2026年分子生物師面試題及答案一、單選題（共10題，每題2分）1.在PCR反應(yīng)體系中，引物二聚體形成的最主要原因是？A.引物過(guò)長(zhǎng)B.引物濃度過(guò)高C.引物退火溫度不合適D.DNA聚合酶活性不足2.以下哪種方法最適合用于檢測(cè)基因組DNA中的特定位點(diǎn)突變？A.DNA測(cè)序B.溶血性貧血實(shí)驗(yàn)C.基因芯片雜交D.原位雜交3.在蛋白質(zhì)印跡（WesternBlot）實(shí)驗(yàn)中，以下哪個(gè)步驟最容易導(dǎo)致條帶模糊？A.SDS電泳B.轉(zhuǎn)膜C.一抗孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)D.二抗孵育濃度過(guò)高4.CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)中，引導(dǎo)RNA（gRNA）的作用是？A.擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段B.識(shí)別并切割目標(biāo)DNA位點(diǎn)C.調(diào)控基因表達(dá)D.提供DNA模板5.RNA干擾（RNAi）的核心機(jī)制是？A.核酶降解mRNAB.轉(zhuǎn)錄激活C.DNA甲基化D.組蛋白修飾6.以下哪種質(zhì)粒載體最適合用于原核表達(dá)系統(tǒng)？A.真核啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的表達(dá)載體B.ColE1復(fù)制起始位點(diǎn)C.真核終止子D.細(xì)胞凋亡相關(guān)基因7.流式細(xì)胞術(shù)主要用于分析？A.DNA序列B.細(xì)胞表面標(biāo)記物表達(dá)C.基因表達(dá)調(diào)控D.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)8.以下哪種方法最適合用于檢測(cè)微小殘留病灶（MRD）？A.環(huán)境DNA檢測(cè)B.基因芯片分析C.數(shù)字PCRD.等溫?cái)U(kuò)增9.在基因克隆過(guò)程中，限制性內(nèi)切酶識(shí)別的序列通常是？A.密碼子B.重復(fù)序列C.回文序列D.外顯子10.單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的主要優(yōu)勢(shì)是？A.高通量B.精確區(qū)分細(xì)胞異質(zhì)性C.快速檢測(cè)D.低成本二、多選題（共5題，每題3分）1.以下哪些因素會(huì)影響qPCR實(shí)驗(yàn)的擴(kuò)增效率？A.引物二聚體形成B.熒光探針降解C.DNA模板濃度D.聚合酶活性2.以下哪些方法是基因表達(dá)調(diào)控的常用手段？A.轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控B.DNA甲基化C.RNA編輯D.細(xì)胞周期調(diào)控3.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，以下哪些步驟需要嚴(yán)格控制？A.蛋白質(zhì)上樣量B.電泳條件C.一抗二抗孵育時(shí)間D.化學(xué)發(fā)光檢測(cè)條件4.CRISPR-Cas9系統(tǒng)的主要組成成分包括？A.gRNAB.Cas9蛋白C.目標(biāo)DNAD.反轉(zhuǎn)錄酶5.單細(xì)胞RNA測(cè)序（scRNA-seq）的常見(jiàn)挑戰(zhàn)包括？A.數(shù)據(jù)噪聲B.細(xì)胞捕獲效率C.RNA降解D.成本高昂三、簡(jiǎn)答題（共5題，每題5分）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化步驟。2.解釋什么是“基因敲除”及其應(yīng)用。3.簡(jiǎn)述WesternBlot實(shí)驗(yàn)的基本流程。4.CRISPR-Cas9技術(shù)有哪些潛在脫靶效應(yīng)？如何減少脫靶風(fēng)險(xiǎn)？5.單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)相比傳統(tǒng)測(cè)序有何優(yōu)勢(shì)？四、論述題（共2題，每題10分）1.結(jié)合實(shí)際應(yīng)用，論述基因編輯技術(shù)在臨床診斷中的意義。2.分析高通量測(cè)序技術(shù)在腫瘤研究中的發(fā)展方向。答案及解析一、單選題答案及解析1.B.引物濃度過(guò)高解析：PCR反應(yīng)中，引物濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，形成引物二聚體，從而降低擴(kuò)增效率。2.A.DNA測(cè)序解析：DNA測(cè)序可以直接檢測(cè)基因組DNA中的堿基變化，是檢測(cè)點(diǎn)突變的金標(biāo)準(zhǔn)。3.C.一抗孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)解析：一抗孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合，使條帶模糊。4.B.識(shí)別并切割目標(biāo)DNA位點(diǎn)解析：gRNA負(fù)責(zé)識(shí)別目標(biāo)DNA序列，Cas9蛋白在gRNA引導(dǎo)下切割DNA。5.A.核酶降解mRNA解析：RNAi的核心機(jī)制是miRNA或siRNA通過(guò)核酶降解靶標(biāo)mRNA，抑制基因表達(dá)。6.B.ColE1復(fù)制起始位點(diǎn)解析：ColE1復(fù)制起始位點(diǎn)有助于質(zhì)粒在原核細(xì)胞中高效復(fù)制。7.B.細(xì)胞表面標(biāo)記物表達(dá)解析：流式細(xì)胞術(shù)通過(guò)熒光標(biāo)記檢測(cè)細(xì)胞表面或內(nèi)部的標(biāo)記物。8.C.數(shù)字PCR解析：數(shù)字PCR能精確檢測(cè)微量殘留病灶，靈敏度高。9.C.回文序列解析：限制性內(nèi)切酶識(shí)別對(duì)稱的回文序列，并在特定位點(diǎn)切割DNA。10.B.精確區(qū)分細(xì)胞異質(zhì)性解析：?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序技術(shù)能分析單個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)，揭示細(xì)胞異質(zhì)性。二、多選題答案及解析1.A.引物二聚體形成,B.熒光探針降解,C.DNA模板濃度解析：引物二聚體、探針降解和模板濃度都會(huì)影響擴(kuò)增效率。2.A.轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控,B.DNA甲基化,C.RNA編輯解析：轉(zhuǎn)錄因子、DNA甲基化和RNA編輯是基因表達(dá)調(diào)控的主要機(jī)制。3.A.蛋白質(zhì)上樣量,B.電泳條件,C.一抗二抗孵育時(shí)間解析：這些步驟直接影響蛋白轉(zhuǎn)移和抗體結(jié)合的特異性。4.A.gRNA,B.Cas9蛋白解析：gRNA和Cas9是CRISPR-Cas9系統(tǒng)的核心成分。5.A.數(shù)據(jù)噪聲,B.細(xì)胞捕獲效率,C.RNA降解解析：scRNA-seq面臨數(shù)據(jù)噪聲、細(xì)胞捕獲和RNA降解等挑戰(zhàn)。三、簡(jiǎn)答題答案及解析1.PCR反應(yīng)體系優(yōu)化步驟-引物設(shè)計(jì)：選擇特異性高、Tm值適中的引物。-退火溫度優(yōu)化：逐步降低溫度，尋找最佳退火溫度。-鎂離子濃度調(diào)整：過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響擴(kuò)增效率。-模板濃度控制：避免過(guò)量模板抑制擴(kuò)增。-酶濃度優(yōu)化：確保聚合酶活性充足。2.基因敲除及其應(yīng)用基因敲除是通過(guò)基因工程技術(shù)使特定基因失活。應(yīng)用包括：研究基因功能、治療遺傳病、開(kāi)發(fā)藥物靶點(diǎn)。3.WesternBlot基本流程-蛋白質(zhì)提取與SDS電泳分離。-轉(zhuǎn)膜至PVDF或NC膜。-一抗孵育（封閉非特異性位點(diǎn)）。-二抗孵育（結(jié)合熒光或酶標(biāo)記抗體）。-化學(xué)發(fā)光或熒光檢測(cè)成像。4.CRISPR-Cas9脫靶效應(yīng)及減少方法脫靶效應(yīng)：Cas9在非目標(biāo)位點(diǎn)切割DNA。減少方法：優(yōu)化gRNA設(shè)計(jì)、篩選脫靶位點(diǎn)、使用高特異性Cas變體（如HiFiCas9）。5.單細(xì)胞測(cè)序優(yōu)勢(shì)-揭示細(xì)胞異質(zhì)性，發(fā)現(xiàn)罕見(jiàn)細(xì)胞亞群。-精確研究腫瘤微環(huán)境。-用于疾病診斷和預(yù)后評(píng)估。四、論述題答案及解析1.基因編輯技術(shù)在臨床診斷中的意義基因編輯可用于：-病理診斷：通過(guò)基因檢測(cè)早期發(fā)現(xiàn)遺傳病。-個(gè)性化治療：針對(duì)特定基因突變?cè)O(shè)計(jì)治療