2025年大學生物技術（基因克隆）試題及答案

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______第I卷（選擇題，共40分）（總共10題，每題4分，每題給出的四個選項中，只有一項是符合題目要求的）1.基因克隆的核心步驟是A.目的基因的獲取B.載體的選擇與構建C.目的基因與載體的連接D.重組DNA導入受體細胞2.以下哪種方法不是獲取目的基因的常用方法A.從基因組文庫中篩選B.從cDNA文庫中篩選C.化學合成法D.細胞融合法3.用于基因克隆的載體不包括A.質粒B.噬菌體C.病毒D.核糖體4.限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生的末端通常是A.平末端B.粘性末端C.平末端或粘性末端D.以上都不對5.連接目的基因與載體常用的酶是A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.逆轉錄酶D.DNA連接酶6.將重組DNA導入受體細胞的方法不包括A.轉化B.轉導C.顯微注射D.細胞呼吸7.藍白斑篩選法中，含有重組質粒的菌落呈現(xiàn)A.藍色B.白色C.無色D.綠色w8.基因克隆過程中，用于篩選陽性克隆的方法是A.抗性篩選B.PCR篩選C.酶切鑒定D.以上都是9.以下關于基因克隆的說法錯誤的是A.可以用于生產(chǎn)生物制品B.只能用于動物細胞C.可用于基因治療研究D.有助于揭示基因功能10.構建基因組文庫時，首先要分離細胞的A.蛋白質B.核酸C.多糖D.脂質第II卷（非選擇題，共60分）（總共4題，11題10分，12題15分，13題15分，14題20分，按要求作答）11.簡述基因克隆的基本流程。12.請說明獲取目的基因的三種常見方法及其原理。13.現(xiàn)有一未知基因，設計一個基因克隆的實驗方案，包括實驗步驟和所需試劑。14.閱讀以下材料：在基因克隆研究中，研究人員發(fā)現(xiàn)了一種新的基因，其功能未知。他們首先通過PCR技術從基因組中擴增出該基因片段，然后將其連接到合適的載體上，導入大腸桿菌細胞中進行表達。通過一系列篩選方法，最終獲得了陽性克隆。請回答以下問題：（1）PCR技術擴增目的基因的原理是什么？（2）連接目的基因與載體時需要注意哪些問題？（3）簡述篩選陽性克隆的具體步驟和方法。答案：1.C2.D3.D4.C5.D6.D7.B8.D9.B10.B11.基因克隆基本流程：首先獲取目的基因，可通過從基因組文庫或cDNA文庫篩選、化學合成等方法。然后選擇與構建合適載體，如質粒等。接著將目的基因與載體連接。再把重組DNA導入受體細胞，如大腸桿菌等。最后通過篩選方法，如抗性篩選、PCR篩選等獲得陽性克隆并鑒定。12.常見方法及原理：從基因組文庫中篩選，原理是將生物體基因組DNA切割成一定大小的片段，與載體連接構建文庫，根據(jù)目的基因的序列特征從文庫中篩選。從cDNA文庫中篩選，以mRNA為模板，經(jīng)逆轉錄合成cDNA，構建文庫篩選目的基因。化學合成法，根據(jù)已知基因序列，通過化學方法合成目的基因。13.實驗方案：提取基因組DNA作為模板。設計特異性引物，進行PCR擴增目的基因?；厥誔CR產(chǎn)物，用限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和載體，使其產(chǎn)生互補末端。用DNA連接酶連接目的基因與載體。將重組質粒導入大腸桿菌感受態(tài)細胞。用含抗生素的培養(yǎng)基篩選陽性克隆，提取質粒進行酶切鑒定和測序驗證。所需試劑：基因組DNA提取試劑盒、PCR試劑、限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶、抗生素等。14.（1）PCR技術擴增目的基因原理：以擬擴增的DNA分子為模板，以一對分別與模板5′末端和3′末端相互補的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶作用下，按照半保留復制的機制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，重復這一過程，即可使目的DNA片段得到擴增。（2）連接目的基因與載體時注意載體和目的基因的末端要匹配，連接酶的用量合適，反應體系的條件如溫度、緩沖液等要適宜，防止載體自身環(huán)化等。（3）篩選陽性