2026屆新高考生物沖刺復(fù)習(xí)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用考點(diǎn)一培養(yǎng)基考點(diǎn)二無菌技術(shù)考點(diǎn)三微生物的純培養(yǎng)考點(diǎn)四

微生物的數(shù)量測(cè)定培養(yǎng)基【P309】011.培養(yǎng)基的概念：人們按照微生物對(duì)

的不同需求，配制出供其

的營養(yǎng)基質(zhì)。2.培養(yǎng)基的用途：用以

、

、

、

微生物或

。營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖培養(yǎng)分離鑒定保存分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體。菌落積累其代謝物【擴(kuò)展】鑒定菌種的重要依據(jù)：菌落的大小、形狀、顏色、透明度、光澤度等。培養(yǎng)基【P309】013.種類：劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì).

.培養(yǎng)基不加凝固劑。常用于

；.

.培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂。微生物的

、

，活菌

，菌種

；用途.

.培養(yǎng)基允許特定種類微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長的培養(yǎng)基。富集、分離出特定的微生物.

.培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，用以鑒別不同種類的微生物。鑒別不同的微生物液體固體分離鑒定計(jì)數(shù)保藏工業(yè)生產(chǎn)瓊脂：是一種從紅藻中提取的多糖，在98℃以上融化，在44℃以下凝固，瓊脂僅作凝固劑，不提供能量和營養(yǎng)。選擇鑒別【素養(yǎng)提升】選擇培養(yǎng)基的具體實(shí)例01具體處理原理目的固氮菌能利用空氣中的N2分離固氮菌自養(yǎng)型微生物能利用空氣中的CO2分離自養(yǎng)型微生物大部分微生物不能利用石油中的能量分離石油分解菌金黃色葡萄球菌具有獨(dú)特的耐鹽性分離金黃色葡萄球青霉素能抑制細(xì)菌生長，對(duì)真菌無作用分離酵母菌、霉菌等真菌大部分微生物不耐高溫分離水生棲熱菌不加氮源不加碳源以石油為唯一碳源加高濃度食鹽加入青霉素高溫環(huán)境培養(yǎng)【素養(yǎng)提升】鑒別培養(yǎng)基的具體實(shí)例01具體處理原理目的尿素被分解產(chǎn)生氨，培養(yǎng)基呈堿性，使酚紅指示劑變紅。鑒別尿素分解菌剛果紅與纖維素能形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈。鑒別纖維素分解菌在伊紅-亞甲藍(lán)培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌菌落呈深紫色，并有金屬光澤。鑒別大腸桿菌酚紅培養(yǎng)基剛果紅培養(yǎng)基伊紅-亞甲藍(lán)培養(yǎng)基剛果紅培養(yǎng)基鑒別纖維素分解菌伊紅-亞甲藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌酚紅培養(yǎng)基鑒別尿素分解菌培養(yǎng)基【P309】014.培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：①主要營養(yǎng)物質(zhì)：基本成分舉例作用碳源

碳源CO2、CO32-、HCO3-為

微生物提供碳元素

碳源牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖等為

微生物提供碳元素氮源

氮源NH4＋、NO3-、NH3等是微生物合成

、

等物質(zhì)所必需的。

氮源牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等K2HPO4、MgSO4、FeSO4、Ca(NO3)2、NaCl等①調(diào)節(jié)

平衡；②調(diào)節(jié)

平衡，等；水--①良好的

；②參與

反應(yīng)，等；自養(yǎng)異養(yǎng)注：含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源蛋白質(zhì)核酸無機(jī)有機(jī)無機(jī)有機(jī)酸堿滲透壓溶劑生物化學(xué)無機(jī)鹽培養(yǎng)基【P309】014.培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：②其他條件：pH、

、氧氣。特殊營養(yǎng)物質(zhì)【擴(kuò)展】特殊營養(yǎng)物質(zhì)指一類調(diào)節(jié)微生物正常生長代謝所必需，但不能用簡(jiǎn)單的碳源、氮源自行合成的有機(jī)物。如：維生素、氨基酸、堿基、卟啉、胺類等。微生物乳酸桿菌霉菌細(xì)菌厭氧微生物特殊需求添加.

.pH調(diào)至.

.pH調(diào)至.

..

.維生素酸性中性或弱堿性無氧注：牛肉膏和蛋白胨來源于動(dòng)物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)。培養(yǎng)基01常見的細(xì)菌培養(yǎng)基配方探究·實(shí)踐【資料】1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成組分含量提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g碳源、氮源和維生素等NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容至1000mL水【思考1】牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是

培養(yǎng)基，

判斷的依據(jù)是

?！舅伎?】牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中能為細(xì)菌同時(shí)提供碳源和氮源的物質(zhì)

是

。液體培養(yǎng)基中未加凝固劑牛肉膏和蛋白胨牛肉膏蛋白胨提示：不一定。例如，培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物時(shí)，一般不需要添加

，原因：

；培養(yǎng)固氮微生物時(shí)，一般不需要添加

，原因：

。光合細(xì)菌固氮菌(根瘤菌)培養(yǎng)基01常見的細(xì)菌培養(yǎng)基配方探究·實(shí)踐【思考3】培養(yǎng)微生物時(shí)，培養(yǎng)基中是否必須有碳源和氮源？碳源微生物可以利用空氣中的CO2氮源微生物可以利用空氣中的N2藍(lán)細(xì)菌-光合作用硝化細(xì)菌-化能合成作用固氮菌的同化類型是：異養(yǎng)型，需要有機(jī)碳源；考向

圍繞微生物的選擇培育，考查科學(xué)探究【P313】1.（2023·廣東卷）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是（）A.A點(diǎn)時(shí)取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B.B點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C.B點(diǎn)時(shí)取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D.C點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基D012.廚房中的廚余垃圾多為濕垃圾，濕垃圾處理的有效方法之一是用微生物對(duì)其進(jìn)行降解。如圖表示篩選高效降解淀粉菌種的過程。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.配制培養(yǎng)基后需進(jìn)行滅菌處理，常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法B.菌落①與菌落②周圍產(chǎn)生了透明圈，說明菌落①與菌落②能產(chǎn)生淀粉酶C.培養(yǎng)基上的一個(gè)菌落可能來源于樣品稀釋液中的一個(gè)甚至幾個(gè)活菌D.初步判斷培養(yǎng)基上菌種的類型，需要用顯微鏡觀察菌體的形態(tài)特征考向

圍繞微生物的選擇培育，考查科學(xué)探究【P313】D01培養(yǎng)基滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌法，√；淀粉遇到碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，因此會(huì)形成透明圈，√；由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上顯示的只是一個(gè)菌落，√；用肉眼觀察菌落的形態(tài)特征,即可初步判斷培養(yǎng)基上菌種的類型，×；4.（2024·江西卷）聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯（PET）是一種聚酯塑料，會(huì)造成環(huán)境污染。磷脂酶可催化PET降解。為獲得高產(chǎn)磷脂酶的微生物，研究人員試驗(yàn)了2種方法?；卮鹣铝袉栴}：(1)方法1從土壤等環(huán)境樣品中篩選高產(chǎn)磷脂酶的微生物。以磷脂酰乙醇胺(一種磷脂類物質(zhì))為唯一碳源制備

培養(yǎng)基，可提高該方法的篩選效率。除碳源外，該培養(yǎng)基中至少還應(yīng)該有

、

、

等營養(yǎng)物質(zhì)。(2)方法2采用

技術(shù)定向改造現(xiàn)有微生物，以獲得高產(chǎn)磷脂酶的微生物。除了編碼磷脂酶的基因外，該技術(shù)還需要

、

、

等“分子工具”?？枷?/p>

圍繞微生物的選擇培育，考查科學(xué)探究【P314】01選擇氮源水無機(jī)鹽轉(zhuǎn)基因(重組DNA/基因工程)限制酶DNA連接酶載體(3)除了上述2種方法之外，還可以通過

技術(shù)非定向改造現(xiàn)有微生物，篩選獲得能夠高產(chǎn)磷脂酶的微生物。(4)將以上獲得的微生物接種到鑒別培養(yǎng)基（在牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中添加2%的瓊脂粉和適量的卵黃磷脂）平板上培養(yǎng)，可以通過觀察卵黃磷脂水解圈的大小，初步判斷微生物產(chǎn)磷脂酶的能力，但不能以水解圈大小作為判斷微生物產(chǎn)磷脂酶能力的唯一依據(jù)。從平板制作的角度分析，其原因可能是:

。考向

圍繞微生物的選擇培育，考查科學(xué)探究【P314】01誘變育種培養(yǎng)基的卵黃磷脂的含量、pH和滅菌是否徹底等都會(huì)影響水解圈的大小無菌技術(shù)【P309】021.目的：獲得

。2.關(guān)鍵：

。3.常用方法：①

：對(duì)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒；②

：將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；防止雜菌污染純凈的微生物培養(yǎng)物消毒滅菌無菌技術(shù)·消毒02項(xiàng)目主要方法應(yīng)用范圍

消毒法①

℃消毒30min；②

℃處理15s；③

℃處理10～15s；牛奶、啤酒、果酒和醬油等不耐高溫的液體

消毒法100℃煮沸

min；家庭餐具等生活用品

消毒紫外燈照射

min；適量噴灑

或

可加強(qiáng)效果；接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)

消毒用體積分?jǐn)?shù)為

；擦拭實(shí)驗(yàn)者雙手

水源1.概念：指使用較為

的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部

微生物。2.常用方法：溫和一部分巴氏63-6572-7680-85煮沸5-6紫外線30化學(xué)藥物70%的酒精氯氣擴(kuò)展：生物消毒法是指利用生物或其代謝物除去環(huán)境中的部分微生物的方法。苯酚煤酚皂無菌技術(shù)·消毒02牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是什么？思考提示：在達(dá)到

目的的同時(shí)，

損失較少。消毒用的酒精是不是濃度越高越好？思考提示：不是，若酒精濃度過高，菌體表面

過快而凝固成一層保護(hù)膜，酒精不能滲入其中；但若酒精濃度過低，

。殺菌能力減弱消毒營養(yǎng)物質(zhì)蛋白質(zhì)變性無菌技術(shù)·滅菌021.概念：指使用

的理化方法殺死物體內(nèi)外

的微生物，包括

和

。強(qiáng)烈所有芽孢孢子芽孢：有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。孢子：細(xì)菌、原生動(dòng)物、真菌和植物等產(chǎn)生的一種有繁殖或休眠作用的生殖細(xì)胞，能直接發(fā)育成新個(gè)體。注：芽孢和孢子具有高度的耐熱性，可抗化學(xué)藥物和抗輻射。無菌技術(shù)·滅菌022.常用方法：項(xiàng)目主要方法應(yīng)用范圍

滅菌直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒微生物的接種工具、接種時(shí)用的試管口或瓶口等。

滅菌干熱滅菌箱中，160～170℃加熱2～3h耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等。

滅菌高壓蒸汽滅菌效果最好：高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，100kPa，溫度121℃,15～30min培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、無菌水等，生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室常用。灼燒干熱濕熱無菌技術(shù)·小結(jié)02類型理化因素作用強(qiáng)度消滅微生物數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒滅菌

1.比較消毒和滅菌對(duì)微生物作用效果的差異：較為溫和強(qiáng)烈部分微生物全部微生物一般不能能2.無菌操作過程中，應(yīng)注意：①避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與

.相接觸。②實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在

上并在

.火焰附近進(jìn)行。周圍物品超凈工作臺(tái)酒精燈無菌技術(shù)·小結(jié)02無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么作用？思考無菌技術(shù)還能有效避免污染環(huán)境以及操作者自身被微生物感染。注意：①實(shí)驗(yàn)室中，切不可吃東西、喝水，離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，

以防止被微生物感染。②使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。微生物的純培養(yǎng)【P310】03接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體。由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體。獲得純培養(yǎng)物的過程。培養(yǎng)物純培養(yǎng)物純培養(yǎng)注：分散的微生物在適宜的

表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有

的子細(xì)胞群體叫作菌落?！緮U(kuò)展】鑒定菌種的重要依據(jù)：菌落的大小、形狀、顏色等。固體培養(yǎng)基一定形態(tài)結(jié)構(gòu)微生物的純培養(yǎng)【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐一、實(shí)驗(yàn)原理：采用

法和

法將單個(gè)微生物分散在

培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的

。平板劃線稀釋涂布平板固體純培養(yǎng)物即分離純化稀釋涂布平板法：一系列的梯度稀釋、涂布固體培養(yǎng)基(平板)；平板劃線法:接種環(huán)在固體培養(yǎng)基(平板)表面連續(xù)劃線；微生物的純培養(yǎng)·平板劃線法【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐二、方法步驟：1.制備培養(yǎng)基：①

→②

→③

。配置培養(yǎng)基滅菌倒平板①配置培養(yǎng)基：稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向?yàn)V液中加入20g葡萄糖、

，用蒸餾水定容至1000ml?！鶕?jù)物理性質(zhì)劃分：

培養(yǎng)基。固體15～20瓊脂微生物的純培養(yǎng)·平板劃線法【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐②滅菌：將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15-30min。將5-8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃滅菌2h。→培養(yǎng)基滅菌：

；→培養(yǎng)皿滅菌：

；濕熱滅菌法干熱滅菌法注：調(diào)節(jié)pH應(yīng)在定容完成之后，滅菌之前進(jìn)行操作。微生物的純培養(yǎng)·平板劃線法【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐③倒平板：a.溫度：

左右；b.操作：在

附近。(1)拔出錐形瓶的棉塞。(2)將瓶口迅速通過火焰。(3)用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基(10~20mL)倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋。(4)等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置?！康模和ㄟ^灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基;→注：不能完全打開皿蓋，避免雜菌污染培養(yǎng)基;→目的：防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染；避免培養(yǎng)基的水分過快的揮發(fā)。50℃酒精燈火焰→倒平板過程用到的滅菌方法是：

；灼燒滅菌法視頻：倒平板03分離純化方法：平板劃線法微生物的純培養(yǎng)·平板劃線法【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐2.接種和分離酵母菌：通過

在固體培養(yǎng)基（平板）表面

的操作，將聚集的菌種逐步

到培養(yǎng)基表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到由單個(gè)微生物繁殖而形成的

。連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法接種環(huán)連續(xù)劃線稀釋分散單菌落微生物的純培養(yǎng)·平板劃線法【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐具體操作：(1)將接種環(huán)放在火焰上

，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅；(2)在

冷卻接種環(huán)。同時(shí)，拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞；(4)在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液；(3)試管口通過

；火焰旁→防止接種環(huán)溫度過高殺死菌種;火焰→注：僅蘸取一次；灼燒微生物的純培養(yǎng)·平板劃線法【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐具體操作：(6)在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃3-5條

，蓋上皿蓋；(5)將試管口通過火焰，并塞上

；(7)灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從

劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。棉塞→注：不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基；→注：不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連?！臃N過程用到的滅菌方法是：

；灼燒滅菌法平行線第一次微生物的純培養(yǎng)·平板劃線法【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐為什么最后一次的劃線與第一次的劃線不能相連？思考12345圖中共劃了5個(gè)區(qū)域，在每次劃線前后均需要對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌，因此共需要灼燒接種環(huán)多少次？思考最后一次的劃線已經(jīng)將微生物稀釋成單個(gè)的細(xì)胞，如果與第一次的劃線相連則增加了微生物的數(shù)目，得不到純化的效果。6次。灼燒時(shí)期目的取菌種前避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基。每次劃線前殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線的菌種均來自

，從而使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸

，直至得到

；接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免微生物

；微生物的純培養(yǎng)·平板劃線法【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐第1區(qū)劃線接種環(huán)滅菌（灼燒）第2區(qū)劃線接種環(huán)滅菌（灼燒）接種環(huán)滅菌（灼燒）第5區(qū)劃線接種環(huán)滅菌（灼燒）污染環(huán)境和感染操作者【核心歸納】不同時(shí)期灼燒接種環(huán)的目的：上次劃線的末端減少單個(gè)細(xì)胞視頻：接種和分離（平板劃線法）03微生物的純培養(yǎng)·平板劃線法【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐3.培養(yǎng)酵母菌：完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將

的平板和一個(gè)

的平板倒置，放入

℃左右(培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異)的

中培養(yǎng)24-48h。接種后未接種28恒溫培養(yǎng)箱設(shè)置未接種平板組的意義是什么？思考對(duì)照組，通過觀察未接種平板是否有菌落存在以確定培養(yǎng)基

或

。是否被污染滅菌是否徹底三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析：1.在未接種的培養(yǎng)基表面是否有

生長；

注：若有菌落生長，則說明

。2.在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，是否有單菌落。

這些單菌落的

、

和

是否一致，

注：酵母菌菌落一般表面光滑，多呈乳白色。3.若在培養(yǎng)基中觀察到不同形態(tài)的菌落，

原因可能是

。微生物的純培養(yǎng)【P310】03酵母菌的純培養(yǎng)探究·實(shí)踐菌液不純，混入其他雜菌，或在實(shí)驗(yàn)操作過程中被雜菌污染顏色培養(yǎng)基被污染，應(yīng)該重新制備菌落形態(tài)大小結(jié)合培養(yǎng)基的配制和無菌技術(shù)，考查科學(xué)思維【P311】1.（2024·湖南卷）微生物平板劃線和培養(yǎng)的具體操作如圖所示，下列操作正確的是（）A.①②⑤⑥B.③④⑥⑦C.①②⑦⑧

D.①③④⑤D03②中拔出棉塞后應(yīng)握住棉塞上部；⑥中劃線時(shí)不能將培養(yǎng)皿的皿蓋完全拿開，應(yīng)只打開一條縫隙；⑦中劃線時(shí)第5次的劃線不能與第1次的劃線相連；⑧中平板應(yīng)倒置培養(yǎng)結(jié)合培養(yǎng)基的配制和無菌技術(shù)，考查科學(xué)思維【P311】2.分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面繁殖形成的肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，稱為菌落。由單個(gè)微生物在固體培養(yǎng)基表面繁殖形成的單菌落就是純培養(yǎng)物，獲取純培養(yǎng)物的常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。下列有關(guān)這兩種方法的說法，錯(cuò)誤的是（）A.這兩種方法的關(guān)鍵都是要防止雜菌污染以保證獲得培養(yǎng)物的純度B.這兩種方法均需同時(shí)將接種的平板和未接種的平板倒置進(jìn)行培養(yǎng)C.接種環(huán)和涂布器均需要在火焰上灼燒，且涂布器灼燒前需用酒精引燃D.用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，所獲得的數(shù)據(jù)往往比實(shí)際值大D03獲得純培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染，√；為驗(yàn)證培養(yǎng)基是否被污染及滅菌是否徹底，題述兩種方法均需，√；接種過程中使用灼燒滅菌法，√；稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物的計(jì)數(shù)時(shí)，所獲得的數(shù)據(jù)往往比實(shí)際值小，×；考向

圍繞微生物的純培養(yǎng)，考查科學(xué)探究【P311】3.（2020·江蘇卷）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是（）A.倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整B.圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落C.該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的D.菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色B03倒平板后無需間歇晃動(dòng)，×；Ⅲ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量較少，可從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，√；Ⅲ區(qū)中存在單菌落，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果能達(dá)到菌種純化的目的，×；菌落周圍的纖維素被降解后，會(huì)形成透明圈，×；考向

圍繞微生物的純培養(yǎng)，考查科學(xué)探究【P311】4.如圖為實(shí)驗(yàn)室中酵母菌純培養(yǎng)過程的部分操作步驟，下列說法正確的是（）C03A.微生物的純培養(yǎng)物就是指不含代謝廢物的微生物培養(yǎng)物B.步驟①中，用手觸摸估計(jì)培養(yǎng)基冷卻至室溫后開始倒平板C.步驟①使用的培養(yǎng)基制備過程是先調(diào)pH再滅菌D.③到④過程中，每次劃線后都需要灼燒接種環(huán)并蘸取菌液由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，×；步驟①中，用手觸摸估計(jì)培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，開始倒平板，×；調(diào)pH的酸堿溶液中也可能存在雜菌，故需要先調(diào)pH，再滅菌，√；只需要在第一次劃線前蘸取菌液，后面均不需要，×；微生物的數(shù)量測(cè)定·①顯微鏡直接計(jì)數(shù)法【P312】041.原理：利用特定的

板或

板，在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，然后再計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量。2.特點(diǎn)：

，能觀察微生物的形態(tài)特征。3.缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌而使計(jì)數(shù)結(jié)果偏

。細(xì)菌計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)大【相關(guān)信息】細(xì)菌計(jì)數(shù)板和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理相同。①血細(xì)胞計(jì)數(shù)板比細(xì)菌計(jì)數(shù)板厚，常用于相對(duì)較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等的計(jì)數(shù)。②細(xì)菌計(jì)數(shù)板可對(duì)細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。有什么方法可以幫助我們通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)活菌？思考加入臺(tái)盼藍(lán)染液(活菌-無色)；快速、直觀微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】041.原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)

，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)

。注：通過統(tǒng)計(jì)平板上的

，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌?；罹鋽?shù)2.計(jì)數(shù)原則：①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)②在同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)

個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出

。30～3003平均值→重復(fù)實(shí)驗(yàn)的目的：減小實(shí)驗(yàn)誤差，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力和準(zhǔn)確性。107108√單菌落微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】04通過稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落的數(shù)目就是活菌實(shí)際數(shù)目嗎？是否存在誤差？思考提示：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目

。原因：

.

。低兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落注：統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】043.方法步驟：(1)系列稀釋操作①取1mL上清液加入盛有9mL

的試管中，依次

稀釋。無菌水等比【表述】①稀釋

倍的稀釋液；②稀釋

的稀釋液；10n10-n微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】043.方法步驟：(2)涂布平板操作①取菌液：取

mL菌液，滴加到

。②涂布器消毒：將涂布器放在盛有

的燒杯中。③涂布器滅菌：將涂布器放在火焰上灼燒，待

、涂布器

后，再進(jìn)行涂布。④涂布平板：用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿,使

。微量移液器0.1培養(yǎng)基表面酒精酒精燃盡冷卻涂布均勻微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】043.方法步驟：(3)培養(yǎng)待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板

，放入30～37℃的

.

中培養(yǎng)1～2d。在涂布有合適濃度菌液的培養(yǎng)基上就可以觀察到分離的單菌落。恒溫培養(yǎng)箱倒置恒溫培養(yǎng)箱視頻·稀釋涂布平板法04微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】044.結(jié)果分析：取10g土樣，求每克土壤中的活菌數(shù)?！舅伎肌?號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的活菌數(shù)約為

個(gè)。每克樣品中的菌株數(shù)=某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積×稀釋倍數(shù)1.1×108101倍102倍103倍104倍105倍平均數(shù)：110個(gè)微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】04土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)探究·實(shí)踐1.實(shí)驗(yàn)原理：①土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣?/p>

。②配制以

為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，能夠在該培養(yǎng)基中生長的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌。組分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0gH2O定容至1000mL脲酶尿素微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】04土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)探究·實(shí)踐2.實(shí)驗(yàn)流程：①土壤取樣：從酸堿度接近

且潮濕的土壤中取樣。先鏟去

，

在距地表約

的土壤層。②樣品稀釋：選用一定稀釋范圍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，

保證獲得菌落數(shù)在

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。③培養(yǎng)：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)

和培養(yǎng)

。④觀察：每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。⑤計(jì)算：計(jì)算單位體積中的菌落數(shù)。中性3～8cm表層土30～300溫度時(shí)間微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】04土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)探究·實(shí)踐3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)：未接種以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1×1041×1051×106牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基中的菌落數(shù)，說明

.

；該選擇培養(yǎng)基有篩選作用未接種的培養(yǎng)基上無菌落的生長，說明：

；

；培養(yǎng)基沒有被雜菌污染微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】04土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)探究·實(shí)踐【思考】甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。(1)甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230，該同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果

(填“可靠”或“不可靠”)。若不可靠，應(yīng)如何改進(jìn)？

。(2)乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)將21舍去，然后取平均值。該同學(xué)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理

(填“合理”或“不合理”)。微生物計(jì)數(shù)時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果差別很大的情況，應(yīng).

。不可靠沒有重復(fù)實(shí)驗(yàn)（至少涂布3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后計(jì)算平均值）不合理分析實(shí)驗(yàn)過程中可能的影響因素，從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因微生物的數(shù)量測(cè)定·②稀釋涂布平板法【P312】04土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)探究·實(shí)踐利用尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基分離出的微生物都是能分解尿素的微生物嗎？并說明理由。思考不一定；因?yàn)橛行┪⑸锟梢岳媚芊纸饽蛩氐募?xì)菌的代謝物進(jìn)行生長繁殖。【拓展應(yīng)用】04依據(jù)以上資料，思考如何對(duì)分離得到的微生物是否是分解尿素的細(xì)菌作進(jìn)一步鑒定？思考【資料1】細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高。【資料2】酸堿指示劑酚酞變色反應(yīng)區(qū)段：8.2-10.0，無色→紅色；酚紅變色反應(yīng)區(qū)段：6.8-8.0，黃色→紅色；提示：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入

，

若菌落周圍出現(xiàn)

，則可說明該菌種能夠分解尿素。酚紅指示劑(更靈敏)紅色環(huán)帶補(bǔ)充：紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說明分解能力越

。強(qiáng)考向

圍繞微生物的分離與計(jì)數(shù)，考查科學(xué)探究【P313】3.養(yǎng)殖場(chǎng)糞便是農(nóng)家肥的重要來源，其中某些微生物可使氨氮化合物轉(zhuǎn)化為尿素進(jìn)而產(chǎn)生NH3，影響畜禽健康。為篩選糞便中能利用氨氮化合物且減少NH3產(chǎn)生的微生物。興趣小組按圖進(jìn)行實(shí)驗(yàn)獲得目的菌株，正確的是（）C04考