(2025年)細(xì)菌室試卷及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共40分）1.下列哪種細(xì)菌在革蘭染色中呈紫色？A.大腸埃希菌B.銅綠假單胞菌C.金黃色葡萄球菌D.流感嗜血桿菌2.巧克力培養(yǎng)基主要用于分離培養(yǎng)哪種細(xì)菌？A.肺炎鏈球菌B.淋病奈瑟菌C.枯草芽孢桿菌D.變形桿菌3.進(jìn)行血培養(yǎng)時(shí)，成人每瓶培養(yǎng)基的推薦接種量為？A.3-5mlB.5-8mlC.10-20mlD.20-30ml4.以下哪種試驗(yàn)可用于區(qū)分葡萄球菌和鏈球菌？A.觸酶試驗(yàn)B.氧化酶試驗(yàn)C.凝固酶試驗(yàn)D.吲哚試驗(yàn)5.高壓蒸汽滅菌的標(biāo)準(zhǔn)條件是？A.105℃，15分鐘B.115℃，20分鐘C.121℃，15-20分鐘D.132℃，5分鐘6.痰標(biāo)本做細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，合格標(biāo)本的標(biāo)準(zhǔn)是鏡檢每低倍視野鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)應(yīng)？A.＜10個(gè)B.＜25個(gè)C.＜50個(gè)D.無要求7.腸桿菌科細(xì)菌的主要鑒定依據(jù)是？A.氧化酶陰性、發(fā)酵葡萄糖B.氧化酶陽性、氧化葡萄糖C.觸酶陰性、發(fā)酵乳糖D.觸酶陽性、氧化乳糖8.進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶檢測時(shí)，最常用的底物是？A.頭孢硝噻吩B.氨芐西林C.亞胺培南D.阿莫西林9.生物安全二級實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）的基本要求不包括？A.配備生物安全柜B.實(shí)驗(yàn)區(qū)與非實(shí)驗(yàn)區(qū)嚴(yán)格分隔C.必須設(shè)置獨(dú)立的空氣凈化系統(tǒng)D.工作人員需穿防護(hù)服10.下列哪種細(xì)菌需在微需氧環(huán)境（5%-10%CO?）中培養(yǎng)？A.霍亂弧菌B.幽門螺桿菌C.產(chǎn)氣莢膜梭菌D.結(jié)核分枝桿菌11.藥敏試驗(yàn)中，紙片擴(kuò)散法（K-B法）的培養(yǎng)基厚度應(yīng)為？A.2-3mmB.3-4mmC.4-5mmD.5-6mm12.用于腸球菌屬鑒定的關(guān)鍵試驗(yàn)是？A.膽汁七葉苷試驗(yàn)B.馬尿酸水解試驗(yàn)C.尿素酶試驗(yàn)D.硝酸鹽還原試驗(yàn)13.厭氧菌培養(yǎng)時(shí)，常用的指示劑是？A.美藍(lán)B.酚酞C.甲基紅D.溴甲酚紫14.以下哪種細(xì)菌可引起“衛(wèi)星現(xiàn)象”？A.肺炎克雷伯菌B.流感嗜血桿菌C.嗜麥芽窄食單胞菌D.鮑曼不動桿菌15.進(jìn)行血培養(yǎng)時(shí)，若懷疑為布魯菌感染，培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)延長至？A.3天B.5天C.10天D.21天16.痰標(biāo)本涂片革蘭染色鏡檢見大量中性粒細(xì)胞（＞25個(gè)/低倍視野）及少量革蘭陽性球菌，提示？A.正常菌群B.上呼吸道污染C.可能為致病菌D.需進(jìn)一步做抗酸染色17.下列哪種培養(yǎng)基可用于篩選耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）？A.麥康凱培養(yǎng)基B.甘露醇高鹽瓊脂C.SS瓊脂D.中國藍(lán)瓊脂18.進(jìn)行細(xì)菌鑒定時(shí)，MALDI-TOFMS技術(shù)的主要原理是？A.檢測細(xì)菌代謝產(chǎn)物B.分析細(xì)菌核糖體RNA序列C.測定蛋白質(zhì)指紋圖譜D.觀察細(xì)菌形態(tài)特征19.實(shí)驗(yàn)室生物安全中，“銳器傷”的主要預(yù)防措施不包括？A.使用安全型移液器B.禁止用手直接接觸銳器C.操作后立即將銳器放入防刺容器D.戴雙層乳膠手套20.以下哪種細(xì)菌對萬古霉素天然耐藥？A.屎腸球菌B.鶉雞腸球菌C.金黃色葡萄球菌D.糞腸球菌二、填空題（每空1分，共20分）1.革蘭染色的步驟依次為______、______、______、______。2.血培養(yǎng)瓶通常包括______瓶和______瓶，分別用于培養(yǎng)需氧菌和厭氧菌。3.痰標(biāo)本接種時(shí)，需同時(shí)接種______平板、______平板和______平板（或選擇性培養(yǎng)基）。4.藥敏試驗(yàn)結(jié)果判讀的標(biāo)準(zhǔn)主要依據(jù)______（機(jī)構(gòu)縮寫）發(fā)布的指南，2024年版中規(guī)定腸桿菌科細(xì)菌對頭孢他啶/阿維巴坦的敏感折點(diǎn)為______μg/ml。5.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制中，培養(yǎng)基的質(zhì)控應(yīng)包括______檢查、______試驗(yàn)和______試驗(yàn)（用標(biāo)準(zhǔn)菌株驗(yàn)證）。6.厭氧菌分離培養(yǎng)時(shí)，常用的氣體置換法是______，需將環(huán)境中的氧氣濃度降至______以下。7.結(jié)核分枝桿菌涂片染色常用______法，其抗酸性是由于細(xì)胞壁含大量______。8.細(xì)菌室生物安全等級應(yīng)為______級，操作結(jié)核分枝桿菌時(shí)需在______級生物安全柜中進(jìn)行。三、簡答題（每題8分，共40分）1.簡述痰標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)的完整處理流程。2.列舉5種常見的革蘭陰性桿菌及其主要鑒定特征。3.說明血培養(yǎng)陽性報(bào)警后的處理步驟及注意事項(xiàng)。4.實(shí)驗(yàn)室如何進(jìn)行細(xì)菌鑒定的質(zhì)量控制？請從人員、設(shè)備、方法三方面闡述。5.簡述β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的主要機(jī)制及實(shí)驗(yàn)室檢測方法。四、案例分析題（每題10分，共20分）案例1：患者男性，58歲，因“發(fā)熱伴寒戰(zhàn)3天”入院，臨床懷疑血流感染。細(xì)菌室接收2套血培養(yǎng)標(biāo)本（共4瓶），接種后第2天需氧瓶報(bào)警陽性。問題：（1）血培養(yǎng)標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)注意哪些關(guān)鍵點(diǎn)？（2）陽性報(bào)警后需進(jìn)行哪些檢測？（3）若涂片鏡檢見革蘭陽性球菌，呈葡萄狀排列，下一步應(yīng)如何鑒定？案例2：某患者痰培養(yǎng)結(jié)果回報(bào)：草綠色鏈球菌（++）、奈瑟菌屬（+）、肺炎克雷伯菌（+++），鏡檢鱗狀上皮細(xì)胞8個(gè)/低倍視野，中性粒細(xì)胞30個(gè)/低倍視野。問題：（1）該痰標(biāo)本是否為合格標(biāo)本？依據(jù)是什么？（2）如何判斷培養(yǎng)結(jié)果中的優(yōu)勢菌？（3）若肺炎克雷伯菌對頭孢曲松耐藥，可能的耐藥機(jī)制是什么？需進(jìn)一步做哪些檢測？答案一、單項(xiàng)選擇題1.C2.B3.C4.A5.C6.A7.A8.A9.C10.B11.C12.A13.A14.B15.D16.C17.B18.C19.D20.B二、填空題1.結(jié)晶紫初染；碘液媒染；95%乙醇脫色；稀釋復(fù)紅復(fù)染2.需氧；厭氧3.血；巧克力；麥康凱（或中國藍(lán)/伊紅美藍(lán)）4.CLSI；≤45.外觀；無菌；性能6.厭氧罐法（或厭氧袋法）；0.5%7.萋-尼染色（抗酸染色）；分枝菌酸8.BSL-2；BSL-3三、簡答題1.痰標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)處理流程：①標(biāo)本接收與審核：觀察標(biāo)本性狀（膿性/黏液性），鏡檢判斷是否合格（鱗狀上皮細(xì)胞＜10個(gè)/低倍視野，中性粒細(xì)胞＞25個(gè)/低倍視野）；②前處理：用無菌生理鹽水稀釋或胰酶消化，減少黏液干擾；③接種：分區(qū)劃線接種血平板、巧克力平板、麥康凱平板（或選擇性培養(yǎng)基）；④培養(yǎng)：血平板和巧克力平板置35℃、5%-10%CO?環(huán)境培養(yǎng)18-24小時(shí)，麥康凱平板置35℃需氧環(huán)境培養(yǎng)；⑤觀察：記錄菌落形態(tài)、溶血情況等，挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭染色和生化鑒定；⑥根據(jù)鑒定結(jié)果和藥敏試驗(yàn)回報(bào)最終報(bào)告，注明“合格痰標(biāo)本”或“不合格標(biāo)本（可能污染）”。2.常見革蘭陰性桿菌及鑒定特征：①大腸埃希菌：發(fā)酵乳糖（麥康凱平板上呈紅色菌落），IMViC試驗(yàn)（++--）；②銅綠假單胞菌：產(chǎn)生綠色色素（綠膿素），氧化酶陽性，42℃可生長；③肺炎克雷伯菌：菌落黏稠（拉絲試驗(yàn)陽性），尿素酶陽性，動力陰性；④流感嗜血桿菌：衛(wèi)星現(xiàn)象（需V、X因子），巧克力平板生長，血平板不生長；⑤鮑曼不動桿菌：氧化酶陰性，動力陰性，對多種抗生素耐藥（需結(jié)合API20NE等系統(tǒng)鑒定）。3.血培養(yǎng)陽性報(bào)警后處理步驟及注意事項(xiàng)：①記錄報(bào)警時(shí)間、瓶號，立即從培養(yǎng)儀中取出；②消毒瓶塞（75%酒精擦拭），無菌抽取培養(yǎng)液涂片革蘭染色，鏡檢記錄細(xì)菌形態(tài)、染色性；③轉(zhuǎn)種：取培養(yǎng)液接種血平板、巧克力平板（必要時(shí)厭氧平板），需氧菌置35℃、5%-10%CO?培養(yǎng)，厭氧菌置厭氧環(huán)境培養(yǎng)；④快速鑒定：可采用MALDI-TOFMS或快速生化試驗(yàn)（如觸酶、凝固酶）初步判斷；⑤注意事項(xiàng)：嚴(yán)格無菌操作，避免交叉污染；若為雙瓶（套）陽性，提示感染可能性大；若僅單瓶陽性需考慮污染（尤其是皮膚正常菌群如凝固酶陰性葡萄球菌）。4.細(xì)菌鑒定質(zhì)量控制：①人員：定期參加培訓(xùn)（如CLSI指南解讀、新型設(shè)備操作），通過室間質(zhì)評（如CAP、衛(wèi)生部臨檢中心）驗(yàn)證能力，操作時(shí)雙人核對關(guān)鍵步驟；②設(shè)備：定期校準(zhǔn)培養(yǎng)箱（溫度±1℃）、生物安全柜（氣流速度0.38-0.5m/s）、全自動鑒定儀（每日做功能測試），記錄維護(hù)日志；③方法：使用標(biāo)準(zhǔn)菌株（如ATCC25922金黃色葡萄球菌、ATCC25923大腸埃希菌）進(jìn)行培養(yǎng)基性能驗(yàn)證，每批新培養(yǎng)基使用前做陽性（生長）和陰性（無菌）對照；鑒定卡/條需在有效期內(nèi)使用，嚴(yán)格按說明書操作，疑難菌株需通過分子生物學(xué)方法（如16SrRNA測序）復(fù)核。5.β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機(jī)制及檢測方法：①產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶（如ESBLs、AmpC酶、碳青霉烯酶）：水解β-內(nèi)酰胺環(huán)，檢測方法包括頭孢硝噻吩紙片法（快速檢測β-內(nèi)酰胺酶）、雙紙片協(xié)同試驗(yàn)（ESBLs）、三維試驗(yàn)（AmpC酶）、改良Hodge試驗(yàn)（碳青霉烯酶）；②青霉素結(jié)合蛋白（PBPs）改變（如MRSA的PBP2a）：通過頭孢西丁紙片法或mecA基因檢測；③外膜通透性降低（如銅綠假單胞菌OprD蛋白缺失）：需結(jié)合MIC測定和基因檢測；④主動外排系統(tǒng)（如嗜麥芽窄食單胞菌的Sme系統(tǒng)）：通過MIC梯度試驗(yàn)或外排泵抑制劑試驗(yàn)輔助判斷。四、案例分析題案例1：（1）采集關(guān)鍵點(diǎn)：①時(shí)機(jī)：寒戰(zhàn)或高熱初期（未用抗生素前）；②消毒：皮膚用2%碘酊或2%葡萄糖酸氯己定-70%酒精消毒，待干后穿刺；③血量：每瓶接種10-20ml（成人），2套/次（間隔30分鐘）；④標(biāo)識：注明患者信息、采集時(shí)間、是否使用抗生素。（2）陽性后檢測：涂片革蘭染色（觀察形態(tài)、染色性），轉(zhuǎn)種血平板和巧克力平板，做觸酶試驗(yàn)（區(qū)分葡萄球菌和鏈球菌），若觸酶陽性進(jìn)一步做凝固酶試驗(yàn)（區(qū)分金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌）。（3）革蘭陽性葡萄狀球菌，觸酶陽性，凝固酶陽性→金黃色葡萄球菌；若凝固酶陰性→凝固酶陰性葡萄球菌（需結(jié)合菌落計(jì)數(shù)和臨床判斷是否為污染）。案例2：（1）合格標(biāo)本：鱗狀上皮細(xì)胞8個(gè)/低倍視野（＜10個(gè)），中性粒細(xì)胞30個(gè)/低倍視野（＞25個(gè)），符合合格痰標(biāo)本標(biāo)準(zhǔn)。（2）優(yōu)勢菌判斷：以培養(yǎng)結(jié)果中菌落數(shù)量最多（