發(fā)酵工程及微生物培養(yǎng)專題解讀

一、傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)腐乳、果酒、果醋、泡菜的制作

1.常見(jiàn)的發(fā)酵產(chǎn)品及其微生物

發(fā)酵產(chǎn)品微生物代謝類型生物類型繁殖方式

腐乳毛霉異養(yǎng)需氧型真核胞子生殖

泡菜乳酸菌異養(yǎng)厭氧型原核分裂生殖

果酒酵母菌異養(yǎng)兼性厭氧真核出芽生殖

果醋醋酸菌異養(yǎng)需氧型原核分裂生殖

2.果酒和果醋發(fā)酵的改進(jìn)裝置分析

——［充氣口］-----

-I排氣口I-

發(fā)酵前期充氣口打排出酒精發(fā)

開，輸入無(wú)菌空氣.醉時(shí)產(chǎn)生的

讓肝母菌增殖，后

co.

期關(guān)閉充氣口.進(jìn)

行酒精發(fā)酵；在果長(zhǎng)而彎管

儺發(fā)酵時(shí)連接充氣排氣口通過(guò)

泵進(jìn)行充氣一個(gè)長(zhǎng)而彎

——（7EWH）-----曲的膠管與

瓶身連接.

用來(lái)取樣，及時(shí)其口的是防

監(jiān)測(cè)發(fā)醉進(jìn)行的止空氣中微

情況生物的污染

3.泡菜制作中乳酸菌、乳酸和亞硝酸鹽含量的變化

頤比［乳酸間（乳酸）「亞硝酸鹽）

VVVV

少（有5，增加（硝酸鹽

（含腎A乳酸菌活少—還原菌的作用）

動(dòng)受抑制）

F降（硝酸鹽

廢徽最多（乳酸積累、

&）>嗎他一增多、一還原菌受抑制,

pH卜,降部分亞硝酸鹽

閑活動(dòng)）被分解）

減少（3L酸繼續(xù)增多.

下降至相對(duì)穩(wěn)

繼續(xù)積累.pH繼續(xù)下

定（硝酸鹽還原

>pH繼續(xù)下降，直至

菌被完全抑制）

降,抑制穩(wěn)定

其活動(dòng)）亞硝酸

1乳酸菌［乳酸1鹽含量

■

發(fā)醉時(shí)高

發(fā)酵時(shí)間發(fā)醉時(shí)間

注意：亞硝酸鹽是硝酸鹽還原菌促進(jìn)硝酸鹽還原形成的，而不是硝化細(xì)菌氧化氮形成的。

4.果酒、果醋、泡菜的發(fā)酵條件控制

泡菜

條件控制果酒果醋

02前期有氧，后期無(wú)氧有氧無(wú)氧

溫度18~30℃30?35℃室溫

時(shí)間10?12天7?8天腌制15天左右

其他條件器具需消毒器具需消毒控制鹽水濃度、且煮沸

【易錯(cuò)點(diǎn)辨析】傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的3個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)

（1）果酒發(fā)酵，發(fā)酵罐要留有大約1/3的空間，目的是先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，快速繁

殖，耗盡①后，再進(jìn)行酒精發(fā)酵，并且防止發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的CO2造成發(fā)酵液溢出。

（2）醋酸菌是好氧細(xì)菌，在發(fā)酵過(guò)程中始終需要氯氣，如果氧氣中斷則會(huì)引起醋酸菌的死

亡，且所需溫度高于酵母菌。

（3）泡菜制作時(shí)，配制清水與食鹽的質(zhì)量百分比為5%?20%的鹽水。鹽的用量過(guò)高，乳酸

發(fā)酵受抑制，泡菜風(fēng)味差：用量過(guò)低，雜菌易繁殖，導(dǎo)致泡菜變質(zhì)。鹽水要煮沸后冷卻。煮

沸的作用：一是除去水中的氧氣，二是殺滅鹽水中的其他微生物。

【典例1】（2024?湖北卷）制醋、制餡、制酒是我國(guó)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)。醋酸菌屬于好氧型原核

生物，常用于食用醋的發(fā)醉。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.食用醋的酸味主要來(lái)源于乙酸

B.醋酸菌不適宜在無(wú)氧條件下牛.存

C.醋酸菌含有催化乙醇氧化成乙酸的酶

D.福萄糖在醋酸菌中的氧化分解發(fā)生在線粒體內(nèi)

【典例2】（2024?河北卷）（多選）中國(guó)傳統(tǒng)白酒多以泥窖為發(fā)酵基礎(chǔ)，素有“千年老窖萬(wàn)

年糟”“以窖養(yǎng)糟，以糟養(yǎng)泥”之說(shuō)。多年反復(fù)利用的老窖池內(nèi)壁窖泥中含有大量與釀酒相關(guān)

的微生物。下列敘述正確的是（）

A.傳統(tǒng)白酒的釀造是在以釀酒酵母為主的多種微生物共同作用下完成的

B.窖池內(nèi)各種微生物形成了相對(duì)穩(wěn)定的體系，使眼造過(guò)程不易污染雜菌

C.從窖泥中分離的釀酒酵母擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，需在CO2或M環(huán)境中進(jìn)行

D.從谷物原料發(fā)酵形成的酒糟中，可分離出產(chǎn)淀粉酶的微生物

【典例3]（2023?山東卷）以下是以泡菜壇為容器制作泡菜時(shí)的4個(gè)處理:①沸鹽水冷卻后

再倒入壇中；②鹽水需要浸沒(méi)全部菜料;③蓋好壇蓋后，向壇蓋邊沿的水槽中注滿水；@檢測(cè)

泡菜中亞硝酸鹽的含量。下列說(shuō)法正確的是

A.①主要是為了防止菜料表面的醋酸桿菌被殺死

B.②的主要目的是用鹽水殺死菜料表面的雜菌

C.③是為了使氣體只能從泡菜壇排出而不能進(jìn)入

D.④可檢測(cè)到完整發(fā)酵過(guò)程中亞硝酸鹽含量逐漸降低

【典例4】（2021?湖北卷）中國(guó)的許多傳統(tǒng)美食制作過(guò)程蘊(yùn)含了生物發(fā)酵技術(shù)。下列敘述正

確的是（）

A.泡菜制作過(guò)程中，酵母菌將葡萄糖分解成乳酸

B.饅頭制作過(guò)程中，酵母菌進(jìn)行呼吸作用產(chǎn)生

C.米酒制作過(guò)程中,將容器密封可以促進(jìn)酵母菌生長(zhǎng)

D.酸奶制作過(guò)程中，后期低溫處理可產(chǎn)生大量乳酸桿菌

【典例5］（2021?山東卷）葡萄酒的制作離不開酵母菌。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.無(wú)氧條件下酵母菌能存活但不能大量繁殖

B.自然發(fā)酵制作葡萄酒時(shí)包主要作用的菌是野生型酥母菌

C.葡萄酒的顏色是葡萄皮中的色素進(jìn)入發(fā)酵液形成的

D.制作過(guò)程中隨著發(fā)酵的進(jìn)行發(fā)酵液中糖含量增加

【典例6】（2021?浙江1月卷）用白蘿卜制作泡菜的過(guò)程中，采用適當(dāng)方法可縮短腌制時(shí)間。

下列方法中錯(cuò)誤的是（）

A.將白蘿卜切成小塊

B.向容器中通入無(wú)菌空氣

C.添加已經(jīng)腌制過(guò)的泡菜汁

D.用沸水短時(shí)處理白蘿卜塊

【典例7】（2021?遼寧卷）利用菠蘿蜜制作果醋的大致流程為:先在滅菌的果肉勻漿中接種

酵母菌，發(fā)酵6天后，再接入活化的醋酸桿菌，發(fā)酵5天。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.乙醉既是醋酸發(fā)酵的底物,又可以抑制雜菌繁殖

B.酵母菌和醋酸桿菌均以有絲分裂的方式進(jìn)行增殖

C.酵母菌和醋酸桿菌發(fā)酵過(guò)程中控制通氣的情況不同

D.接入醋酸桿菌后,應(yīng)適當(dāng)升高發(fā)酵溫度

【典例8】（2021?湖北卷）中國(guó)的許多傳統(tǒng)美食制作過(guò)程蘊(yùn)含了生物發(fā)酵技術(shù)。下列敘述正

確的是（）

A.泡菜制作過(guò)程中，酵母菌將葡萄糖分解成乳酸

B.饅頭制作過(guò)程中，酵母菌進(jìn)行呼吸作用產(chǎn)生C（h

C.米酒制作過(guò)程中,將容器密封可以促進(jìn)酵母菌生長(zhǎng)

D.酸奶制作過(guò)程中，后期低溫處理可產(chǎn)生大量乳酸桿菌

【典例9］（2020?山東卷）我國(guó)的釀酒技術(shù)歷史悠久，古人在實(shí)際生產(chǎn)中積累了很多經(jīng)驗(yàn)?！洱R

民要術(shù)》記載:將蒸熟的米和酒曲混合前需“浸曲發(fā)，如魚眼湯，凈淘米八斗，炊作飯,舒令極

冷”。意思是將酒曲浸到恬化冒出魚眼大小的氣泡，把八斗米淘凈，蒸熟，攤開冷透。下列說(shuō)

法錯(cuò)誤的是（）

A.“浸曲發(fā)”過(guò)程中酒曲中的微生物代謝加快

B.“倒眼湯”現(xiàn)象是微生物呼吸作用產(chǎn)生的CO?釋放形成的

C.“凈淘米”是為消除雜菌對(duì)釀酒過(guò)程的影響而采取的主要措施

D.“舒令極冷”的目的是防止蒸熟的米溫度過(guò)高導(dǎo)致酒曲中的微生物死亡

【典例10］（2020?江蘇卷）某同學(xué)在線提交了在家用帶蓋玻璃瓶制作果酒和果醋的實(shí)驗(yàn)報(bào)

告，他的做法錯(cuò)誤的是（）

A.選擇新鮮的葡萄略加沖洗，除去枝梗后榨汁

B.將玻璃瓶用酒精消毒后、裝滿葡萄汁

C.酒精發(fā)酵期間，根據(jù)發(fā)醉進(jìn)程適時(shí)擰松瓶蓋放氣

D.酒精發(fā)酵后去除瓶蓋,蓋一層紗布,再進(jìn)行醋酸發(fā)酵

二、比較傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)與發(fā)酵工程

項(xiàng)目傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)發(fā)酵工程

直接利用原料中天然存在的微生物，或利用微生物的特定功能，通過(guò)現(xiàn)代T程技

概念利用前一次發(fā)酵保存下來(lái)的面團(tuán)、鹵汁術(shù)，規(guī)?；a(chǎn)對(duì)人類有用的產(chǎn)品

等發(fā)酵物中的微生物進(jìn)行發(fā)酵、制作食

品的技術(shù)

菌種來(lái)源于空氣、蔬菜、面團(tuán)發(fā)酵物等，菌性狀優(yōu)良的菌種，可從自然界中篩選出

來(lái)源種不純來(lái)，也可以通過(guò)誘變育種或基因工程育種

獲得

過(guò)程無(wú)菌種選育、擴(kuò)大培養(yǎng)、接種，無(wú)嚴(yán)格菌種選育，培養(yǎng)基的配制、滅菌，擴(kuò)大培

的滅菌等養(yǎng)，接種，發(fā)酵，產(chǎn)品的分離和提純

發(fā)酵通過(guò)微生物自身的代謝調(diào)節(jié)pH,通過(guò)通過(guò)計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)，對(duì)發(fā)酵過(guò)程中的溫

條件充氣口、排氣口及其他人工措施調(diào)節(jié)溶度、pH和溶解氧等進(jìn)行監(jiān)測(cè)和控制

控制解氧

應(yīng)用果酒、果醋的制作，腐乳、泡菜的制作應(yīng)用于食品工業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)、農(nóng)牧業(yè)等

等

【典例1】（2024?山東卷）在發(fā)酵過(guò)程中，多個(gè)黑曲霉菌沐常聚集成團(tuán)形成菌球體，菌球體大

小僅由菌體數(shù)量決定。黑曲霉利用糖類發(fā)酵產(chǎn)生檸檬酸時(shí)需要充足的氧。菌體內(nèi)鉉離子濃度

升高時(shí)，可解除檸檬酸對(duì)其合成途徑的反饋抑制。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.相同菌體密度下，菌球體越大檸檬酸產(chǎn)生速率越慢

B.發(fā)解中期添加一定量的毓酸鉉可提高檸檬酸產(chǎn)量

C.發(fā)酵過(guò)程中pH下降可抑制大部分細(xì)菌的生長(zhǎng)

D.發(fā)酵結(jié)束后,將過(guò)濾所得的固體物質(zhì)進(jìn)行干燥即可獲得檸檬酸產(chǎn)品

【典例2]（2024?貴州卷）酵母菌W是一種產(chǎn)果膠酶工程菌,為探究酵母菌W的果膠酶產(chǎn)量

與甲醉濃度（I<n<w）的關(guān)系。將酵母菌W以相同的初始接種量接種到發(fā)酵罐，在適宜條件

下培養(yǎng),結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是（）

(

一￡

己

)

A.發(fā)酵罐中接種量越高,醉母菌W的K值越大

B.甲醇濃度為III時(shí)，酵母菌W的果膠酶合成量最高

C.72h前,三組實(shí)驗(yàn)中，甲醇濃度為II時(shí),產(chǎn)果膠酶速率最高

D.96h后，是酵母菌W用于工業(yè)生產(chǎn)中收集果膠酶的最佳時(shí)期

【典例3]（2024?江西卷）井岡霉素是我國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)的一種氨基寡糖類抗生素，它由吸水

鏈霉菌井岡變種（JGs,一種放線菌，菌體呈絲狀生長(zhǎng)）發(fā)醉而來(lái)，在水稻病害防治等領(lǐng)域中得

到廣泛應(yīng)用。下列關(guān)于JCs發(fā)酵生產(chǎn)井岡霉素的敘述,正確的是（）

A.JGs可發(fā)酵生產(chǎn)井岡霉素,因?yàn)樗心軌蚓幋a井岡霉素的基因

B.JGs接入發(fā)酵罐前需要擴(kuò)大培養(yǎng),該過(guò)程不影響井岡霉素的產(chǎn)量

C.提高JGs發(fā)酵培養(yǎng)基中肯養(yǎng)物質(zhì)的濃度,會(huì)提高井岡霉素的產(chǎn)量

D.稀釋涂布平板法不宜用于監(jiān)控JGs發(fā)酵過(guò)程中活細(xì)胞數(shù)量的變化

【典例4]（2023?山東卷）（不定項(xiàng)）果酒的家庭制作與啤酒的工業(yè)化生產(chǎn)相比，共同點(diǎn)有

（）

A,都利用了酵母菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精的原理

B.都需要一定的有氧環(huán)境供發(fā)酵菌種繁殖

C.發(fā)酵前都需要對(duì)原料進(jìn)行滅菌

D.發(fā)酵結(jié)束后都必須進(jìn)行消毒以延長(zhǎng)保存期

【典例5]（2023?遼寧卷）（2023遼寧，13,2分）利用某種微生物發(fā)酵生產(chǎn)DHA油脂,可獲取

DHA（一種不飽和脂肪酸）。如圖為發(fā)酵過(guò)程中物質(zhì)含量變化曲線。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

250

7

3200

?

號(hào)150

空

W

V100

H

U50

0

發(fā)醉時(shí)間（h）

生物最為每升發(fā)酵液中的細(xì)胞干就便?

A.DHA油脂的產(chǎn)量與生物量呈正相關(guān)

B.溫度和溶解氧的變化能影響DHA油脂的產(chǎn)量

C.他萄糖代謝可為DHA油脂的合成提供能量

D.12%0h,DHA油脂的合成對(duì)氮源的需求比碳源高

【典例6】（2023?江蘇卷）（多選）某醋廠和啤酒廠的工藝流程如圖所示。酒曲含有霉菌、酵

母菌、乳酸菌;醋醋含有醋酸菌;糖化即淀粉水解過(guò)程。下列相關(guān)敘述正確的有（）

菌種選育、

大粉擴(kuò)大培養(yǎng)

米碎C

麥T

糖

X成

芽煮沸、發(fā)過(guò)濾

化

包品

冷卻醉除菌裝

啤酒釀造工藝流程

A.糯米“蒸熟”與大米“蒸煮”的目的是利于糖化和滅菌

B.發(fā)酵原理是利用真菌的無(wú)氧呼吸與細(xì)菌的有氧呼吸

C.醋酸發(fā)醉過(guò)程中經(jīng)常翻動(dòng)發(fā)醉物.可控制發(fā)酵溫度和改善通氣狀況

D.啤酒釀造流程中適當(dāng)增加溶解氧可縮短發(fā)酵時(shí)間

【典例7】（2022?湖北卷）關(guān)于白酒、啤酒和果酒的生產(chǎn)，下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.在白酒、啤酒和果酒的發(fā)酵初期需要提供一定的氧氣

B,白酒、啤酒和果酒釀制的過(guò)程也是微生物生長(zhǎng)繁殖的過(guò)程

C.葡萄糖轉(zhuǎn)化為乙醵所需的酶既存在于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，也存在于線粒體

D.生產(chǎn)白酒、啤酒和果酒的原材料不同,但發(fā)酵過(guò)程中起主要作用的都是酵母菌

【典例8】（2022?湖北卷）廢水、廢料經(jīng)加工可變廢為寶。某工廠利用果糖生產(chǎn)廢水和沼氣

池廢料生產(chǎn)蛋白質(zhì)的技術(shù)路線如圖所示。下列敘述正確的是（）

A.該生產(chǎn)過(guò)程中，一定有氣體生成

B.微生物生長(zhǎng)所需碳源主要來(lái)源于沼氣池廢料

C.該生產(chǎn)工藝?yán)梦⑸飬捬醢l(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)蛋白質(zhì)

D.沼氣池廢料和果糖生產(chǎn)廢水在加入反應(yīng)器之前需要滅菌處理

【典例9]（2022?山東卷）青霉菌處在葡萄糖濃度不足的環(huán)境中時(shí)，會(huì)通過(guò)分泌青霉素殺死

細(xì)菌，以保證自身生存所需的能量供應(yīng)。目前已實(shí)現(xiàn)青霉素的工業(yè)化生產(chǎn)，關(guān)于該生產(chǎn)過(guò)程,

下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.發(fā)酵液中的碳源不宜使用簡(jiǎn)萄糖

B.可用深層通氣液體發(fā)酵技術(shù)提高產(chǎn)量

C.選育出的高產(chǎn)菌株經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后才可接種到發(fā)酵罐中

D.青霉素具有殺菌作用，因此發(fā)酵罐不需嚴(yán)格滅菌

【典例10]（2022?山東卷）（不定項(xiàng)）啤酒的工業(yè)化生產(chǎn)中，大麥經(jīng)發(fā)芽、焙烤、碾磨、糖化、

蒸煮、發(fā)酵、消毒等工序后，最終過(guò)濾、調(diào)節(jié)、分裝。下列說(shuō)法正確的是（）

A.用赤霉素處理大麥,可使大麥種子無(wú)須發(fā)芽就能產(chǎn)生淀粉酶

B.焙烤是為了利用高溫殺死大麥種子胚并進(jìn)行滅菌

C.糖漿經(jīng)蒸煮、冷卻后需接種醉母菌進(jìn)行發(fā)酵

D.通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)可減少啤酒酵母雙乙酰的生成,縮短啤酒的發(fā)酵周期

三、微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

1.培養(yǎng)基的類型劃分

劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途

液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)

半固體培養(yǎng)基觀察微生物的運(yùn)動(dòng)

物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物分離、鑒定、

活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種

化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)

合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定

選擇培養(yǎng)基加入允許目標(biāo)微生物生長(zhǎng)，而抑制或阻培養(yǎng)、分離出目標(biāo)微

止其他微生物生長(zhǎng)的化學(xué)物質(zhì)生物

用途鑒別培養(yǎng)基加入某種指示劑或化學(xué)藥品（不影響微鑒別目標(biāo)微生物

生物正常生長(zhǎng)）

【提醒常見(jiàn)選擇培養(yǎng)基舉例

（D缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的微生物。

（2）含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細(xì)菌，篩選出真菌。

（3）無(wú)有機(jī)碳源的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。

（4）尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運(yùn)用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯

一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。

2.培養(yǎng)基的四大基本成分——碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽

碳源無(wú)機(jī)碳源（自養(yǎng)型生物）_

co2>co?\uco3

有機(jī)碳源（異養(yǎng)型生物）葡萄糖、牛肉膏、蛋白陳等

氮源無(wú)機(jī)氮源NH4+、NO：,、ML等

有機(jī)氮源牛肉甘、蛋白陳、尿素、氨基酸等

無(wú)機(jī)鹽大量元素Ca、K、Mg

微量兀求Zn、Cu、Mn、Co、Mo等

【提醒】培養(yǎng)基還需滿足的其他要求

（1）特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（即生長(zhǎng)因子）：維生素、堿基、氨基酸等，如培養(yǎng)乳酸桿菌需維生素。

（2）pH：培養(yǎng)霉菌的培養(yǎng)基一般需調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基需調(diào)至中性或弱堿性。

（3）0公培養(yǎng)厭氧微生物需提供無(wú)氧環(huán)境。

3.常用的滅菌、消毒方法比較

條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍

'消較為溫和僅殺死物體表面煮沸消毒法日常用品

毒的物理或或內(nèi)部的部分微巴氏消毒法不耐高溫的液體

化學(xué)方法生物，不能消滅芽化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源

抱和抱子。紫外線消毒法用紫外燈照射接種室、接種箱、超

凈T作臺(tái)。

滅強(qiáng)烈的理殺死物體內(nèi)外所灼燒滅菌法接種工具（涂布器、接種環(huán)）、試管

菌化因素有的微生物，包括口或瓶口

芽抱和袍子干熱滅菌法玻璃器皿、金屬用具

濕熱滅菌法培養(yǎng)基及容器

4.微生物的分離方法比較

項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法

?

分離結(jié)果

關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線①一系列的梯度稀釋；②涂布平板操作

接種用具接種環(huán)涂布器

優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征

缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板

都要用到固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無(wú)菌操作；都會(huì)在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落；

共同點(diǎn)

都可用于觀察菌落特征

【提醒】平板劃線法的注意事項(xiàng)

（1）5次畫線需進(jìn)行6次灼燒接種環(huán)的目的

①第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物。

②每次劃線后：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來(lái)自上一次劃線的末端.

③劃線操作結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。

（2）灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操作，以免接種環(huán)因溫度過(guò)高而殺死菌種。

（3）劃線時(shí)最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。

（4）培養(yǎng)皿蓋不能完全打開，應(yīng)只打開一條縫隙。

5.微生物的計(jì)數(shù)方法比較

內(nèi)容直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法

主要用具顯微鏡、細(xì)窗計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板涂布器

計(jì)數(shù)依據(jù)細(xì)菌個(gè)數(shù)培養(yǎng)基上菌落數(shù)

優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)的是活菌

計(jì)算公式每亳升原液含菌株數(shù)=每小格平均菌每克樣品中的菌株數(shù):(C4-V)XM

株數(shù)X400XI0000X稀釋倍數(shù)C:某稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落

數(shù);V:涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積

(mL)；M:稀釋倍數(shù)

缺點(diǎn)不能區(qū)分死菌與活菌當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌體連在一起時(shí)，平板卜

觀察到的只是一個(gè)菌落

結(jié)果比實(shí)際值偏大比實(shí)際值偏小

【典例1](2024?湖南卷)微生物平板劃線和培養(yǎng)的具體操作如圖所示，卜列操作正確的是

)

①灼燒接種環(huán)②冷卻接種環(huán)?拔出試管棉塞

④接種環(huán)蘸取菌液

⑤試管口通過(guò)火焰并塞上棉塞⑥接種環(huán)劃線操作

⑦接種環(huán)劃線方法⑧平板正置培養(yǎng)

A.???@B.③

C.①0⑦⑧I）.@@??

【典例2】（2024?新課標(biāo)卷）（不定項(xiàng)）某些香蕉植株組織中存在的內(nèi)生菌可防治香蕉枯萎

病，其篩選流程及抗性檢測(cè)如圖。下列操作正確的是（）

解品采集H樣品消毒戶麗樣品凹磨）

保性檢測(cè)卜■供得純培養(yǎng)物＞■（稀:涂初

內(nèi)生菌卜液劃線

工片病原菌菌斑

抗性檢測(cè)

A.在大量感染香蕉枯萎病的香蕉種植園內(nèi)，從感病植株上采集樣品

B.將采集的樣品充分消毒,后，用蒸儲(chǔ)水沖洗，收集沖洗液進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)

C.將無(wú)菌檢測(cè)合格的樣品研磨，經(jīng)稀釋涂布平板法分離得到內(nèi)生菌的單菌落

D.判斷內(nèi)生菌的抗性效果需比較有無(wú)接種內(nèi)生菌的平板上的病原菌菌斑大小

【典例3]（2024?山東卷）酵母菌在合成色氨酸時(shí)需要3種酶X、Y和Z,trpX.trpYWtrpZ

分別為相應(yīng)酶的編碼基因突變的色氨酸依賴型突變體。已知3種酶均不能進(jìn)出細(xì)胞，而色家

酸合成途徑的中間產(chǎn)物積累到一定程度時(shí)可分泌到胞外.將這3種突變體均勻劃線接種到含

有少量色氨酸的培養(yǎng)基上，生長(zhǎng)情況如圖。據(jù)圖分析,3種酶在該合成途徑中的作用順序?yàn)?/p>

（）

A.X-Y-ZB.Z-Y-X

C.Y-X-ZD.Z-X7

【典例4]（2023?河北卷）為篩選能平衡腸道菌群和降解膽固醇的乳酸菌，卜列相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)

計(jì)錯(cuò)誤的是（）

A.從酸奶和泡菜中采樣分離乳酸菌

B.平板倒置培養(yǎng)為篩選乳酸菌創(chuàng)造無(wú)氧環(huán)境

C.對(duì)目的菌株進(jìn)行膽固醇降解能力的測(cè)定

D.檢測(cè)目的菌株對(duì)消化道環(huán)境的耐受力

【典例5]（2023?遼寧卷）細(xì)菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細(xì)菌形成的,

利用空氣微生物采樣器對(duì)某市人員密集型公共場(chǎng)所采樣并檢測(cè)細(xì)菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)

/nf）。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.采樣前需對(duì)空氣微生物采樣器進(jìn)行無(wú)菌處理

B.細(xì)菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時(shí)需將平板倒置

C.同一稀釋度下至少對(duì)3個(gè)平板計(jì)數(shù)并取平均值

D.稀釋涂布平板法檢測(cè)的細(xì)菌氣溶膠濃度比實(shí)際值高

【典例6】（2023?山東卷）平板樓種常用在微牛物培養(yǎng)中。下列說(shuō)法正確的是（）

A.不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)

B.平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒

C.接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄

D.利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成服酶的微生物

【典例7】（2023?廣東卷）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中

角蛋白的嗜熱菌“根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培并基篩選