dá)頸部末端

膜質(zhì)，被稀疏細(xì)鱗片，R1脈和C脈在翅前緣的近中部融合；R5脈和C脈交會(huì)于翅端部，Rs脈細(xì)縮呈R5脈

翅

上的一個(gè)隆起，Cu脈叉狀

足足密被細(xì)鱗和稀疏短毛；前跗節(jié)齒狀；爪間突與前跗節(jié)近等長；爪墊幾不可見

第1至第6節(jié)矩形，表面散布鱗片，各節(jié)后緣具

背板第1節(jié)至第7節(jié)與雄性相近，但毛及鱗片略多；第

背板單排長毛，側(cè)緣及中部散布短毛，前緣具成對(duì)

8節(jié)背板未骨化，后緣稀疏散布一排短毛

毛狀感器；第6～8背板逐漸收窄

第2至第7節(jié)矩形，具不規(guī)則長毛，側(cè)緣及中部腹板第2節(jié)至第7節(jié)與雄性相近，但毛及鱗片略多；

腹板

短毛較背板密，前緣具一對(duì)緊鄰的毛狀感器第8節(jié)腹板未骨化，后緣稀疏散布一排短毛

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表2芒小果普癭蚊成成蟲形態(tài)特征（續(xù)）

部位雄成蟲雌成蟲

生殖基節(jié)基突圓鈍，強(qiáng)烈骨化，密生毛列；生殖突粗壯，向端部齒突逐漸細(xì)縮，基部三分之一密被微

生殖節(jié)

毛，其余部分具稀疏短毛

陽莖細(xì)長，明顯長于生殖基節(jié)，向端部逐漸變

產(chǎn)卵器較伸長，伸出時(shí)約為腹部其他部分的0.55～

生殖器細(xì)，末端背側(cè)1/3具無毛點(diǎn)狀感器，腹側(cè)1/4較

0.65倍

稀疏地散布稍大的感器

從端部1/5處分開，密被短毛，背部具若干稀疏長

尾突端緣中部微凹入，具長毛

毛，端部具若干中等長度的剛毛

肛下板窄，略與尾突等長，端部微凹入，具短肛下板約為尾突長的1/5，腹面觀端部寬圓，后緣具

肛下板

毛一對(duì)毛

6.2.1卵

長橢圓形，半透明，體長0.15mm～0.25mm。

6.2.2幼蟲

幼蟲共4齡。黃色至橘黃色。長1.8mm～2.2mm，寬0.5mm～0.6mm。觸角錐形，長約為基部寬的

1.6～1.8倍。胸叉具2個(gè)齒突，齒突基部隆起，2個(gè)齒突由一個(gè)U形淺凹分開；與胸叉相近的2組側(cè)瘤突

均無毛。末節(jié)端部圓鈍，具8個(gè)瘤突，1對(duì)較大的瘤突角錐狀，在中央的1對(duì)小瘤突有微毛。

6.2.3蛹

橘褐色。雄蟲體長1.0mm，雌蟲1.4mm～1.5mm。觸角基具微角突；頭部的毛短而細(xì)。前胸氣門不

明顯，長而粗壯，向前部漸窄，端部略彎曲，氣管伸達(dá)前端。

6.3與近似種的鑒別

芒小果普癭蚊及其近似種鑒別見附錄C。

7現(xiàn)場檢疫

現(xiàn)場檢疫抽樣按照SN/T2122的規(guī)定進(jìn)行。

對(duì)芒果植株或苗木進(jìn)行現(xiàn)場檢疫時(shí)，重點(diǎn)檢查幼果、花序和花蕾有無成蟲產(chǎn)卵，或者幼蟲孵化后蛀

食幼果形成的為害蛀孔，有無活蟲或死蟲，有無老熟幼蟲出果的蟲孔；篩查帶土苗木的土壤是否有老熟

幼蟲掉入土中化蛹。

對(duì)現(xiàn)場檢疫發(fā)現(xiàn)的蟲體用鑷子或毛筆收集，以指形管保存，加貼標(biāo)簽。

8室內(nèi)檢測

8.1鏡檢

將現(xiàn)場采集的可疑幼蟲、蛹或成蟲送到實(shí)驗(yàn)室，在體視顯微鏡下對(duì)其形態(tài)特征進(jìn)行鑒定。

8.2分子檢測

對(duì)芒小果普癭蚊進(jìn)行分子檢測，檢測方法按附錄D的規(guī)定執(zhí)行。

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9結(jié)果判定

以成蟲的形態(tài)特征為主要鑒定依據(jù)，蛹和幼蟲的形態(tài)特征作參考，符合6.2的描述可鑒定為芒小果

普癭蚊。

分子檢測結(jié)果所得序列與GenBank系統(tǒng)中芒小果普癭蚊的已知序列（MG637425、MG637426）相似度

大于98%，則可鑒定為芒小果普癭蚊。

10標(biāo)本保存

10.1成蟲標(biāo)本保存

芒小果普癭蚊成蟲制作成三角紙片標(biāo)本保存，保存期6個(gè)月至永久。

10.2卵、幼蟲或蛹標(biāo)本保存

卵、幼蟲或蛹用蒸餾水清洗后，置于保存液中，保存6個(gè)月以上。

11檔案管理

記錄蟲體標(biāo)本來源、采集日期、地點(diǎn)、鑒定方法、鏡檢圖片和結(jié)果以及分子檢測結(jié)果圖片、原始

數(shù)據(jù)等信息。專人保管，保存期2年以上。

A

A

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附錄A

（資料性）

芒小果普癭蚊生物學(xué)特性

A.1寄主

芒果。

A.2地理分布

菲律賓呂宋島，廣西百色。

A.3發(fā)生規(guī)律

該蟲喜溫暖濕潤環(huán)境，25℃～30℃、相對(duì)濕度70%以上利于其繁殖。干旱或暴雨會(huì)抑制種群增長。

該蟲在廣西地區(qū)12月中旬至翌年4月下旬，成蟲羽化，在芒果嫩梢、花梗、花蕾和幼果上產(chǎn)卵，老熟幼

蟲掉入土中化蛹，蛹羽化成下一代成蟲，再次為害。在芒果初花期至幼果形成期內(nèi)，該蟲可發(fā)生數(shù)代。

蔭蔽、通風(fēng)不良的果園受害較重。

A.4為害癥狀

該蟲主要為害芒果嫩梢、嫩花梗、花蕾和幼果，致使花穗畸形、枯死，幼果被蛀空并造成落果，芒

果園幼果受害率最高可達(dá)90%。成蟲產(chǎn)卵在嫩梢、花梗、花蕾及幼果上（見圖A.1a），幼蟲孵化后即蛀

食幼果，造成落果。初期受害幼果果皮上的產(chǎn)卵點(diǎn)像炭疽病發(fā)生初期癥狀，在放大鏡下，受害幼果可見

清晰的為害蛀孔（見圖A.1b），剖開幼果，可見長2mm左右的淺黃色幼蟲，有些幼果有多個(gè)蛀孔，多

條幼蟲（見圖A.1c）。

a）雌蟲在子房基部花中產(chǎn)卵b）有幼蟲逃逸孔的受害果實(shí)c）果實(shí)中的幼蟲及幼蟲室

注：引自Jiaoetal.,2018。

圖A.1芒小果普癭蚊為害癥狀

A.5傳播途經(jīng)

芒小果普癭蚊成蟲飛行能力較弱，不具備遠(yuǎn)距離擴(kuò)散能力。主要以幼蟲隨寄主果實(shí)、蛹隨寄主附著

的土壤，以及卵隨寄主的花或子房進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播。

5

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附錄B

（資料性）

芒小果普癭蚊成蟲形態(tài)特征圖

芒小果普癭蚊成蟲形態(tài)特征實(shí)物圖見圖B.1，雄成蟲各部位特征示意圖見圖B.2。

圖B.1芒小果普癭蚊成蟲形態(tài)特征實(shí)物圖

a）翅b）第三鞭毛粒

c）背面末端d）末端腹位

f）跗爪伴瞼窩

e）頭枕部突起

注：引自Jiaoetal.,2018

圖B.2芒小果普癭蚊雄成蟲各部位特征示意圖

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附錄C

（資料性）

芒小果普癭蚊及其近似種鑒別

C.1芒小果普癭蚊及其近似種檢索表

芒小果普癭蚊及其近似種檢索表見表C.1。

表C.1芒小果普癭蚊及其近似種檢索表

1.翅R5脈后1/3略向下彎曲，在翅端處或翅端稍靠前處與C脈匯合；雄性抱器基節(jié)中基瓣明顯短于陽莖，且不抱握陽莖；

雄性觸角鞭小節(jié)呈雙結(jié)狀，其基結(jié)與端結(jié)上分別具一圈大環(huán)狀環(huán)絲；產(chǎn)卵器幾乎不具伸縮

性················································2

翅R5脈C脈明顯分離，在翅中后部與C脈匯合；雄性抱器基節(jié)基部有1個(gè)大的基葉，陽莖粗壯，端部寬大，端緣中央具

凹刻，亞端部側(cè)各具一突起；雄性觸角基球部和端球部的亞端部各有l(wèi)0個(gè)輪生環(huán)絲；雌性產(chǎn)卵器鉤為腹部的1/3，末端有

大的端葉，其上密生小刺和數(shù)根剛毛······························芒果葉癭蚊

2.抱器基節(jié)粗壯膨大，其長寬比約為1.2倍；陽莖粗壯，其基部明顯寬于抱器基節(jié)；抱器基節(jié)中基瓣不明顯；雄性觸角

鞭小節(jié)結(jié)間頸遍布微毛···································壯鋏普癭蚊

抱器基節(jié)細(xì)長不膨大，其長寬比約為2.5倍；陽莖細(xì)長，其基部約與抱器端節(jié)基部等寬；抱器基節(jié)中基瓣極為明顯；

雄性觸角鞭小節(jié)結(jié)間頸光滑且不被毛····································3

3.陽莖近中部向端部逐漸膨大，其近端部兩側(cè)各具一角狀突起，其端緣微凹；抱器端節(jié)明顯長于抱握器基節(jié)長的一半；

抱器基節(jié)中基瓣明顯向上膨大凸起但不骨化色深························居芒普癭蚊

陽莖近中部向端部漸細(xì)呈近錐狀，其近端部無飾變，其端緣圓；抱器端節(jié)約為抱器基節(jié)長的一半；抱器基節(jié)中基瓣

不明顯突出但骨化色深····································芒小果普癭蚊

A

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附錄D

（規(guī)范性）

芒小果普癭蚊的分子檢測

B

D.1樣品前處理

用于分子生物學(xué)試驗(yàn)的癭蚊樣品在提取DNA之前均應(yīng)作前處理，卵、幼蟲、擬蛹、成蟲或部分組織

等癭蚊樣品用無菌水沖洗數(shù)遍，晾干；干標(biāo)本、乙醇或福爾馬林浸泡的標(biāo)本先用TE緩沖液（pH8.0）浸

泡處理1h～2h。

D.2癭蚊基因組總核酸提取

D.2.1試劑盒法

將癭蚊樣品移入1.5mL離心管或碾缽中,搗碎或加入液氮碾磨,之后實(shí)驗(yàn)步驟根據(jù)天根基因組DNA提

取試劑盒（DP304）的操作說明書操作。癭蚊基因組DNA溶液置于-20℃冷凍保存。

D.2.2提取液法

DNA提取按照以下步驟進(jìn)行：

——樣品研磨與裂解：將單頭癭蚊置于Parafilm膜上的20μL提取緩沖液(50mmoL/LTris-

HCl、1mmol/LEDTA、1%SDS、20mmoL/LNaCl,pH8.0)中，以0.2mL的PCR管底部作為勻漿器

充分研磨，用50μL緩沖液清洗勻漿器4次，合并所有液體；

——蛋白酶消化：將混合液轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管，加入5μL蛋白酶K(20mg/mL)，混勻后60℃

水浴1h(中途混勻1次)；

——蛋白質(zhì)變性：100℃沸水浴加熱5min；

——有機(jī)溶劑抽提：加入220μL氯仿/異戊醇(v:v=24:1)抽提液，輕柔混勻數(shù)十次，冰浴10min，

10000r/min離心10min，取上清液；

——DNA沉淀：加入440μL預(yù)冷的無水乙醇，輕柔混勻至出現(xiàn)少量絮狀沉淀，于-20℃放置30min，

4℃12000r/