病理學(xué)技術(shù)(中級(jí))基礎(chǔ)知識(shí)衛(wèi)生專業(yè)技術(shù)資格考試試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（共20題，每題1分，每題只有1個(gè)正確選項(xiàng)）1.以下哪種固定液適用于顯示組織中的糖原？A.10%中性福爾馬林B.乙醇C.Bouin液D.戊二醛答案：B（乙醇可沉淀糖原并防止其溶解，是糖原固定的常用試劑）2.HE染色中，伊紅染色后使用的分化劑是？A.70%乙醇B.鹽酸乙醇C.蒸餾水D.氨水答案：A（伊紅為酸性染料，70%乙醇可去除組織中多余的伊紅，實(shí)現(xiàn)分化）3.免疫組織化學(xué)技術(shù)中，“封閉”步驟的主要目的是？A.增強(qiáng)抗原抗體結(jié)合B.減少非特異性背景染色C.固定組織抗原D.促進(jìn)顯色反應(yīng)答案：B（封閉劑通過(guò)占據(jù)組織中的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，降低背景染色）4.透射電鏡樣品制備時(shí)，常用的脫水劑是？A.乙醇梯度溶液B.丙酮C.二甲苯D.正丁醇答案：A（電鏡樣品需通過(guò)梯度乙醇（50%→70%→80%→90%→95%→100%）逐步脫水，避免組織收縮）5.以下哪種染色方法用于顯示神經(jīng)髓鞘？A.剛果紅染色B.鍍銀染色C.甲苯胺藍(lán)染色D.蘇丹Ⅲ染色答案：B（神經(jīng)髓鞘含脂蛋白，鍍銀法可特異性顯示其結(jié)構(gòu)）6.組織切片厚度一般要求為？A.12μmB.35μmC.68μmD.910μm答案：B（常規(guī)石蠟切片厚度35μm，過(guò)厚或過(guò)薄會(huì)影響觀察）7.用于檢測(cè)DNA的原位雜交技術(shù)中，常用的標(biāo)記物是？A.生物素B.熒光素C.地高辛D.以上均是答案：D（生物素、熒光素、地高辛均為常用探針標(biāo)記物）8.冷凍切片的主要優(yōu)點(diǎn)是？A.保存酶活性B.切片更薄C.染色效果更穩(wěn)定D.適合長(zhǎng)期保存答案：A（冷凍切片避免了高溫固定和脫水過(guò)程，能較好保存酶活性）9.瑞氏染色主要用于觀察？A.上皮細(xì)胞B.血細(xì)胞C.神經(jīng)細(xì)胞D.骨組織答案：B（瑞氏染色是血細(xì)胞分類的經(jīng)典方法）10.以下哪種固定液可用于電鏡樣品的前固定？A.10%福爾馬林B.4%多聚甲醛+2.5%戊二醛C.乙醇D.Bouin液答案：B（電鏡樣品需用戊二醛或多聚甲醛固定，以保存超微結(jié)構(gòu)）11.免疫組化中，“抗原修復(fù)”的主要原因是？A.福爾馬林固定導(dǎo)致抗原表位被遮蔽B.抗體濃度過(guò)高C.組織切片過(guò)厚D.顯色劑失效答案：A（福爾馬林中的醛基與蛋白交聯(lián)，遮蔽抗原表位，需通過(guò)熱修復(fù)或酶消化暴露）12.革蘭染色中，關(guān)鍵的區(qū)分步驟是？A.結(jié)晶紫初染B.碘液媒染C.95%乙醇脫色D.沙黃復(fù)染答案：C（革蘭陽(yáng)性菌細(xì)胞壁厚，乙醇脫色后保留結(jié)晶紫碘復(fù)合物，呈紫色；陰性菌脫色后被沙黃復(fù)染為紅色）13.用于顯示淀粉樣物質(zhì)的染色方法是？A.PAS染色B.剛果紅染色C.普魯士藍(lán)染色D.網(wǎng)狀纖維染色答案：B（剛果紅與淀粉樣物質(zhì)結(jié)合后，在偏光顯微鏡下呈蘋果綠色雙折光）14.石蠟包埋時(shí)，組織透蠟的溫度應(yīng)高于石蠟熔點(diǎn)？A.12℃B.35℃C.68℃D.910℃答案：B（透蠟溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致組織收縮，通常高于熔點(diǎn)35℃）15.原位雜交中，“預(yù)雜交”的目的是？A.固定組織B.封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)C.促進(jìn)探針與靶序列結(jié)合D.去除內(nèi)源性酶答案：B（預(yù)雜交液中的無(wú)關(guān)DNA或RNA可封閉組織中的非特異性結(jié)合位點(diǎn)）16.吉姆薩染色主要用于觀察？A.細(xì)菌B.寄生蟲C.脂肪D.膠原纖維答案：B（吉姆薩染色對(duì)瘧原蟲、利什曼原蟲等寄生蟲著色良好）17.以下哪種試劑用于脫蠟？A.乙醇B.二甲苯C.丙酮D.冰醋酸答案：B（二甲苯是常用脫蠟劑，可溶解石蠟）18.免疫組化結(jié)果判讀時(shí)，“陽(yáng)性對(duì)照”的作用是？A.驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的可靠性B.排除假陽(yáng)性C.確定抗體濃度D.觀察非特異性染色答案：A（陽(yáng)性對(duì)照使用已知陽(yáng)性組織，若結(jié)果陰性提示實(shí)驗(yàn)步驟有誤）19.電鏡樣品包埋常用的樹脂是？A.石蠟B.環(huán)氧樹脂C.明膠D.瓊脂答案：B（環(huán)氧樹脂硬度高，適合超薄切片）20.以下哪種染色方法可同時(shí)顯示細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)？A.HE染色B.剛果紅染色C.蘇丹Ⅳ染色D.銀染法答案：A（蘇木精染核呈藍(lán)色，伊紅染質(zhì)呈紅色）二、多項(xiàng)選擇題（共10題，每題2分，每題有25個(gè)正確選項(xiàng)，少選或多選均不得分）1.常用的組織固定液包括？A.10%中性福爾馬林B.乙醇C.戊二醛D.苦味酸E.冰醋酸答案：ABCD（冰醋酸通常作為固定液的添加劑，單獨(dú)使用會(huì)導(dǎo)致組織膨脹）2.影響免疫組化結(jié)果的因素包括？A.組織固定時(shí)間B.抗體濃度C.孵育溫度D.切片厚度E.顯色時(shí)間答案：ABCDE（所有選項(xiàng)均會(huì)影響抗原暴露、抗體結(jié)合及顯色效果）3.石蠟切片制備的主要步驟包括？A.固定B.脫水C.透明D.包埋E.切片答案：ABCDE（固定→脫水→透明→透蠟→包埋→切片→貼片→烤片為完整流程）4.用于顯示多糖的染色方法有？A.PAS染色B.阿爾辛藍(lán)染色C.剛果紅染色D.甲苯胺藍(lán)染色E.蘇丹Ⅲ染色答案：AB（PAS顯示糖原等中性多糖，阿爾辛藍(lán)顯示酸性黏多糖）5.電鏡樣品制備的關(guān)鍵步驟包括？A.快速固定B.充分脫水C.樹脂包埋D.超薄切片E.重金屬染色答案：ABCDE（電鏡樣品需在30分鐘內(nèi)固定，脫水需徹底，包埋后切5080nm薄片，用鈾鉛染色增強(qiáng)反差）6.免疫組化中，“內(nèi)源性生物素”干擾常見(jiàn)于哪些組織？A.肝臟B.腎臟C.脾臟D.腦組織E.肌肉組織答案：ABC（肝、腎、脾等富含生物素，需用阻斷劑處理）7.以下哪些染色方法屬于特殊染色？A.HE染色B.網(wǎng)狀纖維染色C.彈力纖維染色D.革蘭染色E.瑞氏染色答案：BCDE（HE為常規(guī)染色，其余為顯示特定成分的特殊染色）8.冷凍切片的缺點(diǎn)包括？A.切片厚度不均B.易脫片C.長(zhǎng)期保存困難D.酶活性保存差E.染色時(shí)間長(zhǎng)答案：ABC（冷凍切片因未脫水，易脫片；未包埋導(dǎo)致厚度不均；需低溫保存，長(zhǎng)期穩(wěn)定性差）9.原位雜交技術(shù)的應(yīng)用包括？A.檢測(cè)病毒核酸B.基因定位C.細(xì)胞內(nèi)mRNA表達(dá)D.蛋白質(zhì)定量E.染色體畸變分析答案：ABCE（原位雜交檢測(cè)核酸，不能直接檢測(cè)蛋白質(zhì)）10.組織脫水時(shí)，常用的脫水劑有？A.乙醇B.丙酮C.二甲苯D.正丁醇E.叔丁醇答案：ABDE（二甲苯是透明劑，非脫水劑）三、填空題（共10空，每空1分）1.組織固定的主要目的是防止（自溶）和（腐敗）。2.HE染色中，蘇木精屬于（堿性）染料，主要染（細(xì)胞核）。3.免疫組化中，常用的酶標(biāo)記物是（辣根過(guò)氧化物酶）和（堿性磷酸酶）。4.電鏡樣品染色常用的重金屬鹽是（醋酸鈾）和（檸檬酸鉛）。5.原位雜交中，探針的類型包括（DNA探針）、（RNA探針）和（寡核苷酸探針）。四、簡(jiǎn)答題（共5題，每題5分）1.簡(jiǎn)述石蠟切片制備的主要步驟及注意事項(xiàng)。答案：步驟：①固定：24小時(shí)內(nèi)完成，固定液體積為組織的1020倍；②脫水：梯度乙醇（70%→80%→95%→100%），每級(jí)3060分鐘；③透明：二甲苯23次，至組織透明；④透蠟：60℃石蠟23次，每次12小時(shí)；⑤包埋：石蠟溫度高于熔點(diǎn)35℃；⑥切片：厚度35μm，展片水溫4550℃；⑦烤片：60℃烤2小時(shí)。注意事項(xiàng)：組織大小不超過(guò)2cm×1.5cm×0.3cm；脫水需徹底，避免透明不充分；透蠟時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致組織變脆。2.比較免疫熒光技術(shù)與免疫酶標(biāo)技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)。答案：免疫熒光技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：快速（34小時(shí)完成）、可雙標(biāo)（不同熒光標(biāo)記）、定位直觀；缺點(diǎn)：熒光易淬滅（需立即觀察）、背景熒光干擾、無(wú)法長(zhǎng)期保存。免疫酶標(biāo)技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：顯色穩(wěn)定（可長(zhǎng)期保存）、靈敏度高（酶放大信號(hào)）、適用普通光鏡；缺點(diǎn)：步驟多（需顯色反應(yīng)）、雙標(biāo)難度大（酶底物易重疊）。3.簡(jiǎn)述PAS染色的原理及主要應(yīng)用。答案：原理：多糖（如糖原、黏多糖）的醛基與過(guò)碘酸反應(yīng)生成醛基，醛基與無(wú)色品紅（Schiff試劑）結(jié)合形成紫紅色復(fù)合物。應(yīng)用：①診斷糖原累積?。ǜ渭?xì)胞、肌細(xì)胞內(nèi)糖原增多）；②顯示基底膜（如腎小球基底膜）；③鑒別腺上皮黏液（中性黏液PAS陽(yáng)性，酸性黏液阿爾辛藍(lán)陽(yáng)性）；④檢測(cè)真菌（如念珠菌、隱球菌的細(xì)胞壁含多糖）。4.電鏡樣品固定時(shí)，為何需要“前固定”和“后固定”？答案：前固定（常用2.5%戊二醛）：快速交聯(lián)蛋白質(zhì)，保存超微結(jié)構(gòu)（如細(xì)胞膜、細(xì)胞器）；后固定（1%四氧化鋨）：與脂類結(jié)合，增強(qiáng)電子密度（顯示膜性結(jié)構(gòu)），同時(shí)進(jìn)一步固定蛋白質(zhì)。兩者聯(lián)合使用可全面保存細(xì)胞的蛋白和脂類成分，提高電鏡圖像的反差和分辨率。5.簡(jiǎn)述免疫組化結(jié)果判讀的基本原則。答案：①陽(yáng)性定位：明確陽(yáng)性信號(hào)是胞核、胞質(zhì)還是胞膜（如ER陽(yáng)性為胞核，CK陽(yáng)性為胞質(zhì)）；②陽(yáng)性強(qiáng)度：分陰性（）、弱陽(yáng)性（+）、中等陽(yáng)性（++）、強(qiáng)陽(yáng)性（+++）；③陽(yáng)性比例：計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞的百分比（如HER2需≥10%細(xì)胞膜著色）；④對(duì)照驗(yàn)證：陽(yáng)性對(duì)照必須陽(yáng)性，陰性對(duì)照（無(wú)抗體）必須陰性，排除假陽(yáng)性/假陰性；⑤結(jié)合形態(tài)：陽(yáng)性信號(hào)需與組織學(xué)結(jié)構(gòu)一致，避免非特異性背景干擾。五、案例分析題（共2題，每題10分）案例1：某實(shí)驗(yàn)室接收1例胃黏膜活檢標(biāo)本，固定液為10%福爾馬林（pH6.0），固定時(shí)間48小時(shí)。切片HE染色后，鏡下見(jiàn)細(xì)胞核著色淺淡，細(xì)胞質(zhì)紅染不均。分析可能原因及解決方法。答案：可能原因：①固定液pH過(guò)低（正常中性福爾馬林pH7.07.2），酸性環(huán)境導(dǎo)致核酸（DNA）水解，影響蘇木精染色；②固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（胃黏膜為軟組織，812小時(shí)足夠），過(guò)度固定導(dǎo)致組織硬脆，切片時(shí)細(xì)胞破裂，染色不均；③脫水不徹底（若固定后未及時(shí)脫水，福爾馬林可與組織成分反應(yīng)，阻礙染料滲透）。解決方法：①使用中性福爾馬林（pH7.07.2），固定液體積為組織的10倍；②胃黏膜固定時(shí)間調(diào)整為612小時(shí)；③脫水前用流水沖洗30分鐘，去除多余福爾馬林；④染色前延長(zhǎng)蘇木精染色時(shí)間（510分鐘），或使用氨水溶液（藍(lán)化）增強(qiáng)核著色。案例2：某實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行CK（細(xì)胞角蛋白）免疫組化染色，結(jié)果顯示所有切片（包括陽(yáng)性對(duì)照）均為陰性。分析可能的故障環(huán)節(jié)及排查方法。答案：可能故障環(huán)節(jié)及排查：①抗體問(wèn)題：抗體失效（過(guò)期或保存不當(dāng)）、抗體濃度過(guò)低；排查：更換新抗體，按說(shuō)明書推薦濃度重新實(shí)驗(yàn)。②抗原修復(fù)：未進(jìn)行抗原修復(fù)（福爾馬林固定需熱修復(fù)）、修復(fù)時(shí)間不足；排查：檢查修復(fù)液（EDTA或檸檬酸）、溫