ICS65.020.30CCSB4354IDB54/T0573—2026 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4材料與方法 4.1實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備 4.2供體羊的選擇 4.3受體羊的選擇 4.4飼養(yǎng)管理 4.5同期發(fā)情 4.6超數(shù)排卵 4.7供體母羊發(fā)情鑒定 4.8人工輸精 4.9胚胎采集 4.10胚胎移植 4.11術(shù)后護(hù)理 4.12術(shù)后飼養(yǎng) 4.13早期妊娠診斷 附錄A（資料性）同期發(fā)情、超數(shù)排卵藥品 附錄B（資料性）常規(guī)耗材 附錄C（資料性）胚胎移植設(shè)備 附錄D（資料性）受體綿羊胚胎移植流程 附錄E（資料性）胚胎鑒定 附錄F（資料性）供體羊沖胚記錄 附錄G（資料性）受體羊移植記錄 DB54/T0573—2026本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所。本文件主要起草人：德慶卓嘎，楊燕燕，烏達(dá)巴拉，李秀男，格桑加措，陳鑫艷，洛桑催成，平措班旦，扎西央吉，巴桑吉巴，次仁曲珍，張立，任越。DB54/T0573—20261西藏羊胚胎移植技術(shù)規(guī)范本文件按照西藏地區(qū)飼養(yǎng)的本地綿羊胚胎移植技術(shù)中試劑耗材的使用、供體羊的選擇與飼養(yǎng)管理、同期發(fā)情、超數(shù)排卵、發(fā)情鑒定、人工輸精、胚胎采集及新鮮胚胎移植、受體母羊選擇、術(shù)后管理和飼養(yǎng)以及早期妊娠診斷等技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、方法及操作流程。本文件適用于西藏綿羊胚胎移植。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T826綿羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1571羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1674牛羊胚胎質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1胚胎移植指將母羊（供體）體內(nèi)的早期胚胎，或者通過(guò)體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀況相同的母羊（受體）體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。3.2供體羊指經(jīng)超數(shù)排卵、同期發(fā)情等人工調(diào)控后，為胚胎移植提供遺傳物質(zhì)（精子或胚胎）的特異性羊只。3.3受體羊指生殖系統(tǒng)機(jī)能健全、經(jīng)同期發(fā)情處理后生理狀態(tài)與供體羊協(xié)同的雌性羊只，是胚胎著床與發(fā)育的生理載體。4材料與方法4.1實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備4.1.1試劑、藥品試劑藥品詳情參見(jiàn)附錄A，附錄B。DB54/T0573—202624.1.2設(shè)備、耗材設(shè)備耗材詳情參見(jiàn)附錄C。4.2供體羊的選擇4.2.1品種選擇選擇品種優(yōu)良、生產(chǎn)性能良好、具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和育種價(jià)值、適應(yīng)高原地區(qū)的優(yōu)良綿羊品種。4.2.2母羊的選擇（1）符合本品種特征，遺傳背景明確、系譜清晰、體質(zhì)健壯、體況良好；（2）年齡在2周歲～5周歲，體重35kg～40kg，經(jīng)產(chǎn)母羊；（3）繁殖機(jī)能正常，無(wú)遺傳性及傳染性疾病；（4）經(jīng)產(chǎn)母羊產(chǎn)后90d以上，羔羊已斷奶，生殖機(jī)能恢復(fù)正常的空懷母羊；（5）重復(fù)超數(shù)排卵間隔時(shí)間在60d以上。4.2.3公羊的選擇（1）符合品種標(biāo)準(zhǔn)，遺傳性穩(wěn)定，系譜清楚，體質(zhì)健壯、中等及以上膘情；（2）年齡在2周歲～5周歲，睪丸發(fā)育良好，性欲旺盛，精液質(zhì)量合格的公羊。4.3受體羊的選擇受體羊的選擇應(yīng)符合以下要求：（1）空懷母羊；（2）選擇無(wú)繁殖障礙，體格發(fā)育正常，健康，無(wú)傳染性疾病，經(jīng)產(chǎn)母羊；（3）年齡在2周歲～5周歲，經(jīng)觀察后有兩個(gè)正常發(fā)情周期的母羊。4.4飼養(yǎng)管理將供體羊、受體羊應(yīng)與其他羊只分開(kāi)，進(jìn)行分群舍飼，并提供科學(xué)的飼養(yǎng)管理，以確保其體況健康、繁殖機(jī)能正常。具體管理要求如下：（1）供體羊：超數(shù)排卵前30天起補(bǔ)飼，日糧粗蛋白質(zhì)14%～16%，代謝能≥10MJ/kg。小群管理，確保圈舍衛(wèi)生與通風(fēng)，在誘情、超排及采卵等關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)避免應(yīng)激。（2）受體羊：移植前30天補(bǔ)飼，保證日糧能量與蛋白質(zhì)水平，新引進(jìn)受體羊須經(jīng)隔離觀察、驅(qū)蟲(chóng)（伊維菌素等）與免疫（口蹄疫、小反芻獸疫等）程序，適應(yīng)環(huán)境且發(fā)情周期正常后方可使用。（3）配種公羊：維持膘情，日糧補(bǔ)充足量蛋白質(zhì)及維生素A、E，保障精液品質(zhì)，試情時(shí)，對(duì)公羊或母羊采取物理隔配措施，嚴(yán)防計(jì)劃外配種。4.5同期發(fā)情母羊發(fā)情周期的任意一天放置孕酮栓（PIDR-孕酮海綿栓或CIDR-孕酮緩釋硅膠栓羊胚胎移植方案參見(jiàn)附錄D。4.6超數(shù)排卵以母羊發(fā)情之日作為發(fā)情周期的第0d，在母羊發(fā)情周期的第10d開(kāi)始，每天早、晚各注射1次FSH，連續(xù)3d，遞減注射，在第13d注射FSH（促卵泡素）時(shí)，同時(shí)肌肉注射PMSG（孕馬血清促性腺激素）。確DB54/T0573—20263定供體羊發(fā)情后開(kāi)始配種，并注射LH（促黃體生成素）。如果FSH未注射完供體羊已發(fā)情，停止注射FSH（促卵泡素），立即注射LH（促黃體生成素）。4.7供體母羊發(fā)情鑒定超數(shù)排卵處理后開(kāi)始觀察發(fā)情，以母羊站立接受試情公羊爬跨做為發(fā)情標(biāo)準(zhǔn)。發(fā)情觀察早中晚各1次，每次不少于0.5h。做好發(fā)情記錄。4.8人工輸精在供體母羊發(fā)情后12h～24h進(jìn)行人工輸精，輸精兩次，間隔8h～12h。具體輸精操作按照NY/T826和NY/T1571執(zhí)行。4.9胚胎采集4.9.1供體羊保定供體羊仰臥在手術(shù)架上，固定四肢。4.9.2供體羊準(zhǔn)備肌肉注射2%靜松靈0.5ml，局部用0.5%鹽酸普魯卡因麻醉，對(duì)乳房前腹中線部或后肢股內(nèi)側(cè)腹股溝部剪毛消毒。4.9.3沖胚時(shí)間供體母羊發(fā)情后6d～7.5d內(nèi)采用子宮角沖胚法進(jìn)行沖胚。4.9.4沖胚用腸鉗夾在子宮角分叉處，注射器吸入預(yù)熱的沖胚液（生理鹽水、葡萄糖、氨基酸、維生素等組成）50ml～60ml，沖卵針頭從子宮角尖端插入，當(dāng)確認(rèn)針頭在管腔內(nèi)且進(jìn)退通暢時(shí)，將回收卵針頭從腸鉗鉗夾基部的上方迅速扎入，沖胚液經(jīng)硅膠管收集于燒杯內(nèi)，最后用兩手拇指和食指輕輕擠壓子宮角。另一側(cè)同樣方法沖洗。沖胚完畢后，用25℃~30℃的生理鹽水將子宮沖洗干凈。供體母羊創(chuàng)口采用三層縫合法。即腹膜、肌肉連續(xù)縫合；皮膚結(jié)節(jié)縫合，針腳間距1cm。在肌肉與皮膚間噴灑適量青、鏈霉素，以防創(chuàng)口感染。4.9.5檢胚（1）在35mm的培養(yǎng)皿中注入胚胎保存液，放在恒溫臺(tái)上預(yù)熱；（2）將收集到的沖胚液移至體視顯微鏡下，檢出胚胎，移入35mm的培養(yǎng)皿中；（3）每個(gè)培養(yǎng)皿在顯微鏡下重復(fù)檢查3次，檢出培養(yǎng)皿中所有胚胎。4.9.6胚胎鑒定在20倍～40倍體視顯微鏡下觀察胚胎的形態(tài)、顏色、分裂球的大小、均勻度、細(xì)胞的密度、與透明帶的間隙以及變性情況。具體胚胎發(fā)育階段和質(zhì)量鑒定，參見(jiàn)附錄E。A、B級(jí)胚胎均可用于鮮胚移植，C級(jí)不用。鑒定后的胚胎做好記錄，包括羊號(hào)、胚胎發(fā)育階段、質(zhì)量等信息，參見(jiàn)附錄F，具體胚胎鑒定按照NY/T1674執(zhí)行。4.10胚胎移植DB54/T0573—202644.10.1受體羊同期發(fā)情在受體母羊生殖道內(nèi)植入孕酮栓PIDR（孕酮海綿栓）或CIDR（孕酮緩釋硅膠栓），15d～17d撤栓，同時(shí)按每只羊肌肉注射PMSG200IU/只～2500IU/只（PMSG-孕馬血清促性腺激素撤栓24h～48h內(nèi)進(jìn)行胚胎移植。4.10.2受體羊的保定將受體羊仰臥于保定架上，按每公斤體重靜脈注射0.01ml～0.02ml2%鹽酸塞拉唑，并對(duì)手術(shù)部位進(jìn)行剃毛消毒。4.10.3移植過(guò)程（1）常規(guī)手術(shù)法a）輸卵管移植時(shí)，將有黃體一側(cè)的輸卵管傘部撥開(kāi)，找到管口，把裝有胚胎的移植器從此插入3cm~4cm，然后將胚胎輕輕推出即可，操作中不可用力牽拉卵巢，不能觸摸黃體；b）子宮角移植時(shí)，將較好一側(cè)黃體的子宮拉出，避開(kāi)血管，在子宮角打孔，把裝有胚胎的移植器從此插入子宮腔內(nèi)，伸至子宮角尖端后將胚胎輕輕推出即可。(2)腹腔內(nèi)窺鏡法a)用手術(shù)刀片在腹中線兩側(cè)，距離乳房2cm處，各切1cm～1.5cm的小口；b)用與腹腔鏡配套的專(zhuān)用穿刺器將腹膜、肌肉打通，在兩側(cè)刀口放入腹腔鏡和子宮鉗；c）在子宮不暴露于體外的情況下，利用腹腔鏡觀察卵巢上黃體發(fā)育情況；d）用子宮鉗夾住黃體較好側(cè)子宮角尖端系膜并將其拉出，避開(kāi)血管，在子宮角打孔；將裝有胚胎的移植槍超子宮角方向推出胚胎。4.11術(shù)后護(hù)理術(shù)后創(chuàng)口處理及觀察要求如下：（1）供體沖胚完畢后，用37℃滅菌生理鹽水濕潤(rùn)母羊子宮，沖去凝血塊，器官?gòu)?fù)位，腹腔內(nèi)倒入250mL37℃滅菌生理鹽水；（2）腹膜、肌肉層采用連續(xù)縫合后撒適量青霉素粉，皮膚層采用結(jié)節(jié)縫合法縫合后傷口用碘酒消（3）從手術(shù)當(dāng)天開(kāi)始每天早晚對(duì)肌肉注射青霉素、鏈霉素各80萬(wàn)IU，同時(shí)用碘酒對(duì)傷口進(jìn)行消毒，連續(xù)3d，第7d可拆線；（4）受體羊移植胚胎后，將子宮角復(fù)位即可縫合，方法和供體羊一致，縫合完畢后肌肉注射孕酮2mL和青霉素、鏈霉素各80萬(wàn)IU；（5）供體、受體羊術(shù)后觀察48h，一周后無(wú)異常合群放牧或與其他羊只混群；（6）如有臥地不起、弓背癥狀或不進(jìn)食不排便的現(xiàn)象，應(yīng)及時(shí)檢查創(chuàng)口縫合情況，給予必要治療或重新縫合。4.12術(shù)后飼養(yǎng)供體、受體羊術(shù)后護(hù)理應(yīng)注意以下事項(xiàng)：（1）術(shù)后供體、受體羊應(yīng)單群飼養(yǎng)、專(zhuān)人管理；初期，飼喂干草并提供清潔的飲水，以加鹽的溫水為宜；（2）術(shù)后3d，恢復(fù)術(shù)前精料飼喂量；DB54/T0573—20265（3）受體羊需補(bǔ)充維生素與礦物質(zhì)，同時(shí)強(qiáng)化飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激反應(yīng)。術(shù)后1個(gè)～2個(gè)發(fā)情周期內(nèi)，需密切觀察受體羊返情情況，若出現(xiàn)返情，應(yīng)及時(shí)安排配種或下次移植；若2個(gè)發(fā)情周期未返情，可初步判定為妊娠，妊娠羊需進(jìn)一步加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，重點(diǎn)滿足其對(duì)蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)需求；（4）做好妊娠母羊的助產(chǎn)、產(chǎn)羔記錄和羔羊培育工作；（5）產(chǎn)羔記錄應(yīng)包括產(chǎn)羔母羊耳號(hào)、供體耳號(hào)、配種公羊耳號(hào)、產(chǎn)羔日期、羔羊數(shù)量、羔羊初生重、羔羊健康狀況等。4.13早期妊娠診斷采用超生波診斷儀（B超）進(jìn)行早期的妊娠診斷，對(duì)移植后25d以上的受體羊可用B超檢查。利用探頭在羊只腹部子宮部位移動(dòng)，在熒光屏上便可觀察到周?chē)谏虚g有一個(gè)長(zhǎng)1cm～2cm灰白色圖像，即是胎兒。60日齡時(shí)胎兒長(zhǎng)為6cm～7cm，90日齡時(shí)胎兒長(zhǎng)為14cm～17cm。受體成功，加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)、做好環(huán)境管理、密切監(jiān)測(cè)健康與進(jìn)行孕期檢查；未受體母羊的進(jìn)行再次配種。DB54/T0573—20266（資料性）同期發(fā)情、超數(shù)排卵藥品同期發(fā)情、超數(shù)排卵耗材詳見(jiàn)表A.1。表A.1同期發(fā)情、超數(shù)排卵藥品序號(hào)名稱用途1孕酮栓供、受體羊同期發(fā)情。2促卵泡素(FSH)供體羊超數(shù)排卵3孕馬血清促性腺激素(PMSG)供、受體羊同期發(fā)情4促黃體素釋放激素(LH)供體羊同期排卵5沖胚液子宮角沖胚6胚胎保存液(Holding)胚胎體外保存DB54/T0573—20267常規(guī)耗材同期發(fā)情、超數(shù)排卵耗材詳見(jiàn)表B.1。表B.1同期發(fā)情、超數(shù)排卵耗材1手術(shù)器械1套供、受體羊手術(shù)2消炎粉手術(shù)創(chuàng)口消炎3縫合線手術(shù)創(chuàng)口縫合4沖卵管子宮角沖胚5沖卵針子宮角沖胚6胚胎移植槍受體羊移植胚胎用790mm培養(yǎng)皿收集沖胚液用835mm培養(yǎng)皿胚胎保存和質(zhì)量鑒定975%酒精手術(shù)部位消毒碘酊手術(shù)部位消毒抗生素供、受體羊手術(shù)后抗感染8胚胎移植設(shè)備胚胎移植設(shè)備詳見(jiàn)表C.1。表C.1胚胎移植設(shè)備序號(hào)名稱用途1移動(dòng)紫外燈實(shí)驗(yàn)室消毒2水浴鍋生理鹽水和沖胚液加熱、保溫3手術(shù)床供、受體羊保定4生物顯微鏡精子活力檢查5腹腔內(nèi)窺鏡輸精和移植胚胎用6體視顯微鏡檢胚和胚胎質(zhì)量鑒定7恒溫臺(tái)胚胎恒溫操作9（資料性）受體綿羊胚胎移植流程受體綿羊胚胎移植流程詳見(jiàn)表D.1。表D.