(10)申請公布號CN110680847A(21)申請?zhí)?01911116607.5(71)申請人云南綠新生物藥業(yè)有限公司地址655000云南省曲靖市沾益區(qū)城西工業(yè)園區(qū)(72)發(fā)明人王鉦霖劉勝貴蔣永昌付彬彬李智高孔令羽A61K36/60(2006.01)(54)發(fā)明名稱一種提取及純化大麻黃酮的方法(57)摘要本發(fā)明公開了一種提取及純化大麻黃酮的方法。其包括以下步驟：花葉處理后投入到提取罐中用甲醇水提取2次，得到的提取液濃縮至一定量體積；冷卻后加入一定比例的甲醇，放置沉丁醇萃??；水相加入鉛鹽和碳酸氫鈉攪勻沉降；過濾，得到的濾液加酸調(diào)節(jié)PH值，再加入正丁醇萃取三次；得到的萃取液濃縮后用凝膠吸附過濾，待吸附完全后用不同PH的水洗滌；收集黃酮21.一種提取及純化大麻黃酮的方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟3,濃縮：收集提取液濃縮至1/5體積；步驟4,醇沉：得到的濃縮液加入一定量的乙醇溶液，放置一定時間沉淀；步驟6,萃?。悍蛛x得到的濾液用正己烷萃取，萃取后的水相再用正丁醇萃??；步驟7,沉降：萃取后的水相加入鉛鹽，攪拌一段時間后，再加入一定量的碳酸氫鈉，攪步驟9,吸附：得到的正丁醇相用凝膠吸附過濾；步驟11,柱層析：得到的洗滌液加入一定量碳酸氫鈉，濃縮至1/6體積；得到的濃縮液上柱層析進行分離。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取及純化大麻黃酮的方法，其特征在于，所述的步驟1中的大麻花葉晾曬后含水量應(yīng)控制15%左右，粗碎后顆粒控制在30目左右。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取及純化大麻黃酮的方法，其特征在于，所述的步驟2中用于提取的甲醇水溶液為20-50%,提取次數(shù)為2-5次。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取及純化大麻黃酮的方法，其特征在于，所述的步驟4中加入的乙醇溶液酒精度不低于80%,加入量為濃縮液體積的3-5倍，放置沉降時間為6-5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取及純化大麻黃酮的方法，其特征在于，所述的步驟6中分離得到濾液用正己烷萃取3-5次，正己烷萃取后的水相用正丁醇萃取1-2次。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取及純化大麻黃酮的方法，其特征在于，所述的步驟7中萃取后的水相按體積量加入3-5%的醋酸鉛，攪拌0.5-1h,再按水相體積量加入2-4%的碳酸氫鈉。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取及純化大麻黃酮的方法，其特征在于，所述的步驟8中得到的濾液加入鹽酸調(diào)節(jié)PH值至5-6,用正丁醇萃取2-3次。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取及純化大麻黃酮的方法，其特征在于，所述的步驟9中所用的吸附凝膠為硅膠。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取及純化大麻黃酮的方法，其特征在于，所述的步驟1010.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取及純化大麻黃酮的方法，其特征在于，所述的步驟11中所用的分離樹脂型號為LSA—33。3一種提取及純化大麻黃酮的方法技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于中藥提取工藝技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提取及純化大麻黃酮的方法。背景技術(shù)[0002]工業(yè)大麻(SteviarebaudianaBertoni)為大麻科大麻屬一年生雌雄異株的草本植物，廣泛分布于世界各地。世界上大麻屬植物主要有野生大麻(CannabisruderalisJanisch)、印度大麻(CannabisindicaLam)和栽培大麻(CannabissativaL)3個種，在長期的生物進化過程中又產(chǎn)生了許多大麻變種和亞種。由于大麻中含有一種致幻成癮的次生代謝產(chǎn)物一四氫大麻酚tetrahydrocannabinol,THC),因而成為公眾熟知的毒品原植物之一。為了方便監(jiān)管和合理使用，國際上將大麻中THC含量<0.3%的大麻品種定義不具備毒品利用價值的工業(yè)大麻。目前世界上種植工業(yè)大麻的國家已達27個，培育出的符合THC含量<0.3%的工業(yè)大麻品種26個。[0003]工業(yè)大麻又稱漢麻，漢麻全身都是寶主要有紡織、食用和藥用三大功能。漢麻皮富含纖維，可用于服裝及各種飾品加工；漢麻桿芯是極佳的木材替代品，還可用來生產(chǎn)超微粉；漢麻籽富含優(yōu)質(zhì)蛋白以及人體必需脂肪酸，可應(yīng)用于食品、保健品等領(lǐng)域。漢麻葉中疾病、降血壓等作用，具有較高的藥用價值。目前總黃酮提取主要以銀杏葉為原料，前期初步分析表明，從大麻的葉、花及花粉中分離得到的已知黃酮類化合物有20多種，它們可以被糖基化、異戊烯基化或甲基化。2002年，McPartland等分素(apigenin)、木犀草素(luteolin)、槲皮素(quercetin)和山奈酚(kaempferol);同年，Vanhoenacker等分離得到了C-糖苷化合物：葒草苷(orientin)、紫杉醇(vitexin)、木犀草素-7-0-葡萄糖苷(luteolin-7-0-glucoside)和芹菜素-7-0-葡糖苷(apigenin-7-0-glucoside)。此外，大麻中特有的化合物大麻黃素A、大取總黃酮既可拓展植物黃酮的來源，也可提升漢麻加工品的附加值，完善漢麻產(chǎn)業(yè)鏈并有利于漢麻資源的綜合利用。目前，黃酮類化合物的提取方法主要有溶劑提取法、微波輔助提微波輔助提取法要考慮微波穿透物質(zhì)內(nèi)部時衰減的問題；溶劑萃取法選擇性高，產(chǎn)品收率高，但其提取時間較長，提取效率不高。目前從漢麻葉和漢麻果膠中提取總黃酮工藝已見報道，但實現(xiàn)工業(yè)化提取的并不多見。本發(fā)明采用甲醇水溶液提取配合柱層析分離純化，對漢麻葉總黃酮的提取工藝進行優(yōu)化，以探尋漢麻葉總黃酮的最適提取條件，目的在于研發(fā)一個適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的工藝，旨在為充分利用漢麻葉中的生物活性成分，實現(xiàn)漢麻資源的綜合利用和效益最大化提供指導(dǎo)。4發(fā)明內(nèi)容[0004]為了使大麻花葉中有效成分被完全提取出來并得到充分利用，本發(fā)明采用了常規(guī)提取技術(shù)。本提取工藝具有溶劑消耗小、提取簡單、提取量大和提取收率高等特點，經(jīng)過純化后的大麻黃酮含量高，有效成分齊全，且不含有四氫大麻酚。[0005]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過如下的技術(shù)方案來實現(xiàn)：1、前處理：花葉晾曬至含水量15-20%,用脫葉機脫去葉柄，脫去葉柄的碎葉用40目篩網(wǎng)粉碎。[0006]2、提?。喝∫欢康幕ㄈ~顆粒加入5-7倍量甲醇水溶液，升溫至70-85℃,提取2-3h,提取2-3次。[0007]3、濃縮：合并提取液，減壓濃縮至1/5體積。[0008]4、醇沉：得到的濃縮液加入3-5倍量的乙醇溶液，放置6-18h沉淀。[0009]5、過濾：待沉淀完全后，取上清液用200目濾網(wǎng)過濾。[0010]6、萃?。悍蛛x得到的濾液用正己烷萃取，萃取2-3次，合并萃取液濃縮抽干；萃取后的水相再用正丁醇萃取1-2次，合并正丁醇萃取液濃縮抽干。[0011]7、沉降：萃取后的水相按體積量加入3-5%的醋酸鉛，攪拌0.5-1h,再按水相體積量加入2-4%的碳酸氫鈉，攪拌0.5-1h,靜置1-2h,攪拌1-2min,用200目濾網(wǎng)過濾。[0012]8、萃?。旱玫降臑V液加入鹽酸調(diào)節(jié)PH值至5-6,用正丁醇萃取2-3次，合并萃取液濃縮至1/4體積。[0013]9、吸附：得到的正丁醇濃縮液，緩慢通過硅膠吸附柱，流速控制在每小時0.2-0.5個柱體積，吸附比控制在1:20(大麻酮有效量：硅膠)。[0014]10、水洗：吸附完全后，用PH值5-6的水溶液洗滌，再用PH值6.5-7.5的水溶液洗滌，最后用PH值7-8的水溶液洗滌，收集PH值7-8的水溶液濃縮至體積的1/6,加入一定量的碳酸氫鈉，攪拌均勻。[0015]11、柱層析：得到的濃縮液通過柱層析分離，收集濃縮大麻黃酮段。[0016]本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明不僅保護了大麻黃酮中的活性成分，同時還具有提取完全、產(chǎn)物易分離、投料量大、運行成本低等特點；制備得的大麻黃酮成分齊全，且制備工藝簡單易控制。具體實施方式[0017]為使本發(fā)明實現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體實施方式，進一步闡述本發(fā)明。[0018]本具體實施方式采用以下技術(shù)方案：1、前處理：取一定量的大麻花葉晾曬至含水量15-20%,用脫葉機脫去葉柄，脫去葉柄的碎葉用40目篩網(wǎng)粉碎。[0019]2、提?。喝?kg的花葉顆粒加入5倍量40%的甲醇水溶液，升溫至85℃,提取3h,提取2次。[0021]4、醇沉：得到的濃縮液加入15L的工業(yè)乙醇，放置8h沉淀。[0022]5、過濾：待沉淀完全后，取上清液用200目濾網(wǎng)過濾。5[0023]6、萃?。悍蛛x得到的濾液濃縮至3L左右，加入2倍量的正己烷萃取，萃取3次，合并萃取液濃縮抽干；萃取后的水相再加入2倍量正丁醇萃取1次，合并正丁醇萃取液濃縮抽干。[0024]7、沉降：萃取后的水相加入100g醋酸鉛，攪拌0.5-1h,再加入80g的碳酸氫鈉，攪拌0.5-1h,靜置2h;攪拌1min,用200目濾網(wǎng)過濾。[0025]8、萃?。旱玫降臑V液加入5%的鹽酸調(diào)節(jié)PH值至5-6,加入2倍量的正丁醇萃取2次，合并萃取液濃縮至500ml。[0026]9、吸附：得到的正丁醇濃縮液，緩慢通過2L柱體積的硅膠吸附柱，流速控制在每小時400ml。[0027]10、水洗：吸附完全后，用5LPH值5-6的水溶液洗滌，再用4LPH值6.5-7.5的水溶液洗滌，最后用6LPH值7-8的水溶液洗滌，收集PH值7-8的水溶液濃縮至1L,加入50g碳酸氫鈉，攪拌均勻。[0028]11、柱層析：得到的濃縮液通過柱層析分離，收集濃縮大麻黃酮段。大麻黃酮成分含量(mg/g)大麻黃素A大麻黃素B大麻黃素C木犀草素葒草苷芹菜素槲皮素牡荊素、異牡荊素芹菜素-7-0-β-D-葡萄糖苷酸木犀草素-7-