再生醫(yī)學心肌干細胞培養(yǎng)研究員崗位考試試卷及答案單項選擇題（每題2分，共10題）1.心肌干細胞培養(yǎng)常用的基礎培養(yǎng)基是（）A.DMEMB.RPMI1640C.F12D.MEM2.以下哪種細胞因子對心肌干細胞增殖有促進作用（）A.TNF-αB.TGF-βC.VEGFD.IFN-γ3.心肌干細胞培養(yǎng)時，一般選用的血清是（）A.小牛血清B.胎牛血清C.馬血清D.羊血清4.細胞培養(yǎng)箱的氣體環(huán)境一般是（）A.95%O?+5%CO?B.95%空氣+5%CO?C.100%O?D.90%空氣+10%CO?5.進行心肌干細胞傳代時，常用的消化液是（）A.胰蛋白酶B.胃蛋白酶C.木瓜蛋白酶D.膠原蛋白酶6.心肌干細胞培養(yǎng)的適宜溫度是（）A.35℃B.37℃C.39℃D.40℃7.以下哪種物質(zhì)可用于檢測心肌干細胞的活性（）A.MTTB.臺盼藍C.結(jié)晶紫D.中性紅8.心肌干細胞凍存時，常用的凍存保護劑是（）A.DMSOB.甘油C.乙醇D.丙二醇9.培養(yǎng)心肌干細胞的器皿需要進行（）處理。A.消毒B.滅菌C.清潔D.沖洗10.從心臟組織獲取心肌干細胞常用的方法是（）A.酶消化法B.機械分離法C.密度梯度離心法D.流式細胞術(shù)分選法答案：1.A2.C3.B4.B5.A6.B7.A8.A9.B10.A多項選擇題（每題2分，共10題）1.心肌干細胞培養(yǎng)需要的基本條件有（）A.合適的培養(yǎng)基B.適宜的溫度C.氣體環(huán)境D.無菌操作E.充足的光照2.影響心肌干細胞培養(yǎng)的因素包括（）A.細胞來源B.培養(yǎng)基成分C.培養(yǎng)器皿材質(zhì)D.傳代次數(shù)E.細胞接種密度3.以下屬于心肌干細胞鑒定方法的有（）A.免疫熒光B.流式細胞術(shù)C.RT-PCRD.WesternblotE.細胞形態(tài)學觀察4.心肌干細胞培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)的問題有（）A.細胞污染B.細胞凋亡C.細胞分化D.細胞增殖緩慢E.細胞貼壁不良5.常用的細胞培養(yǎng)耗材有（）A.培養(yǎng)瓶B.培養(yǎng)皿C.移液管D.槍頭E.凍存管6.血清在心肌干細胞培養(yǎng)中的作用有（）A.提供營養(yǎng)物質(zhì)B.促進細胞貼壁C.調(diào)節(jié)細胞代謝D.維持細胞滲透壓E.防止細胞污染7.細胞培養(yǎng)過程中，無菌操作的要點包括（）A.實驗前消毒操作臺面B.佩戴無菌手套C.使用無菌器材D.操作在酒精燈火焰附近E.定期更換工作服8.心肌干細胞凍存和復蘇的注意事項有（）A.凍存時緩慢降溫B.復蘇時快速解凍C.凍存液比例合適D.復蘇后及時換液E.標記凍存管信息9.用于心肌干細胞培養(yǎng)的添加劑有（）A.生長因子B.抗生素C.維生素D.氨基酸E.激素10.心肌干細胞的特性包括（）A.自我更新能力B.多向分化潛能C.低免疫原性D.高增殖能力E.組織修復能力答案：1.ABCD2.ABCDE3.ABCDE4.ABCDE5.ABCDE6.ABCD7.ABCD8.ABCDE9.ABCDE10.ABCE判斷題（每題2分，共10題）1.心肌干細胞培養(yǎng)不需要二氧化碳培養(yǎng)箱。（）2.消化心肌干細胞時，消化時間越長越好。（）3.臺盼藍可以區(qū)分活細胞和死細胞。（）4.凍存的心肌干細胞復蘇后可直接用于實驗。（）5.血清在使用前需要進行滅活處理。（）6.細胞培養(yǎng)過程中，可隨意打開培養(yǎng)箱門。（）7.免疫熒光可用于心肌干細胞表面標志物的檢測。（）8.培養(yǎng)基中添加抗生素可以完全防止細胞污染。（）9.心肌干細胞培養(yǎng)的傳代比例固定不變。（）10.原代培養(yǎng)的心肌干細胞活性高于傳代培養(yǎng)的細胞。（）答案：1.×2.×3.√4.×5.√6.×7.√8.×9.×10.√簡答題（每題5分，共4題）1.簡述心肌干細胞培養(yǎng)時選擇胎牛血清的原因。胎牛血清富含多種生長因子、激素和營養(yǎng)物質(zhì)，能為心肌干細胞提供良好的營養(yǎng)環(huán)境，促進細胞的貼壁、增殖和生長，且其未接觸外界抗原，成分相對穩(wěn)定，免疫原性低，可減少對細胞培養(yǎng)的干擾，有利于維持心肌干細胞的正常生物學特性。2.細胞培養(yǎng)過程中防止污染的措施有哪些？保持操作環(huán)境無菌，如實驗前用紫外線消毒超凈臺和培養(yǎng)箱，操作時在酒精燈火焰附近；使用無菌器材，包括培養(yǎng)基、耗材等；操作人員嚴格遵守無菌操作規(guī)范，穿戴工作服、口罩、手套；定期對培養(yǎng)細胞進行檢查，及時發(fā)現(xiàn)并處理污染問題；合理添加抗生素，但不能過度依賴。3.簡述心肌干細胞鑒定的主要依據(jù)。形態(tài)學上，心肌干細胞具有特定的細胞形態(tài)；免疫熒光檢測其表面標志物，如c-kit等；通過流式細胞術(shù)分析細胞表面標志物的表達情況；利用RT-PCR和Westernblot技術(shù)檢測相關基因和蛋白的表達，這些方法綜合起來作為心肌干細胞鑒定的依據(jù)。4.簡述心肌干細胞凍存的步驟。首先將處于對數(shù)生長期的心肌干細胞用胰蛋白酶消化制成細胞懸液，計數(shù)并調(diào)整細胞密度至合適范圍。然后將細胞懸液與含10%DMSO和90%胎牛血清的凍存液按比例混合均勻。將混合液分裝入凍存管，標記好細胞信息。將凍存管依次放入4℃30分鐘、-20℃1小時、-80℃過夜，最后轉(zhuǎn)移至液氮罐長期保存。討論題（每題5分，共4題）1.討論心肌干細胞培養(yǎng)在再生醫(yī)學中的應用前景和面臨的挑戰(zhàn)。應用前景：為心肌損傷修復和心血管疾病治療提供新途徑，可分化為心肌細胞修復受損心肌組織。面臨挑戰(zhàn)：心肌干細胞的來源有限，獲取和分離難度較大；培養(yǎng)條件復雜，維持細胞干性和分化方向的調(diào)控困難；臨床應用的安全性和有效性還需大量研究驗證，倫理問題也需進一步探討。2.如何優(yōu)化心肌干細胞培養(yǎng)條件以提高培養(yǎng)效率？可以從培養(yǎng)基成分優(yōu)化入手，研究不同生長因子組合對細胞增殖和分化的影響；選擇合適的血清批次，保證營養(yǎng)物質(zhì)穩(wěn)定供應。控制培養(yǎng)環(huán)境參數(shù)，如精確調(diào)節(jié)溫度、氣體成分和pH值。改善培養(yǎng)器皿表面性質(zhì)，促進細胞貼壁。優(yōu)化傳代方法，確定合適的傳代比例和時間，減少對細胞的損傷，從而提高培養(yǎng)效率。3.談談你對心肌干細胞培養(yǎng)過程中質(zhì)量控制的理解。質(zhì)量控制貫穿于心肌干細胞培養(yǎng)全過程。從細胞來源，要確保細胞無污染、具有良好活性和特性。培養(yǎng)過程中，對培養(yǎng)基、血清等耗材嚴格把關，定期檢測培養(yǎng)環(huán)境參數(shù)。通過多種鑒定方法，如免疫熒光、流式細胞術(shù)等，定期檢測細胞的生物學特性，保證細胞的純度和干性。對凍存和復蘇過程進行監(jiān)控，確保細胞復蘇后的活性和功能正常，以保證培養(yǎng)細胞質(zhì)量符合實驗或臨床應用要求。4.舉例說明心肌干細胞培養(yǎng)與其他學科領域的交叉應用。與材料科學交叉，研發(fā)適合心肌干細胞培養(yǎng)和移植的生物