A(22)申請日2019.02.27A61P29/00(2006.01)A61P9/10(2006.01)A61K103/10(2006.01)有限公司11205A61K51/04(2006.01)組合物及其合成方法、套組、成像方法及應用(57)摘要物。本發(fā)明還提供一種合成所述組合物的方法，21.一種雌激素受體與大麻受體之間的相互交談用組合物，包含螯合劑及受體配體。2.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中所述螯合劑是含氮四氮雜環(huán)。3.根據(jù)權利要求2所述的組合物，其中所述含氮四氮雜環(huán)是環(huán)拉胺、大環(huán)多胺、環(huán)拉胺-羧酸或大環(huán)多胺-羧酸。4.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中所述受體配體是雌激素配體或抗雌激素配體。5.根據(jù)權利要求4所述的組合物，其中所述雌激素配體包括雌二醇、雌酮、雌三醇及克6.根據(jù)權利要求4所述的組合物，其中所述抗雌激素配體包括非甾體他莫昔芬、托麗米7.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中所述受體配體具有間隔羥基。8.根據(jù)權利要求1所述的組合物，還包括金屬離子。9.根據(jù)權利要求8所述的組合物，其中所述金屬離子是放射性核素、非放射性金屬或其10.根據(jù)權利要求9所述的組合物，其中所述放射性核素是99mTc、67,68Ga、60,61,62,64,67Cu其組合。11.根據(jù)權利要求9所述的組合物，其中所述非放射性金屬是Tc、Sn、Cu、In、T1、Ga、As、12.根據(jù)權利要求8所述的組合物，其中所述組合物是99mTc-環(huán)拉胺-他莫昔芬類似物13.一種套組，包括如權利要求1至12中任一項所述的組合物。14.一種合成如權利要求1至12中任一項所述的組合物的方法。15.根據(jù)權利要求14所述的合成所述組合物的方法，其中所述受體配體利用環(huán)氧化物共軛到四環(huán)。16.根據(jù)權利要求14所述的合成所述組合物的方法，其中環(huán)氧化物附連到所述受體配體的脂肪族鏈。17.一種用于癌癥、類風濕性關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、動脈粥樣硬化或子宮內(nèi)膜組織的成像方法，包括施用如權利要求1至12中任一項所述的組合物。18.根據(jù)權利要求17所述的用于癌癥、類風濕性關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、動脈粥樣硬化或19.根據(jù)權利要求17所述的用于癌癥、類風濕性關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、動脈粥樣硬化或子宮內(nèi)膜組織的成像方法，其中成像劑量被定義為套組。20.根據(jù)權利要求1至12中任一項所述的組合物在制備治療癌癥、類風濕性關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、動脈粥樣硬化或子宮內(nèi)膜組織藥物的應用。3法、套組、成像方法及應用[0001]本發(fā)明涉及一種組合物，尤其涉及一種雌激素受體與大麻受體之間的相互交談法對活組織檢查(biopsy)的分析，所述分子及組織病理學方法提供一般異質(zhì)過程[0003]開發(fā)放射性標記的生化化合物來理解分子通路已擴展了核分子成像(nuclearmolecularimaging)研究在藥品tomography,PET)及單光子放射電腦斷層掃描(singlephotonemissioncomputedFDG)是PET的黃金標準，其與CT及MRI互補且允許檢測未預料到的遠處轉(zhuǎn)移(distantreceptor,CBR)之間的相互交談(crosstalk)用組合物以及一[0005]本發(fā)明提供一種包含螯合劑(chelator)及受體配體(receptorligand)的雌激素4雌三醇(estiol)及克羅米芬(clomiphene)。[0010]在本發(fā)明的實施例中，所述抗雌激素配體包括非甾體他莫昔芬(non-steroidaltamoxifen)、托麗米芬(torimiphene)、雷洛昔芬(raloxifen)及氨魯米特[0011]在本發(fā)明的實施例中，所述受體配體具有間隔羥基(spacerhydroxygroup)。[0012]在本發(fā)明的實施例中，所述組合物還包含金屬離子。[0013]在本發(fā)明的實施例中，所述金屬離子是放射性核素、非放射性金屬或其組合。[0015]在本發(fā)明的實施例中，所述非放射性金屬是锝離子(Tc)、錫離子(Sn)、銅離子(Cu)、銦離子(In)、鉈離子(T1)、鎵離子(Ga)、砷離子(As)、錸離子(Re)、鈥離子(Ho)、釔離子(Mn)、镥離子(Lu)、鈷離子(Co)、鉑離子(Pt)、鈣離子(Ca)、銠離子(Rh)、銪離子(Eu)及鋱離子(Tb)或其組合。[0016]在本發(fā)明的實施例中，所述組合物是99mTc-環(huán)拉胺-他莫昔芬類似物或99mTc-大環(huán)多胺-他莫昔芬類似物。[0017]本發(fā)明還提供一種包含上述組合物的套組(kit)。[0018]本發(fā)明還提供一種合成上述組合物的方法。[0019]在本發(fā)明的實施例中，所述受體配體利用環(huán)氧化物(epox[0020]在本發(fā)明的實施例中，環(huán)氧化物附連到受體配體的脂肪族鏈(aliphaticchain)。[0021]本發(fā)明還提供一種用于癌癥、類風濕性關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、動脈粥樣硬化或子宮內(nèi)膜組織的成像方法，所述方法包括施用上述組合物。[0023]在本發(fā)明的實施例中，成像劑量被定義為套組。[0024]本發(fā)明還提供一種用于癌癥、類風濕性關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、動脈粥樣硬化或子宮內(nèi)膜組織的治療方法，所述方法包括施用上述組合物。[0025]基于上述，本發(fā)明提供雌激素受體與大麻受體之間的相互交談用組合物。羥基包含在制成品中。在本發(fā)明的組合物中，使用受保護的螯合劑來使環(huán)氧基化受體配體反應以形成螯合劑-受體配體共軛體。技術平臺可利用共軛拮抗劑(antagonist)及激動劑(agonist),并觀察其在各種形式的疾病中的效果。此外，所述組合物還可使用技術人員所已知的化學程式而被制備成藥物配方及套組。另外，還提供合成所述組合物的方法，且所述合成方法可不再需要向受體配體中添加保護基，且會提高制程效率并純化最終產(chǎn)品。除此之外，可使用本發(fā)明的組合物對雌激素受體及大麻受體相關聯(lián)的疾病進行成像或治療。[0026]為讓本發(fā)明的上述特征和優(yōu)點能更明顯易懂，下文特舉實施例，并配合附圖作詳細說明如下。5附圖說明[0031]圖1E示出在本發(fā)明的實例1中合成的化合物SC-05-K-1的13C-NMR光譜；[0032]圖1F示出在本發(fā)明的實例1中合成的化合物SC-05-K-1的1H-,1H相關光譜學[0033]圖1G示出在本發(fā)明的實例1中合成的化合物SC-05-K-1的1H-,13C異核單量子相關[0034]圖1H示出在本發(fā)明的實例1中合成的化合物SC-05-K-1的1H-,13C異核多鍵相關[0035]圖1I示出在本發(fā)明的實例1中合成的化合物SC-05-K-1的液相色譜-質(zhì)譜(liquid[0036]圖1J示出在本發(fā)明的實例1中合成的化合物SC-05-K-1的高效液相色譜(high[0037]圖1K及圖1L示出在本發(fā)明的實例2中合成的組合物99mTc-SC-05-K-1在兩個不同的系統(tǒng)中的放射化學純度(radiochemicalpurity);[0038]圖1M示出在本發(fā)明的實例2中合成的組合物99mTc-SC-05-K-1的標記效率；[0039]圖2A示出在本發(fā)明的實例3中合成的化合物5的H-NMR光譜；[0040]圖2B示出在本發(fā)明的實例3中合成的化合物6的H-NMR光譜；[0041]圖2C示出在本發(fā)明的實例3中合成的化合物SC-05-L-1的H-NMR光譜；[0043]圖2E示出在本發(fā)明的實例3中合成的化合物SC-05-L-1的H-,HCOSYNMR光譜；[0044]圖2F示出在本發(fā)明的實例3中合成的化合物SC-05-L-1的1H-,13CHSQCNMR光譜；[0046]圖2H示出在本發(fā)明的實例3中合成的化合物SC-[0047]圖2I示出在本發(fā)明的實例3中合成的化合物SC-05-L-1的HPLC光譜；[0048]圖2J及圖2K示出在本發(fā)明的實例4中合成的組合物99mTc-SC-05-L-1在兩個不同的系統(tǒng)中的放射化學純度；[0049]圖2L及圖2M示出在本發(fā)明的實例4中合成的組合物99mTc-SC-05-L-1在兩個不同的系統(tǒng)中的標記效率；[0050]圖2N及圖20示出在本發(fā)明的實例2中合成的組合物99mTc-SC-05-L-1在兩個不同的系統(tǒng)中的體外(invitro)穩(wěn)定性；[0051]圖3A及圖3B示出在本發(fā)明的實例2及實例4中合成的組合物99mTc-SC-05-K-1及組[0052]圖4A及圖4B示出在本發(fā)明的實例2及實例4中合成的組合物99mTc-SC-05-K-1及組合物99mTc-SC-05-L-1的OVCAR3細胞6[0053]圖5示出在本發(fā)明的實例2中合成的組合物99mTc-SC-05-L-1的OVCAR3細胞及TOV-112D細胞攝取及阻斷研究；[0054]圖6示出本發(fā)明的化合物SC-05-L-1及化合物SC-05-K-1抵抗淋巴瘤細胞(lymphomacell)的效果；[0055]圖7A及圖7B示出在本發(fā)明的實例3中合成的化合物SC-05-L-1的體外抗癌研究；[0056]圖8A及圖8B示出在本發(fā)明的實例1及實例3中合成的化合物SC-05-K-1及化合物SC-05-L-1的體外抗癌研究。具體實施方式[0057]現(xiàn)在將詳細參照本發(fā)明的當前優(yōu)選實施例，在附圖中示出所述優(yōu)選實施例的實例。盡可能地，在附圖及說明中使用相同的參考編號指代相同或相似的部件。[0058]評估雌激素受體-陽性(ER+)通路啟動系統(tǒng)是激素依賴性疾病管理(hormone-dependentdiseasemanagement)的基礎。ER+患者對內(nèi)分泌療法的反應更好，且其存活時間是陰性ER患者的存活時間的兩倍長。然而，腫瘤對抗雌激素的抗性是無法預測的?？顾幮钥赡苁怯捎谀[瘤對其的攝取不良或緩慢。選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(selectiveestrogenreceptormodulator,SERM)可能會在雌激素受體(ER)與大麻受體(CBR)通路系統(tǒng)之間產(chǎn)生相互交談。識別SERM系藥品是否使用CBR作為主動輸送策略可增強藥品到雌激素受體結(jié)合口袋(drugtoERbindingpocket),且可克服抗藥性。因此，本發(fā)明提供一種包含螯合劑及受體配體的雌激素受體與大麻受體之間的相互交談用組合物。[0059]在一些實施例中，螯合劑可例如為含氮四氮雜環(huán)。具體來說，含氮四氮雜環(huán)可例如[0060]在一些實施例中，配體受體可例如為雌激素配體或抗雌激素配體。在一些實施例素配體可包括例如非甾體他莫昔芬、托麗米芬、雷洛昔芬及氨魯米特。然而，本發(fā)明并非僅限于此。在一些實施例中，受體配體具有間隔羥基，所述間隔羥基將在以下進行詳細闡述。[0061]在一些實施例中，所述組合物還包含金屬離子。具體來說，金鈥離子(Ho)、釔離子(Y)、釤離子(Sm)、硒離子(Se)、鍶離子(Sr)、釓離子(Gd)、鉍離子(Bi)、鐵離子(Fe)、錳離子(Mn)、镥離子(Lu)、鈷離子(Co)、鉑離子(Pt)、鈣離子(Ca)、銠離子(Rh)、銪離子(Eu)及鋱離子(Tb)或其組合。然而，本發(fā)明并非僅限于此。在本發(fā)明的一個具體實施[0062]應提到，可使用本發(fā)明的組合物來通過細胞表面CBR識別ER+通路。放射性標記的ER+配體不僅能夠針對癌癥階段及再現(xiàn)階段(stageandre-stage)對ER+組織攝取進行量化，且還能夠針對最優(yōu)療法反應選擇患者并且當出現(xiàn)抗性時中斷治療。換句話說，由于組合物的結(jié)構，組合物可通過主動輸送策略來增強藥品到雌激素受體結(jié)合口袋，從而克服抗藥7[0063]本發(fā)明還提供一種合成所述組合物的方法。合成方法的步驟在以下詳細闡述，但本發(fā)明并非僅限于此。[0064]在一些實施例中，受體配體例如首先利用環(huán)氧化物共軛到四環(huán)。換句話說，環(huán)氧化物附連到受體配體的脂肪族鏈。在一些實施例中，受體配體可例如為雌激素激動劑、雌激素拮抗劑或芳香酶抑制劑，包括克羅米芬、他莫昔芬、雷洛昔芬、托麗米芬及氨魯米特的非甾體衍生物。在本發(fā)明的一個具體實施例中，抗雌激素是他莫昔芬，但本發(fā)明并非僅限于此。具體來說，氯化環(huán)氧化物(間隔物)在有機溶劑中與脂族羥基化他莫昔芬反應，從而生成環(huán)氧化物-他莫昔芬。在這種情況下，受體配體是他莫昔芬，即選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM),其可能會在雌激素受體與大麻受體通路系統(tǒng)之間產(chǎn)生相互交談，但本發(fā)明并非僅限于此。然后，環(huán)氧化物-他莫昔芬與包括偶合劑的受保護的四氮雜環(huán)狀螯合劑反應。因此，羥基位于制成品中的螯合劑-他莫昔芬共軛體處。在一些實施例中，四氮雜環(huán)狀螯合劑可例如為環(huán)拉胺或大環(huán)多胺。然而，本發(fā)明并非僅限于此。應注意，羥基位于受體配體的脂肪族鏈處。為了清晰地理解，反應流程圖1示出如下所示共軛到環(huán)拉胺或大環(huán)多胺的受體配體(R)的示意圖：[0066]反應流程圖1:受體配體(R)共軛到環(huán)拉胺或大環(huán)多胺[0067]在一些實施例中，可在例如二甲基甲酰胺(dimethylformamide)、二甲亞砜(dimethylsulfoxide)、二惡烷(dioxane)、甲醇、乙醇、己烷、二氯甲烷、乙腈(acetonitrile)、四氫呋喃(tetrahydrofuran)或其混合物等有機溶劑中施行摻和方法。在其他實施例中，可在水性溶劑中施行摻和方法。在一些實施例中，螯合劑的氮基中的一者、兩者或三者可例如由叔丁基(tert-butylgroup)或苯甲基(benzylgroup)保護或者不受保護。[0068]在一些實施例中，本發(fā)明的方法還可包括至少一個純化步驟?？山?jīng)由所屬領域中8的技術人員所已知的任何方法對本發(fā)明的任何化合物進行純化。所屬領域中的技術人員熟習這些方法，且當時可采用這些方法。舉例來說，在旨在得到特定化合物的多步驟合成中，可在每一合成步驟之后、在幾個步驟之后、在合成期間的各種時間點處和/或在合成末尾執(zhí)行純化步驟。在一些實施例中，一個或多個純化步驟包括選自由硅膠柱色譜法(silicagelcolumnchromatography)、高效液相色譜法(HPLC)及液相色譜法(LC)組成的群組的技術。在某些實施例中，純化方法具體來說不包括尺寸篩除色譜法(sizeexclusionchromatography)和/或透析。應注意，在有機溶劑中合成組合物的方法以及保護基的使用通常會改善化合物的純化。保護基的設置允許保護合成期間的中間物的各種官能基，且有利于這些中間物的純化。使用有機溶劑的各種純化方式允許分離及隔離期望的化合物(例如成像劑)且具有非常少的雜質(zhì)。因此，可開發(fā)有機合成技術以允許以更高效的方式獲得更高純度的位點特異性共軛體(site-specificconjugate)。[0069]在本發(fā)明的一個具體實施例中，羥基化他莫昔芬使用以下反應流程圖2及反應流程圖3所示的合成路徑在一個氮基處共軛到環(huán)拉胺及大環(huán)多胺。在這種情況下，羥基包含在制成品中。使用受保護的螯合劑來使環(huán)氧基化他莫昔芬反應以形成螯合劑-他莫昔芬共軛體。技術平臺利用共軛拮抗劑及激動劑，并觀察其在各種形式的疾病中的效果。換句話說，個性化的技術平臺可基于與每一患者的疾病相關聯(lián)的大麻受體及雌激素受體的個體基因構成來設計。在其他方面，這些合成方法可能不再需要向他莫昔芬類似物中添加保護基且提高制程效率并純化最終產(chǎn)品。[0071]反應流程圖2:合成化合物SC-05-K-1的方法96[0073]反應流程圖3:合成化合物SC-05-L-1的方法[0074]另外，在一些實施例中，提供包含上述組合物的藥物配方或套組。在其他方面，所述組合物還可使用技術人員所已知的化學程式而被制備成藥物配方或套組。在一些實施例中，藥物配方或套組還可包含例如抗氧化劑(antioxidant)、穩(wěn)定劑(stabilizingagent)、防腐劑(preservative)或鹽。在一些實施例中，藥物配方或套組可包含例如抗壞血酸(ascorbicacid)、甘露醇(mannitol)、氯化錫(II)及螯合劑-他莫昔芬共軛體。在一些方面，藥物配方或套組可例如為水溶液或已被冷凍和/或凍干的溶液。[0075]此外，本發(fā)明準確地提供在給定受試者中的疾病位點處成像的方法，以執(zhí)行每次治療/治療后評價，且只要所述受試者正在以抗雌激素進行治療或在治療中便能夠監(jiān)測所述受試者。在某些方面，所述方法包括：檢測由各別受試者的疾病位點處的放射性核素標記的螯合劑-共軛體產(chǎn)生的信號，其中疾病位元點如果存在，則會產(chǎn)生比組織周圍更強烈的信號。在一些方面，金屬離子可為放射性核素及所屬領域中的技術人員所已知的任何放射性限于此。在其他方面，金屬離子可為非放射性金屬。在一些實施例中，將成像的位點可為腫瘤或ER富集的組織，例如卵巢及子宮組織。在一些實施例中，所述方法可被定義為用于癌癥、類風濕性關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、動脈粥樣硬化或子宮內(nèi)膜組織的成像方法，其包括施用上述組合物。在一個具體實施例中，所述方法可被定義為對受試者內(nèi)的位點進行成像的方法，其包括檢測來自定位在所述位元點處的金屬離子標記的螯合劑-受體配體共軛體的信號，但本發(fā)明并非僅限于此。在一些實施例中，可使用例如選自由PET、PET/CT、SPECT、SPECT/CT、PET/MRI、SPECT/MRI及具有核成像裝置的光學成像混合型組成的群組的技術來套組，且成像劑量被定義為套組。除此之外，所述方法還可被定義為治療患有癌癥或子宮內(nèi)膜異位(endometriosis)的受試者的方法。在特定方面，癌癥例如是乳癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮癌、子宮頸癌或子宮內(nèi)膜癌(endometrialcancer),但本發(fā)明并非僅限于此。在一些實施例中，所述方法可例如被定義為用于癌癥、類風濕性關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、動脈粥樣硬化或子宮內(nèi)膜組織的治療方法，其包括施用上述組合物。換句話說，提供一種在受試者體內(nèi)對位點進行成像、診斷疾病或治療疾病的方法，其包括對受試者施用金屬離子標記的螯合劑-受體配體共軛體，其中對位點進行成像，對疾病進行診斷或?qū)膊∵M行治療。[0076]另一方面，應注意本發(fā)明的組合物可應用于分子成像及療法。舉例來說，可使用本發(fā)明的組合物作為分子核成像劑。具體來說，分子核成像劑能夠全面表征治療性干預(therapeuticintervention),且可用于患者選擇、藥代動力學(pharmacokinetic)、劑量發(fā)現(xiàn)(dosage-finding)及概念驗證(proof-of-concept)研究。在患者治療反應的成果評估中，與儀器開發(fā)并行的受體圖像指導的細胞治療方法方面的努力將會更全面。更具體來說，使用螯合作用的分子成像劑在放射化學產(chǎn)率、純度、生產(chǎn)成本及在常規(guī)臨床實踐中藥劑的可用性的批次間重現(xiàn)性(batch-to-batchreproducibility)方面提供了優(yōu)點。[0077]另外，本發(fā)明技術平臺將金屬離子、螯合劑及受體配體集成在一起?？墒褂檬荏w配其通過細胞表面受體與細胞內(nèi)細胞溶質(zhì)受體(intracellularcytosolicreceptor)之間的相互交談而發(fā)揮雙重作用，因而會增強復位劑的細胞攝取。舉例來說，CB1/CB2受體及ER通路在各種癌癥中是重迭的。已知他莫昔芬提供ER與CBR之間的相互交談。因此，理想的是，開發(fā)他莫昔芬系成像劑以經(jīng)由CB1/CB2受體測量ER系統(tǒng)活性。這種他莫昔芬系成像將有助于監(jiān)測CB1/CB2受體及ER通路引導的治療反應并針對最優(yōu)治療反應預測患者的選擇。在這種情況下，羥基包括在螯合劑-他莫昔芬共軛體中的脂族間隔物處以在利用創(chuàng)新工具進行診斷成像期間實現(xiàn)磷酸化，從而理解導致組織退化、炎癥及增生性異常的通路啟動的細胞受體的動態(tài)變化并改善患者診斷、治療及預后[0078]為了證明本發(fā)明的組合物適用于成像且用于癌癥療法，本發(fā)明的組合物是使用在以下實例中所述的方法來合成及測試。[0081]在此實例中，合成了4種具體化合物(化合物1到化合物4)以及本發(fā)明的化合物SC-[0082]A.合成化合物1[0083]在室溫下將2NNaOH溶液(10mL)添加到克羅米芬檸檬酸鹽(1g,1.69mmol)與乙酸乙酯(ethylacetate,EA,10mL)的溶液中。將混合物劇烈攪拌了30分鐘并以EA萃取了三次(10mL,8mL,6mL)。在減壓下對有機層進行了濃縮以得到無色油(colorlessoil)形式的游離堿式克羅米芬(化合物1,685.7mg,1.68mmol,99%)。[0084]B.合成化合物2[0085]在-40℃下將叔丁基鋰(50mL,96mmol,在戊烷中為1.9M)逐滴添加到化合物1(1.95g,4.8mmol)在四氫呋喃(tetrahydrofuran,THF,50mL)中的溶液中。逐滴添加了1,3-環(huán)氧丙烷(trimethyleneoxide)(6.26mL,96mmol)且將混合物在-40℃下攪拌了30分鐘。使反應升溫到室溫并在室溫下連續(xù)攪拌了18小時。向反應中小心地添加了水，且以EA將反應110.1)對粗制產(chǎn)物進行了純化以得到白色固體形式的(Z)-5-(4-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-4,5-二苯基戊-4-烯-1-醇((Z)-5-(4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)-4,5-diphenylpent-4-en-1-ol)[0087]向化合物2(503.3mg,1.17mmol)在35%NaOH溶液(12mL)中的懸浮液中，添加了四丁基溴化銨(TBABr,113.3mg,0.35mmol)。氯醇(epichlorohydrin)(758.7mg,8.2mmol)及幾滴甲苯0.1)對粗制產(chǎn)物進行了純化，以得到黃色油形式的(Z)-N,N-二乙基-2-(4-(5-(環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基)-1,2-二苯基戊-1-烯-1-基)苯氧基)乙-1-胺((Z)-N,N-diethy1-2-(4-(5-(oxiran-2-ylmethoxy)-1,2-diphenylpent-1-en-1-yl)phenoxy)ethan-1-amine)(化合物[0089]將1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷(1,4,7,10-tetraazacyclododecane)(大環(huán)多胺，642.9mg,3.73mmol)及化合物3在甲苯(4mL)中的混合物加熱到的(Z)-1-(1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二-1-基)-3-((5-(4-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-4,5-二苯基戊-4-烯-1-基)氧基)丙-2-醇((Z)-1-(1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1-y1)-3-((5-(4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)-4,5-diphenylpent-4-en-1[0091]將1NHCl溶液添加到化合物4(330mg,0.50mmol)的混合物中，且逐滴添加了水4mm1H-13C納米探針的500MHz瓦里安伊諾瓦NMR光譜儀(500MHzVarianInovaNMR里克斯(BrukerSolarix)(德國)獲得了質(zhì)譜儀。從配備有磷PC)親水相互作用液相色譜(hydrophilicinteractionliquidchromatogra柱(5μm,2.0mmI.D.×150mm)的沃特世(Waters)2695分離模塊(麻塞諸塞州的米爾福德本發(fā)明的實例1中合成的化合物SC-05-K-1的13C-NMR光譜。圖1F示出在本發(fā)明的實例1中合成的化合物SC-05-K-1的H-,HCOSYNMR光譜。圖1G示出在本發(fā)明的實例1中合成的化合物NMR、H-,HCOSYNMR、H-,13CHSQCNMR及1H-,13CHMBCNMR確認了化合物SC-05-K-1的結(jié)且結(jié)果呈現(xiàn)在圖1I及圖1J中。如圖1J所示，使用HILIC柱對化合物SC-05-K-1(pH5到pH7)的HPLC分析顯示出大約6.5分鐘的延遲時間(retentiontime)。[0098]從柯惠公司(Covidien)(德克薩斯州的休斯頓(Houston,TX))的??Mo/99mTc產(chǎn)生器凍干殘余物中添加?9mTc-高锝酸鹽(40mCi到50mCi),實現(xiàn)了組合物99mTc-SC-05-K-1的放射[0100]通過以丙酮及鹽水洗脫的薄層色譜法(thin-layerchromatography,TLC,沃特曼(St.Louis,MO))確定了放射化學純度。在0.5mL/min的流速下以乙腈(acetonitrile)/水(1:1V/V)洗脫的PCHILIC柱(2.0mmI.D.×150mm,安捷倫公司(Agilent),(加利福尼亞州的圣克拉拉(SantaClara,CA))上執(zhí)行了配備有NaI檢測器及紫外線(ultraviolet,UV)檢測器(235nm)的高效液相色譜法(HPLC)。[0101]圖1K及圖1L示出在本發(fā)明的實例2中合成的組合物99mTc-SC-05-K-1在兩個不同的系統(tǒng)中的放射化學純度。具體來說，圖1K示出組合物99mTc-SC-05-K-1在丙酮系統(tǒng)中的放射化學純度，且圖1L示出組合物99mTc-SC-05-K-1在鹽水系統(tǒng)中的放射化學純度。如圖1K及圖1L所示，組合物9mTc-SC-05-K-1(停留在原點處)的放射化學純度大于95%且至6小時的比移值(Rfvalue)為0.1,其中游離Na?9mTc0?遷移到溶劑前沿。[0102]圖1M示出在本發(fā)明的實例2中合成的組合物99mTc-SC-05-K-1的標記效率。具體來大約6.5分鐘的延遲時間。[0105]在此實例中，合成了5種具體化合物(化合物1到化合物3、化合物5及化合物6)以及本發(fā)明的化合物SC-05-L-1。合成化合物1到化合物3相似于以上所述的合成化合物1到化合物3,且此處不再重復。產(chǎn)物(Z)-1-(1,4,8,11-四氮雜環(huán)十四-1-基)-3-((5-(4-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-4,5-二苯基戊-4-烯-1-基)氧基)丙-2-醇((Z)-1-(1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan-1-yl)-3-((5-(4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)-4,5-diphenylpent-4-en-1-己烷/乙酸乙酯/三乙胺=4/1/0.1的柱色譜法進行了純化，以得到黃色粘稠油形式的三-叔丁基(Z)-11-(3-((5-(4-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-4,5-二苯基戊-4-烯-1-基)氧基)-2-羥丙基)-1,4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷-1,4,8-三羧酸酯(化合物6)(tri-tert-butyl(Z)-11-(3-((5-(4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)-4,5-diphe2-hydroxypropyl)-1,4,8,11-tetraazacyclotetradecane-1,4,8-tricarbo步驟產(chǎn)率為70%)。[0111]向化合物5(800mg,0.8111mmol)的圓底燒瓶中，添加了三乙基硅烷過使用從水到甲醇的洗脫液的反相柱色譜法進行了純化，以得到淺黃色固體產(chǎn)物(Z)-1-(1,4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷-1-基)-3-((5-(4-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-4,5-二苯基戊-4-烯-1-基)氧基)丙-2-醇鹽酸鹽((Z)-1-(1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan-1-yl)-3-((5-(4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)-4,5-diphenylpent-4-en-1-譜。圖2I示出在本發(fā)明的實例3中合成的化合物SC-05-L-1的HPLC光譜NMR、H-,HCOSYNMR、H-,13CHSQCNMR及H-,13CHMBCNMR確認了化合物SC-05-L-1的結(jié)果呈現(xiàn)在圖2H及圖2I中。如圖2I所示，化合物SC-05-L-1的HPLC分析顯示出大約6.3分鐘的延遲時間。[0117]合成組合物99mTc-SC-05-L-1[0118]從柯惠公司(德克薩斯州的休斯頓)的?9Mo/99mTc產(chǎn)生器獲得了高锝酸鈉對化合物SC-05-L-1與99mTc進行了絡合。[0120]通過以丙酮及鹽水洗脫的TLC(沃特曼No.1,奧德里奇-西格瑪公司，密蘇里州的圣路易斯)確定了放射化學純度。在0.5mL/min的流速下以乙腈/水(1:1V/V)洗脫的PCHILIC柱(2.0mmI.D.×150mm,安捷倫公司，加利福尼亞州的圣克拉拉)上執(zhí)行了配備有NaI檢測器及紫外線檢測器(280nm)的高效液相色譜法(HPLC)。組合物99Tc-SC-05-L-1在24小時處靜置以進行延長的儲存期穩(wěn)定性(shelf-lifestability)測定。[0121]圖2J及圖2K示出在本發(fā)明的實例4中合成的組合物99mTc-SC-05-L-1在兩個不同的系統(tǒng)中的放射化學純度。具體來說，圖2J示出組合物99mTc-SC-05-L-1在丙酮系統(tǒng)中的放射化學純度，且圖2K示出組合物99mTc-SC-05-L-1在鹽水系統(tǒng)中的放射化學純度。如圖2J及圖2K所示，組合物99mTc-SC-05-L-1的放射化學純度大于95%且Rf值為0.1。[0122]圖2L及圖2M示出在本發(fā)明的實例4中合成的組合物99mTc-SC-05-L-1在兩個不同的系統(tǒng)中的標記效率。具體來說，向100μg氯化錫(II)(在100μLH?0中)然后是200μL(channel))及圖2M(射電星通道(radiostarchannel))所示，組合物99mTc-SC-05-L-1的HPLC分析顯示出大約7分鐘的延遲時間。[0123]圖2N及圖20示出在本發(fā)明的實例4中合成的組合物99mTc-SC-05-L-1在兩個不同的體外穩(wěn)定性。如圖2N(280nm通道)及圖20(射電星通道)所示，組合物99mTc-SC-05-L-1在24小時后在pH6.5中是穩(wěn)定的。[0125]體外細胞攝取研究[0127]將化合物SC-05-K-1及化合物SC-05-L-1(分別為5mg)溶解在pH5到pH6的0.3mL水中。添加了SnCL2(在0.1mL中為0.1mg)(從10mL水中的10mg錫(II)制備),接著添加了5mCi/1mL(0.1mg/0.1mCi/20μL/孔)。每一孔含有10μg分子。使用多細胞株(multi-cellline)來進行細胞攝取測定。使用96孔板進行MCF-7ER(+)細胞攝取研究。在150μL無血清羅斯威爾派克紀念研究所(RoswellParkMemorialInstitute,RPMI)培養(yǎng)基中，每一孔含有200,000個MCF-7細胞。將組合物99mTc-SC-05-K-1及組合物99mTc-SC小時到4小時)添加到在培養(yǎng)基中含有細胞的每一孔中。為了查明細胞攝取是否經(jīng)由ER介導的過程，向MCF-7細胞中添加了雌二醇(10次到100次)。細胞攝取是以總劑量的百分比來表[0128]圖3A及圖3B示出在本發(fā)明的實例2及實例4中合成的組合物99mTc-SC-05-K-1及組05-K-1及組合物99mTc-SC-05-L-1二者均顯示出良好的細胞攝取。特別是，在組合物99mTc-SC-05-L-1中添加雌二醇之后，細胞攝取降低(30%到40%),如圖3A所示。血清RPMI中含有100,000個細胞。將組合物99mTc-SC-05-K-1及組合物99Tc-SC-05-L-1以不同的間隔(0小時到2小時)添加到在培養(yǎng)基中含有細胞的每一孔中。為了查明組合物99mTc-SC-05-L-1的OVCAR3細胞攝取是否經(jīng)由ER介導的過程，進行了阻斷研究。為了進行阻斷研孔)的1%。將在培養(yǎng)基中含有細胞的孔溫育不同的間隔(0小時到2小時)。隨后，以冰冷的磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate-bufferedsaline,PBS)將細胞洗滌了兩次并以0.5mL胰蛋白酶(trypsin)溶液進行了胰蛋白酶化以分離腫瘤細胞。使用蛋白質(zhì)濃度測定確定出每一孔中的蛋白質(zhì)。在含有蛋白酶抑制劑(羅氏診斷公司(RocheDiagnostic),德國的曼海姆(Mannheim,Germany))的裂解(lysis)緩沖液中對細胞進行了裂解。使用由制造商(伯樂公司(Bio-RAD),美國加利福尼亞州的赫拉克勒斯(Hercules,CA,USA))闡述的布拉德福德方法(BradfordMethod)對細胞裂解物中的蛋白質(zhì)濃度進行了量化。以蒸餾水對布拉德福德染料進行了稀釋(1:4)并通過濾紙(數(shù)目1,沃特曼no.1,東京的愛多幫得科有限公司以1:9在裂解緩沖液中對蛋白質(zhì)樣本進行了稀釋。將稀釋的蛋白質(zhì)樣本或標準與96孔中的布拉德福德染料進行了混合，接著記錄了在595nm下的吸光度。以γ計數(shù)器(康涅狄格州的帕卡德(Packard,CT))測量了細胞及培養(yǎng)基中的放射性濃度，且以細胞的cpm/g及培養(yǎng)基的cpm/g來表達放射性濃度。計算出蛋白質(zhì)品質(zhì)對培養(yǎng)基放射性濃度比率并繪制了隨時間變化的圖。[0131]圖4A及圖4B示出在本發(fā)明的實例2及實例4中合成的組合物99mTc-SC-05-K-1及組合物9mTc-SC-05-L-1及組合物99Tc-SC-05-K-1進行的細胞攝取研究表明組合物99mTc-SC-99mTc-SC-05-L-1具有比組合物99mTc-SC-05-K-1高的細胞/培養(yǎng)基比率。[0132]圖5示出在本發(fā)明的實例4中合成的組合物99mTc-SC-05-L-1的OVCAR3細胞及TOV-斷80%,表明發(fā)生了ER介導的過程。[0136]通過在代表性套細胞株(mantlecellline)及彌漫性大B細胞淋巴瘤(diffuselargeB-celllymphoma,DLBCL)細胞株中使用細胞存活率(cellviability)測定，評估了化合物SC-05-K-1以及化合物SC-05-L-1抵抗淋巴瘤細胞的效果。[0137]圖6示出本發(fā)明的化合物SC-05-L-1及化合物SC-05-K-1抵抗淋巴瘤細胞的效果。如圖6所示，這些細胞株通過大麻受體過度表達。[0139]隨著化合物SC-05-L-1及化合物SC-05-K-1的濃度增加，對細胞進行了治療。比較了對化合物SC-05-L-1及化合物SC-05-K-1敏感或較不敏感的代表性DLBCL細胞株。[0140]圖7A及圖7B示出在本發(fā)明的實例3中合成的化合物SC-05-L-1的體外抗癌研究。圖8A及圖8B示出在本發(fā)明的實例1及實例3中合成的化合物SC-05-K-1及化合物SC-05-L-1的體外抗癌研究。如圖7A及圖7B所示，體外抗癌研究表明化合物SC-05-L-1抵抗淋巴瘤細胞具有劑量依賴方式(dose-dependentmanner)。如圖8A及圖8B所示，化合物SC-05-L-1及化合物SC-05-K-1二者顯示出抵抗淋巴瘤細胞的相似的劑量依賴方式。然而，化合物SC-05-L-1的毒性低于化合物SC-05-K-1。換句話說，螯合劑環(huán)拉胺的毒性低于螯合劑大環(huán)多胺。[0141]綜上所述，本發(fā)明提供雌激素受體與大麻受體之間的相互交談用組合物。羥基包含在制成品中。在本發(fā)明的組合物中，使用受保護的螯合劑來使環(huán)氧基化受體配體反應以形成螯合劑-受體配體共軛體。技術平臺可利用共軛拮抗劑及激動劑，并觀察其在各種形式的疾病中的效果。此外，所述組合物還可使用技術人員所已知的化學程式而被制備成藥物配方及套組。另外，還提供合成所述組合物的方法，且所述合成方法可不再需要向受體配體中添加保護基，且會提高制程效率并純化最終產(chǎn)品。除此之外，可使用本發(fā)明的組合物對[0142]雖然本發(fā)明已以實施例揭示如上，然其并非用以限定本發(fā)明，任何所屬技術領域中技術人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，當可作些許的更改與潤飾，故本發(fā)明的保護范圍當視權利要求所界定的為準。2/31頁3/31頁4/31頁弱期弱期弱弱WWWW上266556/31頁7/31頁