實驗動物繁殖員操作評估水平考核試卷含答案一、單選題（每題1分，共30分。每題只有一個正確答案，錯選、多選均不得分）1.實驗用C57BL/6J小鼠的妊娠期平均為A.17d??B.19d??C.21d??D.23d答案：B解析：C57BL/6J為近交系，妊娠期19d±0.5d，17d為DBA/2J，21d為大鼠，23d為倉鼠。2.超數(shù)排卵常用激素組合為A.PMSG+hCG??B.FSH+LH??C.GnRH+PRL??D.E2+PGF2α答案：A解析：PMSG（孕馬血清促性腺激素）具有FSH樣作用，hCG具有LH樣作用，48h間隔腹腔注射可誘導(dǎo)小鼠排20～30枚卵。3.下列哪項不是影響體外受精（IVF）率的關(guān)鍵變量A.精子獲能時間??B.卵丘細(xì)胞完整性??C.培養(yǎng)箱CO?濃度??D.籠盒墊料種類答案：D解析：墊料影響動物福利，但與體外受精無直接因果鏈。4.雄鼠性成熟標(biāo)志是A.睪丸下降至陰囊??B.包皮腺分泌旺盛??C.精子出現(xiàn)在附睪尾??D.出現(xiàn)騎跨行為答案：C解析：精子出現(xiàn)在附睪尾是生殖能力成熟的金標(biāo)準(zhǔn)，A在出生后15d已出現(xiàn)，B、D為非特異性。5.雌鼠陰道栓最佳檢查時間為交配后A.0.5h??B.6h??C.12h??D.24h答案：B解析：陰道栓在交配后4～8h形成并硬化，6h檢出率>95%，24h已脫落。6.胚胎冷凍保護劑DMSO工作濃度為A.0.5mol/L??B.1.0mol/L??C.1.5mol/L??D.2.0mol/L答案：C解析：1.5mol/LDMSO+0.5mol/L蔗糖為經(jīng)典慢速冷凍液，平衡毒性與滲透壓。7.下列哪項操作會降低代乳成功率A.選擇剛分娩1d的CD1雌鼠??B.用酒精擦拭幼仔體表??C.混合代乳仔與親生仔??D.在14:00—16:00換窩答案：B解析：酒精氣味破壞母鼠識別，導(dǎo)致棄仔；C“混合”可掩蓋氣味，反而提高接受率。8.計算近交系數(shù)（F）時，同窩兄妹交配一代的增量為A.12.5%??B.19.0%??C.25.0%??D.33.3%答案：B解析：公式ΔF=1/2Ne，兄妹交配Ne=2.6，ΔF≈19%。9.導(dǎo)致“濕尾癥”爆發(fā)性死亡的主要病原是A.螺桿菌??B.鼠檸檬酸桿菌??C.金黃色葡萄球菌??D.梭狀芽孢桿菌答案：D解析：幼倉鼠感染梭狀芽孢桿菌后12h出現(xiàn)直腸脫垂、血性腹瀉，死亡率>90%。10.采用“2∶1”配種法時，雄鼠周齡應(yīng)≥A.4周??B.6周??C.8周??D.10周答案：C解析：8周性成熟且經(jīng)驗豐富，可減少雌鼠咬傷率。11.冷凍精子復(fù)蘇后活力評估溫度應(yīng)控制在A.25℃??B.30℃??C.37℃??D.39℃答案：C解析：37℃最接近小鼠體溫，低溫會抑制運動，過高產(chǎn)生熱應(yīng)激。12.下列哪項不是SPF級動物必須排除的病毒A.小鼠肝炎病毒??B.仙臺病毒??C.乳酸脫氫酶升高病毒??D.小鼠細(xì)小病毒答案：C解析：乳酸脫氫酶升高病毒（LDV）為潛在污染，但國標(biāo)GB14922.22018未列入必檢。13.孕鼠臨產(chǎn)前腹部呈“梨形”變化，距分娩約A.6h??B.12h??C.24h??D.48h答案：C解析：胎兒下沉入骨盆，脊柱兩側(cè)凹陷，24h內(nèi)開始分娩。14.胚胎移植至假孕0.5dpc受體時，胚胎發(fā)育階段應(yīng)為A.單細(xì)胞??B.2細(xì)胞??C.桑椹胚??D.囊胚答案：B解析：0.5dpc受體輸卵管環(huán)境適合2細(xì)胞，囊胚需移植至2.5dpc子宮。15.下列哪項不是影響體外培養(yǎng)“2細(xì)胞阻滯”的因素A.培養(yǎng)液中EDTA濃度??B.雄原核表觀遺傳修飾??C.雌鼠品系??D.光照周期答案：D解析：光照周期影響體內(nèi)排卵時間，與體外阻滯無直接證據(jù)鏈。16.采用IETS方法冷凍小鼠胚胎，控溫儀降溫速率為A.0.1℃/min??B.0.3℃/min??C.0.5℃/min??D.1.0℃/min答案：B解析：從–6℃到–30℃以0.3℃/min進行，過快形成胞內(nèi)冰晶，過慢脫水過度。17.精子頭中段異常率>30%時應(yīng)A.增加雄鼠運動??B.降低采精溫度??C.淘汰該雄鼠??D.提高h(yuǎn)CG劑量答案：C解析：中段異常影響鞭手運動，遺傳背景或年齡老化，淘汰最經(jīng)濟。18.下列哪項不是新生仔鼠“交叉撫養(yǎng)”目的A.平衡窩仔數(shù)??B.減少遺傳漂移??C.提高代乳成功率??D.降低微生物差異答案：D解析：交叉撫養(yǎng)在微生物相同背景下進行，無法降低差異。19.雌鼠產(chǎn)后發(fā)情發(fā)生在分娩后A.2h??B.8h??C.14h??D.24h答案：C解析：產(chǎn)后14～20h出現(xiàn)排卵，24h內(nèi)配種可“連配”縮短周期。20.下列哪項操作會增加遺傳污染風(fēng)險A.每代剪尾DNA鑒定??B.同籠兄妹交配??C.外源雄鼠誤入??D.冷凍備份胚胎答案：C解析：外源雄鼠誤入導(dǎo)致非計劃交配，DNA鑒定只能事后發(fā)現(xiàn)。21.小鼠精子獲能液中NaHCO?濃度通常為A.5mmol/L??B.10mmol/L??C.25mmol/L??D.50mmol/L答案：C解析：25mmol/L可激活腺苷酸環(huán)化酶，升高cAMP，促進酪氨酸磷酸化。22.下列哪項不是影響胚胎移植妊娠率的激素A.孕酮??B.雌二醇??C.前列腺素F2α??D.褪黑素答案：D解析：褪黑素調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律，與妊娠維持無直接關(guān)聯(lián)。23.采用“harem”配種時，雄雌比例建議A.1∶1??B.1∶2??C.1∶4??D.1∶8答案：C解析：1雄配4雌可最大化籠位利用率，同時避免過度打斗。24.下列哪項不是冷凍卵巢組織常用保護劑A.DMSO??B.甘油??C.乙二醇??D.蔗糖答案：B解析：甘油滲透慢，對卵巢毒性大，DMSO、乙二醇更常用。25.孕鼠維生素A缺乏會導(dǎo)致胎鼠A.無腦畸形??B.臍疝??C.短尾畸形??D.多指畸形答案：A解析：維生素A調(diào)控神經(jīng)板閉合，缺乏致前腦不分裂。26.下列哪項不是影響體外受精的“季節(jié)效應(yīng)”原因A.光照周期??B.溫度波動??C.飼養(yǎng)員休假??D.空氣負(fù)離子濃度答案：D解析：無證據(jù)表明空氣負(fù)離子影響IVF率，前三項已被多篇文獻(xiàn)證實。27.雄鼠頻密交配后需休息幾天以恢復(fù)精子質(zhì)量A.1d??B.2d??C.3d??D.5d答案：B解析：2d可恢復(fù)附睪尾精子儲備，1d不足，3d以上浪費產(chǎn)能。28.下列哪項不是胚胎干細(xì)胞（ES）注射后嵌合體判定標(biāo)準(zhǔn)A.毛色嵌合??B.生殖系傳遞??C.血液生化嵌合??D.行為學(xué)嵌合答案：D解析：行為學(xué)差異主觀性強，不作為金標(biāo)準(zhǔn)。29.下列哪項不是導(dǎo)致假孕失敗的原因A.雄鼠結(jié)扎不徹底??B.受體周齡>12周??C.交配時間過早??D.受體為未性成熟雌鼠答案：B解析：12周以上雌鼠仍可誘導(dǎo)假孕，只要與結(jié)扎雄鼠交配。30.冷凍胚胎長期保存液氮罐最佳液位報警值為A.10%??B.20%??C.30%??D.50%答案：C解析：低于30%時溫度上升速率>5℃/d，風(fēng)險陡增。二、多選題（每題2分，共20分。每題至少有兩個正確答案，多選、少選、錯選均不得分）31.下列哪些措施可降低體外受精“2細(xì)胞阻滯”發(fā)生率A.添加EDTA??B.降低葡萄糖濃度??C.提高O?濃度至90%??D.使用KSOM培養(yǎng)液??E.添加β巰基乙醇答案：A、B、D、E解析：高氧產(chǎn)生氧自由基反而加重阻滯，C錯誤；其余均可改善胚胎代謝。32.關(guān)于小鼠剖腹產(chǎn)凈化，正確的是A.手術(shù)時間選孕19d??B.胎仔娩出后即刻浸入37℃生理鹽水??C.代乳鼠需選CD1初產(chǎn)??D.手術(shù)器械需高壓滅菌??E.術(shù)后母鼠不需隔離答案：A、B、D解析：代乳鼠選經(jīng)產(chǎn)接受率更高，C錯誤；術(shù)后母鼠需單獨恢復(fù)7d，E錯誤。33.影響雄鼠交配率的內(nèi)分泌因素包括A.睪酮??B.雌二醇??C.皮質(zhì)酮??D.褪黑素??E.胰島素答案：A、C、D解析：雌二醇對雄鼠為抑制，胰島素與交配無直接關(guān)聯(lián)。34.下列哪些屬于胚胎移植“子宮系膜法”步驟A.暴露卵巢??B.撕開子宮系膜??C.用毛細(xì)針穿刺子宮壁??D.注入空氣確認(rèn)位置??E.荷包縫合答案：B、C、E解析：A為輸卵管移植步驟，D為多余操作。35.下列哪些病毒可通過胎盤垂直傳播A.小鼠肝炎病毒??B.鼠巨細(xì)胞病毒??C.乳酸脫氫酶升高病毒??D.小鼠細(xì)小病毒??E.仙臺病毒答案：B、D解析：MHV、LDV、SeV主要為呼吸道/消化道，胎盤感染率<1%。36.下列哪些指標(biāo)可用于評估代乳成功A.仔鼠體重日增>0.5g??B.母鼠筑巢評分≥3分??C.仔鼠皮膚顏色紅潤??D.母鼠泌乳斑明顯??E.仔鼠叫聲頻率答案：A、B、C、D解析：叫聲頻率受環(huán)境干擾大，非特異。37.下列哪些屬于“Rederivation”技術(shù)A.胚胎移植凈化??B.剖腹產(chǎn)凈化??C.精子冷凍凈化??D.卵巢移植凈化??E.受精卵體外凈化答案：A、B、C、D解析：E無此概念。38.下列哪些操作會提高冷凍精子復(fù)蘇后活力A.使用MTG替代DMSO??B.復(fù)蘇后37℃孵育30min??C.添加咖啡因??D.使用低鈣培養(yǎng)液??E.避光操作答案：A、B、C、E解析：低鈣抑制精子運動，D錯誤。39.下列哪些屬于“3R”原則在繁殖管理中的體現(xiàn)A.一雄多雌減少雄鼠用量??B.冷凍備份減少活體維持??C.交叉撫養(yǎng)減少代乳鼠??D.終點麻醉采血??E.使用高日齡雌鼠答案：A、B、C、D解析：高日齡雌鼠繁殖力下降，違背優(yōu)化原則。40.下列哪些因素會導(dǎo)致“假孕”雌鼠黃體維持失敗A.結(jié)扎雄鼠睪酮水平過低??B.光照周期紊亂??C.受體雌鼠體重<18g??D.交配刺激不足??E.環(huán)境噪音>85dB答案：B、C、D、E解析：結(jié)扎雄鼠睪酮水平不影響交配刺激，A錯誤。三、判斷題（每題1分，共10分。正確打“√”，錯誤打“×”）41.小鼠排卵數(shù)與體重呈線性正相關(guān)。答案：×解析：>30g后平臺，甚至因脂肪組織芳香化酶升高導(dǎo)致排卵下降。42.冷凍胚胎在液氮蒸汽相保存可完全避免交叉污染。答案：×解析：蒸汽相仍有氣溶膠傳播風(fēng)險，需使用套管二次密封。43.采用“同步發(fā)情”可減少因個體差異造成的移植失敗。答案：√解析：PMSG+hCG同步化后，受體子宮環(huán)境一致，妊娠率提高15%。44.雄鼠連續(xù)交配5d后精子DNA碎片率顯著升高。答案：√解析：文獻(xiàn)報道碎片率由3%升至12%，與氧化應(yīng)激相關(guān)。45.代乳母鼠選擇“曾弒仔”史可提高接受率。答案：×解析：弒仔史為負(fù)面行為，應(yīng)淘汰。46.胚胎移植時，氣泡注入子宮腔有助于定位。答案：×解析：氣泡刺激子宮收縮，降低妊娠率。47.孕鼠臨產(chǎn)前筑巢評分與母性能力正相關(guān)。答案：√解析：評分≥3分者仔鼠存活率高20%。48.小鼠精子可在4℃保存48h仍保持受精能力。答案：×解析：4℃下超活化喪失，24h內(nèi)IVF率<5%。49.采用“透明帶鉆孔”可提高ICSI成功率。答案：√解析：Piezodriven鉆孔減少精子膜破裂，小鼠ICSI成功率由15%提至75%。50.冷凍卵巢復(fù)蘇后移植，可恢復(fù)自然交配產(chǎn)仔。答案：√解析：移植至腎包膜下，3周血管化，交配后產(chǎn)仔率與正常一致。四、填空題（每空1分，共20分）51.小鼠正常排卵數(shù)為________枚，超排C57BL/6J平均________枚。答案：8～12；25～3552.孕馬血清促性腺激素（PMSG）半衰期________h，故提前________h注射。答案：40～60；4853.體外受精液HTF中NaCl濃度為________mmol/L，滲透壓________mOsm。答案：101；31054.胚胎慢速冷凍從室溫降至–6℃的速率為________℃/min，植冰后________min開始降溫。答案：–2；1055.假孕受體需與________雄鼠交配，檢查________確認(rèn)交配成功。答案：結(jié)扎；陰道栓56.小鼠剖腹產(chǎn)取胎時間應(yīng)為孕________d，室溫保持________℃。答案：19；2557.精子冷凍保護劑中添加________可提高膜穩(wěn)定性，濃度為________%。答案：脫脂奶粉；358.胚胎移植至子宮時，胚胎發(fā)育階段為________，移植胚胎數(shù)________枚。答案：囊胚；10～1259.代乳仔鼠需用________擦拭混合氣味，代乳母鼠窩內(nèi)保留________只親生仔。答案：尿墊；260.冷凍胚胎長期保存需每________年抽檢一次，復(fù)蘇率應(yīng)>________%。答案：1；70五、簡答題（每題6分，共30分）61.簡述“2細(xì)胞阻滯”的分子機制及三項改善措施。答案：機制：C57BL/6J胚胎在常規(guī)培養(yǎng)液中，ZGA（合子基因組激活）失敗，表現(xiàn)為線粒體膜電位下降、ROS升高、H3K4me3異常。措施：①添加EDTA螯合重金屬，減少氧化應(yīng)激；②使用KSOMAA降低葡萄糖，促進丙酮酸氧化；③添加β巰基乙醇維持GSH水平。62.說明冷凍精子復(fù)蘇后IVF率低的排查流程。答案：①復(fù)蘇活力：CASA測總/前向運動率<30%→冷凍液或液氮問題；②獲能時間：HTF1hvs1.5h對比；③卵母細(xì)胞質(zhì)量：超排數(shù)<20枚→PMSG批次或雌鼠周齡；④培養(yǎng)條件：CO?濃度、液滴pH、油毒性；⑤受精比例：精子密度1×10?/mLvs2×10?/mL；⑥交叉實驗：用已知高活力精子與待測卵母細(xì)胞互配，定位環(huán)節(jié)。63.列舉判定代乳成功的五項指標(biāo)并給出評分標(biāo)準(zhǔn)。答案：①仔鼠體重日增≥0.5g（2分）；②母鼠筑巢評分≥3分（2分）；③泌乳斑明顯（1分）；④仔鼠皮膚紅潤、叫聲清脆（1分）；⑤第7天存活率≥90%（2分）。總分≥6分為成功。64.描述胚胎移植“子宮系膜法”操作關(guān)鍵步驟。答案：①麻醉受體，背部開口暴露卵巢子宮；②用細(xì)鑷撕開子宮系膜，避開血管；③26G針頭穿刺子宮壁，形成隧道；④移植槍沿隧道插入0.5cm，緩慢注入囊胚10枚；⑤荷包縫合1針，復(fù)位臟器，縫合皮膚；⑥術(shù)后保溫，單籠恢復(fù)。65.說明如何通過“Rederivation”實現(xiàn)病毒凈化并給出時間軸。答案：D0：選擇孕2dpc