合成生物基因編輯工程師崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.CRISPR-Cas9系統(tǒng)中引導(dǎo)Cas9切割靶DNA的RNA是______。答案：sgRNA（單導(dǎo)向RNA）2.Ⅱ型限制酶識(shí)別的回文序列通常為______個(gè)堿基對。答案：4-63.基因編輯常用的非病毒載體是______。答案：質(zhì)粒載體4.PCR擴(kuò)增的熱穩(wěn)定DNA聚合酶是______。答案：Taq酶5.實(shí)現(xiàn)C→T轉(zhuǎn)換的堿基編輯器是______。答案：CBE（胞嘧啶堿基編輯器）6.合成啟動(dòng)子的核心元件包括TATA盒和______。答案：轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)（TSS）7.植物基因轉(zhuǎn)化常用______介導(dǎo)法。答案：農(nóng)桿菌8.第二代測序技術(shù)的代表是______測序。答案：Illumina9.基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控方式包括可變剪接和______。答案：RNA干擾10.合成生物學(xué)核心是“設(shè)計(jì)-構(gòu)建-測試-______”循環(huán)。答案：學(xué)習(xí)二、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.CRISPR-Cas9中PAM序列的作用是（）A.引導(dǎo)sgRNA結(jié)合B.識(shí)別切割標(biāo)志C.穩(wěn)定Cas9D.促進(jìn)修復(fù)答案：B2.無需PAM序列的基因編輯工具是（）A.Cas9B.TALENC.ZFND.CBE答案：B3.AAV載體的特點(diǎn)是（）A.隨機(jī)整合基因組B.免疫原性高C.可遞送大片段D.無致病性答案：D4.檢測基因編輯突變的常用方法是（）A.瓊脂糖電泳B.Sanger測序C.蛋白印跡D.ELISA答案：B5.合成代謝途徑“前體充足”屬于（）A.途徑選擇B.酶學(xué)優(yōu)化C.調(diào)控優(yōu)化D.宿主適配答案：A6.合成生物學(xué)常用宿主不包括（）A.大腸桿菌B.酵母菌C.CHO細(xì)胞D.噬菌體答案：D7.RNA干擾的核心分子是（）A.siRNAB.miRNAC.shRNAD.以上都是答案：A8.先導(dǎo)編輯（PE）的優(yōu)勢是（）A.無需PAMB.任意堿基替換C.脫靶為0D.編輯大片段答案：B9.禁止的基因編輯應(yīng)用是（）A.體細(xì)胞治療B.生殖細(xì)胞編輯C.腫瘤編輯D.遺傳病治療答案：B10.Cas13系統(tǒng)的作用是（）A.編輯DNAB.編輯RNAC.切割雙鏈DNAD.調(diào)控表達(dá)答案：B三、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.基因編輯工具包括（）A.CRISPR-CasB.TALENC.ZFND.堿基編輯器答案：ABCD2.合成生物學(xué)關(guān)鍵技術(shù)有（）A.基因合成B.編輯C.調(diào)控D.高通量測序答案：ABCD3.載體必需元件包括（）A.啟動(dòng)子B.終止子C.抗性標(biāo)記D.復(fù)制原點(diǎn)答案：ABCD4.脫靶效應(yīng)影響因素有（）A.sgRNA長度B.PAM特異性C.Cas9濃度D.靶位點(diǎn)結(jié)構(gòu)答案：ABCD5.代謝途徑優(yōu)化方法有（）A.途徑工程B.代謝流分析C.蛋白工程D.轉(zhuǎn)錄調(diào)控答案：ABCD6.細(xì)胞轉(zhuǎn)化方法有（）A.電穿孔B.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染C.農(nóng)桿菌介導(dǎo)D.基因槍答案：ABCD7.CRISPR衍生技術(shù)包括（）A.BEB.PEC.Cas13RNA編輯D.CRISPRi答案：ABCD8.合成生物學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域有（）A.醫(yī)藥B.農(nóng)業(yè)C.能源D.環(huán)境治理答案：ABCD9.基因編輯倫理問題涉及（）A.生殖細(xì)胞編輯B.基因增強(qiáng)C.專利D.知情同意答案：ABCD10.合成啟動(dòng)子設(shè)計(jì)策略有（）A.組合轉(zhuǎn)錄因子位點(diǎn)B.調(diào)整TATA盒C.引入增強(qiáng)子D.優(yōu)化TSS答案：ABCD四、判斷題（每題2分，共20分）1.Cas9只能編輯DNA不能編輯RNA。（）答案：×2.ZFN識(shí)別序列是回文結(jié)構(gòu)。（）答案：×3.AAV可整合到AAVS1特定位點(diǎn)。（）答案：√4.PCR只能擴(kuò)增已知序列。（）答案：×5.合成啟動(dòng)子必須含TATA盒。（）答案：×6.脫靶效應(yīng)可完全避免。（）答案：×7.TALEN識(shí)別模塊含34個(gè)氨基酸重復(fù)。（）答案：√8.合成生物學(xué)核心是DBTL循環(huán)。（）答案：√9.RNAi只能抑制不能敲除基因。（）答案：√10.基因編輯僅用于醫(yī)藥領(lǐng)域。（）答案：×五、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述CRISPR-Cas9編輯原理。答案：CRISPR-Cas9源于細(xì)菌免疫。sgRNA的5’端互補(bǔ)靶DNA，3’端結(jié)合Cas9；Cas9識(shí)別靶DNA的PAM（NGG），在PAM上游切割雙鏈DNA（DSB）；細(xì)胞通過NHEJ修復(fù)易產(chǎn)生插入/缺失（基因敲除），通過HDR可整合外源DNA（基因敲入/定點(diǎn)突變）。2.如何降低脫靶效應(yīng)？答案：①優(yōu)化sgRNA：選擇高特異性靶序列，控制長度18-20nt；②用高保真Cas9變體（如HF1）；③控制Cas9/sgRNA濃度；④用雙切口酶（需兩個(gè)sgRNA）；⑤結(jié)合GUIDE-seq等檢測篩選低脫靶體系。3.常用基因調(diào)控元件及作用？答案：①啟動(dòng)子：結(jié)合RNA聚合酶啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄；②終止子：終止轉(zhuǎn)錄；③增強(qiáng)子：增強(qiáng)啟動(dòng)子活性；④絕緣子：阻斷基因間干擾；⑤RBS：結(jié)合核糖體啟動(dòng)翻譯；⑥調(diào)控因子（轉(zhuǎn)錄因子、小RNA）：響應(yīng)信號(hào)調(diào)控表達(dá)。4.AAV載體的優(yōu)勢？答案：①免疫原性低，無致病性；②可改造衣殼實(shí)現(xiàn)組織靶向；③不整合/低頻率整合特定位點(diǎn)，安全；④高效轉(zhuǎn)導(dǎo)分裂/非分裂細(xì)胞；⑤容量適中（~4.7kb），滿足編輯元件遞送。六、討論題（每題5分，共10分）1.CRISPR臨床應(yīng)用的倫理挑戰(zhàn)及應(yīng)對？答案：挑戰(zhàn)：①生殖細(xì)胞編輯（改變germline）；②基因增強(qiáng)（加劇不平等）；③知情同意不足；④專利壟斷。應(yīng)對：①禁止生殖細(xì)胞編輯，限制增強(qiáng)；②加強(qiáng)公眾教育；③完善專利共享政策；④建立嚴(yán)格倫理審查，明確適應(yīng)癥。2.合成生物學(xué)+基因編輯在生物制造的前景及風(fēng)險(xiǎn)？答案：前景：