北京義翹神州科技股份有限公司——義翹神州以精品試劑助力您的科研事業(yè)！義翹講堂——《聚焦2025版中國藥典：生物制品病毒安全性控制策略變革深度解讀》答疑環(huán)節(jié)匯總非常感謝大家對義翹講堂的大力支持，也感謝義翹神州生物安全檢測中心負(fù)責(zé)人徐明明老師的精彩分享。本次講座已圓滿結(jié)束，我們對直播過程中答疑環(huán)節(jié)大家的問題及老師的解答進(jìn)行整理如下。如果對我們義翹講堂欄目有任何建議或者還想聽其他更多主題相關(guān)的講座，歡迎來信和我們交流，我們會(huì)根據(jù)您的寶貴意見不斷完善，給大家?guī)砀喔实闹v座內(nèi)容！marketing@

問題1：老師CNAS申報(bào)病毒清除驗(yàn)證工藝中，我可以使用BUFFER代替物質(zhì)么？答：如果樣品本身對檢測用細(xì)胞影響過大，或樣品本身有較明顯的殺滅病毒的作用時(shí)是可以使用Buffer替代樣品進(jìn)行病毒清除驗(yàn)證的。問題2：老師，請問FDA申報(bào)IND需要做EOPC檢測嗎？答：需要做的。問題3：請問細(xì)胞類產(chǎn)品，是否在庫檢階段必須做致瘤？是否可以放在非臨床？答：一般需要根據(jù)細(xì)胞類型和工藝等進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估，庫檢階段通常是不需要做致瘤性檢測的，成瘤致瘤性檢測可以也是通常會(huì)放在非臨床安評中進(jìn)行評估。問題4：另外請問對于通用型CGT產(chǎn)品，細(xì)胞代次會(huì)有要求嗎？還是自行通過穩(wěn)定性試驗(yàn)做規(guī)定？答：通用型CGT產(chǎn)品的細(xì)胞代次無需硬性遵守某一數(shù)值，但必須通過系統(tǒng)的穩(wěn)定性試驗(yàn)（涵蓋功能、基因組、安全性）證明代次設(shè)定的合理性，并在工藝描述中明確控制策略。問題5：穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)里提到的插入位點(diǎn)研究IND階段可以暫時(shí)不做，BLA再做嗎？答：高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品（如整合型病毒載體LV/RV、基因編輯細(xì)胞）需在IND階段提供初步插入位點(diǎn)數(shù)據(jù)，以評估致瘤性潛在風(fēng)險(xiǎn)；低風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品（如非整合型載體AAV、瞬時(shí)表達(dá)mRNA）可能允許延遲至BLA階段。具體還要根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估和跟監(jiān)管機(jī)構(gòu)進(jìn)行溝通討論確定。問題6：細(xì)胞庫穩(wěn)定性的要求要做哪些？不同申報(bào)階段有不同嗎？答：細(xì)胞穩(wěn)定性通常包括生產(chǎn)穩(wěn)定性和貯存穩(wěn)定性。在生產(chǎn)穩(wěn)定性上，應(yīng)評估MCB/WCB與EOPC(或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞)之間產(chǎn)品的產(chǎn)量和特性的一致性。對于重組細(xì)胞，還應(yīng)評估MCB/WCB與EOPC(或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞)之間插人基因的序列、插人位點(diǎn)(如適用)、目的蛋白序列及翻譯后修飾的一致性。對于二倍體細(xì)胞從MCB/WCB至EOPC(或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞)還應(yīng)確保細(xì)胞的二倍性。在貯存穩(wěn)定性上，可通過生產(chǎn)中細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的活力數(shù)據(jù)來評估。若長時(shí)間未生產(chǎn)，也可按照一定的時(shí)間間隔對貯存細(xì)胞的活力進(jìn)行測定來評估。細(xì)胞庫穩(wěn)定性要求隨申報(bào)階段逐步升級：如IND階段需聚焦短期數(shù)據(jù)和關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)控制，允許部分?jǐn)?shù)據(jù)后續(xù)補(bǔ)充；BLA階段需提供完整生命周期數(shù)據(jù)，包括極限代次和長期穩(wěn)定性驗(yàn)證；特殊產(chǎn)品（基因修飾/干細(xì)胞）需附加致瘤性和分化穩(wěn)定性研究。問題7：25版藥典中，穩(wěn)定性要求中的“對于二倍體細(xì)胞，從MCB/WCB至EOPC（或生產(chǎn)限定代次）還應(yīng)確保細(xì)胞的二倍性”這句話，如何確保細(xì)胞的二倍性？用什么方法？答：二倍體細(xì)胞的基因組穩(wěn)定性直接關(guān)系到產(chǎn)品的安全性（如避免致瘤性）和有效性（如病毒疫苗生產(chǎn)的適應(yīng)性）。從MCB（主細(xì)胞庫）→WCB（工作細(xì)胞庫）→EOPC（生產(chǎn)末端細(xì)胞）的全過程中，需證明細(xì)胞未因傳代或工藝操作出現(xiàn)非整倍體或異倍體變異。檢測細(xì)胞二倍性的方法包括核型分析、流式細(xì)胞術(shù)、熒光原位雜交（FISH）、基因組拷貝數(shù)變異分析等方法。問題8：按照新藥典的要求，對于重組細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性，在IND申報(bào)期間，是不是可以只做MCB與EOPC的遺傳穩(wěn)定性就能滿足申報(bào)要求？答：對于早期臨床階段（如PhaseI/II），部分監(jiān)管機(jī)構(gòu)可能接受MCB+EOPC的數(shù)據(jù)，尤其是當(dāng)EOPC覆蓋了生產(chǎn)實(shí)際使用的最大傳代代數(shù)時(shí)。但需明確說明科學(xué)依據(jù)。不過如果生產(chǎn)涉及WCB，某些監(jiān)管機(jī)構(gòu)可能要求額外數(shù)據(jù)（如有限傳代次的穩(wěn)定性）。建議進(jìn)行MCB+WCB+EOPC的完整遺傳穩(wěn)定性研究。問題9：關(guān)于螺原體檢測，如何理解“如果細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用了植物源性材料”，細(xì)胞培養(yǎng)基中添加的成分單一的植物源的糖類是否在此列？答：成分單一的植物源糖類（如葡萄糖、蔗糖）通常不屬于“需檢測螺原體的植物源性材料”范疇，但需提供純度及工藝證明。復(fù)雜植物提取物建議檢測螺原體，尤其是含蛋白質(zhì)或多糖的成分。可通過預(yù)先溝通（Pre-IND）或補(bǔ)充風(fēng)險(xiǎn)評估報(bào)告與監(jiān)管機(jī)構(gòu)達(dá)成一致?；?yàn)榱私档惋L(fēng)險(xiǎn)直接檢測。問題10：老師，我想問一下成瘤性檢測提到對于一些低代次細(xì)胞可以用體外軟瓊脂克隆法初步評價(jià)成瘤性，這里的低代次藥典有規(guī)定嗎？我自己在網(wǎng)上找的是P10以內(nèi)不確定是否準(zhǔn)確？答：藥典（如中國藥典、USP、EP）通常不會(huì)明確規(guī)定一個(gè)絕對的“低代次”數(shù)字（如P10）。它們更側(cè)重于原則性的要求，即用于安全性評價(jià)（包括成瘤性）的細(xì)胞應(yīng)代表用于生產(chǎn)的細(xì)胞，并考慮其傳代歷史。P10是一個(gè)在研究和行業(yè)中經(jīng)常被提及的、相對合理的經(jīng)驗(yàn)性參考范圍，但它不是絕對的、普遍適用的硬性規(guī)定。關(guān)鍵取決于具體的細(xì)胞類型、建庫策略和實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。有些?xì)胞系可能建庫代次很低（如P5建立主庫），那么P10可能已經(jīng)相對較高了。用于成瘤性評價(jià)的細(xì)胞代次應(yīng)不高于生產(chǎn)過程中細(xì)胞所達(dá)到的最高代次，且最好接近或等同于工作細(xì)胞庫的擴(kuò)增水平。問題11：請問使用先驗(yàn)知識簡化病毒清除驗(yàn)證的策略適用于中國的抗體藥物申報(bào)嗎？還是僅僅適用于海外申報(bào)。答：按照法規(guī)國內(nèi)、國外申報(bào)均可以應(yīng)用先驗(yàn)知識。不過當(dāng)下是否可以應(yīng)用先驗(yàn)知識來減少病毒驗(yàn)證的步驟，主要取決于生產(chǎn)企業(yè)的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，如企業(yè)已對相同表達(dá)系統(tǒng)（如CHO細(xì)胞）、相同下游工藝（如層析步驟）積累了大量數(shù)據(jù)，監(jiān)管機(jī)構(gòu)可能會(huì)接受減少部分重復(fù)性驗(yàn)證。問題12：如何識別和控制外源性病毒風(fēng)險(xiǎn)？答：外源性病毒控制需采取“預(yù)防-檢測-清除”三位一體策略：預(yù)防：嚴(yán)格篩選原材料，避免引入風(fēng)險(xiǎn)；檢測：結(jié)合傳統(tǒng)方法（共培養(yǎng)）與新技術(shù)（NGS）多維度篩查；清除：工藝驗(yàn)證確保病毒去除能力，并制定應(yīng)急響應(yīng)預(yù)案。關(guān)鍵點(diǎn)：始終基于產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)特征和監(jiān)管要求動(dòng)態(tài)調(diào)整控制策略。問題13：細(xì)胞庫檢定周期一般是多久？如何預(yù)防細(xì)胞庫檢定失敗？答：檢定周期一般為2-3個(gè)月，預(yù)防細(xì)胞庫（如MCB、WCB）檢定失敗需要從建庫源頭、過程控制、檢測方法和管理體系多維度進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)防控。問題14：對于細(xì)胞庫的細(xì)菌/真菌檢查，是取分裝前的培養(yǎng)物上清，還是分裝后取凍存管復(fù)蘇培養(yǎng)后的上清？答：可以是取分裝前的培養(yǎng)物上清，能代表建庫的水平，但是如果建庫時(shí)沒有留取，使用復(fù)蘇后的上清也是可以的。問題15：菌種的穩(wěn)定性傳代研究一般做多少代？答：菌種穩(wěn)定性研究的代次需根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)代次擴(kuò)展1.5～3倍，并基于產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)動(dòng)態(tài)調(diào)整。常規(guī)微生物通常研究10～20代。穩(wěn)定性研究的核心是要在擬定的代次范圍內(nèi)，產(chǎn)品質(zhì)量和安全性不受影響。問題16：想問一下對于貼壁細(xì)胞是否不適合軟瓊脂克隆法，這個(gè)方法應(yīng)該更多適用于懸浮細(xì)胞，還有這個(gè)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)克隆形成率多少有規(guī)定嗎？答：貼壁細(xì)胞也可以進(jìn)行軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)，這是評價(jià)其錨定非依賴性生長能力的標(biāo)準(zhǔn)方法之一。問題17：病毒清除驗(yàn)證新要求下，常用工藝需要改進(jìn)嗎，怎么改進(jìn)？答：常規(guī)工藝還是以產(chǎn)品質(zhì)量為主，如果病毒清除效果不錯(cuò)，不需要改進(jìn)。如果項(xiàng)目正處于研發(fā)階段，可以考慮增加專用的病毒清除工藝步驟，比如：低pH/SD滅活、納米膜過濾等步驟。問題18：老師您好，新興生物制品，國內(nèi)外病毒檢測要求有無特殊情況？答：新興生物制品（如CAR-T、AAV基因治療、病毒樣顆粒疫苗等）的病毒風(fēng)險(xiǎn)與傳統(tǒng)生物藥不同，主要體現(xiàn)在以下三方面：·載體自身風(fēng)險(xiǎn)：病毒載體（如LV、AAV）可能產(chǎn)生復(fù)制型病毒（RCV）或整合突變?！ば滦臀廴疚铮簃RNA疫苗中脂納米顆粒（LNP）可能攜帶外源RNA病毒片段。·細(xì)胞基質(zhì)復(fù)雜性：iPSC或通用型CAR-T需關(guān)注潛伏病毒再激活（如HHV-6、EBV）。問題19：請問老師，抗體藥物申報(bào)中美IND，non-GMP的毒理批次是否需要檢測UPB？答：需要檢測。問題20： 請問無菌檢查陽性菌與國際一致了，但是訂購?fù)緩讲煌?，中國藥典的菌種為CMCC，國際為ATCC，請問中美雙報(bào)用什么來源的菌種，謝謝答：使用ATCC來源的菌種可以滿足中美申報(bào)要求。北京義翹神州科技股份有限公司（SinoBiologicalInc.北京義翹神州科技股份有限公司（SinoBiologicalInc.，股票簡稱：義翹神州）于2021年8月16日成功登陸深圳證券交易所創(chuàng)業(yè)板（股票代碼：301047）。義翹神州重點(diǎn)從事重組蛋白、抗體、基因、ELISA試劑盒、培養(yǎng)基等產(chǎn)品，以及重組蛋白、抗體的開發(fā)和生物分析檢測等服務(wù)，同時(shí)也為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供單克隆抗體候選藥物的臨床前規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)。未來，義翹神州將堅(jiān)持自主創(chuàng)新，不斷擴(kuò)充和優(yōu)化現(xiàn)有產(chǎn)品線