生物制藥層析柱裝填技師（中級）考試試卷及答案一、填空題（10題，每題1分）1.生物制藥層析常用填料按原理分離子交換型、______、親和型、疏水作用型等。2.層析柱裝填多采用______法（避免填料干涸）。3.評價柱效的核心指標(biāo)是______（符號表示）。4.填料裝填前需______處理（去除氣泡、雜質(zhì)）。5.離子交換平衡液pH應(yīng)______目標(biāo)蛋白pI（保證電荷）。6.凝膠過濾填料需匹配目標(biāo)蛋白______范圍。7.裝填后用______沖洗穩(wěn)定床層。8.柱效低常見原因是床層存在______。9.親和填料需偶聯(lián)______（特異性捕獲蛋白）。10.層析柱長期保存需加______（防微生物污染）。一、填空題答案1.凝膠過濾型（分子篩型）2.濕法3.理論塔板數(shù)（N）4.溶脹/脫氣5.遠(yuǎn)離（高于/低于）6.分子量分離7.平衡緩沖液8.氣泡/裂縫9.特異性配基10.抑菌劑（20%乙醇/NaN?）二、單項選擇題（10題，每題2分）1.分離分子量差異大的蛋白選哪種填料？A.離子交換B.凝膠過濾C.親和D.疏水2.裝填錯誤操作是？A.緩慢倒填料B.靜置穩(wěn)定C.快速加壓D.防干涸3.理論塔板數(shù)N計算不含的參數(shù)是？A.保留時間B.峰寬C.柱長D.填料粒徑4.離子交換填料裝填前用______平衡？A.去離子水B.高鹽液C.低鹽液D.有機溶劑5.凝膠過濾柱效低最可能原因是？A.溶脹不足B.pH不當(dāng)C.配基脫落D.疏水過強6.柱壓升高不包括的原因是？A.填料堵塞B.氣泡積累C.流速過快D.配基飽和7.親和層析裝填注意點是？A.高壓裝填B.防配基變性C.直接上樣D.反復(fù)凍融8.裝填合格的標(biāo)志是？A.峰拖尾B.N值高C.柱壓波動D.床層傾斜9.維護錯誤做法是？A.定期反沖B.防微生物C.純水處理保存D.記錄次數(shù)10.疏水層析裝填用______緩沖液？A.低鹽B.高鹽C.中性D.酸性二、單項選擇題答案1.B2.C3.D4.C5.A6.D7.B8.B9.C10.B三、多項選擇題（10題，每題2分，多選/少選不得分）1.影響柱效的因素有？A.填料粒徑B.裝填均勻性C.流速D.樣品濃度2.裝填前準(zhǔn)備工作含？A.柱體清洗B.填料溶脹C.脫氣D.配平衡液3.離子交換填料類型？A.陽離子交換B.陰離子交換C.混合床D.凝膠型4.凝膠過濾應(yīng)用？A.分子量測定B.脫鹽C.蛋白純化D.濃度測定5.常見問題及解決方法？A.柱壓高→反沖B.峰拖尾→重裝填C.柱效低→換填料D.氣泡→排氣6.親和層析關(guān)鍵步驟？A.配基偶聯(lián)B.平衡C.洗脫D.再生7.裝填需避免的操作？A.填料干涸B.快速傾倒C.高壓裝填D.引入氣泡8.疏水層析特點？A.高鹽結(jié)合B.低鹽洗脫C.疏水作用D.需特異性配基9.柱保存注意事項？A.加抑菌劑B.防冷凍C.密封D.定期沖洗10.柱性能評價指標(biāo)？A.N值B.分離度C.柱壓D.保留時間三、多項選擇題答案1.ABCD2.ABCD3.AB4.ABC5.ABD6.ABCD7.ABCD8.ABC9.ABCD10.ABCD四、判斷題（10題，每題2分，√/×）1.裝填流速越快，柱效越高。（×）2.凝膠過濾分離范圍越大，分辨率越高。（×）3.離子交換高鹽平衡液結(jié)合力越強。（×）4.親和填料可高溫滅菌。（×）5.裝填后需沖洗至柱壓穩(wěn)定。（√）6.柱效低僅因填料老化。（×）7.疏水層析洗脫需降鹽濃度。（√）8.柱用后可直接去離子水保存。（×）9.裝填需垂直固定柱體。（√）10.N值越高，柱效越好。（√）四、判斷題答案1.×2.×3.×4.×5.√6.×7.√8.×9.√10.√五、簡答題（4題，每題5分）1.簡述離子交換填料裝填步驟答案：①填料溶脹：加緩沖液攪拌/超聲脫氣，靜置4-8小時；②柱體準(zhǔn)備：清洗后垂直固定，裝篩板；③濕法裝填：緩慢倒入溶脹填料，加緩沖液打開下端出口，控制流速<1ml/min；④穩(wěn)定床層：用平衡液沖洗至柱壓穩(wěn)定；⑤柱效檢測：進標(biāo)準(zhǔn)蛋白，計算N值（需>2000/米）。2.如何判斷裝填合格？答案：①視覺：床層平整無氣泡/裂縫；②柱壓：平衡液沖洗時穩(wěn)定無波動；③柱效：標(biāo)準(zhǔn)樣品N值達(dá)標(biāo)；④峰形：對稱無拖尾/前沿；⑤重復(fù)性：重復(fù)進樣保留時間偏差<2%。3.凝膠過濾裝填注意事項？答案：①選匹配分子量范圍的填料；②充分溶脹（避免過度攪拌）；③裝填流速<1ml/min（防破碎）；④裝填后靜置30分鐘；⑤操作防干燥/污染；⑥避免高壓（≤0.3MPa）。4.層析柱維護要點？答案：①用后沖洗：平衡液沖至無殘留樣品；②反沖：柱壓高時反向沖洗（流速為正常1/2）；③保存：加20%乙醇/0.02%NaN?密封；④防冷凍：避免填料凍裂；⑤記錄：跟蹤使用次數(shù)/柱效，老化則更換。五、簡答題答案（同上）六、討論題（2題，每題5分）1.層析柱裝填后柱效低的原因及解決方法答案：常見原因：①填料溶脹不足（床層不均）；②裝填過快（局部壓實）；③氣泡殘留（脫氣不徹底）；④填料破碎（流速過快）；⑤篩板堵塞（雜質(zhì)殘留）。解決方法：①重新溶脹（延長時間+超聲）；②慢速濕法重裝填；③反沖排氣；④更換破碎填料；⑤清洗篩板（用0.2μm濾膜過濾緩沖液）。通過上述操作可提升柱效至合格范圍。2.離子交換、凝膠過濾、親和層析裝填的異同答案：相同點：①均濕法裝填（防干涸）；②裝填前溶脹/脫氣；③需垂直固定；④裝填后平衡至柱壓穩(wěn)定